一个两次妊娠外生殖器畸形胎儿家系的临床遗传学分析

目的 明确一个两次妊娠外生殖器畸形胎儿家系的遗传病因，为有效遗传咨询提供依据。方法 对引产胎儿进行脐血染色体核型分析、超声检查、尸体解剖，以及CYP21A2基因突变检测并验证变异来源。结果 脐血染色体核型为46,XX,inv(9)(p11q13)，超声检查提示胎儿外生殖器畸形，肾上腺增大，尸检结果与超声检查一致，病检提示儿肾上腺皮质微囊性增生。CYP21A2基因突变检测结果提示引产胎儿存在30 kb大片段纯合缺失，其父母均为携带者。该基因同时检测到11个纯合变异，分别为c.92C> T(p.P31L),c.293-13C> G,c.332＿339del8(p.G111Vfs^*21),c.518T> A(p.I173N),c.710T> A(p.I237N),c.713T> A(p.V238E),c.719T> A(p.M240K),c.844G> T(p.V282L),c.923dupT(p.L308Ffs^*6)、c.955C> T(p.Q319^*)和c.1069C>...     

纳米孔测序技术在非经典型21-羟化酶缺乏症基因诊断中的应用

目的探讨纳米孔测序对2例非经典型21-羟化酶缺乏症(NC 21-OHD)患者基因诊断的性能及应用。方法 2例NC 21-OHD患者于2019年5月就诊于郑州大学第一附属医院, 收集其临床资料, 采集患者及其父母外周血并提取基因组DNA, 应用纳米孔测序技术和生物学信息分析患者的基因变异情况, 进一步通过一代测序对患者检测到的致病性CYP21A2基因变异进行验证。结果患者1平均测序读长12 792 bp, 测序深度27.19 ×, 携带CYP21A2基因c.293-13C>G/c.844G>T(p.Val282Leu)复合变异。患者2平均测序读长13 123 bp, 测序深度21.34 ×, 携带CYP21A2基因c.332₃39delGAGACTAC(p.Gly111Valfs)/c.844G>T(p.Val282Leu)复合杂合变异。进一步验证显示, 例1的c.293-13C>G变异遗传自父亲, c.844G>T(p.Val282Leu)遗传自母亲;例2的c.844G>T(p.Val282Leu)遗传自父亲, c.332     

FⅨ基因全外显子测序技术在血友病B基因携带者检测及产前基因诊断中的应用

目的 探索应用FⅨ基因全外显子测序技术进行血友病B(HB)基因携带者检测和产前基因诊断.方法 在取得5个无血缘关系的汉族HB家系成员知情同意后,采集相关家系成员标本.3个产前诊断标本中,2例为胎儿脐血标本,1例为羊水标本.从标本中提取基因组DNA,通过PCR扩增FⅨ基因所有外显子及其侧翼序列,将产物进行全外显子直接测序.结果 5个家系的HB患者以及FⅨ基因携带者共检出5种突变:c.484 C＞T (p.R162X)、c.1022G＞A(p.R341Q)、c.1135C＞T(p.R379X)、c.799C＞T(p.H267Y)和c.1232G＞T(p.S411I).在产前诊断中,发现1例c.484 C＞T(p.R162X)突变,另2例未检出FⅨ基因突变的胎儿出生后血浆FⅨ促凝活性分别为52.7％和76.2％.结论 首次报道中国汉族HB家系FⅨ基因c.1022G＞A(p.R341Q)、c.1135C＞T(p.R379X)、c.799C ＞T (p.H267Y)和c.1232G＞T(p.S411I)突变;在严格的质量控制下,FⅨ基因全外显子直接测序是一种快速准确的诊断HB基因携带者及产前基因诊断的方法.     

