小鼠心脏移植急性排斥反应模型的建立

目的:建立可用于移植急性排斥反应研究的小鼠心脏移植模型。方法:实验组的供、受体分别来自BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠;对照组的供、受体来自BALB/c小鼠,每组各20对。采用Cuff血管吻合技术,在小鼠颈部进行异位心脏移植。心脏移植术后第7天,每组10只取移植心脏组织,用石蜡包埋、切片、苏木精-伊红染色,进行组织病理学分析。观察每组其余存活受体小鼠的移植心脏存活期。结果:手术成功率达92.5%(37/40)。移植后第7天病理组织检查结果显示:实验组排斥反应等级为3.55±0.44,对照组为0.40±0.32,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。实验组移植心脏存活(8.22±0.67)d,对照组移植心脏存活>100 d,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:采用Cuff血管吻合技术,将BALB/c小鼠心脏移植至C57BL/6小鼠,可以建立稳定的小鼠心脏移植急性排斥反应模型。     

应用Tail-cuff技术改良小鼠颈部异位心脏移植模型

背景:小鼠颈部心脏移植模型是研究移植缺血再灌注损伤和排斥反应的理想模型,由于显微血管吻合的技术问题,限制了小鼠颈部异位心脏移植模型在医学研究中的广泛应用.目的:应用Tail-cuff技术改良小鼠颈部异位心脏移植模型.方法:选用Balb/c→Balb/c小鼠进行同系心脏移植,C57BL/6→Balb/c小鼠进行同种心脏移植.将24G和22G静脉内导管制作成带有尾巴的套管(Tail-cuff),在受体血管准备时,Tail-cuff通过右颈外静脉或右颈总动脉近心端后,用显微血管夹一起固定其近心端和Tail-cuff管的尾巴,翻转血管并固定后分别与供心肺动脉主干和升主动脉连接固定.结果与结论:共36例次正式实验,12例次同系移植,24例次同种移植,移植成功率为100%.应用改良技术后总操作时间和心肌缺血时间分别缩短为(49.6±7.4)min和(28.8±4.2)min,尤其是血管翻转和与供心连接时间明显缩短.结果提示应用Tail-cuff技术建立小鼠颈部异位心脏移植模型显示出一定的优越性,是一种理想的方法.     

小鼠皮肤心脏联合移植模型的建立及移植物功能监测

目的探讨小鼠皮肤心脏联合移植模型的建立及移植物功能的监测。方法以BALB/C小鼠、C57BL/6小鼠做为供、受者,单纯皮肤移植组采用尾-背法行皮肤移植,单纯心脏移植组采用腹腔异位心脏移植法行心脏移植,皮肤心脏联合移植组序贯采用尾-背皮肤移植及腹腔异位心脏移植模型。术后采用腹部触诊的方法,监测心脏移植物功能,通过观察残存移植皮片大小,监测皮肤移植物功能。结果皮肤心脏联合移植组皮肤移植物存活时间较单纯皮肤移植组略有延长(皮肤心脏联合移植物v.s.单纯皮肤移植组,8天v.s.7天),但两组皮肤移植物存活时间比较没有显著差别(P=0.1290)。单纯心脏移植组心脏移植物和皮肤心脏联合移植组心脏移植物平均存活时间均为9天(MST=9天),两组心脏移植物存活时间无显著差别(P=0.6077)。结论小鼠皮肤心脏联合移植模型稳定,移植物功能监测简单方便,适用于移植免疫学方面的研究。     

