miR-199-3p过表达调控肺癌A549细胞生长、侵袭及上皮间质转化机制研究

目的 探究miR-199-3p过表达靶向抑制SOX5对肺癌A549细胞生长、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响。方法 荧光素酶实验检测miR-199a-3p与SOX5靶向关系。构建SOX5 pcDNA载体过表达SOX5,将miR-199-3p与pcDNA-SOX5单独或联合转染A549,将细胞随机分为对照组(Control组)、miR-199-3p过表达组(mimic组)、SOX5组和mimic+SOX5组进行后续实验。克隆形成法检测肺癌A549细胞增殖情况,流式细胞术检测肺癌A549细胞凋亡情况,Transwell检测肺癌A549细胞侵袭能力;荧光显微镜观察肺癌A549细胞EMT形态学变化;蛋白免疫印迹试验检测Ki-67、PCNA、Bax、Bcl-2、Caspase-3、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果 与SOX5组比较,mimic+SOX5组细胞克隆形成率降低,Ki-67、PCNA蛋白水平降低,细胞凋亡率升高,Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3/Caspase-3比值升高,细胞侵袭数降低,E-cadherin蛋白水平...     

微小 RNA-520a-5p通过靶向调控鼠双微体基因影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨微小 RNA-520a-5p(miR-520a-5p)在胶质瘤发生发展中的作用和机制。方法选取 2016年 5月至 2018年 11月在宝鸡高新人民医院治疗的胶质瘤病人肿瘤组织作 56例为研究对象。实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测 56例胶质瘤组织和 56例正常脑组织中 miR-520a-5p表达水平。体外培养胶质瘤 U251细胞,转染 miR模拟对照序列( miR-NC)、 miR-520a-5p9模拟物( miR-520a-5p mimics)至 U251细胞,分别采用四甲基噻唑蓝染色法( MTT)、流式细胞仪、 Transwell和蛋白质印迹法检测过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中鼠双微体基因( MDM2)、细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、 P21、B淋巴细胞瘤 -2相关蛋白( Bax)、 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)和 E-钙黏蛋白( E-cadherin)蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证 miR-520a-5p与 MDM2靶向关系,蛋白质印迹法检测转染 miR-520a-5p mimics、miR-520a-5p抑制剂( anti-miR-520a-5p)对 U251细胞中 MDM2蛋白表达的影响。共转染 miR-520a-5p mimics和 MDM2过表达载体( pcD. NA3.1-MDM2)至 U251细胞,上述相同方法观察过表达 MDM2能否逆转过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中 miR-520a-5p表达降低( P<0.05)。与转染 miR-NC的 U251细胞比较,转染 miR-520a-5p mimics的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值［(0.36±0.04)比( 0.50±0.05)、(0.49±0.05)比( 0.95±0.09)、(0.71±0.07)比( 1.36±0.13)］、迁移细胞数［(67±6.26)比( 144±13.38)］、侵袭细胞数［(59±5.47)比( 135±13.12)］均降低( P<0.05),凋亡率［( 21.17±2.06)%比( 7.82±0.77)%］升高( P<0.05)细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均降低( P<0.05)而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均升高( P<0.05miR-520a-5p可与 MDM2的 3’UTR靶向结合,mimics的 U251细胞中 MDM2蛋白水平显著低于转染 miR-NC的细胞,而转染 anti-miR-520a-5p的 U251细胞中 MDM2的蛋白水平显著高于转染 anti-miR-NC的细胞。与共转染 miR-520a-5p mimics与 pcDNA3.1的 U251细胞比较,共转染 miR-520a-5p mim. ics与 pcDNA3.1-MDM2的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数均升高( P<0.05)凋亡率降低( P< 0.05)。,同时转染miR-520a-5p,细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均升高( P<0.05),而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均降低( P<0.05)。结论 miR-520a-5p在胶质瘤组织中表达降低,过表达 miR-520a-5p可能通过靶向负调控 MDM2抑制胶质瘤 U251细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。     

