紫草素调控PI3K/Akt/mTOR通路对人胃癌MGC803细胞自噬和凋亡的影响

目的：研究紫草素对人胃癌MGC803细胞自噬和凋亡的影响及作用机制。方法 ：取对数生长期MGC803细胞,设空白对照组、紫草素组、紫草素+IGF-1(PI3K激活剂)组、紫草素+LY294002(PI3K抑制剂)组。药物干预24 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,GFP-LC3质粒转染法观察细胞自噬小体,Western blot法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、p-mTOR、Caspase-3、cleaved Caspase-3、LC3、Beclin-1的表达。结果：与空白对照组比较,紫草素组细胞增殖抑制率、凋亡率升高（P<0.05）,自噬小体数量明显增多,PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平降低（P<0.05）,cleaved Caspase-3/Caspase-3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及Beclin-1表达量升高（P<0.05）。IGF-1可明显逆转紫草素对MGC803细胞增殖抑制、凋亡、自噬,PI3K、Akt、mTOR磷酸化和cleaved Cas...     

17β-E2介导GPR30/AMPK/mTOR通路调节MC3T3-E1成骨细胞线粒体自噬的作用机制研究

目的阐明17β-E2介导GPR30/AMPK/m TOR通路调节MC3T3-E1成骨细胞线粒体自噬的具体作用机制。方法体外培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞,使用不同浓度的17β-E2处理细胞,并按照分组选择性应用G15(GPR30抑制剂)或Compound C(AMPK抑制剂)。使用实时定量PCR技术与Western blot方法分别检测MC3T3-E1细胞内GPR30 mRNA与蛋白的表达水平;使用免疫荧光检测技术进一步观察GPR30在MC3T3-E1细胞中的表达及定位情况;应用Western blot方法检测线粒体自噬相关蛋白LC3、Tom20、Hsp60以及信号通路蛋白AMPK、m TOR的表达水平;应用透射电子显微镜观察成骨细胞中线粒体自噬小体的形成情况。结果 (1)GPR30在MC3T3-E1细胞中存在内源性表达,17β-E2能提高MC3T3-E1细胞中GPR30的mRNA与蛋白表达水平,当雌二醇浓度为10-7mol/L时促进作用最强。GPR30特异性抑制剂G15可以阻断17β-E2对GPR30蛋白表达的促进作用。(2)17β-E2能提高MC3T3-E1细胞内线粒体自噬相关蛋白LC3、Tom20、Hsp60的表达水平,GPR30特异性抑制剂G15可以阻断17β-E2对线粒体自噬相关蛋白表达的促进作用。(3)透射电子显微镜观察结果显示,17β-E2能促进MC3T3-E1细胞中线粒体自噬小体的生成。(4)17β-E2能增加MC3T3-E1细胞中信号通路AMPK蛋白的磷酸化水平,并降低信号通路下游分子m TOR蛋白的磷酸化水平,给予AMPK抑制剂Compound C后,信号通路AMPK蛋白的磷酸化水平降低。结论 17β-E2能够促进MC3T3-E1成骨细胞内GPR30的表达,并且能通过作用于GPR30来激活细胞内AMPK/m TOR信号通路,诱导MC3T3-E1成骨细胞发生线粒体自噬。     

釉丛蛋白1表达对结直肠腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探究釉丛蛋白1(TUFT1)表达对结直肠腺癌细胞(HCT-15)增殖、凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:2019年3月至2021年5月,20例结直肠癌(CRA)患者癌组织及相应癌旁组织。将HCT-15细胞分为对照组、siRNA-NC组、siRNA-TUFT1组、siRNA-TUFT1+IGF-1(PI3K/Akt通路激活剂25 ng/mL)组;实时荧光定量PCR检测组织及细胞中TUFT1表达;CCK-8法、克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;Western blot检测组织及细胞中增殖、凋亡及PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果:与癌组织相比,癌旁组织中TUFT1 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);与对照组相比,siRNA-TUFT1组细胞增殖抑制率、G0/G1期细胞、细胞凋亡率、Caspase-3、Bax表达水平显著增加,而c-Myc、Cyclin D1表达水平、克隆细胞数、S期和G2/M期细胞、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt水平显著降低(P<0.05);IGF-1可逆转TUFT1沉默对上述指标的影响。结论:TUFT1表达沉默可能通过抑制PI3K/Akt通路激活来抑制HCT-15细胞增殖、促进凋亡。     