巨细胞病毒对小鼠心脏移植术后急性排斥反应的影响

目的观察巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）感染对同种异基因小鼠腹腔异位移植心脏急性排斥反应的影响。方法 BALB/c小鼠80只,C57BL/6小鼠40只,按供、受鼠基因不同分为3组（每组20对）：同质移植组（A组,BALB/c→BALB/c）、环胞素A组（B组,C57BL/6→BALB/c）和小鼠巨细胞病毒联合环胞素A组（C组,C57BL/6→BALB/c）,施行小鼠腹腔异位心脏移植术。A组无药物干预,B组术后腹腔注射CsA 20mg/kg.d,C组除腹腔注射CsA 20mg/kg.d外,术后第1d腹腔接种104PFU小鼠巨细胞病毒（MCMV）0.2ml。术后观察移植鼠心脏跳动情况、移植心脏存活时间、移植心脏的病理组织学以及MCMV病毒滴度测定。结果术后10d,A组移植心脏几乎无排斥反应;B组移植心脏搏动有力,显微镜下观察移植心脏心肌间质内有局灶性炎症细胞浸润,心肌有变性;C组移植心脏搏动微弱,体积增大,重量增加,显微镜下见心内、外膜下及心肌间质有弥漫性淋巴细胞及单核细胞浸润;心肌细胞可发生变性、坏死。C组（12.4±1.3d）移植心脏存活时间明显低于B组（16.7±1.9d）（P〈0.01）,而A组移植心脏长期存活（观察60d）。结论巨细胞病毒感染加速小鼠腹腔异位移植心脏急性排斥反应。     

小鼠腹腔异位心脏移植模型的建立及移植心功能监测

目的探讨小鼠腹部异位心脏移植手术的技术改进及移植心功能监测。方法采用供心主动脉与受体腹主动脉、供心肺动脉与受体下腔静脉端侧吻合方法对120只小鼠进行腹部心脏移植术。术后采用腹部触诊的方法 ,监测移植心功能。结果手术成功率91.67%(110/120)。供心修取时间(13.4±1.1)min,受体手术时间(40.2±2.8)min,其中吻合时间(25.6±2.5)min。同系异基因组移植心平均存活时间为7天(MST=7天),而同系同基因组移植心均长期存活(MST100天)。结论改进的小鼠腹部异位心脏移植技术稳定可靠,并可通过腹部触诊的方法评价移植物功能,适用于移植免疫学方面的研究。     

瘦素预处理对小鼠心肌冷缺血-再灌注损伤的保护作用研究

目的 本实验旨在研究同种小鼠腹部心脏移植模型中,瘦素预处理对心肌缺血--再灌注损伤的保护作用及其可能机制.方法雄性C57BL/6小鼠行同种间小鼠腹部心脏移植,供体置于4℃UW液中保存6 h.受体随机分为两组:瘦素预处理(Ieptin)组,12只,小鼠重组瘦素50μg/kg溶人生理盐水(normal saline,NS)200 μL中,于心脏移植前腹腔保留;NS对照组,12只,心脏移植前NS 200μL于腹腔保留.另设假手术组,12只.分别于术后6、24 h收获移植心脏与血清标本(每个时间点每组6个标本),评价移植心脏功能及组织形态学变化,检测小鼠移植心脏及血清瘦素的水平,同时测定中性粒细胞活性、炎性细胞因子水平等,并比较两组移植心脏的3周存活时间(每组n=10).结果与对照组比较,瘦素预处理显著降低移植小鼠血清心肌肌钙蛋白Ⅰ,改善移植心脏功能评分;瘦素预处理显著降低心脏移植小鼠术后供心心肌及血清瘦素水平;降低心肌MPO活性,减少血清细胞炎性因子TNF-αd、IL-1β、IL-6的水平;瘦素预处理组60%的移植心脏在术后3周仍然搏动有力,而对照组所有供心在2周内停止跳动.结论瘦素预处理显著减轻心肌冷缺血-再灌注损伤,改善心肌功能,提高移植心脏存活时间,其保护作用可能与减轻炎症反应有关.     

NKT细胞通过IL-10参与诱导小鼠心脏移植免疫耐受

目的探讨NKT细胞在诱导小鼠心脏移植免疫耐受中的作用机制。方法 BALB/c小鼠作为供体,C57BL/6小鼠作为受体,建立小鼠腹部异位心脏移植模型。排斥组:单纯行心脏移植,无其他处理;耐受组:受鼠于术前7天接受BALB/c来源脾细胞(1×107个/只)尾静脉注射,并分别于术前7天、5天、3天,接受抗CD40L抗体腹腔注射(250μg/只/次)。术后通过腹部移植心触诊,观察移植心存活情况;分别取排斥组术后10天及耐受组术后50天的受鼠脾脏,分离NKT细胞,通过混合淋巴细胞反应(Mixed lymphocyte reaction,MLR)检测NKT细胞的免疫抑制功能;通过ELISA法检测NKT细胞的细胞因子分泌情况。结果 NKT细胞可以抑制供体抗原特异性淋巴细胞增殖,并可通过IL-10参与诱导免疫耐受。结论 NKT在诱导小鼠心脏移植免疫耐受过程中起重要作用。     

