甜菜碱对糖尿病足大鼠创面愈合及AMPK/SIRT1/FoxO1通路的影响

目的 探讨甜菜碱对糖尿病足大鼠创面愈合及AMPK/SIRT1/FoxO1通路的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、二甲双胍（200 mg·kg^-1，ig给药）组和甜菜碱低、高剂量（50、100 mg ·kg^-1，ip给药）组，每组18只。除对照组外，其余组大鼠均构建糖尿病足模型。检测大鼠空腹血糖水平和创面愈合率；ELISA法检测大鼠血清炎性因子白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）水平；HE染色检测大鼠创面皮肤组织病理学改变；免疫组化染色检测大鼠创面皮肤组织中CD31蛋白阳性表达；试剂盒法检测大鼠创面皮肤组织中氧化应激指标超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量；Western blotting检测大鼠创面皮肤组织中AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）/沉默信息调节因子相关酶1（SIRT1）/叉头框蛋白1（FoxO1）通路相关蛋白表达。结果 给药结束后，与对照组比较，模型组大鼠空腹血糖、血清IL-6、TNF-α、CRP水平以及创面皮肤组织中MDA含量和p-FoxO1/FoxO1值显著升高，创面愈合率和创面皮肤组织中CD31阳性表达率、SOD活性、p-AMPK/AMPK值和SIRT1蛋白表达水平显著降低（P<0.05），且创面皮肤组织病理学损伤严重；与模型组比较，甜菜碱低、高剂量组和二甲双胍组大鼠空腹血糖、血清IL-6、TNF-α、CRP水平以及创面皮肤组织中MDA含量和p-FoxO1/FoxO1值显著降低，创面愈合率和创面皮肤组织中CD31阳性表达率、SOD活性、p-AMPK/AMPK值和SIRT1蛋白表达水平显著升高（P<0.05），且创面皮肤组织病理学损伤均有不同程度改善，且甜菜碱高剂量组和二甲双胍组上述指标变化更为明显。结论 甜菜碱可激活AMPK/SIRT1/FoxO1通路，减轻糖尿病足大鼠氧化应激和炎症反应，促进血管生成，加速创面愈合。     

铁皮石斛多糖对缺氧/复氧诱导星形胶质细胞AMPK/ULK1通路相关自噬的影响

目的 探讨铁皮石斛多糖对缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）诱导星形胶质细胞腺苷酸激活蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase，AMPK）/UNC-51类似自噬激活激酶1（UNC-51 like autophagy activating kinase 1，ULK1）通路相关自噬的影响。方法 体外培养人星形胶质细胞，分为对照组、H/R组（H/R建模）、低浓度铁皮石斛多糖组（H/R建模+100 μg·mL^-1铁皮石斛多糖）、中浓度铁皮石斛多糖组（H/R建模+200 μg·mL^-1铁皮石斛多糖）和高浓度铁皮石斛多糖组（H/R建模+400 μg·mL^-1铁皮石斛多糖）。MTT法检测细胞增殖情况；流式细胞仪检测细胞凋亡情况；试剂盒测定细胞中丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）水平；Western blotting检测细胞中p-AMPK、AMPK、p-ULK1、ULK1、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3（light chain 3，LC3） I、LC3 Ⅱ蛋白表达情况。结果 与对照组相比，H/R组星形胶质细胞存活率、细胞中SOD水平及LC3 I/LC3 Ⅱ蛋白表达水平显著降低（P<0.05），细胞凋亡率、细胞中MDA水平及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1、Beclin1蛋白表达水平显著升高（P<0.05）；随着铁皮石斛多糖的处理及处理浓度的升高，星形胶质细胞存活率、细胞中SOD水平及LC3 I/LC3 Ⅱ蛋白表达水平显著升高（P<0.05），细胞凋亡率、细胞中MDA水平及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1、Beclin1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论 铁皮石斛多糖对H/R诱导的星形胶质细胞AMPK/ULK1通路激活及自噬具有抑制作用，可促进细胞存活并减少细胞凋亡。     

