心外膜窦房结电图指导窦房结细胞取材的价值

目的探索经心外膜窦房结电图指导窦房结细胞取材的准确性。方法长白山乳猪12只,行心外膜窦房结电图标测,A波前出现圆顶形或上斜形波形为窦房结电图,又称为"P前波",于"P前波"处取材行窦房结细胞培养及超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN4)免疫荧光定量测定。结果窦房结电图指导下窦房结细胞取材,培养的细胞有3种形态,即梭形、三角形与不规则形。培养梭形细胞较多,搏动频率较快;同时免疫荧光证实HCN4通道蛋白密度较高。结论窦房结电图提高窦房结细胞的取材的准确性。     

差速贴壁技术与常规培养方法对窦房结细胞培养中提高梭形细胞纯化率的影响

目的：比较差速贴壁技术与常规培养方法对窦房结梭形细胞比例，旨在建立一套可靠的窦房结梭形细胞取材分离、纯化培养技术。方法：实验于2004—05在解放军第四军医大学心血管外科实验室完成。选用出生24h内的新西兰乳兔15只。对新西兰乳兔的窦房结组织进行原代细胞培养，将培养容器置于37℃、体积分数0.05CO2孵箱中培养(常规方法)。将培养容器置于37℃、体积分数0.05CO2孵箱中培养90min后，采用单细胞悬液中夹杂一部分心房肌细胞和成纤维细胞，成纤维细胞与心肌细胞相比，其贴壁过程快，大部分成纤维细胞能在短时间内(约30～60min)完成贴壁过程；而心肌细胞在短时间内不附着或附着不稳定，轻微震荡就可以浮起，利用这一点得到纯化心肌细胞的差速贴壁分离技术，并采用5-溴脱氧尿核苷抑制除心肌细胞外其他生长比较快的细胞(如成纤维细胞的生长)，从而造成更有利于心肌细胞生长的环境。比较两种方法处理后各形态窦房结细胞的比例。结果：①在窦房结的培养中，起搏细胞、过渡细胞、和心房肌细胞都存在，起搏细胞的比例是评价培养方法的重要指标。差速贴壁技术结合5-溴脱氧尿核苷处理的纯化培养中窦房结梭形细胞比例明显高于常规方法【(65&;#177;4)％，(45&;#177;3)％，P&;lt;001】。②差速贴壁结合5-溴脱氧尿核苷处理的纯化培养的窦房结细胞梭形细胞电生理特征符合窦房结起搏细胞的特点，即动作电位有舒张期自动去极化。记录的10个梭形细胞的动作电位中平均最大舒张电位为(-50．9&;#177;4．8)mV，动作电位幅度为(62．9&;#177;5．0)mV。结论：①梭形细胞动作电位的特性与分离的窦房结单细胞的记录结果相似，证实了梭形细胞就是窦房结起搏细胞。②常规原代培养过程中，成纤维细胞生长速度快，而心肌细胞生长偏慢，成纤维细胞的数量很快会超过心肌细胞，使培养细胞中混杂有大量的成纤维细胞，从而影响心肌细胞培养模型的可靠性。③5-溴脱氧尿核苷可显著抑制培养心肌细胞中的成纤维细胞生长，且对心肌细胞无毒性与抑制作用，可使培养细胞中心肌细胞所占比例提高明显。因此用差速贴壁结合5-溴脱氧尿核苷处理的纯化培养较常规培养可更明显提高窦房结梭形细胞的比例，是一种可靠的窦房结细胞培养技术。     

