基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨阿司匹林对缺氧/复氧H9c2细胞凋亡的影响

摘要：目的:探究阿司匹林（aspirin）对缺氧/复氧（H/R） H9c2心肌细胞凋亡的影响及其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/m TOR）信号通路的关系。方法:正常培养H9c2心肌细胞16 h,作为对照组（control组）;缺氧、复氧处理H9c2心肌细胞,作为H/R组;培养基中加入aspirin,作为H/R+aspirin组;培养基中加入阻断剂LY294002,作为H/R+aspirin+PI3K/AKT特异阻断剂LY294002组（H/R+aspirin+LY组）;检测细胞活力、细胞凋亡情况及细胞中PI3K、磷酸化PI3K（p-PI3K）、Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化m TOR（p-mTOR）、半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白表达情况。结果:H/R组H9c2心肌细胞存活率低于Control组,凋亡率高于Control组（P<0.05）; aspirin预处理组细胞存活率高于H/R组,H/R+aspirin组H9c2心肌细胞凋亡率低于H/R组（P<0.05）; H/R+aspirin+LY组细胞存活率低于H/R+aspirin组,细胞凋亡率高于H/R+aspirin组（P<0.05）。H/R组H9c2心肌细胞中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、caspase-3蛋白表达高于Control组,Bcl-2蛋白表达低于Control组（P<0.05）; H/R+aspirin组H9c2心肌细胞中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、Bcl-2蛋白表达高于H/R组,caspase-3蛋白表达低于H/R组（P<0.05）; H/R+aspirin+LY组p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、Bcl-2蛋白表达低于H/R+aspirin组,caspase-3蛋白表达高于H/R+aspirin组（P<0.05）。结论:aspirin预处理可减轻H/R诱导的H9c2心肌细胞损伤,显著提高心肌细胞存活率,减少细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活PI3K/Akt/m TOR信号通路实现的。     

川皮苷调控miR-145-5p/KLF5轴减轻缺氧复氧诱导的大鼠心肌细胞损伤

摘要：目的:探讨川皮苷对缺氧复氧（H/R）诱导的大鼠心肌损伤细胞发挥保护作用的潜在机制。方法:体外培养大鼠心肌H9c2细胞,CCK-8法检测不同剂量(0,12.5,25,50,100,200μmol·L-1)的川皮苷作用于H9c2细胞48 h后的细胞活力,筛选合适的实验浓度;取对数生长期的H9c2细胞,随机分为对照组、H/R组、mimic-NC组、miR-145-5p mimic组、川皮苷低(12.5μmol·L-1)、高(25μmol·L-1)剂量组、川皮苷+inhibitor-NC组、川皮苷+miR-145-5p inhibitor组,除对照组外,其余组建立H/R损伤模型。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测细胞中miR-145-5p和Krüppel样因子5（KLF5） mRNA的表达水平;CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;并检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平;蛋白印迹法（Western Blot）检测细胞KLF5、核因子-κB p65（NF-κB p65）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达。结果:12.5和25μmol·L-1的川皮苷对H9c2细胞的活力未出现明显影响,当川皮苷浓度大于50μmol·L-1时可显著抑制H9c2细胞的活力（P<0.05）。因此,选择12.5和25μmol·L-1的川皮苷用于后续实验。川皮苷可促进miR-145-5p表达,下调KLF5表达（P<0.05）,升高H9c2细胞活力、SOD水平和Bcl-2蛋白表达（P<0.05）,降低细胞凋亡率、LDH、CK-MB、MDA、TNF-α、IL-1β水平和p-NF-κB p65/NF-κB p65比值及Bax蛋白表达（P<0.05）。上调miR-145-5p表达与川皮苷发挥相同的作用,下调miR-145-5p后,川皮苷对H9c2细胞损伤的保护作用被明显削弱。结论:川皮苷可能通过上调miRNA-145-5p,抑制KLF5的表达和NF-κB p65的活化,进而抑制氧化应激和炎症反应,减少H/R诱导的心肌细胞凋亡。     

