circBACH1靶向miR-4500调控口腔鳞状细胞癌HSC3细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制研究

目的：探讨circBACH1对口腔鳞状细胞癌HSC3细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法：体外培养HSC3细胞,分为si-NC组、si-circBACH1组、miR-NC组、miR-4500组、si-circBACH1+anti-miR-NC组、si-circBACH1+anti-miR-4500组,分别转染si-NC、si-circBACH1、miR-NC、miR-4500 mimics、si-circBACH1与anti-miR-NC、si-circBACH1与anti-miR-4500。qRT-PCR检测口腔鳞状细胞癌组织、癌旁组织及各组HSC3细胞中circBACH1、miR-4500的表达量;CCK-8、平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成能力;划痕实验与Transwell小室实验分别检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测circBACH1对miR-4500的靶向调控作用;Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin的蛋白表达量。结果：与癌旁组织比较,口腔鳞状细胞癌组织中circBACH1的表达量明显升高(P<0...     

miRNA-186靶向Twist-1促胃癌侵袭、迁移的机制研究

目的检测miRNA-186在胃癌中的表达情况,观察miRNA-186表达改变对人胃癌细胞株侵袭、迁移能力的影响并分析可能的分子机制。方法RT-PCR法检测40例胃癌患者胃癌及配对的正常胃黏膜组织中miRNA-186的表达水平,同时检测miRNA-186在胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞中的表达水平。在胃癌细胞中分别转染miRNA-186模拟物（mimic）、抑制物（inhibitor）以上调、下调miRNA-186的表达,应用Transwell试验观察其对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响。应用生物信息学软件预测miRNA-186可能的靶基因,并经双荧光素酶试验及Westernblot试验验证靶基因,分析其促转移的分子机制。结果胃癌组织相较于正常胃黏膜组织、胃癌细胞株相较于正常胃黏膜上皮细胞株的miRNA-186表达水平均降低（均P＜0.05）。在胃癌细胞中,分别上调、下调miRNA-186的表达水平,能够抑制、促进胃癌细胞的侵袭、迁移能力。miRNA-186与Twist-1之间存在反向调控的关系,Twist-1是miRNA-186的靶基因。同时发现,下调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达上调,E-cadherin表达下调,而当上调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调。结论在胃癌组织中miRNA-186的表达水平降低,可能通过靶向调控Twist-1的表达,改变E-cadherin和N-cadherin的表达水平,导致胃癌细胞上皮间质转化,进而促进胃癌细胞的侵袭、迁移。     

miR-203靶向Survivin抑制卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的 探讨miR-203靶向抑制Survivin对卵巢癌SKOV3及OVCAR3细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法 构建过表达miR-203、Survivin及空白对照组的慢病毒载体,转染卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞,嘌呤霉素筛选后构建空白对照组、过表达miR-203组、过表达Survivin组及过表达miR-203联合Survivin组卵巢癌细胞系。Western blotting方法测定各组卵巢癌细胞中Survivin及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达;MTT和平板克隆实验检测卵巢癌细胞增殖能力的改变;Transwell实验检测对细胞迁移和侵袭能力的影响。 结果 (1) 过表达miR-203抑制Survivin的表达及EMT(P<0.05);(2) MTT、平板克隆实验及transwell实验显示,与空白对照组相比,过表达miR-203组能够抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);而过表达Survivin逆转了miR-203对卵巢癌的抑制作用(P<0.05)。 结论 miR-203通过靶向Survivin抑制EMT从而抑制卵巢癌的增殖、迁移及侵袭,miR-203/Survivin/EMT轴有望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

PD-L1对人口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨程序性细胞死亡配体1 (PD-L1)在口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞中的表达及其对OSCC CAL27细胞生物学行为的影响,阐明其可能的作用机制。方法：采用Western blotting法检测口腔上皮HOK细胞和OSCC CAL27、TCA8113和SCC15细胞中PD-L1蛋白表达水平。免疫荧光染色法检测CAL27细胞中PD-L1蛋白表达和定位情况。将CAL27细胞分为对照组（转染si-NC）和si-PD-L1组（转染si-PD-L1）,Western blotting法检测2组细胞干扰效率,CCK-8法检测不同时间点2组细胞增殖活性,平板克隆实验检测2组细胞克隆形成数,细胞划痕愈合实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell小室实验检测2组细胞中迁移和侵袭细胞数。结果：OSCC细胞中PD-L1蛋白表达水平均高于HOK细胞（P<0.05或P<0.01）, PD-L1在CAL27细胞的细胞质和细胞核中均有表达。CCK-8法和平板克隆实验,与对照组比较,不同时间点si-PD-L1组CAL27细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）,克隆形成...     

