飞燕草素葡萄糖苷通过上调SOX2OT减轻高糖诱导的心肌细胞损伤

摘要：目的:探讨飞燕草素葡萄糖苷（DPg）对高糖（HG）诱导的心肌细胞H9C2损伤的影响及可能机制。方法:体外培养H9C2细胞,不同剂量(1,10,100μmol·L-1)的DPg作用于33.3 mmol·L-1葡萄糖诱导的H9C2细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞中兔抗鼠B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2相关蛋白（Bax）的蛋白表达,试剂盒检测细胞中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平,RT-qPCR检测SRY盒转录因子2重叠转录本（SOX2OT）表达。转染SOX2OT过表达载体、小干扰RNA至H9C2细胞,经33.3 mmol·L-1葡萄糖诱导24 h后,检测细胞增殖、凋亡、Bax和Bcl-2蛋白表达及MDA和SOD水平。结果:DPg可提高高糖诱导的H9C2细胞吸光度（A）值（P<0.05）,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量（P<0.05）,并促进Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）,且呈剂量依赖性。DPg可剂量依赖性促进高糖诱导的H9C2细胞中SOX2OT的表达,过表达SOX2OT可提高高糖诱导的H9C2细胞A值（P<0.05）,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量（P<0.05）,并促进Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）。与未敲减SOX2OT的H9C2细胞比较,敲减SOX2OT的H9C2细胞经100μmol·L-1DPg和高糖处理后A值、Bcl-2蛋白表达和SOD活性降低（P<0.05）,细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量升高（P<0.05）,并抑制Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）。结论:DPg可能通过上调SOX2OT表达抑制HG诱导的H9C2细胞凋亡和氧化应激。     

原花青素B2对H2O2诱导的星形胶质细胞氧化损伤和凋亡的保护作用及机制研究[①]

摘要：目的 本研究旨在探讨原花青素B2（proanthocyanidin B2, PC-B2）对过氧化氢（H2O2）诱导的小鼠星形胶质细胞（astrocytes, AS）氧化损伤和凋亡的保护作用及其机制。方法 利用C57BL/6新生小鼠（1-3 d）分离、培养AS,通过随机数字表法分为正常组、正常+PC-B2组（100 μg·mL-1的PC-B2处理24 h）、H2O2模型组（200 μmol·L-1的H2O2处理24 h）、H2O2+PC-B2组（200 μmol·L-1的H2O2与100 μg·mL-1的PC-B2共同处理24 h）;CCK-8法检测各组细胞存活率,LDH法进行细胞毒性检测;ELISA试剂盒检测各组细胞中MDA含量以及SOD、CAT和GSH-Px活力;TUNEL染色法检测各组细胞凋亡情况;RT-PCR和Western Blot分别检测AS中Bax、Bcl-2、Caspase-3、Akt/Stat3、p-Akt、p-stat3、Nrf2/HO-1的mRNA和蛋白表达水平。结果 PC-B2能够明显增强细胞活力,抑制AS凋亡。并且与H2O2模型组相比,PC-B2干预能够显著降低AS中LDH、MDA含量,提高SOD、CAT和GSH-Px活力,抑制Bax,caspase-3的mRNA和蛋白表达,上调Akt/Stat3、Bcl-2、Nrf2/HO-1的mRNA和蛋白表达。结论 PC-B2能够通过Akt/Stat3和Nrf2/HO-1途径增强AS抗氧化能力,减轻H2O2诱导的AS氧化损伤和凋亡。     

蒲公英总黄酮抑制Aβ25-35诱导的海马神经元细胞凋亡的研究

目的：研究蒲公英总黄酮用于防治阿尔兹海默症（AD）的机制,探讨蒲公英总黄酮对Aβ25-35诱导海马神经元细胞凋亡的影响,并进一步探究其潜在机制。方法：对海马神经元胞进行原代培养,经20 μmol·L-1 Aβ25-35诱导,细胞逐渐出现凋亡,用MTT法结合流式细胞仪,观察不同浓度的蒲公英总黄酮的细胞活力和细胞凋亡情况。用硫代巴比妥酸法、黄嘌呤氧化酶法来检测各组细胞中丙二醛（MDA）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）活性。Western blot检测各组细胞凋亡相关的基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达。结果：20 μmol·L-1 Aβ25-35组细胞比对照组活力下降,凋亡增加,MDA 含量上升,SOD 活性降低。与20 μmol·L-1 Aβ25-35组相比,各浓度下的蒲公英总黄酮均能够提高细胞活力,升高细胞内SOD活性,抑制细胞凋亡,降低MDA含量,同时上调Bcl-2表达,降低Bax和活化状态下的Caspase-3蛋白的表达,并呈浓度依赖性相关。结论：蒲公英总黄酮能够减少Aβ25-35诱导神经元细胞的细胞凋亡,这可能与拮抗其氧化损伤有关。     

