呼吸重症监护病房多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因研究

目的 观察我院呼吸重症监护病房(RICU)临床分离多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶基因和Ⅰ类整合子标志物(qacE△1-sul1)存在状况.采用多基因聚类分析方法进行多重耐药菌株亲缘性分析.方法 收集RICU分离多重耐药铜绿假单胞菌33株,采用PCR方法检测8种β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、PER、DHA、IMP、VIM、OXA-23、OXA-24)和qacE△1-sul1基因共9种.应用多基因聚类分析法分析菌株亲缘性.结果 33株多重耐药铜绿假单胞菌中blaTEM阳性8株(24.24%),blaVIM阳性6株(18.19%),blaIMP阳性3株(9.09%),blaSHV阳性2株(6.06%),blaDHA阳性5株(15.15%),blaOXA-23,blaOXA-24,blaPER均未检出,qacE△1-sul1基因阳性28株(84.85%).多基因聚类分析发现存在克隆传播现象.结论 我院RICU多重耐药铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶基因,以携带blaTEM基因为主.qacE△1-sul1携带率高,聚类分析显示存在克隆传播现象,应引起临床重视.     

ICU病房鲍曼不动杆菌的耐药表型及β内酰胺酶基因型检测

目的检测、分析ICU病房鲍曼不动杆菌耐药表型及β-内酰胺酶的基因型。方法收集ICU病房中感染患者的痰、创面分泌物、血、尿、胆管引流液、大便、脑脊液、胸水、腹水等标本,从中培养、分离出鲍曼不动杆菌309株。用K-B纸片扩散法测定其对13种抗菌药物的耐药性;用Nitrocefin纸片法和改良三维试验大平皿法对β-内酰胺酶进行检测;单一引物PCR扩增法检测OXA型β-内酰胺酶基因OXA-23、OXA-24,多重引物PCR扩增法检测ESBLs和AmpC酶基因。结果除亚胺培南（IMP）外,309株鲍曼不动杆菌对余12种抗菌药物的耐药率均超过50%,其中294株（95%）产β-内酰胺酶,171株（55.24%）能经改良三维试验大平皿法进行酶分型。PCR扩增对IMP中介或耐药的53株鲍曼不动杆菌中有11株扩增到blaOXA-23,产ESBLs组29株中有5株扩增出blaSHV、blaCTX-M-14、blaCTX-M-3,2株出现blaSHV、blaCTX-M-1。多重PCR检测中,仅有3株检测到AmpC酶基因。结论 ICU病房鲍曼不动杆菌多重耐药常见,β-内酰胺酶产生率高。耐药菌的碳青霉烯酶以blaOXA-23型为主,ESBLs、AmpC酶基因的多重PCR阳性率均低。     

鲍曼不动杆菌17种β内酰胺酶基因研究

目的了解鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii.Ab)β内酰胺酶耐药基因存在状况。方法根据美国CLSI2004年版要求进行抗生素敏感性判断,应用PCR技术对Ab菌进行17种β内酰胺酶基因测定。结果Ab对13种抗菌药物耐药严重。27株Ab菌中blaTEM阳性22株(81.5%)、blaOXA-23群阳性12株(44.4%),blaADC阳性23株(85.2%)。其中12株为blaTEM、blaOXA-23群、blaADC3种β内酰胺酶基因均阳性,10株为blaTEM、blaADC2种β内酰胺酶基因阳性。结论我院分离的Ab不仅具有多重耐药性,而且blaTEM、blaOXA-23群、blaADC等β内酰胺酶基因携带率高。     

部分非鲍曼不动杆菌耐药性及相关基因分析

目的了解目前非鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药现状及耐药基因携带情况。方法随机抽取100株不动杆菌临床分离株,采用分子生物学方法筛选非鲍曼不动杆菌,用E-test方法检测非鲍曼不动杆菌对12种抗生素的耐药性,用PCR方法检测16种相关耐药基因的分布。结果共筛选出17株非鲍曼不动杆菌,7株为多重耐药(41.2%),其中对头孢噻肟的耐药率为100%,对氯霉素、哌拉西林、氨苄西林和氨曲南的耐药率分别为76.5%、76.5%、64.7%和52.9%,对多粘菌素B普遍敏感;检出6种耐药基因分别为ampC、blaTEM、blaPER-1、blaOXA-23-like、blaOXA-58和Int1。结论携带超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因和blaOXA-23-like基因为非鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类和碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。非鲍曼不动杆菌的耐药形势严峻,应加强监测。     