高糖应激对H9c2细胞凋亡作用

目的 探讨高糖应激早期对H9c2细胞存活的影响及其可能的信号转导通路.方法 高糖培养H9c2细胞24 h后,收集细胞进行细胞活力和凋亡的测定,用Western blot方法 测定蛋白激酶(Akt)的磷酸化水平和内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)的表达.结果 与对照(NG)组相比,高糖培养(HG)组H9c2细胞活力改善,凋亡减少,而P13K抑制剂LY294002预处理和NOS抑制剂L-NAME处理均抑制短期高糖培养对H9c2细胞的保护作用.与NG组相比,HG组早期Akt磷酸化水平升高,eNOS蛋白表达增加,结论 在高糖应激早期(24 h内),高糖通过活化P13K/Akt/eNOS信号通路,改善H9c2细胞的活力,减少其凋亡.     

双氢青蒿素通过PI3K/Akt通路逆转肺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的分子机制

摘要：目的:研究双氢青蒿素通过磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）通路逆转肺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的分子机制。方法:体外培养人肺癌耐顺铂株（A549/DDP）,给予不同浓度双氢青蒿素(20,40,80,160,200,250,300μmol·L-1)处理48 h后,通过MTT法检测双氢青蒿素对A549/DDP细胞增殖影响,选取双氢青蒿素最佳实验浓度及在不同浓度DDP(0,20,40,60,80,100μmol·L-1)作用下观察并计算顺铂对A549/DDP细胞IC50和双氢青蒿素对A549/DDP逆转倍数;通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和半胱氨酸蛋白酶3（Caspase3）及PI3K/Akt通路相关蛋白PI3K、AKT、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达。结果:随双氢青蒿素浓度升高,细胞增殖抑制率依次升高（P<0.05）,且具有浓度依赖性,IC10（32.07±1.04）μmol·L-1是双氢青蒿素为最佳逆转耐药浓度;随DDP浓度的升高,双氢青蒿素A549/DDP细胞增殖抑制率随之升高（P<0.05）,DDP+双氢青蒿素组顺铂对A549/DDP的IC50为（26.42±1.23）μmol·L-1,顺铂组为（58.16±1.32）μmol·L-1,双氢青蒿素的逆转耐药倍数为2.21;与对照组相比,DDP组、双氢青蒿素组、DDP+双氢青蒿素组细胞凋亡率、caspase-3表达显著升高（P<0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt/Akt表达显著降低（P<0.05）;与DDP组、双氢青蒿素组相比,DDP+双氢青蒿素组细胞凋亡率、caspase-3表达显著升高（P<0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt/Akt表达显著降低（P<0.05）。结论:双氢青蒿素通过抑制PI3K/Akt通路促进A549/DDP细胞凋亡,在一定程度上可逆转肺癌A549/DDP细胞株对顺铂的耐药性。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对心肌细胞缺氧/复氧损伤的抑制作用及其机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的抑制作用及其机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,随机分为正常(N)、缺氧/复氧(H/R)、EGCG低剂量(L)、中剂量(M)和高剂量组(H),共5组(n=6)。建立细胞缺氧/复氧模型,给予EGCG预处理,用CCK-8法测定细胞存活率;Annex V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;按照试剂盒说明书检测细胞培养液T-AOC、TNF-α含量;用Western blot法检测Akt蛋白及磷酸化水平;用荧光定量PCR法检测PI3K、Akt、caspase-3基因表达。结果与模型组相比,EGCG能增加H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤后的存活率,减少细胞凋亡,提高T-AOC水平,降低TNF-α含量,增加PI3K、Akt和p-Akt表达,减少caspase-3的表达。结论 EGCG通过影响PI3K/Akt信号通路,减少细胞凋亡,保护心肌细胞。     