牛樟叶总多糖对慢性酒精性肝损伤大鼠的保护作用及机制研究

目的 研究牛樟叶总多糖对大鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用与机制。方法 60只雄性大鼠按体质量随机分为对照组、模型组、多烯磷脂酰胆碱胶囊（10.944 mg/kg）组及牛樟叶总多糖高、中、低剂量（50.0、37.5、25.0 mg/kg）组。对照组和模型组给予蒸馏水,其余各组给予不同剂量药物。给药0.5 h后,除对照组外,其余各组均ig体积分数为56%红星二锅头,共给药8周。采用苏木精-伊红（HE）染色观察各组肝组织形态及结构的变化,测定各组大鼠血清白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、丙氨酸基转移酶（ALT）、谷氨酸基转移酶（AST）、三酰甘油（TG）及肝组织匀浆液中IL-1β、IL-6、TNF-α、谷胱甘肽（GSH）水平。免疫组织化学法测定大鼠肝脏沉默信息调节因子1（SIRT1）、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α（p-AMPKα）表达水平。蛋白质印迹法测定肝组织SIRT1、AMPKα、p-AMPKα、甾醇调节元件结合蛋白1c（SREBP1c）水平。结果 病理切片结果表明,牛樟叶总多糖能改善大鼠肝组织病理变化。与模型组相比,牛樟叶总多糖各剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α、TG、ALT、AST水平均明显降低（P<0.05）;GSH水平明显升高（P<0.05）。牛樟叶总多糖可提高SIRT1表达及AMPKα的磷酸化水平。结论 牛樟叶总多糖对慢性酒精性肝损伤有一定的保护作用,其机制可能与抗氧化应激、抑制炎症反应、调节SIRT1/AMPK信号通路有关。     

川芎嗪通过AMPK/SIRT1通路介导的自噬在急性肝衰竭中的作用及其机制研究

目的 探讨川芎嗪对脂多糖（LPS）/D-氨基半乳糖（D-GalN）诱导的急性肝衰竭小鼠的作用及其机制。方法 将C57BL/6J小鼠随机分对照组、模型组、川芎嗪组、川芎嗪联合SIRT1抑制剂（EX527）组,每组10只。通过ip LPS/D-GalN构建急性肝衰竭小鼠模型,检测血清中天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）的水平;苏木精–伊红（HE）染色检测肝组织病理学变化;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测肝组织中肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）、白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β和环氧化酶-2（COX-2）mRNA水平;检测肝组织中氧化应激因子谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）含量;Western blotting检测肝组织中沉默调节蛋白1（SIRT1）、磷酸化单磷酸腺苷活化蛋白激酶α（p-AMPK）α/AMPKα蛋白和自噬相关蛋白人微管相关蛋白1轻链3（LC3）-II/LC3-I、p62的水平。结果 与模型组比较,川芎嗪组小鼠血清ALT和AST水平均显著降低,肝细胞坏死区域以及炎症细胞浸润明显减少,肝组织中MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、COX-2 mRNA和p62蛋白水平均显著降低,SOD、GSH、SIRT1、p-AMPKα/AMPKα、LC3-II/LC3-I蛋白水平显著升高（P<0.05）。EX527处理后显著逆转了川芎嗪对急性肝衰竭小鼠的作用。结论 川芎嗪通过抑制LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭小鼠炎症反应发挥肝脏保护作用,其机制可能与AMPK/SIRT1信号通路和自噬有关。     

基于能量代谢分析白藜芦醇对H2O2诱导SH-SY5Y细胞保护作用

目的 基于能量代谢探究白藜芦醇对H2O2诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用。方法 选取20、10、5、1 μmol•L^-1的白藜芦醇（Res）处理SH-SY5Y细胞24 h后,加入1.2 mmol•L^-1的H₂O₂,继续培养24 h,采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒检测糖代谢相关酶己糖激酶（HK）、磷酸果糖激酶（PFK）、丙酮酸激酶（PK）、琥珀酸脱氢酶（SDH）、乳酸脱氢酶（LDH）活力以及葡萄糖消耗量、ATP含量,Western blot法检测低氧诱导因子1α（HIF-1α）和葡萄糖转运体1（GLUT-1）表达。结果 1.2 mmol•L^-1的H₂O₂造成SH-SY5Y细胞氧化损伤,细胞活力降低,细胞凋亡率升高（P<0.01）;与H₂O₂氧化损伤组相比,20、10、5 μmol•L^-1白藜芦醇组细胞活力升高,细胞凋亡率显著降低（P<0.01）;PFK、PK、SDH活力及ATP含量、葡萄糖消耗量显著升高,HK活力和细胞外LDH活力明显降低（P<0.01）;GLUT-1表达量显著升高,HIF-1α表达量显著降低（P<0.01）。结论 20、10、5 μmol•L^-1的白藜芦醇调控GLUT-1和HIF-1α蛋白表达,提高细胞糖代谢酶活力,增加产能,对H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤发挥保护作用。     