miR-339-5p调控IGF2对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和内质网应激的影响

摘要：目的:探讨微小RNA（miRNA）-339-5p是否通过调控胰岛素样生长因子2（IGF2）,影响肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和内质网应激。方法:逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）测定1×108CFU·ml-1肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞A549中miR-339-5p和IGF2 mRNA表达。在A549细胞中转染miR-339-5p mimic、si-IGF2或共转染miR-339-5p mimic与pcDNA IGF2,并以1×108CFU·ml-1肺炎链球菌感染。流式细胞术评检测细胞凋亡,免疫印迹实验（Western blot）检测B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、C/EBP同源蛋白（CHOP）和活化转录因子6（ATF6）蛋白表达,比色法检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平。双荧光素酶报告实验验证miR-339-5p对IGF2的靶向作用。结果:miR-339-5p在肺炎链球菌处理的A549细胞中低表达,IGF2 mRNA高表达,差异有统计学意义（P<0.05）。过表达miR-339-5p或敲低IGF2后,肺炎链球菌处理的A549细胞凋亡率、Bax蛋白、CHOP蛋白、ATF6蛋白、MDA、LDH水平减少,Bcl-2蛋白、SOD、GSH-Px水平增加,差异有统计学意义（P<0.05）。miR-339-5p靶向调控IGF2 mRNA表达。过表达IGF2逆转了miR-339-5p对肺炎链球菌处理的A549细胞凋亡及内质网应激的影响。结论:miR-339-5p可能通过靶向调控IGF2,抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和减轻内质网应激。     

miR-502增强肺癌对替莫唑胺化疗敏感性的机制研究

摘要：目的:探讨miR-502对替莫唑胺化疗敏感性的影响及其作用机制。方法:用200μmol·L-1的替莫唑胺处理细胞A549作为替莫唑胺组,不作任何处理的细胞作为对照（Con）组;将miR-NC、miR-502、anti-miR-NC、anti-miR-502质粒分别转染至A549细胞中,分别记为miR-NC组、miR-502组、anti-miR-NC组、anti-miR-502组; miR-502转染至A549细胞后再用200μmol·L-1的替莫唑胺处理作为替莫唑胺+miR-502组;将miR-502质粒分别与pcDNA 3.1、pcDNA 3.1-ERCC1共转染至A549细胞中再用200μmol·L-1的替莫唑胺处理,分别记为替莫唑胺+miR-502+pcDNA 3.1组、替莫唑胺+miR-502+pcDNA3.1-ERCC1组;转染均采用脂质体法。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-502表达水平;蛋白质印迹（Western Blot）法检测p21、细胞周期素D1（Cyclin D1）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、切除修复交叉互补基因1（ERCC1）表达;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-502和ERCC1的靶向关系。结果:与人胚肺成纤维细胞MRC5相比,肺癌细胞A549中miR-502表达水平显著降低。过表达miR-502、替莫唑胺处理以及替莫唑胺处理同时过表达miR-502,肺癌细胞A549中p21、Bax表达水平均显著升高,Cyclin D1、Bcl-2表达水平均显著降低,细胞活性均显著降低,细胞凋亡率均显著升高（P<0.05）。结论:过表达miR-502和替莫唑胺均可抑制细胞A549增殖,促进细胞凋亡,过表达miR-502可增强替莫唑胺对细胞A549增殖抑制和凋亡促进作用,其机制可能与ERCC1有关,将可为提高肺癌化疗效果提供新途径。     

LncRNA Linc00152靶向miR-193a-3p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨LncRNA Linc00152靶向调控miR-193a-3p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR法检测正常胃黏膜细胞GES-1及4种胃癌细胞(MGC803、BGC803、SGC7901、AGS)中Linc00152的表达水平。MGC-803细胞分为pcDNA3.1-GFP-Linc00152组、pcDNA3.1-GFP组;AGS细胞分为si-Linc00152组、si-NC组,分别转染相应的Linc00152过表达和抑制载体。qRT-PCR法检测Linc00152、细胞周期素D1(cyclin D1,CCND1)和miR-193a-3p基因的表达水平,CCK-8检测细胞的活性,细胞克隆试验检测细胞的克隆能力,Annexin VFITC/PI染色后采用流式细胞术检测转染细胞凋亡率,Transwell法检测细胞侵袭,荧光素酶报告试验检测Linc00152和miR-193a-3p靶向关系,Western blotting检测Bcl-2、Bax、CCND1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。并将si-Linc00152组、si-NC组细胞接种裸鼠,观察裸鼠体质量和一般状态,处死后称重记录肿瘤体积、质量,qRT-PCR法测定肿瘤组织Linc00152、CCND1和miR-193a-3p的表达水平。结果 与GES-1细胞相比,胃癌细胞MGC803、BGC803、SGC7901、AGS中Linc00152的表达升高,其中Linc00152在胃癌MGC803细胞中表达较低,而在胃癌AGS细胞中的表达较高,选用胃癌MGC803、AGS细胞进行后续试验。与pcDNA3.1-GFP组相比,pcDNA3.1-GFP-Linc00152组细胞的活性显著升高,克隆能力增强,细胞凋亡减少,侵袭能力显著上升,CCND1、Bcl-2、波形蛋白的表达显著升高,miR-193a-3p和E-钙黏蛋白的表达显著降低。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,Linc00152可直接调控miR-193a-3p的转录活性,且Linc00152可显著上调MGC-803细胞CCND1蛋白表达。与si-NC组相比,si-Linc00152组的裸鼠体内的异种移植瘤体积和体质量显著下降,CCND1和Linc00152的表达显著下降,miR-193a-3p的表达显著上升。结论 Linc00152可靶向作用于miR-193a-3p促进胃癌细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制与细胞周期、上皮细胞间充质转化以及细胞凋亡有关。     