IGF-1经PI3K/Akt依赖性途径保护苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡

目的　观察胰岛素样生长因子 1 (insulin likegrowfactor 1, IGF 1)对苯妥英(100μmol·L-1 )处理的大鼠小脑颗粒神经元 (cerebellargranularneurons, CGNs)存活率的影响,并探讨其与PI3K/Akt通路的关系。方法　体外培养 8的小脑颗粒神经元,同时给予 100μmol·L-1苯妥英和μmol·L-1 IGF 1, 48h后行凋亡分析,观察IGF 1对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元的保护作用;采用PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002(50μmol·L-1 )预先与小脑颗粒神经元孵育 30min,再加 1μmol·L-1 IGF 1和 100μmol·L-1苯妥英共孵育 48h,测定神经元存活率,观察IGF 1与PI3KAkt通路的关系;Westernblot法检测苯妥因处理不同时间小脑颗粒神经元内磷酸化Akt水平及总Akt的表达量,并观察IGF 1对磷酸化Akt水平的影响,进一步探讨IGF 1的作用是否经PI3K/Akt通路。结果　①1μmol·L-1 IGF 1可明显抑制 100μmol·L-1苯妥英引起的小脑颗粒神经元的凋亡明显提高小脑颗粒神经元的存活率,使其凋亡特征消失。②PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002可取消IGF 1的保护作用。③苯妥英使小脑颗粒神经元内磷酸化Akt水平明显降低,但不影响总Akt表达量。④IGF 1可明显恢复被苯妥英抑制的磷酸化Akt的水平。结论　IGF 1保护苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡,这种     

淫羊藿苷调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路对高糖诱导的小胶质细胞铁死亡的影响

摘要：目的:探讨淫羊藿苷调节核转录E2相关因子2（Nrf2）/溶质载体蛋白7家族成员11（SLC7A11）/谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）通路对高糖诱导的小胶质细胞铁死亡的影响。方法:将小胶质细胞（BV2）分为对照组(5.5 mmol·L-1葡萄糖)、高糖组(35 mmol·L-1葡萄糖)、淫羊藿苷低(35 mmol·L-1葡萄糖+0.37μmol·L-1淫羊藿苷)、高(35 mmol·L-1葡萄糖+1.48μmol·L-1淫羊藿苷)剂量组、抑制剂组(35 mmol·L-1葡萄糖+1.48μmol·L-1淫羊藿苷+1μmol·L-1的Nrf2抑制剂ML385)。采用CCK-8法检测细胞增殖,进行细胞形态学观察,用超氧化物阴离子荧光探针（DHE）、氟硼二吡咯(BODIPYTM)检测细胞内活性氧（ROS）、脂质过氧化（LPO）水平,特异性荧光探针检测细胞内活性铁含量,Western Blot检测细胞Nrf2、SLC7A11、GPX4、血红素加氧酶1（HO-1）、环氧合酶2（COX2）、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4（ACSL4）蛋白的表达。结果:与对照组比较,高糖组的BV2细胞形态不规则,出现细胞碎片,细胞光密度(OD450)值、Nrf2、SLC7A11、GPX4、HO-1表达明显降低（P＜0.05）,ROS和LPO水平、活性铁含量、COX2、ACSL4表达显著升高（P＜0.05）;与高糖组比较,低、高剂量淫羊藿苷组的BV2细胞损伤减少,细胞OD450值、Nrf2、SLC7A11、GPX4、HO-1表达升高（P＜0.05）,ROS和LPO水平、活性铁含量、COX2、ACSL4表达降低（P＜0.05）;与高剂量淫羊藿苷组比较,抑制剂组减弱了淫羊藿苷对高糖诱导的小胶质细胞铁死亡的抑制作用。结论:淫羊藿苷通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4通路从而抑制高糖诱导的小胶质细胞铁死亡。     

RISK信号通路在1-磷酸鞘氨醇后适应减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的研究再灌注损伤挽救激酶(reperfusion injury salvage kinase,RISK)信号通路在1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)后适应减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法将H9c2细胞随机分为7组,即(1)正常对照组(C);(2)缺氧/复氧组(H/R);(3)S1P组;(4)S1P+LY294002组(S1P+LY);(5)LY组;(6)S1P+PD98059组(S1P+PD);(7)PD组。采用MTT法测定各组细胞存活率;比色法测定丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(TSOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活力;采用激光共聚焦显微镜技术检测细胞内游离钙离子浓度变化;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;Western blot法测定Akt和ERK1/2蛋白的磷酸化水平。结果与H/R组比较,S1P组可明显增加H9c2细胞缺氧/复氧损伤后细胞存活率及凋亡率,增加TSOD及Mn-SOD活力,降低MDA含量,降低钙离子浓度,增加Akt和ERK1/2磷酸化水平,而PI3K/Akt信号通路阻断剂LY294002或ERK1/2阻断剂PD98059可阻断S1P对H9c2的上述作用。结论 S1P能够减轻H9c2细胞缺氧/复氧损伤,加入PI3K/Akt抑制剂LY294002和ERK1/2抑制剂PD98059均使S1P的保护作用被取消,表明S1P通过RISK信号通路发挥抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤作用。     