川皮苷调控miR-145-5p/KLF5轴减轻缺氧复氧诱导的大鼠心肌细胞损伤

摘要：目的:探讨川皮苷对缺氧复氧（H/R）诱导的大鼠心肌损伤细胞发挥保护作用的潜在机制。方法:体外培养大鼠心肌H9c2细胞,CCK-8法检测不同剂量(0,12.5,25,50,100,200μmol·L-1)的川皮苷作用于H9c2细胞48 h后的细胞活力,筛选合适的实验浓度;取对数生长期的H9c2细胞,随机分为对照组、H/R组、mimic-NC组、miR-145-5p mimic组、川皮苷低(12.5μmol·L-1)、高(25μmol·L-1)剂量组、川皮苷+inhibitor-NC组、川皮苷+miR-145-5p inhibitor组,除对照组外,其余组建立H/R损伤模型。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测细胞中miR-145-5p和Krüppel样因子5（KLF5） mRNA的表达水平;CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;并检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平;蛋白印迹法（Western Blot）检测细胞KLF5、核因子-κB p65（NF-κB p65）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达。结果:12.5和25μmol·L-1的川皮苷对H9c2细胞的活力未出现明显影响,当川皮苷浓度大于50μmol·L-1时可显著抑制H9c2细胞的活力（P<0.05）。因此,选择12.5和25μmol·L-1的川皮苷用于后续实验。川皮苷可促进miR-145-5p表达,下调KLF5表达（P<0.05）,升高H9c2细胞活力、SOD水平和Bcl-2蛋白表达（P<0.05）,降低细胞凋亡率、LDH、CK-MB、MDA、TNF-α、IL-1β水平和p-NF-κB p65/NF-κB p65比值及Bax蛋白表达（P<0.05）。上调miR-145-5p表达与川皮苷发挥相同的作用,下调miR-145-5p后,川皮苷对H9c2细胞损伤的保护作用被明显削弱。结论:川皮苷可能通过上调miRNA-145-5p,抑制KLF5的表达和NF-κB p65的活化,进而抑制氧化应激和炎症反应,减少H/R诱导的心肌细胞凋亡。     

灯盏乙素对过氧化氢致心肌细胞损伤的作用与机制研究

目的：探讨灯盏乙素对过氧化氢（H2O2）损伤心肌细胞的保护作用。方法：将大鼠H9C2心肌细胞分为对照组、H2O2 (200 μmol·L-1)干预组以及灯盏乙素(100、200 μmol·L-1)+H2O2 (200 μmol·L-1)干预组,每组设6个复孔。各组经过药物干预6 h后,通过 MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪测定细胞凋亡率;测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸激酶（CK）、谷草转氨酶（AST）活性和丙二醛（MDA）含量;测定细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。结果：与对照组比较,H2O2干预组H9C2心肌细胞存活率显著降低且凋亡率显著升高,培养液中 LDH、CK、AST 活性和 MDA 含量均显著升高,细胞中 SOD、CAT、GSH-Px 活性显著降低,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。与 H2O2干预组比较,灯盏乙素（100、200 μmol·L-1）+H2O2（200 μmol·L-1）干预组培养液中H9C2心肌细胞存活率显著升高、凋亡率显著降低,培养液中LDH 、AST、CK活性和MDA 含量均显著降低,细胞中SOD、CAT、GSH-Px活性显著升高,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论：灯盏乙素能够有效提高 H2O2诱导状态下 H9C2 心肌细胞存活率并降低凋亡率,改善细胞中抗氧化酶活性、降低细胞损伤,提示灯盏乙素对H2O2诱导 H9C2心肌细胞氧化应激损伤具有剂量相关性的保护作用。     