差速贴壁技术与常规培养方法对窦房结细胞培养中提高梭形细胞纯化率的影响

目的:比较差速贴壁技术与常规培养方法对窦房结梭形细胞比例,旨在建立一套可靠的窦房结梭形细胞取材分离、纯化培养技术。方法:实验于2004-05在解放军第四军医大学心血管外科实验室完成。选用出生24h内的新西兰乳兔15只。对新西兰乳兔的窦房结组织进行原代细胞培养,将培养容器置于37℃、体积分数0.05CO2孵箱中培养(常规方法)。将培养容器置于37℃、体积分数0.05CO2孵箱中培养90min后,采用单细胞悬液中夹杂一部分心房肌细胞和成纤维细胞,成纤维细胞与心肌细胞相比,其贴壁过程快,大部分成纤维细胞能在短时间内(约30～60min)完成贴壁过程;而心肌细胞在短时间内不附着或附着不稳定,轻微震荡就可以浮起,利用这一点得到纯化心肌细胞的差速贴壁分离技术,并采用5-溴脱氧尿核苷抑制除心肌细胞外其他生长比较快的细胞(如成纤维细胞的生长),从而造成更有利于心肌细胞生长的环境。比较两种方法处理后各形态窦房结细胞的比例。结果:①在窦房结的培养中,起搏细胞、过渡细胞、和心房肌细胞都存在,起搏细胞的比例是评价培养方法的重要指标。差速贴壁技术结合5-溴脱氧尿核苷处理的纯化培养中窦房结梭形细胞比例明显高于常规方法犤(65±4)%,(45±3)%,P<001犦。②差速贴壁结合5-溴脱氧尿核苷处理的纯化培养的窦房结细胞梭形细胞电生理特征符合窦房结起搏细胞的特点,即动作电位有舒张期自动去极化。记录的10个梭形细胞的动作电位中平均最大舒张电位为(-50.9±4.8)mV,动作电位幅度为(62.9±5.0)mV。结论:①梭形细胞动作电位的特性与分离的窦房结单细胞的记录结果相似,证实了梭形细胞就是窦房结起搏细胞。②常规原代培养过程中,成纤维细胞生长速度快,而心肌细胞生长偏慢,成纤维细胞的数量很快会超过心肌细胞,使培养细胞中混杂有大量的成纤维细胞,从而影响心肌细胞培养模型的可靠性。③5-溴脱氧尿核苷可显著抑制培养心肌细胞中的成纤维细胞生长,且对心肌细胞无毒性与抑制作用,可使培养细胞中心肌细胞所占比例提高明显。因此用差速贴壁结合5-溴脱氧尿核苷处理的纯化培养较常规培养可更明显提高窦房结梭形细胞的比例,是一种可靠的窦房结细胞培养技术。     

超声引导兔上腔静脉肿瘤性梗阻模型的建立及影像学观察

目的探讨超声引导下经皮穿刺注射VX2组织悬液建立肿瘤性上腔静脉梗阻（SVCO）模型的可行性。方法在无菌操作下制备VX2瘤组织悬液,实验动物为新西兰种兔15只。在超声引导下将瘤株组织悬液约0.1ml经皮注射到上腔静脉（SVC）前方,于注射后9d开始每隔2d用二维及多普勒超声观察SVC周围、管腔形态及血流动力学变化,待其自然死亡,并立即解剖尸体,采集病变处标本。结果15只实验动物中14只于SVC旁和（或）腔内见肿瘤组织生长,其肿瘤直径4.6～80.7mm不等,肿瘤种植成功率为93.33%;肿瘤均生长于SVC前侧壁并压迫、浸润管壁,有肿瘤生长动物均形成SVCO。无一例动物因感染、排异反应等在实验中途死亡。结论经皮超声引导下穿刺注射肿瘤组织悬液建立SVCO动物模型简便易行,成功率高。     

兔骨髓基质细胞在纤维蛋白胶中的立体培养

目的:应用纤维蛋白胶作为细胞支架进行兔骨髓基质细胞立体培养,探讨其作为新型骨组织工程支架材料的可行性。方法:实验于2001-09/2002-03在吉林大学中日联谊医院卫生部创伤骨科研究室、吉林大学再生医学研究所完成。采用兔骨髓基质细胞作为种子细胞在CO2孵箱中进行传代培养后,收集扩增的骨髓基质细胞与新型支架材料纤维蛋白胶复合后再进行培养4周,采用相差显微镜、电子显微镜、苏木精-伊红染色等手段观察骨髓基质细胞在纤维蛋白胶中的生长状况。结果:用相差显微镜、电子显微镜、苏木精-伊红染色均可观察到骨髓基质细胞在不同强度的纤维蛋白胶中的生长状态不同,在低强度纤维蛋白胶中活性好,扩增迅速,而在高强度纤维蛋白胶中细胞生长缓慢,数量少或逐渐死亡。结论:骨髓基质细胞在低强度纤维蛋白胶中能够良好扩增生长。纤维蛋白胶具有孔隙适宜、可塑性强,可降解等优点,是优良的细胞生长支架载体。     

