LC/MS鉴定固相合成多肽P14分子异构体存在的方法

目的 确认固相合成多肽Ｐ１４分子是否存在异构体。方法 通过ＨＰ１１００与ＥＳＩ离子源ＰＥＡＰ２０００液质联用（ＬＣ／ＭＳ）分离Ｐ１４肽,在质谱鉴定合成肽主峰为理论设计量前提下,应用ＰＥ ＳＣＩＥＸ Ａｎ－ａｌｙｓｔ １．０ｂ３质谱分析软件分析子离子流色谱图。结果 从总离子流色谱图中精确提取Ｐ１４肽Ｑ１正离子双电荷质量数,形成Ｐ１４肽质量数子离子流色谱图,其中有散在不同保留时间的质量数存在。结论 Ｐ１     

蕲蛇乙醇提物中多肽成分的蛋白组学研究

【目的】通过蛋白质组学方法分析蕲蛇乙醇提取物中的多肽类成分。【方法】双向凝胶电泳技术分离多肽,染色后切取多肽斑点胶内酶切,利用基质辅助激光解吸离子飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析酶切后抽提的肽段,获取的质谱数据进一步用于数据库检索,鉴定相关肽段序列。【结果】采用稀乙醇热浸法每克蕲蛇药材多肽溶出率为5.48%。凝胶图像显示各等电点区间均有2kDa的多肽分布,无法通过串联质谱数据结合数据库检索方式有效鉴定,而在15kDa区间存在的胶点中高置信度匹配到多个肽段。【结论】采用稀乙醇热浸法能够有效提取蕲蛇干燥药材中的多肽成分。     

溶质线性梯度保留时间的多元回归预测模型

目的:建立准确预测反相高效液相色谱线性梯度条件下溶质保留时间的数学模型。方法:应用最小二乘法构建了溶质保留与梯度参数的多元线性回归模型,并采用了两种不同品牌色谱柱及两种中药提取液对该模型进行了验证。结果:两种不同色谱柱的实验数据均能很好拟合预测模型,对粉葛提取液中14个组分和金银花提取液中13个组分保留时间预测总的平均相对偏差分别为(1.64±1.25)%(n=84),(1.28±0.95)%(n=78),明显低于两种常用梯度保留公式的预测偏差。结论:所建立的回归模型计算简单且对复杂体系中弱保留及强保留组分均能准确地预测。     

GC/MS大口径柱快速测定毒鼠强质谱指纹图谱研究

目的:建立毒鼠强的选择性离子检测的质谱指纹方法,提高气相色谱联用法(GL/MS)测定毒鼠强的灵敏度,保证了质谱定性,定量的准确性。方法:通过对色谱柱分离的试验比较,通过标准试验,溶剂试验,不同样品基质试验等,借鉴国际残留监控技术,根据保留时间毒鼠强裂解的特征离子碎片及比例,建立较大口径毛细管柱快速测定毒鼠强的选择离子检测的质谱指纹方法色谱-质谱技术。结果:色谱保留时间为3.66min,特征鉴定离子为212、240、132、92、121,定性方法依据离子丰度比例及质控措施。结论:灵敏度比普通气质联机高约1000倍,附加的质控措施在保证“高灵敏度”的同时也保证了质谱定量的准确性。     

类风湿关节炎患者血清多肽的MALDI-TOF-MS检测分析

目的本实验应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）寻找RA患者血清中与疾病相关的差异性表达多肽,尝试建立RA的多肽鉴别诊断模型。方法以25名RA患者作为实验组,以24名健康志愿者作为健康对照组。应用弱阳离子交换磁珠分离纯化血清样本,MALDI-TOF-MS获取样本生物学信息,建立分类预测模型。结果成功检测并鉴别出了一系列的差异性多肽,建立了具有高的预测能力和交叉验证能力诊断预测模型。盲法验证该分类模型显示,对RA组的诊断敏感性达80%,对正常对照组的诊断特异性达93.3%。结论运用蛋白质组学技术从一个整体的角度进行疾病研究,为更好地理解RA的发病机制和改进RA的诊断方法进行了初步的探索。     

