60Co辐射事故5名受照者外周血T细胞抗原受体基因的印迹杂交分析

在低熔点琼脂糖胶内制备人淋巴细胞基因组ＤＮＡ，两种限制性核苷酸内切酶对低熔点胶块内的样本ＤＮＡ进行完全消化，以人Ｔ淋巴细胞抗原受体（ＴＣＲ）的α和β链ｃＤＮＡ为探针，对５名４．５年前全身受６０Ｃｏ大剂量受照者外周血淋巴细胞基因组ＤＮＡ进行印迹杂交分析。结果发现经ＨｉｎｄⅢ内切酶消化的样本ＤＮＡ，正常对照与受照者比较，两种ｃＤＮＡ探针的杂交结果无明显区别，经ＥｃｏＲⅠ内切酶消化的ＤＮＡ样本，４名受者的αｃＤＮＡ探针杂交带型不同于正常对照。作者对这一结果进行了初步分析。     

低熔点胶包埋法制备分子杂交用细胞基因组DNA

介绍一种用于分子杂交的简便，高效的细胞ＤＮＡ制备方法。将细胞包埋在０．５％低熔点琼脂糖凝胶中，只经过细胞裂解，蛋白酶消化和含有苯甲基磺酰氟的ＴＥ溶液清洗两个步骤处理，所得ＤＮＡ就可用于限制性内切消化和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交。     

急性放射病患者恢复期外周血淋巴细胞表型及功能分析

了解急性放射病患者恢复期间外周血淋巴细胞功能。方法用流式细胞仪分析淋巴细胞表型，３Ｈ－ＴｄＲ掺入法分别分析Ｔ细胞和ＮＫ细胞功能。结果照后４．５年，患者外周血ＣＤ＋４Ｔ细胞仍有不同程度低于正常对照；受照剂量大于２Ｇｙ者ＣＤ＋８Ｔ细胞数明显高于正常，而受照时年龄为５４岁者ＣＤ＋８Ｔ细胞明显低于对照；多数患者外周血ＮＫ细胞数和功能都高于正常对照。结论受照者外周血Ｔ细胞功能恢复与受照剂量大小及年龄因素有关，恢复期ＮＫ细胞数量和活性增高，对于弥补Ｔ细胞功能不足具有积极意义     

辐射诱发细胞凋亡中DNA大片段的生成

目的与方法：ＤＮＡ在核小体间断裂,琼脂糖凝胶电泳时出现梯形谱（ＤＮＡｌａｄｄｅｒ）通常被认为是细胞凋亡的特征性生化标志,利用脉冲场凝胶电泳,对人外周血淋巴细胞受照后ＤＮＡ梯形谱形成前,ＤＮＡ断裂情况进行了观察。结果人外周血淋巴细胞受照者凋亡过程中,ＤＮＡ的断裂分成两步,首先是产生３００ｋｂ到５０ｋｂ的ＤＮＡ大片段,随后才是通常所描述的ＤＮＡ梯形谱。结论;细胞凋亡中核酸内切酶对ＤＮＡ的降解不是一步完     

榄香烯对小鼠脾洒巴细胞亚群及其调节的辐射保护效应

目的 探讨榄香烯对受照小鼠脾淋巴细胞及亚群间调节作用的保护效应和剂量范围。方法 应用单克隆抗体铺皿法分离受＾６０Ｃｏγ射线分次照射的小鼠脾脏Ｌ３、Ｔ４、Ｌｙｔ２和Ｂ细胞，分别测定榄香烯对以上三种亚群细胞和Ｌ３、Ｔ４，Ｙｙｔ２对Ｂ细胞＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入的影响，同时测定ＳＯＤ活力和ＬＰＯ含量。结果 榄香烯提高了受照２．５Ｇｙ（０．５Ｇｙ×５ｄ）小鼠脾淋巴细胞亚群的辐射抗性，增强了Ｌ３Ｔ４对Ｂ细胞的辅助     