2-脱氧葡萄糖联合二甲双胍抗人肝癌HepG2细胞作用及与AMPK、mTOR相关性研究

目的 考察2-脱氧葡萄糖（2-DG）联合二甲双胍（Met）协同抗人肝癌HepG2细胞作用并探索其机制。方法 刃天青法测定2-DG及Met单独及联合应用对HepG2细胞的生长抑制作用,利用金氏公式计算联合用药Q值;利用高内涵细胞成像系统考察单独及联合用药对细胞线粒体膜电位及活性氧产生的影响;Western blotting检测Cleave-Caspase 3、p-AMPK及p-mTOR的蛋白变化;考察AMPK及mTOR抑制剂对联合用药后细胞生长抑制作用的影响。结果 2-DG、Met单独应用的IC₅₀值分别为2.45及16.35 mmol/L,联合用药对细胞生长抑制具有协同作用,Q值均大于1.15;联合用药能显著降低细胞内线粒体膜电位及p-mTOR蛋白表达,显著增加细胞内活性氧产生及Cleave-Caspase3、p-AMPK蛋白表达;抑制AMPK或mTOR能显著增加联合用药对细胞的生长抑制作用（P<0.05、0.01）。结论 2-DG联合Met具有协同抑制HepG2细胞增殖作用,其机制与降低细胞线粒体膜电位,促进活性氧产生、细胞凋亡,以及非AMPK依赖性的抑制mTOR活化有关。     

基于Nrf2/HO-1信号通路研究橄榄苦苷的体外抗炎作用

目的 探讨橄榄苦苷对脂多糖（LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞（RAW264.7）炎症的保护作用及机制。方法 MTT法检测橄榄苦苷（0、10、20、40 μmol/L）对RAW264.7细胞活性的影响;用橄榄苦苷（10、20、40 μmol/L）预处理细胞1 h后,LPS诱导炎症模型,Griess试剂检测细胞内Nitrite释放;Western blotting方法检测细胞iNOS、COX-2、Nrf2、Keap-1、HO-1、NQO1蛋白表达水平;流式细胞仪检测细胞内NO、ROS、Ca²⁺的水平;荧光显微镜检测线粒体膜电位（MMP）水平;ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的释放。结果 与模型组比较,橄榄苦苷组Nitrite释放水平显著降低（P<0.05、0.01、0.001）,iNOS、COX-2蛋白的表达显著降低（P<0.001）,NO的产生显著减少（P<0.05、0.01）;TNF-α、IL-6的释放受到显著抑制（P<0.001）;Ca²⁺释放受到显著抑制（P<0.01）;ROS生成受到显著抑制（P<0.01）;JC-1单体降低,恢复聚合物状态（红色荧光变多）,MMP稳定性增强;Keap1蛋白表达显著降低, Nrf2、HO-1、NQO1蛋白的表达均显著升高（P<0.05、0.01、0.001）。结论 橄榄苦苷对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症具有抑制作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路相关。     

乌司他丁通过SIRT1、PGC-1a调节氧化应激对失血性休克大鼠脑损伤的保护作用

目的 探讨乌司他丁对失血性休克大鼠脑损伤的影响及作用机制。方法 36只♂ SD大鼠随机分为对照组、模型组和观察组，每组12只，对照组给予假手术，模型组造模后不予处理，观察组造模后予以乌司他丁静脉输注。记录造模时采血开始、采血结束、回输开始以及回输结束时的平均动脉压（MAP）、pH、碱剩余（BE）以及乳酸浓度（La）。造模成功24 h后检测海马组织线粒体超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量，Western blotting测定海马组织中沉默信息调节因子（SIRT1）与过氧化物酶体增殖物激活受体g共激活因子-1a（PGC-1a）蛋白的表达情况。结果 采血开始时和回输结束时各组大鼠MAP无统计学差异；模型组和观察组在采血结束和回输开始时MAP均明显低于对照组（P<0.05）。采血开始时3组大鼠pH值、BE值和La值无统计学差异；与对照组比，采血结束时、回输开始时模型组和观察组pH值降低、BE值降低、La值升高（P<0.05）；回输结束时3组pH值无统计学差异，与对照组比，模型组和观察组BE值降低、La值升高（P<0.05）。海马组织线粒体SOD活性由高到低分别为对照组、观察组和模型组，3组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）。3组MDA含量由高到低分别为模型组、观察组和对照组，3组间的差异均具有统计学意义（P<0.05）。Western blotting结果显示，SIRT1、PGC-1a蛋白表达水平由低到高均为对照组、模型组、观察组。结论 乌司他丁可通过促进SIRT1、PGC-1a蛋白在海马组织中的表达，达到抗氧化应激的作用，发挥保护大鼠缺血再灌注脑损伤的效果。     