异体脐带间充质干细胞对大鼠心脏移植的免疫调节

背景:有资料表明骨髓间充质干细胞可延长小鼠和狒狒异体皮肤移植存活时间,降低造血干细胞移植后急性和慢性移植物抗宿主病的发生,但目前尚未见关于大鼠脐带间充质干细胞用于心脏移植减少排斥反应的报道.目的:观察异体脐带间充质干细胞对大鼠心脏移植的免疫调节作用.方法:DA大鼠20只作为供体,Lewis大鼠20只作为受体,均随机分为2组,即药物干预组、对照组,每组供受体大鼠各10只.采用双套管法将供体大鼠的左肺动脉和无名动脉分别与受体大鼠心脏的颈外静脉和颈总动脉在显微镜下行端端吻合,建立异位心脏移植模型.Wistar孕鼠1只,采用胶原酶消化法分离培养脐带间充质干细胞.造模后,细胞移植组经尾静脉注射脐带间充质干细胞,对照组同法注射氯化钠注射液.检测移植心脏的存活时间,采用心脏移植急性排斥反应诊断标准对移植心脏进行组织病理学评分,苏木精-伊红染色观察移植心脏淋巴细胞浸润程度.结果与结论:与对照组比较,细胞移植组移植心脏存活时间显著延长(P=0.001),急性排斥反应病理学评分显著降低(P=0.000 4).对照组心肌组织内有大量淋巴细胞和单核细胞浸润,细胞移植组心肌组织内有少量淋巴细胞浸润,心肌间质轻度水肿.结果证实大鼠脐带间充质干细胞可诱导心脏移植免疫耐受,减轻免疫排斥反应,延长心脏存活时间.     

供者淋巴细胞光化学疗法处理后预输注对小鼠心脏移植预后的影响

[目的]探讨经体外光化学疗法(extracorporeal photopheresis,ECP)处理后的供者淋巴细胞预输注对小鼠心脏移植后移植物存活的影响.[方法]采用小鼠腹部异位心脏移植模型,供者为BALB/C小鼠,受者为C57BL/6小鼠.实验分为两组:对照组直接行心脏移植手术,ECP组于术前7d分离供者脾脏淋巴细胞,给予ECP处理后回输给受者,移植后观察移植物存活情况;部分受者于术后7d获取脾脏用于流式细胞术检测,移植心脏者行HE染色观察其组织学特点,并用免疫组化法检测组织T淋巴细胞浸润.[结果]ECP组移植心脏存活时间延长(20±4.67dvs7.5±0.70 d,P＜0.001),伴有移植物排斥反应减轻,淋巴细胞浸润减少,以及外周效应性T细胞生成减少,CD4+ CD25+ Foxp-3+调节性T细胞增加.[结论]供者淋巴细胞ECP处理后预输注能延长小鼠移植心脏存活时间,其机制可能在于ECP诱导的凋亡淋巴细胞预输注减少了效应性T细胞的数量,并且增加了调节性T细胞的产生.     

移植大鼠心脏局部CD134表达与急性排斥反应的相关性研究

目的探讨大鼠浸润淋巴细胞CD134表达与移植心脏生存时间的关系。方法建立大鼠异位心脏移植模型，术中静脉应用CD45单克隆抗体（CD45mAb）及供体脾细胞。术后切取移植心脏，检测局部浸润细胞CD134表达情况。结果在正常大鼠心脏，CD134阳性细胞很少；在CD45mAb及联合应用供体脾细胞组，CD134阳性细胞较单用脾细胞组和不用药组均明显减少。结论排斥反应与浸润淋巴细胞的CD134表达呈正相关。