一角膜营养不良家系的TGFBI基因突变*

摘要:目的对一角膜营养不良家 系的致病基因进行检测,明确该家系角膜营养不良的致病基因突变位点。方法采集先证者及其家系成员外周血标本，提取基因组DNA,采用全外显子组测序筛查先证者致病基因及突变位点，并通过Sanger测序对 先证者及其家系成员DNA样本进行验证。结果全外显 子测序结果显示，先证者5号染色体上的转化生长因子β诱导基因(TGFBI)4号外显子发生c.370 C>T(p.R124C)杂合突变,8号外显子发生c.1007 A>T(p.E336V)杂合突变。Sanger 测序验证 发现患者父亲及家系其他患者TGFBI基因也发生c.370 C>T(p.R124C)杂合突变,患者母亲及家系其他正常成员未见TGFBI基因发生突变。TGFBI基因c.370 C>T(p.R124C)突变与疾病表型共分离。结论TGFBI 基因e.370 C>T(p.R124C)杂合突变 是导致该家系角膜营养不良的致病原因。     

云南省婴儿期不同民族高非结合性胆红素血症UGT1A1基因多态性研究

目的研究云南省婴儿期不同民族高非结合性胆红素血症UGT1A1基因多态性研究。方法收集怒江、保山、临沧、迪庆云南边界地区2018年1月至2019年11月就诊于本院新生儿科及消化内科门诊确诊的GS和CNS患儿67例(观察组,基因检测均阳性),并选取同期健康体检婴儿67例作为对照组。比较两组UGT1A1基因突变位点基因型与等位基因频率分布,采用Spearman分析UGT1A1基因突变与非溶血性非结合型高胆红素血症的相关性,比较不同性别、民族患儿UGT1A1基因变异谱。结果观察组c.211G>A、c.1456T>G、c.1061C>T位点突变率分别为62.69%、62.69%、47.77%,高于对照组的14.93%、2.99%、7.46%(P<0.05),组间基因型频率和等位基因频率比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。c.211G>A、c.1456T>G、c.1061C>T杂合与纯合突变均与非溶血性非结合型高胆红素血症呈正相关(P<0.05);汉族患儿c.211G>A、c.1456T>G、c.1061C>T杂合突变型均高于少数民族患儿,汉族患儿c.1456T>G纯合突变型频率低于少数民族患儿(P<0.05)。结论云南地区婴儿期高非结合性胆红素血症发病与UGT1A1基因c.211G>A、c.1456T>G、c.1061C>T位点突变有关,c.1456T>G纯合突变集中体现在少数民族中,c.211G>A、c.1456T>G、c.1061C>T复合杂合突变致病主要集中在汉族人群。     

广西壮族自治区南宁市新生儿GJB2 致聋基因的携带研究

目的 探讨南宁市新生儿GJB2致聋基因携带状况和突变位点与耳聋相关性。方法 收集2016～2018年期间在南宁市新生儿疾病筛查中心进行听力筛查未通过的1 007例新生儿血液,制成干血斑纸片,提取DNA,采用测序法进行GJB2全基因测序。统计新生儿GJB2基因突变的携带率,并结合新生儿听力损失确诊情况分析致聋基因突变特点。结果 1 007例新生儿中GJB2致聋基因突变携带率为55.21%(556/1 007),检测出GJB2基因突变位点16个,其中GJB2 c.109 G>A 突变携带率较高,占20.36%,其次是c.79 G>A 占10.03%,c.608 T>C 占7.65%,c.217 C>A 占7.15%,c.341 A>G 占6.85%,其它位点(包括c.11 G>A,c.-23+1 G>A, c.235del C, c.299 del AT,c.-121 G>A,c.464 A>G,c.147 C>G, c.676 G>T,c.316 T>G,c.-23-35 G>T 和c.368 C>A)突变携带率<0.1%。556例GJB2致聋基因突变者中有31例确诊为不同程度耳聋,4个致聋突变位点包括GJB2 c.109 G>A(26例),c.11 G>A(2例),c.235del C(2例)和c.299 del AT(1例),分别占耳聋患者比率是83.87%,6.45%,6.45%和3.23%。81例检出6个新突变位点c.-23-35 G>T,c.-121 G>A,c.464 A>G, c.217 C>A,c.147 C>G和 c.676 G>T及4例检出1个未明确致病性位点c.-23+1 G>A,另外有250例检出5个常见多态性突变位点。GJB2 c.109 G>A携带率与北京、台湾和上海比较差异有统计学意义(χ²=133.364,11.724,32.449,均P<0.05)。结论 南宁市新生儿GJB2致聋基因携带率较高,筛查出4个致聋突变位点,6个新突变位点及1个未明确致病位点,明确了致聋突变位点以c.109 G>A纯合子突变为主,基因突变特点有明显的地域性差异。     