基于Keap1/Nrf2/HO-1通路汉黄芩素7-O-β-D-乙基葡萄糖醛酸苷体外抗氧化应激作用研究

目的 探讨汉黄芩素 7-O-β-D-乙基葡萄糖醛酸苷（WODE）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞（RAW264.7）的抗氧化应激作用及机制。方法 MTS法检测WODE（2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0 μmol·L^-1）对RAW264.7细胞活力的影响；体外培养RAW264.7细胞，WODE（10、20、40 μmol·L^-1）或地塞米松（1 μmol·L^-1，阳性药）预处理1 h，再给予LPS刺激24 h（造模过程不再加药），对照组不加 LPS 和受试物，模型组只给予 LPS 刺激；荧光探针检测胞内活性氧（ROS）水平；Griess反应测定细胞上清液中 NO 生成量；ELISA 检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的分泌；实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）法检测细胞内诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、环氧化酶-2（COX-2）、白细胞介素-1β（IL-1β）、醌氧化还原酶1（NQO-1）、超氧化物歧化酶-1（SOD-1）的mRNA表达水平；Western blotting法检测细胞核因子E2相关因子2（Nrf2）和血红素加氧酶-（1 HO-1）蛋白表达水平；免疫荧光染色法检测细胞内Kelch ECH相关蛋白（1 Keap1）表达水平。结果 与对照组比较，WODE浓度小于40 μmol·L^-1时，细胞存活率没有明显变化；浓度大于80 μmol·L^-1时，细胞存活率下降，但未见统计学差异。与模型组比较，WODE 10、20、40 μmol·L^-1组 ROS水平显著降低（P＜0.01）；20、40 μmol·L^-1 组 NO 释放显著降低（P＜0.05、0.01）；40 μmol·L^-1 组 iNOS mRNA 表 达 水 平 显 著 降 低（P＜0.01）；10、20、40 μmol·L^-1 组 COX-2 和20、40 μmol·L^-1组IL-1β mRNA表达水平显著降低（P＜0.05、0.01）；10、20、40 μmol·L^-1组TNF-α和IL-6的释放受到显著抑制（P＜0.01）；10、20、40 μmol·L^-1组NQO-1 mRNA表达水平显著升高（P＜0.01），40 μmol·L^-1组SOD-1 mRNA表达水平显著升高（P＜0.01）；10、20、40 μmol·L^-1组Keap1蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）；10、20、40 μmol·L^-1组HO-1蛋白和mRNA表达水平显著提高（P＜0.05、0.01）；20、40 μmol·L^-1 组 Nrf2 蛋白和 40 μmol·L^-1 组 Nrf2 mRNA 表达水平显著增加（P＜0.01）。结论 WODE 对 LPS 诱导的RAW264.7细胞的氧化应激具有抑制作用，其作用机制可能与调控Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关。     

AGGF1通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进结直肠癌发生发展

目的 研究G补缀FHA域血管新生因子1（angiogenic factor with G-patch and FHA domain 1，AGGF1）调控Wnt/β-catenin信号通路对结直肠癌细胞（colorectal cancer，CRC）增殖、侵袭和上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）的可能机制。方法 通过裸鼠荷瘤免疫组化法检测AGGF1在正常组织和癌组织中的表达。qRT-PCR和Western blotting检测NCM460、SW620、HT29、HCT116、SW480中AGGF1的mRNA和蛋白表达水平。于HCT116细胞中过表达AGGF1，分为Vector组和AGGF1组；于SW620细胞中敲减AGGF1，分为shControl组和shAGGF1组。CCK-8法和克隆形成试验测定细胞活性和细胞克隆数目。划痕试验和Transwell试验检测细胞迁移和侵袭情况。免疫荧光检测细胞E-cadherin、N-cadherin的表达。Western blotting检测细胞E-cadherin、N-cadherin、AGGF1、β-catenin、糖原合酶激酶-3β （glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β）、p-GSK-3β蛋白表达水平。结果 AGGF1蛋白表达在CRC组织中明显增高。AGGF1 mRNA和蛋白表达水平在HCT116细胞中最低，在SW620细胞中最高。CCK-8法、克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验结果显示，在HCT116细胞中，与Vector组比较，AGGF1组48，72，96 h细胞活性、克隆细胞数目、相对迁移距离、侵袭细胞数显著增加（P<0.05或P<0.01）；而在SW620细胞中，与shControl组比较，shAGGF1组结果相反（P<0.05或P<0.01）。免疫荧光和Western blotting检测结果显示，与Vector组比较，AGGF1组E-cadherin荧光表达和蛋白表达水平降低（P<0.01），N-cadherin增强（P<0.05或P<0.01），同时上调AGGF1、β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达（P<0.01）；与shControl组比较，shAGGF1组E-cadherin荧光表达和蛋白表达水平显著升高（P<0.01），N-cadherin显著降低（P<0.05或P<0.01），同时下调AGGF1、β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达（P<0.05或P<0.01）。结论 AGGF1可通过激活Wnt/β-catenin信号通路异常表达，上调β-catenin、p-GSK-3β、N-cadherin表达，下调E-cadherin表达，促进CRC细胞增殖、迁移、侵袭和EMT，从而促进CRC发生发展。     