健康新西兰兔上腔静脉的二维超声及多普勒血流频谱分析

目的 利用二维、彩色及频谱多普勒超声对健康新西兰兔上腔静脉(SVC)内径及血流频谱进行分析,探讨其正常值范围。 方法 健康成年新西兰兔84只,经双侧锁骨上窝切面显示SVC长轴,同步连接呼吸曲线及心电图,获取SVC管腔内径及血流频谱,分析双侧SVC内径及多普勒血流频谱。 结果 经锁骨上窝SVC长轴切面获取其二维、彩色及多普勒图像成功率为100%。二维超声测量吸气末右侧SVC内径[(0.29±0.06)cm]大于左侧SVC内径[(0.20±0.04)cm,P＜0.01]。频谱多普勒显示S波、D波的血流速度峰值吸气相较呼气相增高(P＜0.01);VR波、AR波的血流速度峰值吸气相与呼气相相比差异无统计学意义(P均＞0.05)。 结论 经锁骨上窝长轴切面能获得较满意的SVC二维、彩色及频谱多普勒图像;兔双侧SVC的内径存在差异;兔SVC的血流频谱随呼吸周期呈规律性变化。     

乳鼠预损伤周围神经雪旺细胞的培养及增殖能力研究

目的：从乳鼠预损伤的坐骨神经中分离培养雪旺细胞。方法：预损伤SD乳鼠坐骨神经，3d后取损伤的坐骨神经，手术显微镜下分离神经外膜，用胰酶、胶原酶消化，差速贴壁除去成纤维细胞，接种培养后对细胞进行计数、MTT活性检测，并用S-100蛋白标记观察。结果：该方法所培养的雪旺细胞形态正常，数量及纯度高，增殖旺盛。结论：此实验为神经组织工程研究中雪旺细胞的来源提供了一个有效的方法。     

新生兔雪旺细胞体外培养及纯化的实验研究

目的优化雪旺细胞(SCs)的体外培养条件,在去除成纤维细胞(FCs)沾染后,应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促进SCs的增殖以获取大量、纯净SCs应用于神经组织工程。方法采用高浓度胶原酶分次消化分离SCs,使用阿糖胞苷、Geneticin去除FCs,待基本为纯净的SCs后,再用bFGF促进其分裂增殖。结果经S-100染色鉴定,SCs纯度可达到98%以上。结论文章所用的方法是培养和促进SCs增殖较为理想的方法。     

新西兰兔关节软骨细胞分离培养与鉴定的实验研究

目的 探讨新西兰兔关节软骨细胞体外分离、培养及鉴定的实验方法.方法 单纯采用Ⅱ型胶原酶消化新西兰兔关节软骨组织以分离软骨细胞,经体外培养后,以形态学观察、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原蛋白细胞化学染色对软骨细胞进行鉴定.结果 倒置相差显微镜显示3代以内软骨细胞呈多角形或三角形,核为圆形或椭圆形;甲苯胺蓝染色可见细胞呈紫蓝色,细胞基质呈蓝色;Ⅱ型胶原蛋白细胞化学染色可见胞浆及胞膜出现棕黄色颗粒,细胞基质内也有少量棕黄色颗粒.结论 成功建立了新西兰兔关节软骨细胞分离及培养体系,3代以内软骨细胞生长良好,保持稳定的生物学特征,传代4次后出现"去分化"现象.     