气相色谱-飞行时间质谱法快速测定和鉴定芦根中阿魏酸的含量与结构

目的　对芦根中阿魏酸含量和结构进行快速测定和分析。方法　溶剂提取,气相色谱-飞行时间质谱测定和分析其含量和结构。结果　阿魏酸在芦根提取物中的相对质量分数为5 %。根据质谱提供的分子离子和8个特征碎片离子的精确质量和相应的元素组成,提出了阿魏酸分子的裂解途径,结合谱图检索,从而确认该分子的结构。结论　气相色谱-飞行时间质谱法测定和鉴定芦根中阿魏酸含量和结构是一种快速、准确、灵敏、可靠的检测方法。     

两个不同产地大蒜挥发油成分的比较研究

目的 利用色谱联用技术(GC—MS)对陕西兴平基地大蒜和湖南普通食用大蒜中的挥发油成分进行测定，比较挥发油成分的异同。方法 采用质谱相关色谱理论，比较了这两个不同地区大蒜挥发油成分；同时基于直观推导式演进特征投影法(HELP)对产生的二维气相色谱／质谱数据进行解析，根据得到的色谱保留时间和纯质谱在质谱库中进行相似性检索，实现对组份的鉴定。结果 鉴定并用总体积积分法定量计算了19个挥发油成分。质谱相关色谱理论和HELP方法得到了相同的定性信息。结论 采用化学计量学的方法，成功地实现了两个地区大蒜挥发油成分的比较研究，得到了两者整体组份信息的异同，为药理药效的比较研究奠定了基础。     

重质石油中含氮化合物的形态及分布分析Ⅱ．含氦杂环化合物的定性方法

探索了色谱保留值与质谱信息相结合的定性分析方法。用ＳＥ－５４柱代替ＳＥ－５２柱，选用六个多环芳烃化合物作为标准计算保留指数，从而改善了Ｍ．Ｌ．Ｌｅｅ保留指数的应用条件和范围；用文献值转换扩充了Ｌｅｅ的含氮杂环化合物保留指数表，并利用保留时间与沸点的关系作定性佐证。应用该法鉴定了重质石油样品子组分及萘油中的４６个含氮杂环化合物及其异构体，为质谱在异构体鉴定以及缺乏标样所产生的困难提供了可信、简便的定性鉴定方法。     

牙周炎与慢性阻塞性肺疾病患者的唾液多肽组学分析

  目的  分析牙周炎（periodontitis, PD）与慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease, COPD）患者唾液中与疾病相关的差异性表达多肽,寻找具有潜在诊断意义的生物标志物,为探讨COPD的早期防治开辟新视角。  方法  筛选PD患者10例（PD组）、PD伴COPD患者10例（PD伴COPD组）及健康对照人群8例（对照组）,收集各组临床资料及唾液样本。应用弱阳离子交换磁珠（weak-cation-exchange magnetic beads, WCX-MB）分离纯化唾液上清样本,应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS）系统获取样本生物学信息,进行多肽差异性质谱分析,筛选出组间差异性多肽,并通过液相色谱-质谱/质谱联用技术（liquid chromatography tandem mass spectrometry, LC-MS/MS）对差异性多肽进行鉴定。  结果  三组样本共检测出77个差异多肽峰,其中PD伴COPD组和PD组间显著性差异多肽峰10个,PD伴COPD组有8个多肽峰（1193.5、1836.2、1735.1、1321.3、1356.8、2086.8、1863.6、2230.9）表达增高,2个多肽峰（1067.3、1124.4）表达减低。其中1193.5、1356.8多肽峰被鉴定为富组蛋白1、颌下腺激素调节蛋白3B及唾液酸性富脯磷蛋白1/2。  结论  本研究通过WCX-MB和MALDI-TOF-MS分析出PD伴COPD患者唾液中存在与疾病相关的差异性表达多肽,筛选出的差异性表达多肽有望成为早期诊断COPD的辅助指标。     

重质石油中含氮化合物的形态及分布分析：II.含氮杂环化合…

探索了色谱保留值与质谱信息相结合的定性分析方法。用ＳＥ－５４柱代替ＳＥ－５２柱，选用六个多环芳烃化合物作为标准计算保留指数，从而改善了Ｍ．Ｌ．Ｌｅｅ保留指数的应用条件和范围；用文献值转换扩充了Ｌｅｅ的含氮杂环化全要留指数表，并利用保留时间与沸点的关系作定性佐证。应用该法鉴定了重质石油样品子组分及萘油中的４６个含氮杂环化合物及其异构体，为质谱在异构体鉴定以及缺乏标样所产生的困难提供了可信、简便的定性     