miRNA-145调控靶基因c-Myc抑制胃癌增殖、侵袭

目的 探索microRNA145（miR-145）对胃癌细胞增殖活性的影响,及与其靶基因c-Myc的调控关系。方法 选取人胃癌细胞株SGC-7901作为研究对象,并向细胞株内转染miR-145模拟物和miR-145阴性对照物,荧光显微镜观察、Q-PCR检测转染后细胞株miR-145的变化,并通过细胞软琼脂克隆增殖实验和MTT实验检测转染后SGC-7901细胞株的增殖能力、Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力。Western blot法检测转染后SGC-7901细胞株中c-Myc蛋白的表达情况。结果 转染后,miR-145模拟物组中miR-145的表达明显高于miR-145阴性对照和空白组,转染miR-145模拟物后SGC-7901细胞增殖能力显著降低（P<0.05）,c-Myc蛋白表达也明显较低（P<0.05）。结论 miR-145能通过抑制靶基因c-Myc的表达,抑制胃癌细胞的增殖与侵袭能力。总之,miR-145可能在胃癌中发挥抑癌基因的作用,是胃癌潜在的早期诊断指标和治疗靶点。     

上调环状RNA_8199表达对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨上调环状RNA_8199表达对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法:RT-PCR检测ESCC细胞系KYSE520中环状RNA_8199的表达;Sanger测序对环状RNA_8199反向剪接位点的PCR产物进行验证;将KYSE520细胞中提取的RNA分为RNase R处理组与对照组,R...     

circFOXK2靶向miR-409-3p调控肺癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨circFOXK2对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 收集45例肺癌患者的癌组织和癌旁组织,采用qRT-PCR法检测组织中circFOXK2和miR-409-3p表达。体外培养肺癌细胞A549和H1299,双荧光素酶报告基因实验验证circFOXK2和miR-409-3p的调控关系。转染circFOXK2小干扰RNA、miR-409-3p模拟物、或共转染circFOXK2小干扰RNA与miR-409-3p抑制剂至A549和H1299细胞。细胞增殖、迁移和侵袭用CCK-8法、克隆形成实验和Transwell分析。蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 肺癌组织中circFOXK2水平明显上升(P<0.05),而miR-409-3p水平明显下降(P<0.05)。circFOXK2在A549和H1299细胞中靶向结合并负调控miR-409-3p。敲减circFOXK2或过表达miR-409-3p后,肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(均P<0.05),N-cadherin水平降低(P<0.05),而E-...     

miRNA-149靶向IGFBP5抑制膀胱癌细胞侵袭的分子机制研究

目的探讨miRNA-149靶向IGFBP5抑制膀胱癌细胞侵袭的分子机制。方法采用双萤光报告基因系统分别检测miRNA-149对目的基因IGFBP5和PDGFRA的3'UTR的影响。在T24膀胱癌细胞中瞬时转染miRNA-149模拟物(mimic)和阴性对照miRNA(mimic NC),并且在该细胞中分别转染IGFBP5过表达质粒(H10495)、阴性对照(H155)和PDGFRA过表达质粒(H10496),利用Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力。结果 miRNA-149显著抑制IGFBP5的3’UTR活性,差异具有统计学意义(P0.0001)。Transwell实验显示T24-H155-miRNA149-mimics组较T24-H155-mimic-NC对照组(control)侵袭能力降低,差异具有统计学意义(P0.0001),而在T24-H10495-miRNA-149-mimics组较T24-H155-miRNA-149-mimics组侵袭能力明显增强(P0.01)。另一方面,T24-H10496-miRNA-149-mimics组较T24-H155-miRNA-149-mimics组侵袭能力无明显变化(P0.05)。结论该研究表明miRNA-149通过抑制其下游基因IGFBP5从而抑制膀胱癌侵袭,为临床膀胱癌转移的分子治疗研究提供了新的靶点和理论依据。     

LncRNA MIAT靶向miR-206促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用研究

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIAT靶向微小RNA(miR)-206促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用。方法 将食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞分为ctrl组(正常培养的ESCC细胞)、si-NC组、si-MIAT组、si-MIAT+miR-NC组和si-MIAT+miR-206 inhibitor组。实时qRT-PCR检测各组细胞MIAT、miR-206表达;CCK-8法检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞术分析细胞凋亡情况;蛋白质印迹技术检测PCNA、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证MIAT和miR-206的关系。结果 与ctrl组、si-NC组比较,si-MIAT组ESCC细胞中miR-206表达、细胞凋亡率升高,MIAT、OD₄₅₀值(24、48、72 h)、划痕愈合率、PCNA和MMP9蛋白表达降低(P<0.05);干扰LncRNA MIAT表达能降低ESCC细胞增殖、迁移、侵袭能力,提高细胞凋亡能力,MIAT靶向调控miR-206表达。结论 干扰LncRNA MIAT表达能够阻滞ESCC...     