武汉地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者基因突变分析

目的:探讨武汉地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症患者的基因突变特征。方法:对湖北省妇幼保健院1 321例筛查阳性的新生儿及门诊患者进行G6PD基因检测,首选多色探针熔解曲线法(MMCA)检测中国人群常见的12种G6PD基因突变,对于MMCA法未检出者,分析其酶活性和临床信息,必要时进行测序检测。结果:在1 321例受检者中共检出768例突变,检出率58.1%。共检出18种G6PD基因变异类型,包括c.1388G>A、c.1376G>T、c.95G>A、c.1024C>T、c.871G>A、c.392G>T、c.487 G>A、c.1360C>T、c.1004C>A、c.517T>C、c.592C>T、c.94C>G、c.152C>T、c.320A>G、c.1028A>G、c.1316G>A、c.1327G>C和c.1376G>C,其中男性半合子683例,女性纯合子3例,女性杂合子80例,女性复杂杂合2例。结论:本研究共检出18种G6PD基因变异类型,并首次在中国人群中报...     

遗传性椭圆形红细胞增多症患者临床及基因突变特征:9例报告及文献复习北大核心CSCD

目的报告9例遗传性椭圆形红细胞增多症(hereditary elliptocytosis,HE)患者基因突变类型并分析HE致病性基因突变的特征。方法报告中国医学科学院血液病医院2018年6月至2022年2月临床诊断的9例HE患者临床及基因突变特征,应用Sanger测序方法进行验证,分析基因突变构成、突变类型、基因型及与临床表型之间的关系。结果9例HE患者中6例为SPTA1、1例为SPTB、1例为EPB41红细胞膜蛋白基因突变,另1例为20号染色体拷贝缺失。共涉及11个基因突变位点,包括6个已知突变和5个新发突变。5个新发突变分别为:SPTA1基因9号外显子c.1247A>C(p.K416T),15号外显子c.1891delG(p.A631fs*17),6~12号外显子Del;SPTB基因c.154C>T(p.R52W);EPB41基因c.1636A>G(p.I546V)。6例SPTA1突变患者中3例为SPTA19号外显子突变。结论SPTA1是HE患者最常见的突变基因。     

FANCJ基因在成人急性髓系白血病中的突变图谱

目的:检测分析急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者FANCJ基因突变情况,为研究FANCJ突变类型的AML疾病致病机理奠定基础,同时为其疾病防治提供指导。方法:在FANCJ基因蛋白编码区设计引物,采用PCR扩增及sanger测序法检测222例初诊AML患者骨髓细胞中FANCJ基因编码区突变情况,同时检测AML患者黏膜上皮组织FANCJ基因突变情况;采用NCBI Blast在线生物信息学软件分析FANCJ基因突变在不同物种中的进化保守性。结果:测序分析显示,FANCJ基因在蛋白编码区的11个位点出现突变,分别为exon5:c.G430A:p.A144T,exon6:c.A587G:p.N196S,exon9:c.C1255T:p.R419W,exon10:c.G1442A:p.G481D,exon11:c.C1609G:p.L537V,exon16:c.C2360T:p.P787L,exon17:c.C2440T:p.R814C,exon19:c.C2608T:p.H870Y,exon19:c.A2686G:p.I896V,exon19:c.C2830G:p.Q944E,exon20:c.G3412A:p.D1138N,其中A144T、N196S、R814C、I896V及Q944E突变存在复现性;另外,A144、R419、G381、L537、P787、H870、Q944及D1138位点在不同物种中高度保守。结论:在222例AML患者中发现26名患者中存在FANCJ突变,并且突变位点在不同物种中相对保守,功能重要,这为接下来研究FANCJ突变类型的AML疾病致病机理奠定基础,同时为疾病防治提供指导。     