基于Keap1/Nrf2信号通路研究紫檀芪对对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 观察紫檀芪（pterostilbene，PTE）对对乙酰氨基酚（acetaminophen，APAP）诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用，并探讨相关机制。方法 利用APAP （250 mg·kg^-1）制备小鼠急性肝损伤模型，PTE分别给予15，30，60 mg·kg^-1，连续灌胃15 d预保护。自动生化分析仪检测谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、总蛋白（total protein，TP）、白蛋白（albumin，Alb）并计算白球比（Alb/Glb，A/G）；苏木精-伊红（HE）染色法进行肝组织病理学检测并进行分级评价；试剂盒检测超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、还原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平；JC-1检测线粒体膜电位；TUNEL染色法检测肝细胞凋亡情况；Western blotting检测Bax、cytochrome C、转录因子NF-E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor-2，Nrf2）、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Keleh-like ECH-associated protein l，Keap1）的蛋白表达情况。结果 与APAP模型组相比，不同浓度PTE组小鼠血清ALT、AST值显著降低（P<0.01），Alb、TP及A/G比值显著升高（P<0.05或P<0.01）；肝组织病理损伤分级降低；肝组织SOD、GSH显著升高（P<0.01），MDA显著降低（P<0.01）；线粒体膜电位增加（P<0.01）；TUNEL染色结果显示PTE组小鼠肝细胞凋亡明显减少；PTE组与APAP模型组相比，细胞质中的Bax表达显著增加（P<0.05或P<0.01），cytochrome C表达显著降低（P<0.01），而对应的线粒体中Bax表达显著降低（P<0.01），cytochrome C表达显著增加（P<0.01），同时伴有肝组织总的Nrf2表达增加（P<0.01），Keap1表达降低（P<0.01），细胞质Nrf2表达增加（P<0.01），细胞核Nrf2表达增加（P<0.01）。结论 PTE可以保护APAP诱导的小鼠急性肝损伤，其机制可能与PTE上调Nrf2水平，抑制氧化应激，保护线粒体功能有关。     

人参皂苷Rb1调控MAPK通路改善小鼠脑缺血再灌注诱导血脑屏障损伤的作用研究

目的 探讨人参皂苷Rb₁对小鼠脑缺血再灌注诱导的血脑屏障（BBB）损伤的作用及机制。方法 将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组和人参皂苷Rb₁低、中、高剂量（5、10、20 mg·kg^-1）组,采用线栓法栓塞颈内动脉1 h后复灌建立脑缺血再灌注损伤模型,假手术组不栓塞,其余操作同模型小鼠。缺血1 h后ip相应药物,于再灌注24 h后处死取材。采用伊文思蓝染色法检测各组小鼠BBB损伤程度;采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）法检测各组小鼠脑组织中炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）以及紧密连接蛋白1（ZO-1）、闭合蛋白（Occludin）的mRNA表达水平;同时采用Western blotting检测各组小鼠脑组织中ZO-1、Occludin蛋白,金属基质蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）以及MAPK通路相关蛋白磷酸化的表达水平。结果 与模型组相比,人参皂苷Rb₁可显著减少脑缺血再灌注小鼠脑组织中伊文思蓝的渗漏量（P<0.05）,显著降低脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA转录水平（P<0.05、0.01）;显著上调ZO-1和Occludin的mRNA转录和蛋白表达水平（P<0.05、0.01）;显著降低MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平（P<0.05、0.01）;显著抑制MAPK通路p38、JNK及ERK磷酸化蛋白的表达（P<0.05、0.01）。结论 人参皂苷Rb₁对小鼠脑缺血再灌注诱导的BBB损伤具有一定的改善作用,其作用机制可能与抑制MAPK信号通路激活,减少MMP-2、MMP-9蛋白的表达,进而减轻对ZO-1、Occludin等紧密连接蛋白的降解有关。     