SD大鼠许旺细胞提取及纯化:乳鼠和成年鼠的对照(英文)

背景:许旺细胞是神经创伤修复的种子细胞,获取大量高纯度、高活性许旺细胞是研究的关键.目的:比较乳鼠和成年鼠许旺细胞的体外培养、纯化和形态学的差别,探讨简单可行的、可以获得高纯度许旺细胞的培养方法.方法:出生1～3 d SD大鼠20只和成年大鼠10只(体质量150～200 g),实验按细胞的来源分为新生组和成年组.双酶分步消化,二次接种差速分离纯化细胞;倒置显微镜观察细胞形态、贴壁速度;细胞计数,纯度计算;MTT法检测细胞增殖能力,绘制两组许旺细胞的增殖曲线,判定增殖速度;S-100免疫化学法鉴定细胞.结果与结论:乳鼠的许旺细胞贴壁速度快于成纤维细胞,成鼠的许旺细胞贴壁速度慢于成纤维细胞,两组许旺细胞纯度均达96%以上;MTT法检测两组许旺细胞增殖均活跃,由增殖曲线显示乳鼠许旺细胞增殖更快(P < 0.05);S-100免疫化学反应均呈阳性.提示双酶分步消化,二次接种差速分离纯化细胞,可以获取纯度高、活性良好的许旺细胞;乳鼠许旺细胞的增殖、贴壁能力更强.     

Electrophysiological actions of dantrolene sodium in isolated sinoatrial and atrioventricular nodes and in a model of ischemia

Recent experiments have suggested that the electrophysiological actions of dantrolene sodium in cardiac tissues may be mediated in part by slow inward current blockade. The authors report here the effects of this agent in tissues the electrical activity of which depends mainly on the slow inward current. In isolated rabbit sinoatrial node tissue, dantrolene (35.1 microM) significantly diminished maximal diastolic potential, action potential amplitude and upstroke velocity, and it prolonged action potential duration and spontaneous cycle length. Most effects were reversible upon washout. In isolated rabbit atrioventricular nodal tissue, dantrolene diminished action potential amplitude, delayed activation time, prolonged refractoriness and led to frequency-dependent block, also in a reversible manner. Through these actions, dantrolene showed an antiarrhythmic effect by preventing atrioventricular nodal reentry in the form of atrial "echoes." These results support the hypothesis that dantrolene inhibits slow inward current and suggest that, at adequate doses, it might effectively suppress supraventricular arrhythmias in patients. In a third group of experiments, addition of dantrolene (35.1 microM) to the central segment of a canine Purkinje fiber in an "ischemic gap" preparation led to conduction impairment. Consequently, reflections were obtained at relatively slow frequencies, whereas, at faster frequencies, the incidence of reflection was reduced. These effects were similar to those previously reported for other agents such as lidocaine and verapamil. The authors conclude that dantrolene behaves as a calcium channel blocking agent and has potential value as an antiarrhythmic drug.     

新生兔破骨细胞的体外分离培养与功能鉴定

目的:选择新生兔为实验对象,观察体外培养破骨细胞形态学和生物学特征。方法:实验于2007-03/06在辽宁医学院生理实验室完成。采用改良Chambers法机械分离兔四肢长骨获得新生兔(出生24h内)的破骨细胞,并应用倒置显微镜、光镜观察其形态学特征。结果:①倒置显微镜观察结果:培养1d后,细胞贴壁生长,数量增多,第3天后,可见多核巨细胞,呈油煎蛋、长条形,漏斗形等。②光镜观察结果:苏木精-伊红染色可见破骨细胞胞浆丰满,呈浅粉色,内含许多空泡结构,核3～20个不等,核呈浅蓝色,每个核含一两个核仁,有时周围伸出伪足样胞浆突起;Giemsa染色核集中于细胞中央或散在于细胞周边,呈花篮状,核浅粉色,胞浆着色较浅,其中可见数个大小不等未着色空泡;TRAP染色胞浆呈酒红色颗粒,核蓝色,核仁一两个;甲苯胺蓝染色可见骨吸收陷窝呈蓝紫色,圆形,椭圆形或不规则形,边界清晰,其边缘反光性强。结论:应用改良Chambers法可成功获得新生兔破骨细胞,且具有骨吸收功能。     