榄香烯对小鼠脾淋巴细胞亚群及其调节的辐射保护效应

探讨榄香烯对受照小鼠脾淋巴细胞及亚群间调节作用的保护效应和剂量范围。方法应用单克隆抗体铺皿法分离受６０Ｃｏγ射线分次照射的小鼠脾脏Ｌ３，Ｔ４，Ｌｙｔ２和Ｂ细胞，分别测定榄香烯对以上三种亚群细胞和Ｌ３，Ｔ４，Ｌｙｔ２对Ｂ细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入的影响，同时测定ＳＯＤ活力和ＬＰＯ含量。结果榄香烯提高了受照２．５Ｇｙ（０．５Ｇｙ×５ｄ）小鼠脾淋巴细胞亚群的辐射抗性，增强了Ｌ３Ｔ４对Ｂ细胞的辅助调节作用，提高了脾脏ＳＯＤ活力和降低ＬＰＯ含量。而对受照４Ｇｙ（０．８Ｇｙ×５ｄ）和５Ｇｙ（０．５Ｇｙ×１０ｄ）组没有观察到这种效应。结论在一定剂量范围，榄香烯通过清除自由基减少靶分子的损伤。     

5例放射事故病人照后5.5年外周血淋巴细胞 HPRT 基因突变频率和突变谱的测定

通过克隆外周血淋巴细胞并用６巯基鸟嘌呤筛选次黄嘌呤磷酸核糖转移酶基因（ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＨＰＲＴ）缺陷的突变细胞，测定了５例急性放射病人在受２．０～５．２Ｇｙ６０Ｃｏγ射线意外照射后５．５年外周血淋巴细胞ＨＰＲＴ基因突变频率。观察到细胞克隆效率、突变细胞克隆数、ＨＰＲＴ突变频率与受照剂量有一定的依赖性。用多引物聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增突变细胞ＨＰＲＴ基因全部９个外显子伴以琼脂糖凝胶电泳以分析基因突变谱。结果表明，高剂量受照病人的外显子缺失总数较低剂量者高。与照后３．５年和４．５年的突变谱比较，外显子缺失突变比例逐年下降，而点突变比例逐年升高。可能反映病人机体的恢复和受损ＤＮＡ的修复。     

60Co-γ射线照射对大鼠肺一氧化氮合酶和内皮素系统基因表达的影响

目的 探讨一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）和内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ，ＥＴ）及ＥＴ转换酶（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ，ＥＣＥ）等在受照射肺中的基因表达变化，揭示其在肺纤维化发生中的参与作用。方法 用＾６０Ｃｏ对大鼠肺进行３０Ｇｙ照射，照后４，８，２４天提取总ＲＮＡ，分别做ＲＴ－ＰＣＲ；对照射后１，３，５个月肺组织进行ＥＴ肽的Ｗｅｓ     

PCR技术在鉴定阳性重组子中的应用

介绍了采用ＰＣＲ技术在人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）、人促红细胞生成素及中国人γ－干扰素（ｈＩＦＮ－γ）ｃＤＮＡ重组质粒的构建过程中快速鉴定阳性重组子的方法。经ＰＣＲ扩增鉴定为阳性的重组子，提取质粒ＤＮＡ经重组位点相应的ＤＮＡ内切酶双酶切鉴定表明，全部含有插入片段。     

人血小板生成素在大肠杆菌中的高效表达

目的：人血小板生成素（ＴＰＯ）在大肠杆菌中的高效表达。方法：利用ＰＣＲ技术,扩增出了（１－１７４个氨基酸的）人血小板生成素ｃＤＮＡ,并将其克隆到ｐＧＥＸ－１λＴ载体中,构建了融合蛋白表达质粒。重组子用限制性内切酶酶切鉴定。表达产物ＳＤＳ－聚丙烯胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）。结果：限制性内切酶酶切鉴定表明重组子含有正确的（１－１７４氨基酸）ＴＰＯｃＤＮＡ片段;表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ相对分子质量     