miR-26a-1-3p调控XIAP促进滋养层细胞凋亡而引起复发性流产的研究

目的 探讨miR-26a-1-3p通过调节滋养层细胞凋亡引发复发性流产的分子调控机制。方法 体外培养人正常绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo,并将细胞随机分为miR-NC mimic组(转染miR-NC mimic)、miR-26a-1-3p mimic组(转染miR-26a-1-3p mimic)、miR-26a-1-3p mimic+pcDNA-NC组(转染miR-26a-1-3p mimic、pcDNA-NC)、miR-26a-1-3p mimic+pcDNA-XIAP组(转染miR-26a-1-3p mimic、pcDNA-XIAP)。用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶-3(Cl-caspaes-3)、裂解的胱天蛋白酶-9(Cl-caspaes-9)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP);用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-26a-1-3p表达水平;用Transwell小室实验检测各组细胞侵袭能力;用双荧光素酶报告基因实验检测miR-2...     

血府逐瘀胶囊联合非洛地平治疗老年冠心病心绞痛的临床研究

目的 观察重楼皂苷I（PPI）对磷酸三钙（TCP）磨损颗粒诱导的成骨细胞损伤的影响,并探讨其调控机制。方法 通过消化法从SD大鼠颅骨中获得原代成骨细胞,应用碱性磷酸酶（ALP）染色鉴定成骨细胞。TCP磨损颗粒（0.1 mg/mL）与成骨细胞共孵育48 h制备成骨细胞损伤模型,实验随机分为对照组、模型组和PPI（30、100 μg/mL）组。CCK-8和化学比色法分别测定成骨细胞活力和上清液中乳酸脱氢酶（LDH）水平;实时荧光定量PCR法检测成骨细胞中ALP、I型胶原（Collagen I）和Runt相关转录因子2（RUNX2）mRNA水平;Annexin-V/PI染色经流式细胞术定量分析成骨细胞凋亡情况;应用茜素红S染色观察成骨细胞矿化结节形成;Western blotting法检测成骨细胞中Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、Atg5、p62和微管相关蛋白1轻链3（LC-3）蛋白的表达。结果 与对照组比较,模型组成骨细胞活性降低,特征蛋白ALP、Collagen I、RUNX2 mRNA水平及矿化结节形成显著减少,LDH释放量、细胞凋亡和Bax、cleaved Caspase-3、Atg5和LC-3等蛋白表达及LC-3II/LC-3I值明显增加,而Bcl-2和p62蛋白表达显著减少;与模型组比较,PPI各组成骨细胞活性升高,ALP、Collagen I和RUNX2 mRNA水平和矿化结节形成明显增加,LDH释放和细胞凋亡显著减少,Bax、cleaved Caspase-3、Atg5和LC-3蛋白表达及LC-3II/LC-3I值也明显减少,而Bcl-2和p62蛋白表达显著增加。结论 PPI可通过抑制自噬的活化而减轻TCP磨损颗粒诱导的成骨细胞损伤。     