1例c.1117C>T/c.7288-9T>G复合杂合突变所致血管性血友病家系的发病机制分析

摘要:目的探讨 1例血管性血友病(vWD)家系的诊断及发病机制。方法家系收集。 收集北京大学第一医院就诊的先证者及其家系成员(共4人) ,检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、血管性血友病因子抗原( vWF:Ag)和活性( vWF:Ac)、凝血因 子V活性(FVll:C)、vWF瑞斯托霉素辅因子(vWF:RCo),进行瑞斯托霉素诱导血小板聚集试验( RIPA)、vWF胶原结合(vWF:CB)试验,对先证者及其家系成员进行诊断。提取先证者及其家系成员外周血基因组DNA,进行全外显子测序,分析vWF基因突变,采用生物信息分析工具进行基因突变位点致病性分析,探讨先证者发病机制。结果先证者(M)的 APTT轻度延长FIMI:C正常、vWF:Ag、vWF:Ac、vWF:RCo和vWF:CB明显减低,1.0 mg/mL和1.25 mg/mL的RIPA无明显聚集;父亲(I)的APTTFIlI:C、vWF:Ag.、vWF:Ac和vWF:CB均正常,vWF:RCo轻度减低;母亲(I4)的APTT、FVMH:C、vWF :Ag、vWF:RCo和vWF:CB均正常,vWF:Ac明显减低;哥哥( II)的APTT FMI:C均正常,vWF:Ag、vWF:Ac、vWF:RCo及vWF:CB均不同程度减低;父亲(I)、母亲(I)和哥哥(]I2)的1.0 mg/mL RIPA均无明显聚集。基因分析显示先证者(I[)存在vWF基因c.7288-9T>G和c.1117C>T复合杂合突变,其父亲(I],)存在vWF基因c.7288-9T>G杂合突变;母亲(IL)和哥哥(]I2)存在vWF基因c.1117C>T杂合突变。结论先证者为 2A型vWD,其vWF基因c.1117C>T和c.7288-9T>G杂合突变可能是导致该先证者发病的原因。     

1例植物固醇血症的家系调查及致病基因突变研究

目的探讨1例植物固醇血症家系及其致病基因突变。方法对1例诊断为植物固醇血症的患者及其家系成员进行家系调查;通过PCR扩增先证者及其家系成员基因组DNA中ABCG5及ABCG8基因的所有外显子及其侧翼序列,采用Sanger测序法对PCR产物进行基因测序;采用Polyphen2及Mutation Taster生物信息学软件预测突变的致病性。结果 Sanger测序法发现先症者及家系成员中存在多个基因突变,其中ABCG5基因发现3个突变,分别为外显子1 c.64CT(p.Q22X)杂合无义突变、外显子10 c.1336CT(p.R446X)杂合无义突变、外显子13 c.1810CG(p.Q604E)杂合错义突变;ABCG8基因发现4个突变,分别为(ATG前)-19TG纯合突变、外显子2 c.161AG(p.Y54C)纯合错义突变、外显子13 c.1895TC(p.V632A)纯合错义突变、外显子4和5间的内含子g.12902TC纯合突变。Polyphen2及Mutation Taster软件预测ABCG5基因中c.64CT及c.1336CT为致病突变,其他基因突变均为非致病性的多态性位点。结论 ABCG5基因c.64CT及c.1336CT复杂杂合突变是该植物固醇血症家系的基因发病机制。     

High-resolution melting curve (HRM) analysis to establish CYP21A2 mutations converted from the CYP21A1P in congenital adrenal hyperplasia

BackgroundCongenital adrenal hyperplasia (CAH) is an autosomal recessive disease of an inborn error of steroid metabolism in humans. More than 90% of CAH cases are caused by mutations of the steroid 21-hydroxylase (CYP21A2) gene, and approximately 75% of the defective CYP21A2 genes are generated through an intergenic recombination with the neighboring CYP21A1P pseudogene.MethodsA high-resolution melting (HRM) curve analysis was designed to characterize 11 mutation sites of the CYP21A2 gene that commonly appeared in 21-hydroxylase deficiency. Among these 11 mutations, 9 were found in CAH patients, and 2 were mutations created from normal individuals.ResultsFrom the HRM analysis using 6 fragments of amplicons, we have successfully identified these 11 common disease-causing mutations of the CYP21A2 gene, among which 3 showed 3 distinguishable melting plots; the heteroduplexes showed an upcurved plot, a horizontal plot of homoduplexes of wild-type (WT), and a downcurved plot of homoduplexes of compound mutations.ConclusionsThe HRM analysis is a 1-step of non-gel resolution technique which saves time and is a low-cost method to undertake such a program for screening CAH patients with the 21-hydroxylase deficiency caused by intergenic conversions from the neighboring CYP21A1P pseudogene.     