连翘苷调节相关信号通路对地塞米松诱导的成骨细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨连翘苷(phillyrin, PHN)调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对地塞米松(dexamethasone, DEX)诱导的成骨细胞自噬和凋亡的影响。方法 将MC3T3-E1细胞分为对照组(NOR组)、DEX组(10μmol/L DEX处理MC3T3-E1细胞)、L-PHN组(5μmol/L PHN处理MC3T3-E1细胞)、M-PHN组(10μmol/L PHN处理MC3T3-E1细胞)、H-PHN组(20μmol/L PHN处理MC3T3-E1细胞)、ZSTK474组(用20μmol/L PHN和2μmol/L的PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂ZSTK474处理MC3T3-E1细胞);MTT法检测细胞毒性和细胞活力;流式细胞术检测MC3T3-E1细胞凋亡;透射电子显微镜(TEM)观察自噬小体;Western blot法检测MC3T3-E1细胞中自噬、凋亡和PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达;ALP活性及ALP染色检测MC3T3-E1细胞分化能力。结果 0～80μmol/L PHN对...     

无血清条件对诱导转染pEGFP-C1/Akt的骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的探讨无血清条件对诱导pEGFP-C1/Akt转染的骨髓间充质干细胞（MSCs）凋亡的影响。方法实验分实验组（pEGFP-C1/Akt转染MSCs）、抑制组（pEGFP-C1/Akt转染MSCs＋PI3K/Akt特异性抑制剂）和对照组（MSCs）。在无血清培养基条件下,分别在4、12、24和36h共4个时间点利用RT-PCR检测Akt及Caspase-3mRNA表达,Western blot检测Akt蛋白表达,免疫组化检测Caspase-3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果在无血清培养4、12、24和36h后,实验组的Akt mRNA和蛋白的表达均高于抑制组及对照组（P〈0.01）,Caspase-3mRNA及蛋白的表达水平和细胞凋亡率则均低于抑制组及对照组（P〈0.01）;抑制组及对照组间Akt和Caspase-3mRNA及蛋白的表达和凋亡率的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论Akt可能通过PI3K/Akt途径抑制其下游底物Caspase-3的表达,从而抑制无血清诱导的MSCs凋亡。     

雷公藤甲素对PAN致足细胞损伤中mTOR/p70S6K/4EBP1信号通路的影响

目的:探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)对m TOR/p70S6K/4EBP1信号通路的影响及其保护足细胞的可能机制。方法:氨基核苷嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PAN)刺激体外培养的足细胞24 h建立模型。细胞增殖检测试剂盒(CCK-8法)检测不同浓度雷公藤作用下PAN损伤足细胞的细胞存活率。后将足细胞随机分组:(1)对照组;(2)PAN组(PAN组,PAN 50μg/ml);(3)TP组(PAN 50μg/ml+TP 10 ng/ml),予以相应刺激24 h。采用实时荧光定量PCR检测足细胞m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt、synaptopodin mRNA表达量,western blot检测足细胞p-mTOR、p-4EBP1、p-p70S6K、p-Akt、synaptopodin蛋白表达量。结果:(1)CCK-8结果显示,PAN造成足细胞损伤时加入浓度为3、10 ng/ml雷公藤甲素浓度均使足细胞活性上升,10 ng/ml时作用最明显(均P0.05)。(2)PAN增加m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt mRNA及蛋白的表达量,减少synaptopodin mRNA及蛋白表达水平(均P0.05)。(3)雷公藤甲素共处理细胞后,m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt mRNA及蛋白的表达水平明显下降,而synaptopodin mRNA及蛋白表达水平明显升高(均P0.05)。结论:雷公藤甲素可能通过抑制m TOR/p70S6K/4EBP1信号通路,减轻足细胞损伤。     