miR-302c调控CXCL8表达抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭

目的：探讨miR-302c调控CXC趋化因子配体8(CXCL8)表达对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖和侵袭的影响。方法：收集行手术治疗的ESCC病人ESCC组织和其对应的癌旁组织,以及人ESCC细胞系Eca109、Ec9706、TE-11、TE-10、食管正常上皮细胞系Het-1A为研究对象,qRT-PCR检测miR-302c表达;利用Lipofectamine^TM2000转染试剂盒对Eca109细胞进行转染,分组为：空白组(细胞未转染)、miR-NC组、miR-302c mimics组、si-CXCL8组、si-NC组、miR-302c mimics+OE-NC组、miR-302c mimics+OE-CXCL8组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-302c表达;MTT法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验检测各组细胞侵袭情况;双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-302c与CXCL8靶向关系;Western blotting检测CXCL8、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达情况。结果：miR-...     

lncRNA THAP9-AS1靶向miR-577调控结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)THAP9反义RNA1(THAP9-AS1)对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制.方法 收集苏州市立区院东区2017-2019年手术切除并经病理证实的结直肠癌组织标本30例,所有患者术前未接受过放化疗,另取距离癌组织边缘5 cm处的正常组织作为对照.将si-NC、si...     

circ_0001588靶向miR-1286调控人胃癌AGS细胞糖酵解、增殖、迁移及侵袭

目的 探讨circ_0001588对人胃癌AGS细胞糖酵解、增殖、迁移及侵袭的影响及可能机制.方法 采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织、人胃癌细胞株中circ_0001588、miR-1286表达;将人胃癌细胞分为si-NC组、si-circ_0001588组、miR-NC组、miR-1...     

miRNA-125b对舌鳞状细胞癌的增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 研究miRNA-125b对舌鳞状细胞癌的增殖、凋亡、侵袭及迁移产生影响。方法 采用RT-qPCR检测手术切除的舌鳞癌组织及癌旁正常组织中miRNA-125b的表达,构建细胞实验,CCK-8法细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞的凋亡,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕试验检测细胞迁移能力。结果 TSCC组织中miRNA-125b的表达明显低于癌旁正常组织(P<0.05);miRNA-125b过表达组中细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显降低,凋亡率明显升高(P<0.05);而miRNA-125b干扰组上述结果相反(P<0.05)。结论 miRNA-125b在TSCC组织中低表达,低表达的miRNA-125b促进舌鳞状细胞癌的增殖,减少细胞凋亡,增强其侵袭及迁移能力。     

miRNA-381靶向HMGB1对IHH-4细胞生长侵袭及迁移的影响

目的探究微小RNA-381 (miR-381)调控高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)对甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞生长、侵袭及迁移的影响。方法购置甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞及正常甲状腺细胞Nthy-ori-3各1株,取第3代细胞培养48 h后,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-381和HMGB1在甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞和正常甲状腺Nthy-ori-3细胞中的表达水平。利用Lipofectamine 2000转染miR-381 mimic后,检测IHH-4细胞中miR-381和HMGB1的表达水平。生物信息学预测miR-381和HMGB1的靶向关系,并用荧光素酶报告实验验证两者的靶向关系。每孔按2×105/m L细胞密度接种IHH-4细胞,分为IHH-4组(甲状腺乳头状瘤细胞IHH-4组)、miR-381 mimic组(miR-381 mimic转染组)、pc-HMGB1组(HMGB1过表达转染组)、mimic+pc-HMGB1组(miR-381 mimic和pc-HMGB1共同转染组),每组设3个复孔,采用CCK8法检测各组IHH-4细胞活性,Transwell及划痕实验分别检测IHH-4细胞侵袭及迁移能力,免疫印迹法检测IHH-4细胞中Ki67、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9和晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达水平。结果与Nthy-ori-3细胞比较,IHH-4细胞中miR-381mRNA水平降低,HMGB1 mRNA水平升高,差异有统计学意义(P <0. 01)。与IHH-4组相比,miR-381 mimic组miR-381表达增加(P <0. 01)。miR-381和HMGB1存在靶向关系。与IHH-4组相比,miR-381 mimic组细胞增殖倍数、Ki67表达、侵袭细胞数、划痕闭合率、MMP-2、MMP-9和RAGE表达均降低(P均<0. 01),pc-HMGB1组上述指标均升高(P均<0. 01);与miR-381mimic组相比,mimic+pc-HMGB1组细胞增殖倍数、Ki67表达、侵袭细胞数、划痕闭合率、MMP-2、MMP-9和RAGE水平也明显上升(P均<0. 01)。结论 miR-381通过靶向下调HMGB1表达,抑制IHH-4细胞增殖、侵袭和迁移。     