芹菜素对顺铂化疗所致肾损伤及Nrf2/HO-1通路的影响

目的 探索芹菜素（APG）对顺铂（DDP）化疗所致肾损伤大鼠的保护作用及机制研究。方法 将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、氨磷汀组（阳性对照组）及APG低、中、高剂量组,每组10只。模型组、氨磷汀组及APG低、中、高剂量组大鼠均采用一次性腹腔注射DDP（7.5 mg·kg^-1）的方法建立DDP致肾损伤大鼠模型,空白组大鼠仅腹腔注射生理盐水（不造模）;然后分别腹腔注射给药（APG低、中、高剂量组分别给予10、20、40 mg·kg^-1 APG,氨磷汀组给予1 mg·kg^-1氨磷汀,空白组和模型组均给予生理盐水）,1次/d,连续给药28 d。测定各组大鼠24 h尿蛋白量和血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）含量,HE染色法、TUNEL法分别行肾脏病理学检查和细胞凋亡检测,生化分析法检测MDA含量和抗氧化酶（SOD、GSH-Px）活性,ELISA法检测炎症细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）水平,Western blotting检测核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）、核因子-κB（NF-κB）、激活型半胱胺酸蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）蛋白的表达水平。结果 与模型组比较,APG中、高剂量组和氨磷汀组大鼠24 h尿蛋白量和血清Scr、BUN含量显著降低（P<0.05）,肾脏组织病理学改变和细胞凋亡状况明显改善,凋亡指数（AI）显著降低（P<0.01）,MDA含量显著降低且SOD、GSH-Px活性显著升高（P<0.05）,TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著降低（P<0.05）,Nrf2、HO-1表达显著上调而NF-κB、Cleaved Caspase-3表达显著下调（P<0.01）。与氨磷汀组比较,APG高剂量组大鼠血清Scr、BUN含量显著降低（P<0.05）,肾脏组织病理学改变和细胞凋亡状况明显改善、AI显著降低（P<0.01）,MDA含量显著降低且SOD活性显著升高（P<0.01）,TNF-α、IL-1β水平显著降低（P<0.05）,Nrf2、HO-1表达显著上调且Cleaved Caspase-3表达显著下调（P<0.05）。结论 APG对DDP所致肾损伤大鼠具有保护作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1通路而抑制氧化应激损伤、炎症反应和细胞凋亡有关。     

甘草酸苷通过MAPK p38/NF-κB通路对炎症后色素沉着的抑制作用

目的 探讨甘草酸苷对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激后角质形成细胞分泌COX-2/PGE₂和对共培养黑素细胞合成黑素的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 以人表皮角质形成细胞为对象,分为对照组、LPS组、甘草酸苷组（2,5,10 μmol·L^-1）。采用ELISA法检测PGE₂的含量,Western blot检测细胞COX-2、NF-κB p-p65、p-IKKα/β和MAPKp-p38蛋白的表达,比色法检测共培养黑素细胞的黑素含量。结果 与对照组比较,LPS显著增加角质形成细胞COX-2、NF-κB p-p65、p-IKKα/β、MAPK p-p38蛋白表达（P<0.01）和PGE₂的分泌（P<0.01）,增加共培养黑素细胞黑素生成（P<0.01）。与LPS组比较,甘草酸苷呈剂量依赖性抑制COX-2、NF-κB p-p65、p-IKKα/β、MAPK p-p38蛋白表达（P<0.05）和PGE₂的分泌（P<0.05）,减少共培养黑素细胞黑素生成（P<0.05）。结论 甘草酸苷通过抑制角质形成细胞MAPK p38/NF-κB通路,从而降低COX-2/PGE₂的表达,减少共培养黑素细胞合成黑素。     

人参皂苷Rg1对移植性白血病模型小鼠的作用

目的 研究人参皂苷Rg₁对移植性白血病模型小鼠的作用。方法 采用免疫磁性分选法（MACS）从K562细胞中分离、纯化CD34⁺CD38^-人白血病干细胞（CD34⁺CD38^- LSCs）,流式细胞术检测分选细胞纯度,台盼蓝染色测定分选细胞活性。将6～8周雌性NOD/SCID小鼠27只随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rg₁（200 mg/kg）组,每组9只,模型组和人参皂苷Rg₁组通过尾iv移植CD34⁺CD38^- LSCs构建白血病小鼠模型,ip给药30 d。观察各组小鼠一般情况及腹部包块变化;全自动血常规检测仪检测外周血白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板水平;免疫组化法检测肝、脾脏病理学变化;流式细胞仪分析骨髓细胞周期;CCK-8法检测各组骨髓细胞的增殖能力;细胞免疫荧光染色鉴定骨髓细胞CD34阳性表达情况。结果 分选前K562细胞中CD34⁺CD38^- LSCs细胞群百分比为（9.64±1.14）%,分选后CD34⁺CD38^- LSCs纯度可达（96.45±1.63）%;台盼蓝染色显示分选后细胞活性为（95.26±2.16）%。与对照组比较,模型组小鼠腹部包块明显,生存情况较差,体质量显著下降（P<0.05）;白细胞数显著增高,红细胞数、血红蛋白水平、血小板数均显著下降（P<0.05）;肝、脾脏结构被破坏,有大量白细胞浸润;骨髓细胞周期检测显示G₀/G₁期比例显著下降（P<0.05）,S期比例显著升高（P<0.05）;骨髓细胞增殖活力显著升高（P<0.05）。与模型组比较,人参皂苷Rg₁组小鼠腹部包块明显减小,生存情况好转,体质量显著增加（P<0.05）;白细胞总数显著下降（P<0.05）,红细胞数、血红蛋白水平、血小板数均显著升高（P<0.05）;肝、脾脏结构明显恢复;骨髓细胞G₀/G₁期比例显著升高（P<0.05）,G₂/M期和S期比例显著下降（P<0.05）。细胞免疫荧光检测显示,模型组和人参皂苷Rg₁组中小鼠的骨髓细胞中存在大量的人源白血病细胞。结论 NOD/SCID小鼠尾iv移植CD34⁺CD38^- LSCs可成功构建急性髓系白血病小鼠模型,人参皂苷Rg₁能有效缓解NOD/SCID小鼠的白血病症状。     