SH2B1沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡及PI3K/Akt通路的影响

目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)沉默Src同源性2B衔接蛋白1(SH2B1)对乳腺癌细胞增殖、凋亡及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:体外培养人正常乳腺上皮细胞MCF-10a与乳腺癌细胞MCF-7,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞中SH2B1 mRNA及蛋白表达水平。采用RNAi技术将SH2B1阴性对照质粒、si-SH2B1分别转染至MCF-7细胞,分别命名为si-NC组、si-SH2B1组,未经处理的MCF-7细胞命名为空白对照组。采用RT-PCR法检测各组MCF-7细胞中SH2B1、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)mRNA表达水平;CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、PI3K及其磷酸化蛋白(p-PI3K)、Akt及其磷酸化蛋白(p-Akt)等蛋白表达情况。结果:与MCF-10a细胞相比,MCF-7细胞中SH2B1 mRNA及蛋白表达均显著升高(P0.05);与空白对照组、si-NC组相比,si-SH2B1组SH2B1 mRNA及蛋白表达、S期与G_2/M期DNA量、Bcl-2 mRNA及蛋白表达均显著降低(P0.05);MCF-7细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、G_0/G_1期DNA量、Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达均显著升高(P0.05);WB法显示,si-SH2B1组MCF-7细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达均显著低于空白对照组、si-NC组(P0.05)。结论:SH2B1沉默可抑制乳腺癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡,其作用机制可能与下调PI3K/Akt信号通路有关。     

低强度脉冲超声通过PIEZO1/PI3K/AKT/mTOR信号通路促进成骨细胞增殖的研究

目的 探索低强度脉冲超声（low-intensity pulsed ultrasound，LIPUS）的促成骨机制，为治疗骨质疏松寻找潜在有价值的分子靶点。方法 将成骨细胞分为LIPUS组和对照组，分别给予LIPUS 1、6、12、18、24、36 h照射后，使用CCK-8检测两组细胞的增殖活力，并使用Western blot检测两组PIEZO1蛋白的表达水平。将成骨细胞分为对照组、LIPUS组、LIPUS+GsMTx4组和GsMTx4组，给予干预措施后，使用Western blot检测各组p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR和Cyclin D1的表达水平。结果 CCK-8结果提示，LIPUS可显著促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖活力；LIPUS组的PIEZO1和Cyclin D1的表达水平显著高于对照组（P＜0.001），表明LIPUS可能是通过上调PIEZO1的表达进而促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖；在机制研究中发现，LIPUS组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR和Cyclin D1的表达水平显著高于对照组（P＜0.001），GsMTx4组的显著低于对照组（P＜0.001），LIPUS+GsMTx4组的显著低于LIPUS组（P＜0.001）。结论 LIPUS可通过促进PIEZO1的表达进而活化PI3K/AKT/mTOR信号通路促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖。     

黄瓜籽总皂苷对MC3T3-E1细胞分化及SPARC、OPG/RANKL表达的影响

目的观察黄瓜籽总皂苷提取物(cucumber seed saponins,CSS)对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响,以及与骨质疏松相关的SPARC、OPG/RANKL/RANK信号通路的作用。方法通过MTT实验、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测、茜素红染色,考察不同浓度CSS对MC3T3-E1细胞增殖、分化及矿化的影响;采用RT-PCR方法检测SPARC、OPG/RANKL mRNA表达水平; Western blot检测SPARC、OPG/RANKL的蛋白表达量。结果与阳性对照组相比,CSS能明显促进MC3T3-E1细胞增殖(P0.05),CSS高、中剂量组能明显提高MC3T3-E1细胞ALP活性及钙化结节数量(P0.05);与空白组相比,CSS不同剂量组均明显上调SPARC、OPG/RANKL mRNA及蛋白表达水平(P0.05)。结论黄瓜籽总皂苷能够促进成骨细胞MC3T3-E1的增殖、分化及矿化能力,并通过上调SPARC、OPG/RANKL的表达水平提高MC3T3-E1细胞的成骨能力。     

大黄素对胆管癌QBC939细胞生长及磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路表达的影响

目的 观察大黄素在体外对胆管癌QBC939细胞生长的抑制作用及其对磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路的影响.方法 用大黄素作为干预因素,时间效应组以含大黄素的培养液分别培养QBC939细胞不同时间,剂量效应组分别用不同浓度大黄素的培养液与QBC939细胞共培养;检测细胞增殖,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中B淋巴细胞/白血病-2 (bcl-2) mRNA表达,Western blot检测细胞中bcl-2、Akt、磷酸化Akt (p-Akt)、核因子(NF)-κB、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白质的表达.结果 10、20、40、80 μmol/L大黄素对QBC939细胞增殖抑制率分别为17.3％、28.6％、46.5％和66.4％ (P ＜0.05),bcl-2、p-Akt、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR表达明显下降,Akt表达无变化.结论 大黄素抑制QBC939细胞增殖,可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号转导途径.     