阿卡波糖抑制过氧化氢诱导小鼠MIN-6胰岛β细胞氧化应激及细胞凋亡

摘要：目的:通过过氧化氢（H2O2）诱导小鼠MIN-6胰岛β细胞氧化应激,探讨阿卡波糖对氧化损伤引起凋亡的影响。方法:将不同浓度H2O2（50,100,200,400,800μmol·L-1）分别加入小鼠MIN-6细胞中进行相关检测。采用CCK-8比色法观察细胞存活率;试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）释放量、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量; Elisa试剂盒检测胰岛素分泌量; Annexin-V-PI流式细胞术测MIN-6细胞凋亡率; caspase-3试剂盒检测caspase-3活性。结果:随H2O2浓度增高,作用时间延长,MIN-6细胞活性显著降低,H2O2200μmol·L-1作用3 h适宜作为后续MIN-6胰岛细胞氧化损伤研究。在H2O2诱导下,阿卡波糖显著提高MIN-6细胞活性,减少LDH释放;阿卡波糖抑制氧化应激水平,降低SOD活性和MDA含量;另外,阿卡波糖改善MIN-6细胞分泌胰岛素功能,降低凋亡水平。结论:阿卡波糖对H2O2诱导的小鼠MIN-6胰岛β细胞氧化应激和凋亡具有保护作用。     

下调microRNA-1对H2O2诱导的心肌细胞损伤的保护作用

【摘要】目的? ?研究下调microRNA-1在H2O2诱导的心肌细胞损伤中的保护作用及其机制。方法? ?将大鼠H9c2心肌细胞株分为4组,Blank组、NC组、H2O2组和H2O2+AS-miR-1组。Blank组为不做任何处理的空白对照组,NC组细胞转染随机合成的miRNA阴性对照片;H2O2组和H2O2+AS-miR-1组分别为不转染或转染miR-1 inhibitor（AS-miR-1）的H2O2细胞损伤组。采用定量PCR方法检测各组miR-1表达水平,MTT和流式细胞术检测细胞存活率和凋亡情况,利用生物信息学预测miR-1的靶基因,荧光定量PCR和Western Blot的方法检测靶基因Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况。结果? ?Blank组和NC组相比较,各个指标均没有统计学差异。H2O2组细胞的miR-1mRNA表达水平显著升高,存活率降低,凋亡增加,Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平均明显降低。转染AS-miR-1,可以降低H2O2诱导的心肌细胞损伤,提高细胞存活率、降低细胞凋亡,上升Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平。 结论? ?下调miR-1表达可以通过升高凋亡抑制因子Bcl-2的表达水平降低H2O2诱导的心肌细胞凋亡,发挥心肌细胞保护作用。      

三叶苷调控miR-539-5p表达保护缺氧缺糖心肌细胞损伤研究

摘要：目的:探讨三叶苷对缺氧缺糖心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法:采用不同浓度的三叶苷作用于缺氧缺糖诱导的心肌细胞H9C2,试剂盒检测丙二醛（MDA）含量、乳酸脱氢酶（LDH）和超氧化物歧化酶（SOD）活性,流式细胞术、蛋白质印记（Western blot）检测细胞凋亡以及B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）和Bcl相关X蛋白（Bax）蛋白表达,实时荧光定量PCR（RTq PCR）检测miR-539-5p表达。转染miR-539-5p模拟物至H9C2细胞,检测过表达miR-539-5p对缺氧缺糖诱导的H9C2细胞损伤的影响。结果:三叶苷作用于缺氧缺糖诱导的H9C2细胞后,细胞中MDA含量、LDH释放量、细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著降低,SOD活性、Bcl-2蛋白和miR-539-5p表达水平显著升高（P<0.05）。过表达miR-539-5p后,缺氧缺糖诱导的H9C2细胞中MDA含量、LDH释放量、细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著降低,SOD活性、Bcl-2蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。抑制miR-539-5p表达可减弱三叶苷对缺氧缺糖诱导的H9C2细胞MDA含量、LDH释放量、SOD活性、凋亡,以及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结论:三叶苷可有效降低缺氧缺糖诱导的心肌细胞损伤,其机制与上调miR-539-5p表达有关。     