PRRT2 c.649C>T突变导致智力障碍以及蛋白质表达异常

摘要:目的?利用全外显子测序技术寻找1例智力障碍合并癫痫及运动障碍患者的遗传学病因，并探究其致病机制。方法?提取患儿及父母双方的外周血DNA，使用外显子测序技术寻找患儿的致病基因，并使用Sanger测序验证致病位点。利用小鼠cDNA诱导克隆该致病基因并构建质粒，采用western blot检测致病基因蛋白与野生型蛋白的表达情况。结果?全外显子测序检测发现该患者PRRT2基因存在无义突变(c.649C>T;p.R217X)，遗传自母亲；Sanger测序验证结果与外显子捕获测序结果相一致。western blot证实小鼠PRRT2?R223X突变蛋白(对应人PRRT2 R217X)不能正常表达。结论?PRRT2基因c.649C>T突变可能是该例患者智力障碍的致病原因。突变的PRRT2?R217X蛋白不能正常表达。     

海南省新生儿G6PD缺乏症筛查十年回顾分析

目的寻找海南省人群葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症发病情况和基因突变特点。方法对海南省2007至2016年出生的914520名新生儿的干血斑使用荧光斑点法进行G6PD活性筛查。初筛可疑标本召回使用G6PD/6-磷酸葡萄糖脱氢酶(6GPD)比值法进行确诊,对2016年确诊为G6PD缺乏的患儿的3012份干血斑使用多色探针荧光PCR熔解曲线法进行基因分型。结果海南省10年间在914520例新生儿中初筛阳性36314例,确诊了26370例G6PD缺乏,发病率为2.88%(26370/914520)。以民族划分,汉族人群G6PD发病率2.80%(21688/774555)。黎族人群发病率3.45%(4292/124419),黎族和汉族发病率比较,差异具有统计学意义(χ^2=161.261,P=0.000)。苗族人群发病率3.31%(212/6401),苗族和汉族发病率相比较差异具有统计学意义(χ^2=6.104,P=0.013)。其他民族人群发病率为1.95%(178/9145),与汉族发病率相比较差异具有统计学意义(χ^2=24.283,P=0.000)。在3012例G6PD确诊病例中共检出13种基因突变,其中c.1376 G>T、c.1388 G>A、c.95 A>G和c.1024 C>T突变合并约占91.74%。其中经基因测序发现16种基因型以外的2种突变,即c.86C>T和c.1311C>T。结论海南省新生儿人群G6PD发病率高,G6PD发病有民族和地域差异。海南省人群基因突变主要以c.1376G>T、c.1388G>A、c.95 A>G和c.1024 C>T为主。     

荧光PCR-熔解曲线法检测新疆回族人群CYP2C9和VKORC1基因多态性研究

目的应用荧光PCR-熔解曲线法检测新疆回族人群细胞色素P450酶2C9(CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1(VKORC1)基因多态性,研究新疆回族人群CYP2C9和VKORC1基因分布及基因突变频率情况,并评价荧光PCR-熔解曲线法临床使用的适用性。方法采用荧光PCR-熔解曲线法和测序法对比检测CYP2C9*2、CYP2C9*3和VKORC1(-1639G/A)的基因多态性。结果 228例新疆回族人群中,共检测出CYP2C9*1/*1标本199例,CYP2C9*1/*2标本2例,CYP2C9*1/*3标本26例,CYP2C9*3/*3标本1例,未检测出CYP2C9*2/*2和CYP2C9*2/*3标本。VKORC1(-1639G/A)检测出2种等位基因G和A,其中VKORC1-1639G/G型标本检出2例,VKORC1-1639G/A型标本检出39例,VKORC1-1639A/A型标本检出187例,与测序法对比检测比较,荧光PCR-熔解曲线法与测序法检测结果完全一致。结论新疆回族人群同样具有CYP2C9基因*2、*3位点和VKORC1基因-1639位点的多态性,其发生频率与新疆维吾尔族及其他地域人群的具有一定差异,所采用的荧光PCR-熔解曲线法用于基因多态性检测可满足临床检测要求。     