鲍曼不动杆菌携带Ⅰ型整合子与耐消毒剂基因研究

目的 研究鲍曼不动杆菌所携带的Ⅰ型整合子与耐消毒剂基因.方法 琼脂扩散法检测菌株对7种抗菌药物的药敏结果;用聚合酶链反应(PCR)方法检测Int-1、qacA/B、qacE△1-sul1、qacG、smr、ArmA、Isaba1和tnp513共8种基因.结果 24株菌对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、四环素、头孢哌酮/舒巴坦、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、阿米卡星等抗生素敏感率分别为12.5％、4.2％、4.2％、0.0％、12.5％、8.3％和8.3％;PCR结果显示,24株菌qacA/B、qacG、tnp513和smr4种基因检测结果为阴性,携带qacE△1-sul1、ArmA、Isaba1、dfrA17和Int-1基因,且dfrA17位于Ⅰ型整合子基因盒内.结论 本组鲍曼不动杆菌对广谱抗生素耐药严重,并携带了Ⅰ型整合子和消毒剂耐药基因.应规范此类抗生素的使用并采取相应的消毒措施防止多重耐药菌株在院内传播.     

常用消毒剂对多重耐药鲍曼不动杆菌的体外抑制作用

目的 明确临床常用消毒剂对我院ICU病房流行的多重耐药鲍曼不动杆菌的最低抑制浓度（MIC）值,帮助临床选取正确的多重耐药鲍曼不动杆菌消毒剂.方法 收集本院ICU流行鲍曼不动杆菌临床分离株8株,制备菌液,以微量稀释法测定临床常用消毒剂对8株鲍曼不动杆菌的MIC值.结果 碘伏、过氧乙酸,氯己定、2%戊二醛和乙醇对8株鲍曼不动杆菌的MIC值分别为0.001 6%、0.01 1%、62.5mg/L、1%和75% 肥皂对鲍曼不动杆菌无作用.5种消毒剂对鲍曼不动杆菌的有效稀释比,从高到低依次是过氧乙酸、氯己定、碘伏、戊二醛和乙醇.结论 过氧乙酸、氯己定为本院抑杀环境中多重耐药鲍曼不动杆菌的首选消毒剂,而2%戊二醛不主张应用.碘伏能够作为体表中的有效消毒剂,而乙醇应用消毒时一定要保证浓度在75%.我们认为消毒剂对于不同细菌的MIC值检测正如抗菌药物敏感试验一样对于控制细菌感染性疾病的流行有着重要价值.     

多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排泵基因abeM的测定及耐药性分析

目的了解临床分离株鲍曼不动杆菌对16种抗菌药物的耐药性,为抗耐药菌药物选择提供依据,并扩增外排泵蛋白编码基因abeM,以探讨鲍曼不动杆菌多重耐药与主动外排作用的关系。方法采用纸片扩散法(Kirby-Bauer)对收集的65株不重复鲍曼不动杆菌进行药物敏感性试验。应用聚合酶链反应测定多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排系统abeM基因,并进行序列分析。结果收集的鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦敏感,耐药率15.38%,对亚胺培南耐药率为52.31%,对其余抗菌药物的耐药率在60.00%~73.85%之间;经PCR扩增,65株鲍曼不动杆菌中adeB基因阳性60株(92.31%),序列分析显示与Genbank登录的鲍曼不动杆菌ATCC 19606药物外排蛋白编码基因abeM(AB204810)的同源性为98.00%。结论 abeM主动外排作用可能是多重耐药鲍曼不动杆菌多重耐药的重要机制之一。     