类叶升麻苷调控CREG表达对oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

摘要：目的:探讨类叶升麻苷对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的影响及机制。方法:不同浓度(1,10,100μmol·L-1)的类叶升麻苷作用于oxLDL诱导的HUVEC细胞,酶联免疫吸附法检测细胞中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽还原酶（GSH-Px）活力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹（Western blot）法检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）和E1A激活基因阻遏子（CREG）蛋白表达水平,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测CREG mRNA表达水平。转染CREG过表达载体或CREG小干扰RNA至HUVEC细胞,构建CREG过表达或CREG表达抑制的HUVEC细胞。oxLDL诱导CREG过表达的HUVEC细胞,或类叶升麻苷作用于oxLDL诱导的CREG表达抑制的HUVEC细胞,上述相同方法检测MDA含量、SOD和GSH-Px活力、细胞凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:oxLDL诱导HUVEC细胞后,MDA含量、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高,SOD和GSH-Px活力、Bcl-2蛋白及CREG mRNA和蛋白水平降低（P<0.05）。类叶升麻苷或过表达CREG可降低oxLDL诱导的HUVEC细胞MDA含量、凋亡率和Bax蛋白表达,提高SOD和GSH-Px活力及Bcl-2蛋白表达（P<0.05）。类叶升麻苷可促进oxLDL诱导的HUVEC细胞CREG mRNA和蛋白表达（P<0.05）,抑制CREG表达降低了类叶升麻苷对oxLDL诱导的HUVEC细胞MDA含量、SOD和GSH-Px活力、细胞凋亡率及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响（P<0.05）。结论:类叶升麻苷通过上调CREG表达降低oxLDL诱导的HUVEC细胞氧化应激和凋亡,减轻细胞损伤。     

蒲公英总黄酮改善Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病大鼠记忆功能障碍的观察

目的：探索蒲公英总黄酮对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病（AD）大鼠记忆功能的影响以及潜在机制。方法：将50只健康SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和蒲公英总黄酮低、中、高剂量组（100、200、400 mg·kg-1）。采用大鼠右侧海马CA1 区注射1 μL Aβ25-35建立AD大鼠模型,术后各组进行灌胃治疗21d。治疗结束采用Morris水迷宫法观察大鼠的记忆能力;分离海马组织并制备组织匀浆,采取二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)荧光法检测活性氧 (ROS) 水平;利用硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法检测丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性;将海马组织制备切片,应用TUNEL染色观察海马神经元凋亡;Western blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达。结果：与正常对照组相比,模型组大鼠逃逸潜伏期明显延长,空间探索时间明显缩短,海马组织ROS水平增加,MDA含量明显增高,SOD活性明显下降,海马神经元细胞凋亡增加,Bax和Caspase-3表达上调同时Bcl-2表达降低。与模型组相比,不同浓度的蒲公英总黄酮均能缩短逃逸潜伏期,延长空间探索时间,降低ROS水平和MDA含量,升高SOD活性,减少神经元细胞凋亡,同时上调Bcl-2表达,降低Bax和Caspase-3表达,并且呈现浓度依赖性关系。结论：蒲公英总黄酮能够保护Aβ25-35诱导的大鼠记忆能力损伤,这可能与拮抗氧化应激介导的神经元细胞凋亡有关。     

阿魏酸预处理对阿霉素诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的研究阿魏酸(FA)对阿霉素(DOX)诱导H9c2心肌细胞损伤的影响。方法 1μmol·L-1DOX处理H9c2细胞24 h,建立心肌损伤模型。FA预处理组,10、20、40μmol·L-1FA预处理2 h后,再与DOX共培养24 h。CCK-8比色法测定细胞生存率;相差显微镜观察细胞形态学改变;生化试剂盒检测LDH、CK、MDA、SOD;DCF-DA荧光染色流式细胞术检测细胞内活性氧;AO-EB染色、DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;Western blot法测定caspase-3、Bax、Bcl-2表达。结果 DOX降低H9c2细胞生存率,诱导氧化应激损伤和细胞凋亡。FA预处理剂量依赖性提高细胞生存率,减轻LDH、CK外漏和损伤细胞形态学改变。FA减少ROS生成,降低细胞MDA水平,增加SOD酶活性,抑制DOX诱导的氧化应激。FA下调促凋亡蛋白caspase-3和Bax,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2,减少心肌细胞凋亡。结论 FA可抑制DOX诱导的氧化应激和心肌细胞凋亡,减轻心肌损伤。     