缺氧条件下白花丹醌对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡与侵袭及HIF-1α表达的影响

目的 研究白花丹醌在缺氧条件下对人肝癌细胞HepG2增殖、凋亡、侵袭和低氧诱导因子1α(hypoxia induced factor1α，HIF-1α)及其下游基因表达的影响。方法 采用二氯化钴(CoCl₂)化学诱导法建立HepG2细胞体外缺氧模型，经不同浓度(2，4，8 μmol·L^–1)白花丹醌处理24 h后，MTT、平板克隆形成试验观察HepG2细胞增殖水平变化；使用Annexin V/PI双染流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况；使用Transwell试验观察HepG2细胞侵袭能力的变化；使用qRT-PCR检测HepG2细胞内HIF-1A mRNA转录水平变化；使用Western blotting检测细胞内HIF-1α及其下游基因c-Myc、VEGFA、MMP9和TWIST1的蛋白表达水平。结果 当CoCl₂处理浓度为150 μmol·L^–1时，HepG2细胞增殖水平未见显著变化，而HIF-1α蛋白表达水平显著升高(P<0.01)，提示体外缺氧模型建立成功。与常氧对照组相比，MTT、平板克隆形成试验结果显示不同浓度白花丹醌作用HepG2细胞后，其增殖水平受到显著抑制(P<0.05或P<0.01)； Transwell试验结果显示白花丹醌可显著抑制HepG2细胞侵袭(P<0.05或P<0.01)；流式细胞术结果表明白花丹醌能显著诱导HepG2细胞凋亡(P<0.05或P<0.01)；Western blotting及qRT-PCR检测结果显示，白花丹醌能显著下调HIF-1α蛋白及HIF-1A mRNA表达水平(P<0.05或P<0.01)。Western blotting检测结果显示HIF-1α及其下游基因c-Myc、VEGFA、MMP9和TWIST1的蛋白表达水平均显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论 CoCl₂体外模拟肝癌HepG2细胞缺氧的适宜浓度为150 μmol·L^–1；在缺氧条件下，白花丹醌可显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖与侵袭，同时诱导细胞凋亡，其作用机制可能与下调HIF-1α蛋白及其下游靶基因蛋白表达有关。     

注射用丹参多酚酸对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究注射用丹参多酚酸（SAFI）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用及机制。方法 体外培养HUVEC,设置对照组、模型组、SAFI（0.05、0.10、0.20、0.40、0.80 mg/mL）组,对照组及模型组不加药,继续培养24 h,模型组及SAFI组分别加入1 mmol/L H₂O₂作用1 h,对照组不加H₂O₂。CCK-8法检测HUVEC增殖;酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞间黏附因子（ICAM-1）、血管细胞黏附因子（VCAM-1）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量;TUNEL染色法观察HUVEC凋亡状态;Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的变化。结果 与模型组比较,质量浓度大于0.1 mg/mL的SAFI组细胞存活率显著增加（P<0.05）;质量浓度大于0.2 mg/mL的SAFI组LDH、MDA水平显著降低,SOD水平显著增加（P<0.05）;0.4、0.8 mg/mL的SAFI组ICAM-1、VCAM-1水平显著降低（P<0.05）;TUNEL染色结果显示,0.4、0.8 mg/mL的SAFI显著抑制凋亡;Western blotting结果显示,0.4、0.8 mg/mL的SAFI组Bcl-2蛋白表达显著升高（P<0.05）,Bax蛋白表达显著下降（P<0.05）。结论 SAFI对H₂O₂诱导的HUVEC损伤有保护作用,主要是通过提高SOD含量,降低氧化指标LDH、MDA以及炎症因子ICAM-1、VCAM-1水平,调节凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达发挥作用。     