老年患者感染鲍曼不动杆菌耐药性变迁机制

目的通过分析鲍曼不动杆菌的感染特征、耐药性及其产碳青霉烯酶的类型,探讨其对亚胺培南类抗生素的耐药机制。方法收集该院对碳青霉烯类药物敏感、中介或耐药的鲍曼不动杆菌株162株,用琼脂纸片扩散法(K-B法)及肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),用聚合酶链反应(PCR)检测其耐药基因。结果 60株耐药细菌均为多重耐药株,PCR检出47株携带OXA-23基因,3株携带OXA-24基因,85株敏感株均未检出OXA-23及OXA-24基因,各年份与2008年对亚胺培南类药物敏感性以及耐药基因OXA-23基因携带率比较有统计学差异(P0.05)。结论携带OXA-23和OXA-24碳青霉烯酶基因的鲍曼不动杆菌对临床常用亚胺培南类抗生素的耐药率明显增高,且伴随用药时间延长呈逐年上升趋势。     

多重耐药鲍曼不动杆菌blaADC酶耐药基因检测及临床特点分析

目的了解31株多重耐药鲍曼不动杆菌（MI）RAB）中blaADC型β-内酰胺酶基因存在状况。方法对2005年1～6月白求恩国际和平医院临床分离的31株多重耐药鲍曼不动杆菌菌株（耐哌拉西林、第三代头孢菌素、环丙沙星和庆大霉素）应用聚合酶链反应及序列分析方法分析blaADCβ-内酰胺酶基因，应用K-B纸片扩散法检测细菌对药物的敏感性。收集临床资料并作同颐性分析。结果31株MDRAB均对多粘菌素B敏感．3株（9．7％）对受试的其他23种抗菌药物均耐药。31株MDRAB中blaADC全部阳性（100％）。31例MDRAB感染患者，29例（93．5％）为医院内呼吸道感染，1例为菌血症．1例为伤口感染。经抗菌药物治疗后。24例（77．4％）存活，7例（22．6％）死亡。结论MDRAB对8内酰胺类抗菌药物耐药与其产blaADC型β-内酰胺酶密切相关，MDRAB感染患者预后较差。     

呼吸重症监护病房下呼吸道感染病原菌种类、耐药状况及多重耐药菌感染危险因素分析

目的  调查呼吸重症监护病房（RICU）下呼吸道感染病原菌种类及耐药情况,探索引发多重耐药菌感染的危险因素,为制订预防和控制多重耐药菌感染措施提供参考依据。 方法  收集2014年1~12月在无锡市第二人民医院RICU接受治疗的74例痰培养阳性下呼吸道感染病例作为研究对象,对引发下呼吸道感染的病原菌种类及其耐药情况进行调查,统计分析可能导致多重耐药菌感染的危险因素。 结果  74例研究对象中分离出161株病原菌,占前4位的病原菌分别为金黄色葡萄球菌（23.60%）、肺炎克雷伯杆菌（20.50%）、鲍曼不动杆菌（16.15%）和铜绿假单胞菌（9.94%）。其中多重耐药菌106株（65.84%）,主要包括金黄色葡萄球菌（35.85%）、肺炎克雷伯杆菌（22.64%）、鲍曼不动杆菌（14.15%）等;泛耐药菌12株（7.45%）,主要为鲍曼不动杆菌（11株）和肺炎克雷伯杆菌（1株）。74例病例中有49例（66.22%）感染2种以上病原菌,其中合并耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染31例（41.89%）。Logistics回归分析显示,急性生理与慢性健康评分（APACHEⅡ）为多重耐药菌感染的独立危险因素。 结论  RICU下呼吸道多重耐药菌感染发生率高,APACHEⅡ评分是多重耐药菌感染的独立危险因素。     