miR-155靶向调节PIK3R1对类风湿关节炎大鼠模型PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探讨miR-155靶向调节PIK3R1对类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-155 agomir组、miR-155 antagomir组、miR-155阴性对照组,诱导RA模型,分组处理后,观察关节症状,检测关节炎指数及后足趾容积;HE染色观察大鼠关节组织病理形态;使用试剂盒检测大鼠关节组织炎性因子IL-6、IL-17及IL-18水平;免疫印迹检测大鼠关节组织PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白表达;qRT-PCR实验检测大鼠关节组织miR-155及PIK3R1 mRNA水平;双荧光素酶报告基因实验检测miR-155对PIK3R1的靶向调控作用。结果 与对照组比较,模型组大鼠关节炎症状明显,关节炎指数、后足趾容积、关节组织炎性因子IL-6、IL-17及IL-18水平、关节组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt及p-mTOR/mTOR水平、关节组织miR-155水平明显升高（P＜0.05）,PIK3R1 mRNA水平明显降低（P＜0.05）。与模型组、miR-155阴性对照组比较,miR-155 antagomir组大鼠上述指标得到明显改善（P＜0.05）;miR-155 agomir组与miR-155 antagomir组趋势相反（P＜0.05）。结论 miR-155可靶向下调PIK3R1的表达,激活PI3K/Akt/mTOR信号,加重RA大鼠关节炎症损伤,下调miR-155表达,可抑制PI3K/Akt/mTOR信号激活及炎症反应发生发展,改善关节炎症状。     

黄连素通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制高糖条件下的肾脏系膜细胞增殖

目的：探讨黄连素（berberine,BBR）对高糖条件下的大鼠肾脏系膜细胞 HBZY-1 cells （MCS）增殖的影响及其作用机制。方法将对数生长期细胞分成正常糖处理组（NG 组）,高糖组（HG组）和黄连素组（BBR组）。NG组细胞体系常规培养培养,HG 组细胞体系加入40 mmol/L 葡萄糖,BBR组细胞培养体系中加入40 mmol/L葡萄糖＋黄连素30μmol/L。各组细胞培养48 h 后,利用MTT检测各组HBZY-1细胞增殖;RT-PCR检测各组细胞p85,Akt和mTOR基因表达;West-ern blotting检测细胞中 p85、p-p85、Akt、p-Akt,mTOR 和 Collagen-Ⅳ蛋白的变化。结果 NG 组与HG组增值率分别为（25%±3%）和（75%±5%）,与 NG组增值率比较,HG组肾脏系膜细胞增殖率明显增高（P〈0.05）,p85与 Akt mRNA表达水平和蛋白水平均无明显变化（P＆gt;0.05）,但 p-p85、p-Akt,Collagen-Ⅳ蛋白表达水平和 mTOR mRNA 表达与蛋白水平均明显增加（P〈0.05）;BBR 组增值率为（42%±5%）,与 HG 组比较,BBR 组肾脏系膜细胞增值率明显降低（P〈0.05）,但 p-p85、p-Akt、Collagen-Ⅳ蛋白表达水平和 mTOR mRNA 表达与蛋白水平均明显下降（P〈0.05）,而 p85和Akt mRNA和蛋白表达水平均无统计学差异（P〈0.05）。结论黄连素能抑制高糖导致的系膜细胞增殖,其作用可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路激活。     

Abated microRNA-21 attenuates high glucose-induced autophagy inhibition in rat mesangial cells by PTEN/Akt/mTOR pathway