人表皮细胞生长因子基因真核表达质粒pcDNA3—hEGF的构建

目的：构建人表皮细胞生长因子（ｈＥＧＦ）基因真核表达质粒，为深入研究ｈＥＧＦ在组织修复中的分子调节机制及临床应用提供物质基础。方法：含ｈＥＧＦ ｃＤＮＡ的ｐＵＣ１８－ｈＥＧＦ质粒于大肠杆菌ＪＭ１０９内扩增；提纯及纯化ｐＵＣ１８－ｈＥＧＦ质粒；经ＤＮＡ序列分析其所含ｈＥＧＦ ｃＤＮＡ；限制性酶切ｈＥＧＦ ｃＤＮＡ片段，连接酶连接到真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｎｅｏ内，克隆出真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｈ     

60Co-γ射线照射对大鼠肺一氧化氮合酶和内皮素系统基因表达的影响

探讨一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）和内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ，ＥＴ）及ＥＴ转换酶（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅ，ＥＣＥ）等在受照射肺中的基因表达变化，揭示其在肺纤维化发生中的参与作用。方法用６０Ｃｏ对大鼠肺进行３０Ｇｙ照射，照后４，８，２４天提取总ＲＮＡ，分别做ＲＴ－ＰＣＲ；对照射后１，３，５个月肺组织进行ＥＴ肽的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和ＮＯＳ－ｍＲＮＡ原位杂交。结果照射后肺ＮＯＳｍＲＮＡ转录减弱，ＥＴｍＲＮＡ增强，ＥＣＥｍＲＮＡ在第８和２４天增强，ＥＴＢ－ＲｍＲＮＡ在第２４天转为阴性。照射后１，３，５月肺组织ＥＴ肽合成增加。照射后５个月ＮＯＳｍＲＮＡ原位杂交呈阴性。结论ＥＴ和ＮＯ之间平衡失调可能与肺纤维化发生有关。     

上海“6．25”~（60）Co源辐射事故受照者照后2．5～4．5年外周血淋巴细胞表型分析

上海“６．２５”~（６０）Ｃｏ源辐射事故受照者照后２．５～４．５年外周血淋巴细胞表型分析闵锐，程天民，刘本俶，杨如俊，孟祥顺，丁振海淋巴细胞在不同发育阶段各种抗原不断表达。细胞表面各种抗原的出现既是细胞成熟的阶段性标志，也是成熟细胞特征和功能的标志。?..     

神经元烟碱受体β2亚基基因克隆和原核细胞表达

采用异硫氰酸胍－酚－氯仿抽提法从孵育至１２天的鸡胚视叶顶盖中提取ＲＮＡ。ｃｈｏｅｐｆｅｒ报道的序列设计引物，引物的５端添加ＥｃｏＲＩ和ＸｂａＩ酶切位点。通过逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）得到１．４８ｋｂ长的ＣＤＮＡ片段，用ＥｃｏＲＩ和ＸｂａＩ酶切ＣＤＮＡ后插入质粒ＰＵＣ１９。测序采用Ｓａｎｇｅｒ双氧终止法，结果与文献报道一致。将β基因克隆入ＰＢＶ２２０原核表达载体中，宿主菌经４２℃诱导，经ＳＤ     

利用噬菌体表现呈现技术制备HIV—1整合酶单链抗体的初步研究

研制ＨＩＶ－１整合酶的重组噬菌体单链抗体。方法采用噬菌体表现呈现方法。结果：由ＩＮ蛋白免疫的小鼠脾细胞ｍＲＮＡ中构建了单链抗体基因ｃＤＮＡ文库，克隆入噬菌粒载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ，经转化大肠杆菌ＴＧ１，获得了车容为３．５＊１０＾５的表达文库。     

上海“6.25”60Co源事故受照者照后4～6年细胞遗传学随访观察

用染色体核型分析方法对上海６．２５钴源事故５名受照者照后４～６年进行随访观察，为评价辐射对人远期健康影响提供生物学依据。方法照后第４年用常规染色方法，照后第５年用Ｇ显带法，照后第６年进而用染色体核型自动分析系统，加大分析细胞数，使结果更精确。结果根据照后４～６年的随访观察结果，证实在这些受照者所见到的畸变主要是稳定性畸变，它们的频率与原先所受剂量大小关系密切。结论随访观察表明稳定性畸变可以作为早先受照者的剂量评估用     