FOXD3-AS1与miR-135a-5p的相互作用及对肾细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探究FOXD3-AS1与miR-135a-5p的相互作用及对肾细胞癌(RCC)ACHN细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 选取本院2017年1月—2019年12月RCC手术切除癌组织和癌旁组织60份,RT-qPCR检测组织和细胞中FOXD3-AS1和miR-135a-5p表达水平;ACHN细胞分别或联合转染si-NC、si-FOXD3-AS1-1、si-FOXD3-AS1-2、miR-NC、miR-135a-5p mimic、pcDNA3.1-FOXD3-AS1和miR-135a-5p inhibitor;行Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;行划痕闭合实验检测各组细胞迁移能力;行双荧光素酶实验检测靶向关系。建立裸鼠RCC移植瘤模型,分为si-FOXD3-AS1组和si-NC组,每组6只,建模后30 d处死测定移植瘤质量,采用免疫组织化学法检测Ki-67和E-cadherin阳性表达率。结果 与癌旁组织比较,癌组织中FOXD3-AS1表达显著上升,miR-135a-5p表达显著下降(P<0.01)。FOXD3-AS1干扰显著降低细胞活力、侵袭数目和划痕闭合率(P<...     

微小 RNA-335-3p靶向小鼠双微体基因调控骨髓瘤细胞的增殖和凋亡

目的 探讨微小RNA(miR)-335-3p对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 2018年5月至2019年1月,培养正常骨髓细胞MNC和骨髓瘤细胞KM3和U266,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-335-3p表达水平.将KM3细胞分为miR-NC组(转染模拟对照序列)、miR-335-3p组[转染miR-335-3p模拟物(miR-335-3p mimics)]、pcDNA3.1+miR-335-3p组(共转染空载体和miR-335-3p mimics)和pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组[共转染小鼠双微体基因(MDM2)过表达载体和miR-335-3p mimics],MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证KM3细胞中miR-335-3p与MDM2调控关系.结果 骨髓瘤细胞KM3和U266中miR-335-3p表达水平分别为0.24±0.01、0.38±0.02,显著低于正常骨髓细胞MNC中的miR-335-3p表达水平0.77±0.03(均P<0.05).与miR-NC组比较,miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.60±0.03)比(0.99±0.06);72 h:(0.82±0.05)比(1.67±0.07)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均降低(均P<0.05),细胞凋亡率[(24.31±0.99)％比(8.13±0.83)％]、细胞中P21和Bax蛋白表达均升高(均P<0.05).miR-335-3p在KM3细胞中负调控MDM2表达.与pcDNA3.1+miR-335-3p组比较,pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.80±0.05)比(0.63±0.04);72 h:(1.28±0.06)比(0.88±0.05)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均升高(均P<0.05),凋亡率[(15.34±0.66)％比(23.98±1.41)％]、细胞中P21、Bax蛋白表达均降低(均P<0.05).结论 miR-335-3p可能通过下调MDM2表达抑制骨髓瘤细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.     

微RNA-132-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡

目的 研究微RNA(miR)-132-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡中的作用及其作用机制。方法 该研究起止时间为2018年2月至2019年7月。定量聚合酶链反应（qPCR）检测正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19和葡萄膜黑色素瘤细胞SP6.5、M23中miR-132-3p表达。SP6.5细胞中转染miR-132-3p干扰质粒（anti-miR-132-3p）、第10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）过表达质粒（pcDNA3.1-PTEN）或共转染anti-miR-132-3p和PTEN干扰质粒（si-PTEN）,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法检测PTEN、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达,生物信息学预测结合双萤光素酶报告实验分析miR-132-3p与PTEN的靶向关系。结果 与ARPE-19细胞相比,SP6.5、M23细胞中miR-132-3p表达量（0.26±0.02比0.94±0.09、0.81±0.08）明显升高（P<...     