胞外信号调节激酶1/2通路在阿霉素引起的心肌细胞损伤中的作用

目的探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)通路在阿霉素(doxorubicin,DOX)引起的心肌细胞损伤中的作用。方法应用DOX处理H9c2心肌细胞建立细胞损伤的体外模型,在DOX处理前应用ERK 1/2抑制剂PD98059抑制ERK 1/2的活化;检测细胞存活率、ERK 1/2的活化、胞内活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(MMP)以及胱硫醚γ-裂解酶(CSE,为内源性硫化氢的合成酶)的表达。结果 5μmol·L-1DOX处理H9c2心肌细胞1～6 h,呈时间依赖性地促进ERK1/2的活化;5μmol·L-1DOX对心肌细胞具有明显的损伤作用,表现为细胞存活率下降、ROS水平升高、MMP丢失及CSE表达降低;在DOX处理H9c2心肌细胞前30min,应用ERK1/2抑制剂10μmol·L-1PD-98059预处理能明显拮抗DOX对心肌细胞的损伤作用,使ROS水平降低,细胞存活率MMP和CSE表达水平均升高。结论 ERK1/2通路参与DOX对H9c2心肌细胞的损伤作用。     

咖啡因对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用及机制

目的　观察咖啡因 (caffeine)对苯妥英 (diphenylhy dantoin ,DPH) 10 0 μmol·L-1处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranularneurons ,CGNs)存活率的影响 ,并探讨其作用机制。方法　体外培养 8d的CGNs,同时给予 10 0μmol·L-1苯妥英和 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因 ,4 8h后行凋亡分析 ;采用dantrolene(2 0 μmol·L-1)、2APB (5 0 μmol·L-1)、nifedipine(10 0 μmol·L-1)和nimodipine(10 0 μmol·L-1)、MK80 1(4μmol·L-1)、KN93(1μmol·L-1)以及MEK1抑制剂PD980 5 9(5 0 μmol·L-1)分别预先孵育 30min ,再与10mmol·L-1咖啡因和 10 0 μmol·L-1苯妥英共孵育 4 8h ,测定CGNs存活率 ,观察咖啡因的作用与 [Ca2 + ]i 的关系 ;Westernblot法检测咖啡因对磷酸化c Jun和磷酸化ERK水平的影响。结果　① 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因可浓度依赖性抑制 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡 ,显著提高CGNs存活率 ;②dantrolene、2APB、nifedipine和nimodipine、KN93、MK80 1和PD980 5 9均不能取消 10mmol·L-1咖啡因对 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡的保护作用。③咖啡因可明显抑制苯妥英诱导CGNs中c Jun磷酸化水平的升高 ,但不影响被苯妥英抑制的ERK的活性。结论　一定浓度的咖啡因可保护苯?     

PI3K/Akt信号通路在硫化氢保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤的作用

目的探讨硫化氢(H2S)对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响及该通路在H2S神经保护中的作用。方法Western blot法检测H2S供体硫氢化钠(NaHS)处理PC12细胞诱导Akt磷酸化的水平;CCK-8比色法检测细胞存活率;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率。结果应用不同浓度NaHS处理PC12细胞30 min,在50～400μmol.L-1浓度范围内,呈浓度依赖性地上调Akt磷酸化的水平,但随着NaHS浓度的增加,磷酸化Akt表达量逐渐下降;Ly294002明显抑制了NaHS对Akt磷酸化水平的上调作用。NaHS预处理可以保护PC12细胞对抗600μmol.L-1CoCl2诱导的损伤,使细胞存活率提高及细胞凋亡率降低。而在预处理前使用PI3K/Akt信号通路抑制剂Ly294002,则明显地减弱了H2S的神经细胞保护作用。结论 H2S可通过激活PI3K/Akt信号通路保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤。     