H_2O_2预处理对PC12细胞氧化应激损伤的适应性细胞保护作用

目的　探讨H2 O2 预处理对PC12细胞氧化应激损伤的适应性细胞保护作用及与脑源性神经营养因子 (brain de rivedneurotrophicfactor,BDNF)的关系。 方法　采用MTT法检测细胞活力 ,PI染色流式细胞术检测细胞凋亡 ,间接免疫荧光流式细胞术检测细胞BDNF的表达。结果　PC12细胞经 10 μmol·L-1H2 O2 预处理 90min后 ,2 0～ 6 0 μmol·L-1H2 O2 对PC12细胞生长的抑制程度明显下降 ,H2 O2 (2 0、30μmol·L-1)对PC12细胞凋亡的诱导作用明显受到抑制 ,BD NF的表达强度增强。结论　H2 O2 预处理对PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用 ,其作用机制可能与增加脑源性神经营养因子表达有关     

银杏叶标准提取物对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的：探讨银杏叶标准提取物EGB761对过氧化氢（H2O2）诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞（PC12细胞）凋亡的保护作用及可能的机制。方法：PC12细胞常规培养生长至对数期,进行如下分组试验：正常对照组（NS）,H2O2组（H2O2,200μmol/LH2O2）,低剂量EGB761组（GL,10μg/mlEGB761＋H2O2）,中剂量EGB761组（GM,20μg/mlEGB761＋H2O2）,高剂量EGB761组（GH,50μg/mlEGB761＋H2O2）。用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定PC12细胞活力;流式细胞仪测定PC12细胞凋亡率;分光光度计测定过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总超氧化物岐化酶（T-SOD）活力和抗氧化能力（T-AOC）以及丙二醛（MDA）含量;Western blot法测定胞浆内Bcl-2、Bax以及Caspase-3的表达。结果：与正常对照组比较,H2O2组的PC12细胞的活力明显降低,细胞凋亡率显著增加（P〈0.05）。与H2O2组比较,EGB761低、中、高组的PC12细胞活力显著增强,且呈剂量依赖关系（P〈0.05）;GM组和GH组CAT,GSH-Px,T-SOD和活性和T-AOC均显著提高（P〈0.05）,MDA含量显著下降（P〈0.05）,GL组T-SOD活力和T-AOC水平升高以及MDA含量下降（P〈0.05）,而CAT和GSH-Px活力无显著变化（P〈0.05）。与H2O2组比较,EGB761低、中、高组PC12细胞的Bcl-2的表达量增加,Bax的表达量下降,Bcl-2/Bax的比值显著增加（P〈0.05）,Caspase-3的表达显著降低（P〈0.05）。结论：H2O2可诱导PC12细胞凋亡,EGB761能显著抑制H2O2诱导PC12细胞凋亡并对细胞有保护作用;EGB761有较强的抗氧化能力,通过其抗氧化作用改善H2O2诱导的氧化应激状态,并能显著提高Bcl-2/Bax的比值,抑制Caspase-3的活化,发挥保护作用。     

微RNA-24对过氧化氢诱导的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制

目的探讨微RNA-24(miR-24)对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)存活、迁移和凋亡的影响及作用机制。方法通过转染miR-24高表达、miR-24抑制物(anti-miR-24)及其阴性对照慢病毒质粒(miR-24 NC)构建稳转细胞,3种细胞用H2O2500μmol·L^-1处理12 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,划痕实验检测细胞迁移率,Hoechst33258染色及流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-24,Bax,Bcl-2和胱天蛋白酶3 mRNA表达水平,Western印迹法和免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白表达水平。结果与miR-24 NC组比,miR-24高表达组miR-24表达升高(P<0.05),而anti-miR-24组降低(P<0.05)。与正常对照组比,H2O2组细胞凋亡率增加(P<0.05)、细胞存活和迁移率降低(P<0.05),表明氧化损伤模型构建成功。与H2O2+miR-24 NC组比,H2O2+miR-24高表达组上述指标较H2O2+miR-24 NC组升高(P<0.05),促凋亡蛋白Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达量增加,抑凋亡蛋白Bcl-2 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),而H2O2+anti-miR-24组可降低细胞凋亡率、增加细胞存活和迁移率,降低Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达水平,增加Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论氧化应激状态下,miR-24可通过上调Bax、胱天蛋白3表达和下调Bcl-2蛋白表达,促进HUVEC凋亡和抑制其存活和迁移能力。     