双向电泳及质谱分析与蛋白组研究

蛋白组分析是对生物蛋白组的分析与检测，即对生物蛋白质的大范围研究。蛋白组分析首先要将混合蛋白质分离，分离的主要方法是蛋白双向电泳，蛋白双向电泳是一种高效且广泛应用于分析由细胞，组织或其他生物样本中提取的复杂蛋白混合物的方法。此方法根据蛋白互不关联的两个特性-等电点和分子量对蛋白进行分离。它分辨率高，稳定性好，是蛋白组分析的关键技术之一。已被分离的蛋白质由质谱分析对其进行鉴定，质谱测量主要有两种方式；基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱测量法和电子喷雾电离质谱测量法，此两种方法操作方式不同，但其所获得的信息互为补充。前者以多肽质量/电荷比为依据同数据库资料进行比较，进而对蛋白进行鉴定，此法通常被称为多肽质量指纹分析，后者由离子谱推得多肽的氨基酸序列，并依据这些氨基酸序列进行蛋白鉴定，此法较多肽质量指纹分析鉴定更准确，可靠，蛋白组分析可用于样本全蛋白检测，样本蛋白表达检测。蛋白相互作用检测和蛋白修饰检测等方面，具有广阔的前景。     

以蛋白质芯片为中药蛋白质／肽相互作用载体分析羚羊角的生物学特征

目的对传统中药羚羊角水溶液中蛋白质,肽成分进行蛋白质组分析。方法采用饱和硫酸胺沉淀,透析脱盐冻干法获得经煎煮或冷浸的羚羊角蛋白质/肽,美国Ciphergen Biosystems Inc．ProteinChip OR Biology System（PBSⅡ＋）及配套的NP10芯片,激光解析,离子化一飞行时间质谱（SELDI -TOF -MS, Surface enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry）技术．分析羚羊角水溶液中1500～13000 Da蛋白质,肽分布及其分子量。结果共计得出25个蛋白质,肽分子量峰,分子量部分差值与某些氨基酸残基分子量相近。并且在煎煮和冷浸两种方法中显示出部分蛋白质,肽分子量相近,说明可能属同一肽段。为筛选羚羊角的活性效应成分提供了有价值的线索。结论通过分析,可以形成羚羊角水提液或水煎液蛋白质／肽成分质量指纹图（PMF）,并作为羚羊角数字化质控标准。为分离、纯化及验证羚羊角功能相关活性蛋白质,肽成分打下基础。     

姜黄挥发油毛细管气相色谱指纹谱的标准化和数字化研究

目的 建立姜黄挥发油毛细管气相色谱指纹谱数据的标准化和数字化表征方法。方法 在不同色谱条件下进行GC指纹谱测定，以系列正构烷烃为参比，按多项式回归分析计算各谱峰的保留指数。结果 对8主峰的分析结果表明，各峰保留指数的重复性比相对于基峰的相对保留值更优越。结论 采用多参比指标建立的指纹谱数字化标准，对中药质量控制更科学有效。     

Software-aided detection and structural characterization of cyclic peptide metabolites in biological matrix by high-resolution mass spectrometry

Compared to their linear counterparts, cyclic peptides show better biological activities, such as antibacterial, immunosuppressive, and anti-tumor activities, and pharmaceutical properties due to their conformational rigidity. However, cyclic peptides could form numerous putative metabolites from potential hydrolytic cleavages and their fragments are very difficult to interpret. These characteristics pose a great challenge when analyzing metabolites of cyclic peptides by mass spectrometry. This study was to assess and apply a software-aided analytical workflow for the detection and structural characterization of cyclic peptide metabolites. Insulin and atrial natriuretic peptide (ANP) as model cyclic peptides were incubated with trypsin/chymotrypsin and/or rat liver S9, followed by data acquisition using TripleTOF® 5600. Resultant full-scan MS and MS/MS datasets were automatically processed through a combination of targeted and untargeted peak finding strategies. MS/MS spectra of predicted metabolites were interrogated against putative metabolite sequences, in light of a, b, y and internal fragment series. The resulting fragment assignments led to the confirmation and ranking of the metabolite sequences and identification of metabolic modification. As a result, 29 metabolites with linear or cyclic structures were detected in the insulin incubation with the hydrolytic enzymes. Sequences of twenty insulin metabolites were further determined, which were consistent with the hydrolytic sites of these enzymes. In the same manner, multiple metabolites of insulin and ANP formed in rat liver S9 incubation were detected and structurally characterized, some of which have not been previously reported. The results demonstrated the utility of software-aided data processing tool in detection and identification of cyclic peptide metabolites.     