三叶苷调控miR-539-5p表达保护缺氧缺糖心肌细胞损伤研究

摘要：目的:探讨三叶苷对缺氧缺糖心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法:采用不同浓度的三叶苷作用于缺氧缺糖诱导的心肌细胞H9C2,试剂盒检测丙二醛（MDA）含量、乳酸脱氢酶（LDH）和超氧化物歧化酶（SOD）活性,流式细胞术、蛋白质印记（Western blot）检测细胞凋亡以及B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）和Bcl相关X蛋白（Bax）蛋白表达,实时荧光定量PCR（RTq PCR）检测miR-539-5p表达。转染miR-539-5p模拟物至H9C2细胞,检测过表达miR-539-5p对缺氧缺糖诱导的H9C2细胞损伤的影响。结果:三叶苷作用于缺氧缺糖诱导的H9C2细胞后,细胞中MDA含量、LDH释放量、细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著降低,SOD活性、Bcl-2蛋白和miR-539-5p表达水平显著升高（P<0.05）。过表达miR-539-5p后,缺氧缺糖诱导的H9C2细胞中MDA含量、LDH释放量、细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著降低,SOD活性、Bcl-2蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。抑制miR-539-5p表达可减弱三叶苷对缺氧缺糖诱导的H9C2细胞MDA含量、LDH释放量、SOD活性、凋亡,以及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结论:三叶苷可有效降低缺氧缺糖诱导的心肌细胞损伤,其机制与上调miR-539-5p表达有关。     

微小RNA-455-3p 下调TRIM27 对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究微小RNA-455-3p(miR-455-3p)对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法运用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人鼻咽癌细胞5-8F、CNE-1和鼻咽上皮细胞NP69中miR-455-3p的表达;将miR-NC、miR-455-3p mimics、pcDNA3.1、pcDNA3.1- TRIM27、si-NC、si- TRIM27 组、miR-455-3p mimics 和pcDNA3.1、miR-455-3p mimics 和pcDNA3.1-TRIM27通过脂质体试剂转染到5-8F;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、流式细胞术、蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞的增殖、凋亡和TRIM27蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-455-3p与TRIM27的靶向关系。结果与鼻咽上皮细胞NP69(1.37±0.06)相比,人鼻咽癌细胞5-8F(0.42±0.02)、CNE-1(0.96±0.05)中miR-455-3p的表达显著降低(F =314.35,P =0.001)。过表达miR-455-3p 可明显抑制5-8F、CNE-1 细胞的增殖,促进其凋亡;miR-455-3p 可抑制野生型TRIM27细胞的荧光活性,且与TRIM27的表达呈负相关;抑制TRIM27可抑制抑制5-8F细胞的增殖,促进凋亡,过表达TRIM27能够逆转miR-455-3p对鼻咽癌细胞5-8F增殖凋亡的作用。结论miR-455-3p能够调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡的作用机制与其靶向TRIM27相关,将可为鼻咽癌的治疗提供新靶点。     

LncRNA TMPO-AS1调节miR-340-5p/RUNX1轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA TMPO反义RNA1(LncRNA TMPO-AS1)调控miR-340-5p/RUNT相关转录因子1(RUNX1)轴对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 qRT-PCR检测人正常结肠上皮细胞HCoEpiC、人CRC细胞SW480、HCT116、LOVO、HT-29中TMPO-AS1、miR-340-5p、RUNX1表达;将HCT116细胞随机分为：si-ctrl组、si-TMPO-AS1组、mimics NC组、miR-340-5p组、si-TMPO-AS1+anti-miR-ctrl组、si-TMPO-AS1+anti-miR-340-5p组;qRT-PCR检测6组HCT116细胞TMPO-AS1、miR-340-5p、RUNX1水平;CCK-8法检测HCT116细胞活力;EDU法检测HCT116细胞增殖;Transwell检测HCT116细胞迁移和侵袭;western blot检测HCT116细胞RUNX1、PCNA、MMP-2表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证TMPO-AS1和miR-340-5p、miR-340-5p和RUNX1的...     

miR-1915-3p在胃癌细胞中的表达水平及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 检测miR-1915-3p在胃癌细胞中的表达水平,探讨其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞MGC-803、SGC-7901、MKN-45和永生化胃上皮细胞GES-1中miR-1915-3p的相对表达水平;转染实验将miR-1915-3p质粒和对照质粒（miR-NC）转染至MGC-803和SGC-7901中,分别设置MGC-803细胞miR-1915-3p组和miR-NC组及SGC-7901细胞miR-1915-3p组和miR-NC组;细胞增殖实验和凋亡实验分别检测miR-1915-3p组和miR-NC组细胞的光密度（OD）值和凋亡率;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测miR-1915-3p组和miR-NC组细胞的Bcl-2蛋白表达情况。结果 MGC-803、SGC-7901、MKN-45细胞中miR-1915-3p的相对表达水平分别为（0.46±0.06）、（0.42±0.05）、（0.33±0.04）,均低于GES-1细胞中miR-1915-3p的相对表达水平（P<0.05）。MGC-803细胞中,miR-1915-3p组与miR-NC组相比,OD值降低、细胞凋亡率增加、Bcl-2蛋白表达减弱（P均<0.05）;SGC-7901细胞中,miR-1915-3p组与miR-NC组相比,OD值降低、细胞凋亡率增加、Bcl-2蛋白表达减弱（P均<0.05）。结论 miR-1915-3p在胃癌细胞系中表达降低,上调miR-1915-3p的表达可抑制胃癌细胞增殖,减弱Bcl-2蛋白表达以促进细胞凋亡。     