萝卜硫素对肾小管上皮细胞氧化应激及Nrf2/HO 1信号通路的影响

摘 要 目的：探讨萝卜硫素（SFN）对肾小管上皮细胞（HK-2）的氧化应激及核转录因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶（HO）-1信号通路的影响。方法: 体外培养HK-2细胞,将细胞分为空白对照组、H2O2处理组、H2O2+10 μmol·K^-1 SFN组、H2O2+20 μmol·K^-1 SFN组和H2O2+40 μmol·K^-1 SFN组;测定HK-2细胞中丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、谷胱甘肽（GSH）的含量及超氧化物歧化酶（SOD）的活性;RT-PCR和Western Blot法分别检测Nrf2和HO-1 mRNA及蛋白表达水平。结果: 与空白对照组相比,H2O2处理组中MDA、NO含量明显升高,GSH水平和SOD酶活性显著降低（P<0.05）;经高、中、低3种浓度的萝卜硫素处理后MDA、NO含量显著降低,GSH水平显著升高,SOD酶活性也显著升高,Nrf2和HO 1mRNA及蛋白表达明显上调（P<0.05）。结论:萝卜硫素有抗HK 2细胞氧化应激损伤的作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

迷迭香酸抗过氧化氢诱导血管平滑肌细胞凋亡作用的研究

目的探讨迷迭香酸对过氧化氢(H2O2)诱导血管平滑肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法流式细胞术检测细胞凋亡率;吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察细胞形态学变化;MTT法检测细胞活性;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Fas和FasL蛋白的表达。结果经500μmol·L-1H2O2处理24h后,细胞凋亡率为34.9%±2.55%,出现核固缩、核碎裂等典型的凋亡形态学改变,所以随后实验选择500μmol·L-1H2O2为诱导血管平滑肌细胞凋亡的最佳浓度。①500μmol·L-1的H2O2处理血管平滑肌细胞24h能引起细胞活性明显降低;细胞凋亡率明显增加,达35.7%±1.33%;细胞中Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax蛋白比值减少,Fas和FasL蛋白表达升高。②用迷迭香酸(10、20、40μmol·L-1)预处理细胞30min,可以增加细胞活性;降低细胞凋亡率,呈浓度依赖性;细胞中Bcl-2/Bax蛋白比值升高,Fas和FasL蛋白表达降低。结论迷迭香酸能拮抗H2O2诱导血管平滑肌细胞凋亡;其作用机制可能与升高细胞中Bcl-2/Bax蛋白比值,减少Fas、FasL蛋白表达有关。     

miR-502增强肺癌对替莫唑胺化疗敏感性的机制研究

摘要：目的:探讨miR-502对替莫唑胺化疗敏感性的影响及其作用机制。方法:用200μmol·L-1的替莫唑胺处理细胞A549作为替莫唑胺组,不作任何处理的细胞作为对照（Con）组;将miR-NC、miR-502、anti-miR-NC、anti-miR-502质粒分别转染至A549细胞中,分别记为miR-NC组、miR-502组、anti-miR-NC组、anti-miR-502组; miR-502转染至A549细胞后再用200μmol·L-1的替莫唑胺处理作为替莫唑胺+miR-502组;将miR-502质粒分别与pcDNA 3.1、pcDNA 3.1-ERCC1共转染至A549细胞中再用200μmol·L-1的替莫唑胺处理,分别记为替莫唑胺+miR-502+pcDNA 3.1组、替莫唑胺+miR-502+pcDNA3.1-ERCC1组;转染均采用脂质体法。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-502表达水平;蛋白质印迹（Western Blot）法检测p21、细胞周期素D1（Cyclin D1）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、切除修复交叉互补基因1（ERCC1）表达;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-502和ERCC1的靶向关系。结果:与人胚肺成纤维细胞MRC5相比,肺癌细胞A549中miR-502表达水平显著降低。过表达miR-502、替莫唑胺处理以及替莫唑胺处理同时过表达miR-502,肺癌细胞A549中p21、Bax表达水平均显著升高,Cyclin D1、Bcl-2表达水平均显著降低,细胞活性均显著降低,细胞凋亡率均显著升高（P<0.05）。结论:过表达miR-502和替莫唑胺均可抑制细胞A549增殖,促进细胞凋亡,过表达miR-502可增强替莫唑胺对细胞A549增殖抑制和凋亡促进作用,其机制可能与ERCC1有关,将可为提高肺癌化疗效果提供新途径。     