小鼠神经生长因子cDNA的克隆及核苷酸序列分析

用Ｔ４－ＤＮＡ连接酶在限制性内切酶ＳｍａＩ存在下，将神经生长因子ｃＤＮＡ片断克隆到具有双向转录启动子的载体质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）中。Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测定其核苷酸顺序表明，所克隆的ＮＧＦｃＤＮＡ片断，长３６３ｂｐ，包含了成熟神经生长因子的全部编码。该重组质粒可分别用于制备ＮＧＦｃＤＮＡ探针和ＲＮＡ探针，是研究ＮＧＦ基因结构及表达调控等方面的重要工具。     

上海“6.25”^60Co源事故受照者照后4—6年细胞遗传学随？…

用染色体核型分析方法对上海６．２５钴源事故５名受照者照后４－６年进行随访观察，为评价辐射对人远期健康影响提供生物学依据。方法 照后第４年用常规染色方法，照后第５年用Ｇ显带法，照后第６年进而用染色体核型自动分析系统，加大分析细胞数，使结果更精确。结果 根据照后４－６年的随访观察结果，证实在这些受照者所见到的畸变主要是稳定性畸变，它们的频率与原先所受剂量大小关系密切。结论 随访观察表明稳定性畸变可以作     

游泳训练对外周血单个核细胞及细胞因子产生的影响

１１名男青年（１８±１，０岁）随机分入潜泳组（ｎｌｌ５）、水面游泳组（ｎ＝６）。经１１周训练后，对总体样本（潜泳组十水面游泳组）、潜泳组样本、水面游泳组样本进行分析。结果显示：总体样本外周血Ｔ细胞、ＣＤ４、ＣＤ８Ｔ细胞及单核细胞百分比显著下降，其中水面游泳组有显著变化；Ｂ细胞百分比、ＣＤ４／ＣＤ有下降趋势；总体样本一２及一６离体产生能力显著增强，其中潜泳组－６产生变化极显著：ＩＬ－４产生训练前后均低。表明游泳训练改变外周血单个核细胞分布及细胞因子产生能力，从而影响机体免疫状态。     

裂变中子照射对小鼠胸腺淋巴细胞亚群的影响 Ⅱ.小鼠经裂变中子照射后胸腺淋巴细胞及亚群的动力学变化

目的：研究小鼠胸腺细胞及其亚群在裂变中子照射后损伤和修复的规律，并与大约相同致死效应的６０Ｃｏγ射线照射后的规律进行比较。方法：测定照后不同时间小鼠胸腺细胞总数和胸腺重量指数，并采用间接免疫荧光法，测定照后不同时间小鼠胸腺淋巴细胞Ｌｙｔ＋２和Ｌ３Ｔ＋４细胞亚群的百分数。结果和结论：裂变中子和６０Ｃｏγ射线照射后小鼠胸腺重量指数均在照后第３天降至最低，而后的恢复速度差不多，但恢复水平前者一直低于后者，３１ｄ时的水平二者无显著差异。两种辐射照射后第３天胸腺细胞数几乎降至为０，随后的恢复中子照射稍逊于γ射线照射，３１ｄ的恢复水平基本一致。小鼠经裂变中子２．３Ｇｙ和６０Ｃｏγ射线４．５Ｇｙ照射后，第１天Ｌｙｔ＋２和Ｌ３Ｔ＋４细胞百分率均下降，水平基本一致。中子照射第３天的Ｌｙｔ＋２和Ｌ３Ｔ＋４细胞百分率降至更低（７０％以下），而γ射线照射的Ｌｙｔ＋２和Ｌ３Ｔ＋４细胞百分率则开始恢复。中子照射后经第７天明显恢复后，又出现第２次下降，３１ｄ仍未恢复至照前水平。γ射线照射后第３１天，Ｌｙｔ＋２细胞已恢复至照前水平，Ｌ３Ｔ＋４细胞则仍低于照前水平。