New sequence variants in BRCA1 and BRCA2 genes detected by high-resolution melting analysis in an elderly healthy female population in Croatia

BACKGROUND: Mutations in BRCA1 and BRCA2 genes are associated with family predisposition to breast and ovarian cancer. Novel screening methods are required for efficient and rapid detection of sequence variants in cancer patients and their family members. METHODS: The screening for variants in the breast and ovarian cancer susceptibility genes BRCA1 and BRCA2 in Croatia was performed by a high-resolution melting approach, which is based on differences in melting curves caused by variations in nucleotide sequence. This is the first screening in Croatia on elderly healthy women with no family history of cancer. BRCA1 screening was performed on 220 and BRCA2 screening on 115 samples. RESULTS: In a population well beyond the average age of breast/ovarian cancer onset, 21 different sequence variants in the BRCA1 gene (one novel: c.5193+49_50delTA) and 36 variants in the BRCA2 gene (7 novel: c.459A>C, c.3318C>A, c.4412_ 4414delGAA, c.4790C>A, c.6264T>C, c.9087G>A, and c.9864A>G) were detected. CONCLUSIONS: Nine BRCA1 and seven BRCA2 known variants appeared with such high frequencies that they could be declared as harmless in this population. Eight BRCA1 high frequency variants, located further from the promoter region, appear to be strongly correlated. Three novel variants that changed the amino acid sequence of the BRCA2 protein (two missense base substitutions, c.3318C>A and c.4790C>A, and one codon deletion c.4412_4414delGAA), appearing only once, were predicted to have no potential effect on protein structure and function.     

先天性肾上腺皮质增生症基因突变位点诊断方法的建立

目的 利用PCR产物直接测序、SNP位点分析和T-A克隆技术,建立先天性肾上腺皮质增生症的基因突变位点诊断方法.方法 收集临床诊断为21-羟化酶缺乏症(21-OHD)患者33例和17α-羟化酶缺乏症(17-OHD)患者2例及所有患者父母的外周血标本,以及105名健康对照者外周血标本.抽提外周血基因组DNA.根据CYP21A2基因与其假基因间的基因序列差异设计高特异性的PCR引物,扩增CYP21A2基因全长,通过PCR产物直接测序、SNP位点分析以及PCR产物T-A克隆分析检测CYP21A2基因突变.采用PCR扩增结合直接测序的方法进行CYP17A1基因突变的检测.结果 应用本研究建立的方法,可以对所有患者的基因突变进行诊断.33例21-OHD患者中,共发现13种不同形式的CYP21A2基因突变,其中IVS2-13A/C>G、p. I172N和融合基因分别占32%(21/66)、27%(18/66)和15%(10/66).91% CYP21A2基因突变源自于相应的假基因.2例17-OHD患者分别为CYP17A1基因IVS4-6A>G纯合突变及CYP17A1基因p.487_489del纯合突变.所有患者基因突变均来自父母.健康对照者均未检测出基因突变.结论 本研究建立了先天性肾上腺皮质增生症基因突变位点的诊断方法,为临床提供了可靠的确诊依据.     

腓骨肌萎缩综合征患者MFN2基因突变检测的研究

目的对1个腓骨肌萎缩综合征核心家系的致病突变进行鉴定和遗传学分析。方法采用全外显子组测序技术筛选先证者中的致病突变,用Sanger测序技术检测核心家系中致病突变位点的基因型,并对其进行生物信息学分析。结果先证者MFN2基因存在单碱基杂合突变c.1090C>T p.R364W,母亲与妹妹均为该位点单碱基杂合突变,且均呈现不同程度的肌肉萎缩,但严重程度和发病年龄有所不同,父亲表型正常且在该位点未见异常。先证者全外显子组测序结果显示未见其他报道的相关基因突变。结论先证者MFN2基因c.1090C>T为1个致病突变位点。