miR-199a-5p调控DDR1抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移

目的初步探究miR-199a-5p对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。方法选取U251细胞为实验对象,构建miR-199a-5p过表达U251细胞株。实验分组:对照组(无转染的U251细胞,Control)、阴性对照组(转染空载体质粒U251细胞,NC)以及实验组(转染miR-199a-5p成熟模拟物,mimics)。实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-199a-5p表达;CCK-8检测转染miR-199a-5p后细胞增殖;细胞划痕实验与Transwell迁移实验检测各组U251迁移情况;Western blot检测DDR1表达;构建DDR1过表达U251细胞株,检测DDR1过表达对转染miR-199a-5p的U251细胞增殖和迁移的影响。结果mimics组细胞miR-199a-5p水平高于control组(P<0.01),细胞活力降低(P<0.01),增殖能力减弱(P<0.01)。转染miR-199a-5p组细胞DDR1表达水平降低(P<0.01)。与mimins组相比,转染pcDNA3.1-DDR1组能够上调DDR1(P<0.01),增加细胞活力,促进细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。结论miR-199a-5p能够下调DDR1表达,抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移。     

MicroRNA-30a-5p靶向Beclin1抑制自噬减轻牛胆酸钠诱导的胰腺泡细胞损伤

目的探究微小型RNA-30a-5p(MicroRNA-30a-5p,miR-30a-5p)对胰腺泡细胞损伤的影响及作用机制。方法不同浓度牛胆酸钠诱导AR42J细胞损伤,取最佳用药浓度,建立胰腺泡损伤模型。细胞分为Control组、Model组、mimic mock组及miR-30a-5p mimic组,牛胆酸钠及miR-30a-5p mimic处理细胞后,RT-PCR检测miR-30a-5p mRNA水平,MTT检测细胞存活,Hoechst检测细胞凋亡,试剂盒检测脂肪酶及淀粉酶活性,ELISA检测多种炎症因子的浓度,免疫印记检测自噬相关蛋白及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达。生物信息预测miR-30a-5p和Beclin1的靶向关系,通过荧光素酶报告实验验证。pcDNA Beclin1(pc-Beclin1)及miR-30a-5p mimic转染经牛胆酸钠处理的AR42J细胞,检测细胞存活、凋亡、脂肪酶淀粉酶活性、自噬相关蛋白表达及炎症因子浓度。结果 500μmol/L牛胆酸钠处理AR42J细胞。miR-30a-5p mimic可显著提高Model组AR42J细胞中miR-30a-5p的mRNA水平及细胞存活率,降低凋亡细胞百分比、脂肪酶淀粉酶活性及细胞培养上清中炎症因子的浓度。同时,miR-30a-5p mimic可显著降低Model组AR42J细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及Beclin1表达,提高p62、p-P13K、p-Akt及p-mTOR表达。miR-30a-5p mimic显著降低Beclin1wt的荧光酶活性。pc-Beclin1显著上调Beclin1,提高LC3表达,并显著减弱miR-30a-5p mimic对AR42J细胞的促增殖抗凋亡作用及对炎症反应的抑制作用。结论 miR-30a-5p通过靶向下调Beclin1,减轻牛胆酸钠诱导的胰腺泡细胞损伤。     