基于Nrf2/HO-1通路探讨葛根素对高糖诱导成骨细胞凋亡的影响

摘要：目的:探讨葛根素对高糖诱导的成骨细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞,试验分为对照组(葡萄糖浓度为5.5 mmol·L-1)、高糖组(葡萄糖浓度为33 mmol·L-1)、高糖+葛根素组(葛根素终浓度分别为0.1,1,10μmol·L-1)。采用CCK-8法检测葛根素对高糖诱导的MC3T3-E1细胞活力影响;采用流式细胞法观察葛根素对高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡能力的影响;采用免疫印迹法（WB）检测凋亡相关蛋白以及核相关E2因子2/血红素加氧酶-1（Nrf2/HO-1）信号通路相关蛋白表达;添加Nrf2/HO-1信号通路特异性抑制剂ML385检测其对细胞凋亡的影响。结果:与对照组相比,高糖组细胞活力、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白水平、HO-1蛋白水平及细胞核Nrf2蛋白水平降低（P<0.05）,细胞凋亡率、Bcl-2相关X蛋白质（Bax）、cleaved-caspase 3蛋白水平及细胞浆Nrf2蛋白水平升高（P<0.05）;与高糖组相比,高糖+各浓度葛根素组细胞活力、Bcl-2蛋白水平、HO-1蛋白水平及细胞核Nrf2蛋白水平依次升高（P<0.05）,细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase 3蛋白水平及细胞浆Nrf2蛋白水平依次降低（P<0.05）;与高糖+高浓度葛根素相比,高糖+高浓度葛根素+抑制剂组细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase 3蛋白表达升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达降低（P<0.05）。结论:葛根素可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路,抑制高糖诱导的成骨细胞凋亡。     

原花青素B2对H2O2诱导的星形胶质细胞氧化损伤和凋亡的保护作用及机制研究[①]

摘要：目的 本研究旨在探讨原花青素B2（proanthocyanidin B2, PC-B2）对过氧化氢（H2O2）诱导的小鼠星形胶质细胞（astrocytes, AS）氧化损伤和凋亡的保护作用及其机制。方法 利用C57BL/6新生小鼠（1-3 d）分离、培养AS,通过随机数字表法分为正常组、正常+PC-B2组（100 μg·mL-1的PC-B2处理24 h）、H2O2模型组（200 μmol·L-1的H2O2处理24 h）、H2O2+PC-B2组（200 μmol·L-1的H2O2与100 μg·mL-1的PC-B2共同处理24 h）;CCK-8法检测各组细胞存活率,LDH法进行细胞毒性检测;ELISA试剂盒检测各组细胞中MDA含量以及SOD、CAT和GSH-Px活力;TUNEL染色法检测各组细胞凋亡情况;RT-PCR和Western Blot分别检测AS中Bax、Bcl-2、Caspase-3、Akt/Stat3、p-Akt、p-stat3、Nrf2/HO-1的mRNA和蛋白表达水平。结果 PC-B2能够明显增强细胞活力,抑制AS凋亡。并且与H2O2模型组相比,PC-B2干预能够显著降低AS中LDH、MDA含量,提高SOD、CAT和GSH-Px活力,抑制Bax,caspase-3的mRNA和蛋白表达,上调Akt/Stat3、Bcl-2、Nrf2/HO-1的mRNA和蛋白表达。结论 PC-B2能够通过Akt/Stat3和Nrf2/HO-1途径增强AS抗氧化能力,减轻H2O2诱导的AS氧化损伤和凋亡。     