山胡椒内生真菌Trichoderma sp. SHJN1和Perenniporia sp. SHJG1的抗肿瘤活性成分研究

目的 从民族药山胡椒内生真菌Trichoderma sp.SHJN1和Perenniporia sp.SHJG1的代谢物中寻找活性先导化合物。方法 采用正相硅胶、反相硅胶、Sephadex LH-20凝胶及制备型HPLC等对Trichoderma sp.SHJN1和Perenniporia sp.SHJG1发酵物进行分离纯化，再通过NMR、ESI-MS等鉴定化合物结构，同时采用人乳腺癌细胞（MCF-7）和人肺癌细胞（A549）对这些化合物的抗肿瘤活性进行初步评价。结果 从2株内生真菌次级代谢产物中共分离鉴定了12个化合物：alantrypinone （1）、oryzalactam （2）、phomoindene A （3）、cis-gregatin B （4）、huaspenone B （5）、stigmasta-7，22-dien-3β，5α，6α-triol （6）、ergosterol （7）、1-deoxy-2-demethylviridiol （8）、viridiol （9）、trichodermamides A （10）、chromone （11）、对-羟基苯乙酸（12）。抗肿瘤活性评价结果显示，化合物3 抑制MCF-7细胞增殖活性IC₅₀为（62.9±1.02）μmol·L^-1[顺铂（cisplatin，DDP） IC₅₀为（30.1±1.67）μmol·L^-1]；化合物8 和9 抑制A549细胞增殖活性的IC₅₀分别为（34.6±1.57）μmol·L^-1和（44.9±1.74）μmol·L^-1[DDP IC₅₀为（20.6±1.42）μmol·L^-1]。结论 化合物3 ，8 和9 具有潜在抗肿瘤活性。     

基于PERK-eIF2α-NF-κB信号通路研究甘草酸苷对小鼠肠上皮细胞内质网应激的保护作用

目的 从蛋白激酶R样内质网激酶（protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase，PERK）-真核细胞起始因子2α（eukaryotic initiation factor 2α，eIF2α）-核因子κB （nuclear factor kappa B，NF-κB）信号通路角度观察甘草酸苷（glycyrrhizin，GL）对肠上皮细胞（intestinal epithelial cells，IECs）的保护作用，并探讨其治疗溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）的可能作用机制。方法 体外培养并通过免疫荧光法鉴定小鼠IECs，H₂O₂刺激法建立细胞内质网应激模型，GL组于造模同时给予不同剂量的GL干预。采用CCK8法检测细胞的存活率；流式细胞术检测细胞的凋亡水平；细胞跨膜电阻抗和异硫氰酸荧光素标记的右旋糖酐（fluorescein isothiocyanate-dextran，FITC-dextran）法共同明确细胞屏障的通透性；Western blotting检测细胞中PERK-eIF2α-NF-κB通路核心蛋白的表达水平。结果 与模型对照组相比，GL中、高剂量组的存活率均升高（P<0.05或P<0.01），凋亡率均下降（P<0.05或P<0.01）；GL各剂量组单层膜细胞的细胞跨膜电阻抗值均显著升高（P<0.01）、FITC-dextran浓度均显著下降（P<0.01），p-PERK、p-eIF2α和NF-κB蛋白的水平均下降（P<0.05或P<0.01）。结论 GL通过抑制PERK-eIF2α-NF-κB信号通路的活化，从而提高小鼠体外细胞内质网应激状态下IECs的存活率，降低其凋亡水平，并改善细胞屏障的通透性，这可能是GL保护IECs、治疗UC的部分作用机制。     

曲普瑞林联合他莫昔芬治疗子宫肌瘤的临床观察及对血清TGF-β1、VEGF及HIF-1α水平的影响

目的 探讨曲普瑞林联合他莫昔芬治疗子宫肌瘤的临床疗效及对血清转化生长因子-β1（TGF-β1）、血管内皮生长因子（VEGF）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）水平的影响。方法 选取2018年5月—2020年5月聊城市第二人民医院收治的140例子宫肌瘤患者作为研究对象,根据治疗方法分为对照组（70例）和观察组（70例）。对照组患者口服枸橼酸他莫昔芬片,1片/次,1次/d。观察组患者在对照组基础上肌内注射注射用醋酸曲普瑞林,月经周期开始的第3～5天肌内注射1次,之后每隔28 d注射1次,3.75 mg/次。两组均治疗3个月。观察两组临床疗效、不良反应,并比较治疗前后子宫体积、肌瘤体积及血清促卵泡激素（FSH）、雌二醇（E₂）、孕酮（P）、TGF-β1、VEGF、HIF-1α水平。结果 治疗后,观察组总有效率为91.43%,明显高于对照组的75.71%（P<0.05）。治疗后,两组患者子宫体积、肌瘤体积均明显小于治疗前（P<0.05）,且观察组患者子宫体积、肌瘤体积均明显小于对照组（P<0.05）。治疗后,两组患者血清FSH、E₂、P水平均明显低于治疗前（P<0.05）,且观察组患者血清FSH、E₂、P水平均明显低于对照组（P<0.05）。治疗后,两组患者血清TGF-β1、VEGF、HIF-1α水平均明显低于治疗前（P<0.05）,且观察组患者血清TGF-β1、VEGF和HIF-1α水平均明显低于对照组（P<0.05）。治疗期间,两组不良反应发生率相比差异无统计学意义。结论 在他莫昔芬基础上联用曲普瑞林治疗子宫肌瘤,可提高疗效,缩小子宫、肌瘤体积,明显降低血清雌激素、TGF-β1、VEGF、HIF-1α水平,且具有一定安全性。