Objective To investigate the effects of abated microRNA-21 (miRNA-21) on phosphatase and tensin homologue on chromosome ten protein (PTEN) and PI3K/Akt/mTOR pathway, as well as their further influence on the autophagy in high glucose (HG, 25.0 mmol/L) induced rat glomerular mesangial cells. Methods MiRNA-21 inhibitor and negative control were transfected by liposome 2000 into rat glomerular mesangial cells (HBZY-1). The cells were divided into normal glucose (5.5 mmol/L) group, normal glucose+negative control group, normal glucose+miRNA-21 inhibitor group, HG group, HG+negative control group and HG+miRNA-21 inhibitor group. Cell proliferation and hypertrophy were assayed by MTT and the ratio of total protein to cell number respectively. The miRNA-21 expression was detected using real time PCR. The expressions of PTEN/Akt/mTOR signaling signatures, autophagy-associated protein (p62 and LC3 Ⅱ) and collagen Ⅰ was detected by Western blotting and real time PCR. Autophagosomes were observed using electron microscopy. Results Compared with those in normal glucose group, in HG group cells had hypertrophy and proliferation, up-regulated miRNA-21 expression, and down-regulated PTEN protein and mRNA expressions (all P＜0.01). Also there were and up-regulated p-Akt, p-mTOR, p62 and collagen Ⅰ expression, and lower LC3 Ⅱ expression and autophagosomes (all P＜0.01). Further, compared with those in HG group, cells hypertrophy and proliferation in HG+miRNA-21 inhibitor group were reduced, expressions of p-Akt, p-mTOR, p62 and collagen Ⅰ were down-regulated, while expressions of PTEN and LC3 Ⅱ and autophagosomes were up-regulated (all P＜0.01). Conclusions MiRNA-21 inhibitor up-regulates PTEN expression, which inhibits the activation of Akt/mTOR signaling pathway, ameliorates cell hypertrophy, proliferation and enhances autophagy to reduce extracellular matrix accumulation.     

糖皮质激素通过PI3K-Akt-mTOR信号通路诱导股骨头骨微血管内皮细胞凋亡的研究

目的 探讨糖皮质激素通过PI3K-Akt-mTOR信号通路诱导股骨头骨微血管内皮细胞凋亡的机制。方法分离培养人骨微血管内皮细胞，取第3代细胞，给予不同剂量的氢化可的松处理24 h，浓度分别为0.1 mg/mL（低剂量）、0.2 mg/mL（中剂量）和0.3 mg/mL（高剂量），Western blot法检测PI3K-Akt-mTOR信号通路关键蛋白磷脂酰肌醇激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）及其磷酸化形式的表达，AnnexinV/PI染色的流式细胞检测细胞凋亡。结果 Western blot电泳条带灰度值分析提示高浓度氢化可的松可以使该通路关键蛋白表达下降。与对照组相比，0.1 mg/mL、0.2 mg/mL和0.3 mg/mL三组的p-Akt表达分别下降60.72%、61.91%、100.00%（P＜0.01）。p-PI3K表达分别下降12.95%、36.26%、100.00%（P＜0.01）。p-mTOR表达分别下降22.95%、41.28%、57.11%（P＜0.01）。流式细胞检测显示正常对照组的早期凋亡、晚期凋亡/坏死以及活细胞比例分别为16.08%、30.86%和52.52%；激素损伤组这一比例分别为21.67%、37.2%、39.85%。激素损伤+PI3K抑制剂组这一比例分别为19.05%、37.9%和41.26%。统计学分析显示细胞比例组间差异均具有统计学意义（P＜0.001）。结论 糖皮质激素可以显著抑制人股骨头骨微血管内皮细胞内PI3K-Akt-mTOR信号通路关键蛋白的表达，从而诱导股骨头骨微血管内皮细胞发生凋亡和坏死。     

黄芩素通过BMP-2/Smad通路促进MC3T3-E1成骨作用的实验研究

目的 探讨黄芩素（BAI）对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞（MC3T3-E1）成骨分化的作用及其分子机制。方法 将MC3T3-E1分为对照组（正常培养）和BAI组（以Baicalein处理）,在成骨分化条件培养下采用CCK-8检测BAI对MC3T3-E1细胞增殖的影响;分别以碱性磷酸酶染色（ALP）、茜素红染色（ARS）检测MC3T3-E1细胞成骨分化水平与矿化能力,实时荧光定量PCR检测成骨标志基因ALP、COL1A1、RUNX2、OSX的mRNA表达水平,通过免疫印迹法（Western-blot）检测MC3T3-E1细胞中BMP-2、Smad1、p-Smad1蛋白表达水平,通过免疫荧光技术（IF）检测RUNX2、COL1A1表达水平。结果 与对照组比较,BAI干预1 d后发现,BAI组COL1A1（P<0.001）、RUNX2（P <0.05）、OSX（P <0.05） mRNA表达水平在成骨分化中表达上升;干预3 d后发现,与对照组比较,BAI组ALP（P <0.05）、RUNX2（P <0.001）mRNA表达上升;干预7 d后发现,与对照组比较,BAI组COL1A1（P <0.05）mRNA表达水平较对照组上升,BMP-2、p-Smad1/Smad1蛋白表达水平上升（P <0.05）。免疫荧光中成骨标志蛋白RUNX2、COL1A1表达增多（P <0.05）。结论 BAI可通过激活BMP-2/Smad通路促进MC3T3-E1成骨分化。     