IL-33通过miR-19a-3p/MAPK6通路影响心肌缺氧/复氧损伤的机制研究

目的 探讨白细胞介素-33(IL-33)通过miR-19a-3p/MAPK6通路对心肌缺氧/复氧(H/R)损伤的影响及可能的分子机制。方法 建立H/R诱导的新生小鼠心肌细胞体外模型,使用IL-33进行预处理,向心肌细胞中转入miR-19a-3p mimic,以上调miR-19a-3p表达,转入miR-19a-3p inhibitor,以抑制miR-19a-3p表达,转入pc DNA-MAPK6以上调MAPK6表达。通过Caspase-3活性、细胞凋亡ELISA法和原位细胞凋亡染色检测心肌细胞凋亡。Target Scan数据库预测miR-19a-3p的潜在靶点,双荧光素酶检测报告显示miR-19a-3p与MAPK6之间关系;RT-qPCR法检测心肌细胞miR-19a-3p和MAPK6 mRNA表达,Western blot法检测MAPK6蛋白表达。结果 IL-33预处理可以抑制H/R诱导的miR-19a-3p表达下调和细胞凋亡。双荧光素酶测定报告显示,miR-19a-3p靶向调控MAPK6。IL-33抑制了H/R诱导的MAPK6表达上调,过表达MAPK6减弱了IL-33对H/R的抗凋亡作...     

苦参碱通过lncRNA CASC11/miR-381-3p轴调控宫颈癌细胞的恶性生物学行为的研究

目的 探讨苦参碱是否通过调控lncRNA CASC11/miR-381-3p的表达,调控宫颈癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。方法 宫颈癌细胞SiHa分别转染pcDNA3.1空载体、pcDNA3.1-lncRNA CASC11、mimics阴性对照和miR-381-3p mimics,经不同质量浓度(25、50和100 mg·L^-1)的苦参碱处理后,采用qRT-PCR试验检测细胞中lncRNA CASC11和miR-381-3p表达,CCK-8试验检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell小室试验检测细胞迁移和侵袭,双荧光素酶试验验证lncRNA CASC11和miR-381-3p的靶向关系,Western blot试验检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、Cleaved-caspase3、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 lncRNA CASC11在宫颈癌细胞中高表达,miR-381-3p在宫颈癌细胞中低表达;不同质量浓度的苦参碱均能抑制SiHa细胞增殖、迁...     

蕨麻多酚抗缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡作用研究

摘要：目的:探究蕨麻多酚在缺氧条件下对心肌细胞的抗凋亡作用。方法:取新生1～3 d SD大鼠心肌细胞进行原代培养,随机分成5组:正常对照组、缺氧损伤模型组、蕨麻多酚低(0.11 mg·ml-1)、中(0.22 mg·ml-1)、高(0.44 mg·ml-1)浓度组。细胞在5%CO2-95%N2环境下37℃培养6 h,建立缺氧损伤模型;流式细胞术检测细胞凋亡率; Hoechst-PI荧光染色法观察缺氧损伤后心肌细胞凋亡情况;逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组细胞p53、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax） mRNA的表达水平;蛋白质印迹法（Western Blotting）检测各组细胞p53、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。结果:与正常对照组相比,缺氧损伤模型组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,Hoechst-PI染色可见呈亮蓝色荧光的早期凋亡细胞及大量亮红色荧光的晚期凋亡或死亡细胞; p53、Bax mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著下降（P<0.01）;蕨麻多酚干预后细胞较缺氧损伤模型组凋亡率显著降低（P<0.01）,Hoechst-PI染色亮红色荧光的晚期凋亡或死亡细胞数量减少。蕨麻多酚各浓度组p53、Bax mRNA及蛋白表达均显著降低（P<0.01）,Bcl-2 mRNA及蛋白表达均显著升高（P<0.01）。结论:缺氧时蕨麻多酚能够通过下调心肌细胞p53和Bax水平,上调Bcl-2表达,抑制心肌细胞凋亡,从而减轻缺氧导致的心肌损伤。     

miR-891a-5p通过CPEB1调控结肠癌细胞生物过程的机制研究

目的 探讨miR-891a-5p通过细胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白1(CPEB1)调控结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的机制。方法 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qPCR）检测结肠癌组织、癌旁组织、人正常结肠上皮细胞和人结肠癌细胞中miR-891a-5p的表达;将LOVO细胞分为A组（不做任何处理）、B组（转染anti-miRcon）、C组（转染anti-miR-891a-5p）、D组（共转染anti-miR-891a-5p和si-con）、E组（共转染anti-miR-891a-5p和siCPEB1）、F组（转染miR-con）、G组（转染miR-891a-5p）;CCK-8法检测细胞增殖率、Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹实验检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、胱天蛋白酶-3酶原（Pro-caspase-3）、裂解的胱天蛋白酶-3(C-caspase-3)、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的蛋白表达;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭;双荧光素酶报告基因检...