飞燕草素葡萄糖苷通过上调SOX2OT减轻高糖诱导的心肌细胞损伤

摘要：目的:探讨飞燕草素葡萄糖苷（DPg）对高糖（HG）诱导的心肌细胞H9C2损伤的影响及可能机制。方法:体外培养H9C2细胞,不同剂量(1,10,100μmol·L-1)的DPg作用于33.3 mmol·L-1葡萄糖诱导的H9C2细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞中兔抗鼠B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2相关蛋白（Bax）的蛋白表达,试剂盒检测细胞中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平,RT-qPCR检测SRY盒转录因子2重叠转录本（SOX2OT）表达。转染SOX2OT过表达载体、小干扰RNA至H9C2细胞,经33.3 mmol·L-1葡萄糖诱导24 h后,检测细胞增殖、凋亡、Bax和Bcl-2蛋白表达及MDA和SOD水平。结果:DPg可提高高糖诱导的H9C2细胞吸光度（A）值（P<0.05）,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量（P<0.05）,并促进Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）,且呈剂量依赖性。DPg可剂量依赖性促进高糖诱导的H9C2细胞中SOX2OT的表达,过表达SOX2OT可提高高糖诱导的H9C2细胞A值（P<0.05）,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量（P<0.05）,并促进Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）。与未敲减SOX2OT的H9C2细胞比较,敲减SOX2OT的H9C2细胞经100μmol·L-1DPg和高糖处理后A值、Bcl-2蛋白表达和SOD活性降低（P<0.05）,细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量升高（P<0.05）,并抑制Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）。结论:DPg可能通过上调SOX2OT表达抑制HG诱导的H9C2细胞凋亡和氧化应激。     

淫羊藿苷对高糖诱导H9c2心肌细胞凋亡的抑制作用

目的 研究淫羊藿苷(ICA)对高糖诱导大鼠心肌细胞H9c2凋亡的抑制作用及其机制。方法 H9c2细胞分为细胞对照组、高糖模型组、高糖+ICA 2.5,5.0,10.0,20.0和40.0μmol·L^-1组，ICA培养1 h后更换含葡萄糖33 mmol·L^-1的培养基培养3 d。CCK-8法检测H9c2细胞存活率，Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率，生物化学法测定细胞培养基葡萄糖消耗量和乳酸水平，DCFH-DA荧光探针法测定细胞内活性氧(ROS)含量，Mito-Tracker Red CMXRos荧光探针法测定线粒体膜电位，Western印迹法检测动力素相关蛋白1(DRP1)、线粒体分裂蛋白1(FIS1)、线粒体融合蛋白2(MFN2)、视神经萎缩症蛋白1(OPA1)和活化胱天蛋白酶3/6/7蛋白表达水平。结果 与细胞对照组比较，高糖模型组H9c2细胞存活率、线粒体膜电位、MFN2和OPA1蛋白表达水平显著降低(P<0.01)，细胞凋亡率、培养基葡萄糖消耗量和乳酸水平及细胞内ROS含量、DRP1、FIS1和活化...     

溶血磷脂酸上调ROS水平诱导HeLa-S3细胞迁移及相关机制的探讨

目的探讨溶血磷脂酸(LPA)诱导HeLa-S3细胞迁移能力的机制。方法采用细胞迁移实验测定HeLa-S3细胞的迁移;Western blot检测Akt、P-Akt(Ser473)、PAK1、P-PAK1(Thr423)的表达;采用CM-H2DCFDA检测细胞ROS的生成情况。结果①20μmol·L-1LPA可使细胞内ROS的产生明显增加(P<0.05),采用NAC预处理后能明显的抑制ROS的生成;②LPA可升高P-Akt(Ser473),P-PAK1(Thr423)/PAK1水平,但采用LY294002可以抑制PAK1(Thr423)磷酸化水平的升高和细胞的迁移(P<0.01)。结论溶血磷脂酸通过上调ROS水平来诱导HeLa-S3细胞的迁移,其可能的机制是通过PI3K信号通路活化Akt/PAK1来实现的。     

丹参酮衍生物对K562细胞的生长抑制及诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮衍生物对人红白血病细胞株K562的生长抑制以及诱导凋亡作用。方法MTT比色法检测不同浓度丹参酮1、丹参酮2和丹参酮B对K562细胞的增殖抑制作用;PI单染法检测3者对K562细胞周期的影响;An-nexin V/PI双染法检测3者对K562细胞诱导凋亡的作用。结果丹参酮1和丹参酮B能够抑制K562细胞增殖,IC50分别为5.22和15.11μmol·L-1,且分别在2.5~10μmol·L-1和10~40μmol·L-1剂量范围内,G0/G1期细胞比例的增加及早期凋亡细胞百分率的提高均呈剂量相关性;丹参酮2在100μmol·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为27.8%,无诱导其凋亡作用,但可以使G0/G1期细胞增多。结论丹参酮1和丹参酮B抑制K562细胞增殖,阻滞其于G0/G1期并诱导细胞凋亡;丹参酮2对K562细胞没有明显生长抑制及诱导凋亡作用,但可将其阻滞于G0/G1期。     