多药耐药大肠埃希菌老年患者分离株抗菌制剂11种外排泵基因研究

目的了解多药耐药大肠埃希菌中外排泵基因的存在情况。方法微量稀释法检测耐药菌株的药敏结果,采用聚合酶链反应（PCR）扩增法,检测11种抗菌制剂外排泵基因：emrB、emrD、emrE、mdfA、sugE、mdtI、tehA、oqxA、qacE△1、qacEs、mr-2等11种抗菌制剂外排泵基因,扩增产物纯化后基因测序。结果大肠埃希菌对阿米卡星耐药率为60%,对复方新诺明耐药率为95%,对第三代头孢菌素耐药率为100%（均为产ESBLs菌株）,外排泵基因检出率分别为emrB 95.0%、emrD 75.0%e、mrE 50.0%、mdfA 80.0%、sugE 70.0%、mdtI 80.0%、qacE△1 80.0%、tehA 80.0%、oqxA 15.0%,qacE、smr-2基因均未检测到,最少者检出1种基因,最多1株检出9种基因。结论本组分离的大肠埃希菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类、氯霉素等抗菌药物呈多重耐药,可能与细菌携带多种抗菌制剂（包括灭菌剂、消毒剂、抗菌药物等）外排泵基因相关。     

blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因PCR扩增用于鲍曼不动杆菌检测的可行性评价

目的分析blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因PCR扩增用于鲍曼不动杆菌检测和鉴定的可行性。方法PCR扩增105株不动杆菌的blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因,并对检测的特异性进行评估。结果PCR检测82株鲍曼不动杆菌blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因均阳性,但其中1株PCR产物比预期大（1 664 bp）;测序发现blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因中包含一段1 308 bp的插入序列。不动杆菌属其他菌株blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因PCR检测均阴性。若以353 bp扩增带作为blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因PCR阳性标准,检测的敏感度和特异度分别为98.9%和100%;若以出现PCR扩增条带为阳性标准,则检测的敏感度和特异度均为100%。结论blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因PCR扩增用于检测鲍曼不动杆菌特异性较高,但如果仅从扩增片段长度判断,存在出现假阴性的可能。     

Antimicrobial susceptibility patterns and distribution of blaOXA genes among Acinetobacter spp. Isolated from patients at Tehran hospitals

Multiple drug-resistant strains of Acinetobacter have created therapeutic problems worldwide. This study was conducted to determine the antimicrobial susceptibility patterns and prevalence of bla(OXA-type) carbapenemases among isolates of Acinetobacter spp. obtained from Iranian patients. Here, 128 Acinetobacter isolates were identified at the species level, and their susceptibilities to different antibiotics were determined using disk agar diffusion testing. Isolates were then subjected to multiplex-PCR targeting bla(OXA) genes. More than 50% of the isolates showed multidrug resistance to different antibiotics. The rates of susceptibility to imipenem, meropenem, piperacillin-tazobactam, and amikacin were 50.7, 50, 42.1, and 38.2%, respectively. The MICs of carbapenems for the resistant isolates ranged from 64 to > or = 256 microg/ml. All strains of Acinetobacter baumannii possessed a bla(OXA-51-like) gene. The co-existence of bla(OXA-51-like)/bla(OXA-23-like) and bla(OXA-51-like)/bla(OXA-24-like) was detected in 25% (n=32) and 17.9% (n=23) of the isolates, respectively. Over 70% of carbapenem-resistant strains contained at least two genes encoding OXA-type carbapenemase. Resistance to carbapenems in the population of Acinetobacter strains in Iran is high, with the majority of isolates showing multidrug resistance. A wide diversity of OXA genes exists among the strains of A. baumannii in Iran. Detection of bla(OXA-51-like) can be used as a simple and reliable method to differentiate A. baumannii strains from other species.     