不同大小机械牵张力对MC3T3-E1成骨样细胞MMP-13/TIMP-1 mRNA表达的影响

目的:研究不同大小的机械牵张力对成骨细胞MMP-13/TIMP-1mRNA表达的影响。方法:通过自制的多通道细胞牵张应力加载系统对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1同时施加6%、12%和18%的机械牵张力,作用24h后,用RT-PCR方法检测细胞受力后MMP-13/TIMP-1mRNA表达的变化。结果:细胞受力后,其MMP-13/TIMP-1mRNA表达随牵张力值的增大明显增加。结论:不同大小的机械牵张力可以影响成骨细胞的MMP-13/TIMP-1mRNA表达,进而影响骨改建。     

丹参素拮抗氧化应激所致骨质疏松并通过PI3k/Akt通路减少成骨细胞的凋亡

目的探讨丹参素拮抗醋酸泼尼松所致大鼠骨质疏松的作用机理。方法 60只雌性4月龄大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组(醋酸泼尼松5 mg/kg体重)、丹参素高中低剂量组(30 mg/kg体重、20 mg/kg体重、10 mg/kg体重)和对照药白藜芦醇组(5 mg/kg体重)。丹参素组和白藜芦醇组每日先给予模型组同样剂量的醋酸泼尼松,然后给予不同浓度药物处理。连续14w。将成骨细胞MC3T3-E1细胞随机分为A组(正常组)、B组(醋酸泼尼松组)、C组(醋酸泼尼松+丹参素干预组),D组(醋酸泼尼松+丹参素+Ly294002组)。采用双能X线骨密度检测仪检测腰椎及股骨的骨矿物密度(BMD);采用TUNEL原位标记骨质疏松大鼠中骨组织检测细胞凋亡情况;同时采用Western-blot检测细胞凋亡相关蛋白Bax、AIF、cyto-C表达情况;免疫荧光和Western-blot检测成骨细胞MC3T3-E1中PI3/Akt信号通路相关蛋白pAkt表达情况。结果与模型组相比,不同浓度的丹参素和白藜芦醇均能升高BMD值(均P0.05),降低骨质疏松大鼠骨细胞凋亡率(P0.05),抑制凋亡相关蛋白Bax、AIF、cyto-C的表达(均P0.05)。与A组相比,B组和D组成骨细胞凋亡率和凋亡相关蛋白Bax、AIF、cyto-C表达均增高(均P0.05);与B组相比,C组成骨细胞凋亡率和凋亡相关蛋白Bax、AIF、cyto-C表达均明显降低(均P0.05);免疫荧光和Western-blot检测显示C组pAkt表达量与B组相比明显增加(P0.05),具有统计学意义。结论丹参素能够拮抗醋酸泼尼松诱导氧化应激所致骨质疏松大鼠中成骨细胞的凋亡,并且在体外是通过活化PI3k/Akt通路而减少成骨细胞的凋亡。     

抑制核纤层蛋白A/C表达对牵张刺激下成骨细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察小干扰RNA技术(siRNA)抑制核纤层蛋白A/C(lamin A/C)表达对牵张刺激下小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖及凋亡的影响.方法 化学合成3条针对lamin A/C靶点的siRNA序列,脂质体转染MC3T3-E1细胞,实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测lamin A/C mRNA和蛋白变化.细胞转染72 h后行牵张刺激6 h,Hoechst 33258检测DNA含量来反映细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及凋亡.结果 筛选出的siRNA-2显著抑制lamin A/C mRNA和蛋白产物表达(P＜0.01).未转染细胞经牵张刺激,DNA合成随时间推移而增加;细胞G0/G1期比例为65.19%;S期为22.57%,细胞凋亡率为11.49%;转染细胞经牵张刺激后,DNA合成较未转染细胞显著性减少(P＜0.01);G0/G1期比例提高至85.82%;S期降低至11.37%,凋亡率达19.32%(P＜0.01).结论 抑制lamin A/C表达会导致牵张刺激诱导的促增殖作用减弱,细胞周期阻滞于G0/G1期,促进细胞的凋亡.