柚皮素对氧化应激所致成骨细胞凋亡的影响及机制研究

目的：观察柚皮素对氧化应激导致的成骨细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法体外分离培养成骨细胞,细胞分空白对照组、单纯 H2 O2作用组、H2 O2＋0 J．1μmol／L 柚皮素组、H2 O2＋1μmol／L柚皮素组、H2 O2＋10μmol／L柚皮素组。 MTT法检测成骨细胞活力;流式细胞术检测成骨细胞凋亡率;荧光显微镜观察活性氧（ ROS）含量;比色法检测丙二醛（ MDA）含量;Real time-PCR和Western-blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达情况。结果与空白对照组比较,单纯H2 O2处理组细胞活性明显降低,凋亡率及ROS、MDA含量明显增加;同时Bcl-2 mR-NA和蛋白表达明显下调,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调（ P ＜0．05）。与单纯H2 O2处理组比较,柚皮素预处理24 h能够明显增强细胞活性,降低细胞凋亡率及ROS、MDA含量,上调Bcl-2 mRNA和蛋白表达,下调Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达,呈剂量依赖性（ P ＜0．05）。结论柚皮素在氧化应激条件下能够促进成骨细胞增殖,抑制成骨细胞凋亡,其机制与上调Bcl-2表达,下调Bax、Caspase-3表达有关。     

BMAL1对H2O2诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及机制探讨

目的 探讨节律基因BMAL1对过氧化氢（H2O2）诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及机制。方法 构建 BMAL1稳定过表达的H9C2细胞系后,实验分为2个部分。（1）实验1。对照组、H2O2组（0.2 mmol/L的H2O2处理24 h）、 BMAL1 过表达（BMAL1-OE）组（BMAL1 稳定过表达 H9C2 细胞）、BMAL1 过表达+H2O2（BMAL1-OE+H2O2）组 （0.2 mmol/L的H2O2处理BMAL1稳定过表达H9C2细胞24 h）。（2）实验2。H2O2组、BMAL1-OE+H2O2组、BMAL1过表 达+抑制 NRF2+H2O2（BMAL1-OE+ML385+H2O2）组（NRF2 抑制剂 2 μmol/L 的 ML385 预处理 BMAL1 稳定过表达 H9C2 细胞 24 h,再用 0.2 mmol/L 的 H2O2处理 24 h）、BMAL1 过表达+抑制 HO-1+H2O2（BMAL1-OE+Znpp+H2O2）组 （HO-1抑制剂5 μmol/L的Znpp预处理BMAL1稳定过表达H9C2细胞24 h,再用0.2 mmol/L的H2O2处理24 h）。CCK-8 法检测细胞活力,羟胺法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性、TBA 法检测丙二醛（MDA）含量,Western blot 法检测 BMAL1、核因子 E2 相关因子 2（NRF2）和血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白表达水平。结果 （1）与 Control 组相比, BMAL1-OE组BMAL1 mRNA表达水平升高,H2O2组细胞活力和细胞上清液SOD活性下降、MDA含量增加,BMAL1、 NRF2和HO-1蛋白相对表达水平降低（P＜0.05）;与H2O2组相比,BMAL1-OE+H2O2组细胞活力和细胞上清液SOD活 性增加,MDA 含量减少,而 BMAL1、NRF2 和 HO-1 蛋白相对表达水平升高（P＜0.05）;（2）与 BMAL1-OE+H2O2组相 比,BMAL1-OE+ML385+H2O2组和BMAL1-OE+Znpp+H2O2组细胞活力和细胞上清液SOD活性降低,MDA含量增加 （P＜0.05）。结论 BMAL1可能通过上调NRF2/HO-1信号轴,减轻H2O2诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤。     

栀子苷抗H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的实验研究

目的探讨栀子苷对氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用及可能机制。方法体外培养的HUVEC细胞用不同浓度的栀子苷药物预处理24h后,加入终浓度为500μmol·L-1H2O2氧化损伤12h。荧光染色法观察细胞内DNA损伤情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化,Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,酶免法测定caspase-3蛋白酶的活性,Real-time PCR检测超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的mRNA表达。结果与模型组相比,不同浓度栀子苷(12.5、25、50mg·L-1)可以明显改善H2O2对细胞内的DNA氧化损伤,降低细胞凋亡率,下调Bax蛋白表达,逐步恢复Bcl-2/Bax表达比例和线粒体膜电位的改变,降低caspase-3蛋白酶活性,上调细胞内Mn-SOD和GPx的表达,但对Bcl-2的表达无影响。结论栀子苷可以抑制H2O2诱导的HUVEC细胞凋亡,其机制可能与调节线粒体应激途径和发挥抗氧化损伤功能有关。