一种抑制蛋白激酶CK_2活性的新多肽的分离和鉴别

从猪肾上腺髓质嗜铬细胞分泌颗粒裂解物中纯化出 3种新多肽 ,经N 末端降解分析和质谱测定 ,它们分别位于猪嗜铬颗粒蛋白A(CgA) 3 0 8— 3 2 4、3 0 8— 3 2 8及 3 0 8— 3 2 9肽段 ,具有相同N 端区 ,而C 端长度不同。合成的CgA 3 0 8— 3 2 4肽段 ,即GN 1 7在浓度低于 6μmol/L时即可竞争性抑制CK2 活性 ,IC50 为 5 0 μmol/L。     

黄连的毛细管电泳特征指纹图谱研究

目的 建立黄连的高效毛细管电泳指纹图谱。方法 采用毛细管电泳考察了不同批药材季铵碱的保留时间和峰面积的相关性，并以小菜碱作为参照物计算了各色谱峰的相对保留时间和峰面积比值。结果 不同批号的黄连样品色谱组分的保留时间和峰面积的相关系数均大于0．9990。结论 建立的黄连高效毛细管电泳指纹图谱稳定、可靠，可作为黄连的特征指纹图谱。     

SELDI蛋白质芯片技术在肺癌早期诊断中的研究进展

随着人类基因组计划的完成,分子医学的研究领域已转移到蛋白质组学研究。蛋白质组学为发现肿瘤诊断标志物及可能的新型治疗靶分子提供了可能,肿瘤发生早期的蛋白质变化有可能成为临床早期诊断指标。表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术是一种操作简单、敏感性高、特异性强的高通量蛋白组学方法,是基于蛋白质芯片和质谱技术联用的多种肿瘤标志物筛选的分析平台。现主要对SELDI蛋白质芯片技术在肺癌早期诊断中的应用研究现状予以简要综述。     

肉桂提取物醇质体透皮吸收研究

目的 合成一长链肽47肽。方法 采用Fmoc/t-Bu正交保护多肽固相合成策略,使用9-芴甲氧羰基（Fmoc）保护氨基酸的α-氨基,用Liberty微波多肽合成仪,每个耦合循环用20%哌啶脱除Fmoc保护基团,连续添加氨基酸,并用茚三酮法检测反应终点,有效检测反应的进度,最后用82.5%的三氟乙酸将多肽从树脂上切割下来,得到47肽粗品。经过反相高效液相制备系统纯化得到多肽纯品,用反相高效液相分析仪和傅里叶高分辨质谱仪验证该产物。结果 高分辨质谱仪验证了该产物,纯品质量分数达98%。结论 微波可促进多肽特别是长链肽的合成。     

轮状病毒结构蛋白VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位的初步鉴定

目的预测并初步鉴定轮状病毒Wa株结构蛋白VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位,为轮状病毒免疫保护机制研究及疫苗的研制奠定基础.方法应用表位亲和力预测软件SYFPEITHI及蛋白酶切位点预测软件PAProc和Fragpredict相结合预测VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位;用分子模拟对候选肽作进一步筛选;标准Fmoc方案合成候选肽,RP-HPLC纯化、分析,质谱进行鉴定;最后用T2细胞株测定候选肽与HLA-A*0201分子的亲和力及稳定性.结果结合SYFPEITHI、蛋白酶切位点预测结果及分子模建结果,选择分值最高同时在C-末端含有蛋白酶切位点的4条肽作为候选表位肽;标准Fmoc方案合成的各肽纯度均大于95%,质谱检测结果表明,各肽的相对分子质量与理论值基本一致;在候选的4条表位肽中,TLLANVTAV(340-348)和VLADANETL(333-341)与HLA-A*0201呈高亲和力结合,荧光系数(flurorescene index,FI)分别为2.66和2.64,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(dissociation complex50,DC50)均大于8 h.结论TLLANVTAV(340-348)和VLADANETL(333-341)为潜在的HLA-A*0201限制性CTL表位.