Twist调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨增强或降低Twist表达对不同恶性程度的骨肉瘤细胞体外增殖、迁移、侵袭及体内成瘤的作用。方法Real-time PCR 及Western blot检测Twist在143B、MG63及TE85三种不同骨肉瘤中的基础表达。采用Ad-Twist及Ad-siTwist腺病毒感染 细胞,细胞生长曲线检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞的平行迁移能力,Transwell实验检测细胞的垂直迁移及侵袭能力。 Ad-Twist及Ad-siTwist感染Luc标记的143B细胞,制备胫骨近端骨肉瘤模型,活体成像动态观察细胞在体内的生长。结果在 骨肉瘤细胞中Twist 的基础表达显著高于C3H10 细胞（P<0.05）,其中在143B细胞表达最高,MG63 细胞次之,TE85 细胞中最 低,Twist的表达水平与骨肉瘤细胞的恶性程度呈正相关。Ad-Twist及Ad-siTwist感染细胞分别能显著提高或降低骨肉瘤细胞 中Twist的mRNA及蛋白水平的表达（P<0.05）。生长曲线结果显示Twist过表达能显著促进骨肉瘤细胞的增殖,而抑制Twist的 表达后,骨肉瘤细胞的增殖能力降低（P<0.05）。Transwell实验发现Twist过表达后,3种骨肉瘤细胞迁移或侵袭至小室的细胞 数明显增多,而抑制Twist的表达可降低骨肉瘤细胞的迁移侵袭能力（P<0.05）。143B细胞具有良好的体内成瘤能力,Twist过表 达促进143B细胞在裸鼠体内生长,活体成像动态观察荧光信号显著高于对照组,抑制Twist表达可显著抑制细胞在裸鼠体内生 长,信号明显弱于对照组。结论Twist可增强骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及体内成瘤能力。     

miR-320靶向调控FoxM1对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响

目的分析miR-320对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制。方法将SW480细胞分为SW480组、mimic对照组、miR-320 mimic-/FoxM1 wt+/FoxM1 mut-组、miR-320 mimic+/FoxM1 wt+/FoxM1 mut-组、miR-320 mimic-/FoxM1 wt-/FoxM1 mut+组、miR-320 mimic+/FoxM1 wt-/FoxM1 mut+组、miR-320 mimic组、pcFoxM1组、miR-320 mimic+pc-FoxM1组;检测各组细胞内凋亡、增殖、侵袭等相关指标。结果 miR-320 mimic细胞表达miR-320量显著升高(P0.05),FoxM1表达量显著降低(P0.05),荧光素酶报告实验结果显示,与FoxM1 wt组比较,FoxM1 wt+miR-320组荧光素酶活性显著降低(P0.05);miR-320 mimic+pc-FoxM1组细胞细胞增殖数及PCNA蛋白表达水平均显著高于miR-320 mimic组(P0.05);与miR-320 mimic组相比,miR-320 mimic+pc-FoxM1组细胞cleaved Caspase-9表达水平显著降低(P0.05);与miR-320 mimic组相比,miR-320 mimic+pc-FoxM1组细胞迁移率显著升高(P0.05);与miR-320 mimic组相比,miR-320 mimic+pc-FoxM1组细胞侵袭数显著升高(P0.05)。结论 miR-320通过靶向调控FoxM1实现抑制结肠癌SW480细胞增殖、侵袭能力。     

miR-134靶向基质金属蛋白酶1对喉癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的 探讨miR-134靶向基质金属蛋白酶1(MMP1)对喉癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响.方法 双荧光素酶报告基因实验验证MMP1基因是否为miR-134的靶向基因.转染实验分为miR-134 mimics组、miR-134 antagomir组和空白对照组,采用CCK-8、流式细胞术和Transwell法检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,Western blot检测过表达或降低miR-134对MMP1蛋白表达的影响.结果 双荧光素酶报告基因结果显示miR-134能和MMP13'-UTR端结合且明显抑制荧光素酶活性.miR-134 mimics组细胞在转染后24 h的细胞活力明显低于空白对照组(P<0.01),而miR-134 antagomir组明显高于空白对照组(P<0.05).与空白对照组凋亡率[(4.32±0.36)％]比较,miR-134 mimics组[(12.02±0.45)％]明显增加(P<0.01),而miR-134 antagomir组[(2.31±0.26)％]明显降低(P<0.05).与空白对照组比较,miR-134 mimics组的细胞侵袭和迁移能力明显减弱、MMP1蛋白表达明显降低(P<0.05),miR-134 antagomir组的细胞侵袭和迁移能力明显增强、MMP1蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 miR-134在转录后水平调控MMP 1蛋白表达来影响喉癌细胞的增殖、凋亡、侵袭及迁移.