2型糖尿病大鼠心肌PI3K/Akt/mTOR信号通路的改变及Sirt1的调控机制研究

目的检测Sirt1及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白在糖尿病大鼠心肌及高糖培养的H9C2细胞中的表达变化,明确其在糖尿病心肌病发生发展中的作用。方法高脂饮食联合链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,实验将大鼠分为糖尿病2周、4周、8周模型组和对照组,超声心动图检测大鼠心功能变化,Western blot检测大鼠心肌Sirt1、PI3K、Akt、mTOR、S6K1蛋白表达变化。将H9C2细胞分为正常对照组、DMSO组(78.12 mmol·L~(-1))、高糖(HG)组(33 mmol·L~(-1))、白藜芦醇(Res)组(20μmol·L~(-1))、尼克酰胺(Nam)组(40 mmol·L~(-1)),Western blot及qRT-PCR研究心肌细胞Sirt1、PI3K、Akt、mTOR、S6K1相关蛋白基因转录及表达,研究Sirt1对该信号通路的调控机制。结果在动物实验中,与2周DM大鼠比较,8周DM大鼠心肌Sirt1蛋白表达明显增加。2周模型组大鼠相对于正常对照组心肌PI3K、Akt、mTOR、S6K1表达明显增加,且S6K1表达4周模型组比2周模型组增加更明显,但8周表达降低。在高糖培养的H9C2细胞中,与对照组相比,高糖组Sirt1,PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达明显增高。Nam处理组Sirt1表达明显降低,PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达增高。Res处理组Sirt1表达明显增高,而PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达降低。结论 Sirt1通过负调控PI3K/Akt/mTOR信号通路参与糖尿病心肌损伤,参与早期糖尿病心肌病的发生发展。     

原钒酸钠的细胞毒理学实验研究

目的　探讨原钒酸钠 (SOV)对心肌细胞的毒性作用及其机制。方法　采用循环灌流的方法急性分离成年豚鼠心肌细胞 ,使其在原钒酸钠浓度为 1 ,1 0 ,1 0 0 μmol·L- 1 ,1mmol·L- 1 作用后 ,分别检测 30 ,60 ,1 2 0 ,1 80min 4个时相心肌细胞保存液中LDH、CK含量以及心肌细胞蛋白含量和Na+ ,K+ ATP酶活性 ,检测心肌细胞凋亡率和细胞活力 ;电镜下观察死亡和凋亡细胞的细胞器和细胞核形态学变化。结果　在原钒酸钠 1 0 0 μmol·L- 1 和 1mmol·L- 1 两个组的各时相保存液中LDH、CK以及心肌细胞中蛋白含量增加 ;心肌细胞中Na+ ,K+ ATP酶活性和细胞活力降低 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 1 )。流式细胞仪显示 :在 1 80min时 1 0 0 μmol·L- 1 和 1mmol·L- 1 两组的细胞凋亡率与对照组相比增加 (P <0 0 5)。结论　在原钒酸钠浓度高于 1 0 0μmol·L- 1 且作用时间在 30min以上时 ,心肌细胞出现不可逆性损害     

二甲双胍对高糖培养H9c2细胞Connexin43表达的影响

目的研究二甲双胍(metformin,Met)对高糖培养下的H9c2细胞缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)表达的影响及其机制。方法高糖培养的大鼠H9c2心肌细胞分别加入3和5μmol·L-1的两种不同浓度的二甲双胍继续培养24 h。MTT实验检测H9c2细胞活力;LDH释放实验检测细胞毒力;细胞免疫荧光实验检测Cx43的表达和分布;荧光法检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western blot检测Cx43、pAMPK、AMPK和GAPDH的表达。结果 Met能增加H9c2细胞活力,降低细胞内ROS水平,对LDH释放差异无显著性;Met使AMPK磷酸化水平明显升高,增加心肌Cx43表达,改善Cx43的分布。结论 Met可能通过激活AMPK途径,增加心肌细胞Cx43的表达和减少细胞内ROS的产生,进而发挥心血管的保护效应。