RICU鲍曼不动杆菌感染的临床分布及耐药性分析

目的分析我院呼吸症监护病房(RICU)鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii,Ab)的临床分布及耐药情况。方法分析我院入住RICU患者临床分离出的致病菌,其中对分离出Ab的标本来源、临床分布及耐药情况进行分析。结果共分离出209株,其中痰标本182株,血标本11株,尿标本8株,静脉导管4株,其他4株;分离出鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物大部分耐药,对阿米卡星耐药率最低,耐药率为50.24%,其次为米诺环素,耐药率为69.38%,其他抗菌药物耐药率均大于80%。表现为多重耐药、泛耐药。多重耐药菌株为111株,占53.11%,全耐药菌株为21株,占10.05%。结论鲍曼不动杆菌为RICU感染主要致病菌,表现为多重耐药、泛耐药及全耐药,监测该菌临床分布及耐药情况,有助减少该菌在RICU定植及传播。     

梅州地区临床分离耐碳氢霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药机制及分子流行病学研究

目的 了解梅州地区临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药性,探讨其耐药机制及分子流行病学特征。方法 收集梅州地区5所医院2012年1～12月临床分离的非重复耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌210株,采用K-B法检测药敏性,改良Hodge试验筛选耐碳青霉烯表型,PCR扩增IMP、VIM、OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58型碳氢霉烯酶基因,并测序。应用ERIC-PCR分型及同源性分析。结果 药敏结果显示,17种药物除多粘菌素B耐药率为0.48%外,其他药敏耐药率都高于60%;改良Hodge试验阳性菌株163株(77.62%)。扩增结果显示Bla-OXA-51的检出率为最高为94.29%(198/210),Bla-OXA-23的检出率次之为78.57%(165/210),Bla-VIM的检出率为4.29%(9/210),Bla-IMP、Bla-OXA-24、Bla-OXA-58均未被检出。210株菌株分为7个ERIC基因型,其中A型97株,B型44株,H型25株,为主要的流行克隆株。结论 梅州地区临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药十分严重;产OXA-51、OXA-23和VIM型碳氢霉烯酶是本地区鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制,且耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌存在克隆的流行。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌OXA-23基因检测及分析

目的了解临床分离的耐亚胺培南鲍曼不动杆菌OXA-23摹因的存在状况。方法收集我院临床分离的非重复耐亚胺培南鲍曼不动杆菌16株,采用纸片扩散法确定其耐药率,以PCR对亚胺培南耐药菌株进行OXA-23基因的检测并测序,序列与基因库比对。结果16株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌中,OXA-23基因阳性11株,阳性率为68．8％。随机抽取2株OXA-23基因阳性株进行测序后,经网EGenBank比对,与OXA-23标准株100％同源。结论分离菌株主要来源于痰标本,耐亚胺培南鲍曼不动杆菌OXA-23雄因的携带率较高,分离菌株的耐药性可能与OXA-23型碳青霉烯酶基因有关。     

医院获得性鲍曼不动杆菌肺炎六例微生物学及临床观察

目的探讨医院获得性鲍曼不动杆菌肺炎患者临床微生物学特点和治疗转归。方法回顾性调查2005年1～8月白求恩国际和平医院经分子生物学方法证实的6例医院获得性产PER-1型超广谱13内酰胺酶（ESBL）鲍曼不动杆菌肺炎患者的临床资料。用脉冲场凝胶电泳检测6株鲍曼不动杆菌的同源性，聚合酶链反应分析相关耐药基因。结果6株鲍曼不动杆菌中5株仅对亚胺培南敏感，4株对美罗培南敏感。脉冲场凝胶电泳将其分为A1型2株，A2～如型各1株，携有β内酰胺酶blaPER-1基因，同时blaTEM-1型基因、耐消毒剂磺胺药物基因（qacEΔ1-sull）和1类整合子酶基因（intll）阳性，其中3株氨基糖苷类修饰酶基因aac（3）-I、aac（6’）-I同时阳性，2株aac（3）-I、ant（3”）-I同时阳性，1株aac（3）-I单独阳性。6例患者均患有严重的基础疾病，使用过呼吸机；检出鲍曼不动杆菌前15d内应用过广谱抗菌药物；经使用碳青霉烯类和（或）头孢哌酮／舒巴坦抗感染治疗，3例临床好转，3例死亡。结论6株产PER-1型ESBL鲍曼不动杆菌具有高度同源性，耐药基因复杂，其所引起的医院获得性肺炎临床预后差。