大鼠肌源性干细胞的分离、纯化和培养

背景:要获得满足临床需要的肌源性干细胞,体外筛选和扩增已成为关键环节.目的:拟建立稳定高效的成年大鼠肌源性干细胞的分离培养、纯化方法.方法:成年SD大鼠麻醉后,无菌条件下取骨骼肌,采用Ⅺ型胶原酶、Dispase和胰酶消化法获得肌源性干细胞,以密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化.记录细胞生长曲线,MTT比色法观察不同接种密度对细胞生长的影响,采用免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定.结果与结论:原代肌源性干细胞体积较小,贴壁缓慢,折光性较好,多呈球形、梭形或纺锤形,增殖缓慢.传代培养后,加入含体积分数为20%血清浓度的完全培养基,以1×109L-1密度接种时活细胞数量最多,为适宜接种密度,传1～4代细胞生长状态良好.免疫细胞化学染色结果为desmin(+),CD34(+),CD45(-),Sea-1(+),证实通过体外原代培养获得了高纯度的肌源性干细胞,并成功扩增.     

腹股沟淋巴结中分离出一株衣氏放线菌

患者男,59岁.2009年10月因"右腹股沟出现肿物伴疼痛,活动受限"于2010年3月8日于北京市某医院就诊.彩色超声检查提示:右腹股沟多发肿大淋巴结,较大者2.2 cm ×0.75 cm,边界清晰.3月8日至4月19日,先后给予乳酸红霉素、克林霉素和头孢曲松钠治疗,剂量不详,未见好转.4月19日于另一医院再行超声检查,提示双侧腹股沟多发淋巴结肿大,以右侧为著,2.4 cm ×0.8 cm.5月于北京市某中医院进行中药治疗(小金丸和血府逐瘀胶囊),效果不明显.     

血液净化专科护士培养模式与培养方法探讨

[目的]探讨血液净化专科护士培养方法及培养模式.[方法]回顾性总结2008年-2009年血液净化专科护士培训基地培训资料,26名学员均采用半脱产的模式,以理论培训、临床实践和反馈训练相结合的方法进行培养.[结果]理论考核和实践考核通过率100%,答辩考核通过率为92%.学员的直接临床实践能力、指导和教育的能力、提供咨询的能力、进行专科护理研究的能力、领导与创新的能力以及合作的能力得到提高.[结论]在专科护士培训基地采用半脱产的模式,理论培训、临床实践和反馈训练相结合的方法,能使学员得到系统规范的培训,达到血液净化专科护士的要求.     

人胚胎神经干细胞分离、培养、纯化及增殖潜能的特点

目的：探讨获取和培养人胚胎神经干细胞的方法。方法：实验于2003-09／2004—12在重庆医科大学基础研究所完成。人胚胎来源为7-12周人工药物流产胎儿，由重庆医科大学附属第二医院及重庆市妇幼保健院提供，征得产妇本人同意。①从人胚胎大脑皮质中分离、培养、纯化原代神经干细胞，经体外反复传代培养以获得能在体外长期生存的神经干细胞。②免疫细胞化学鉴定神经干细胞特异性表达抗原。⑧观察不同种植细胞密度对神经干细胞增殖的影响，分析其生长特点并绘制生长曲线。④采用悬浮细胞培养法扩增细胞，冷冻复苏后观察细胞的生物学特性。结果：①人胚胎神经干细胞体外生长特点：从7～12周流产胎儿大脑皮质中获得了能在体外长期生存的神经干细胞。经体外传至15代，神经干细胞细胞数量扩增至200倍。②神经干细胞接种密度对增生的影响：当种植细胞的密度为1&;#215;10^5L^-1,1&;#215;10^7L^-1时，体外培养30d后仍呈单细胞贴壁状态。以1&;#215;10^9L^-1细胞密度接种时，12h后即见多个单细胞聚成的小球，悬浮生长。③神经干细胞自我更新能力的检测结果：多数单个细胞在培养后24～48h分裂为2-4个细胞的小克隆，7～10d均发展为上百个细胞的较大的克隆。④nestin抗原的表达：培养的神经干细胞神经球nestin免疫细胞染色均呈阳性。⑤神经干细胞多向分化能力检测：NSE和GFAP免疫细胞化学染色显示，被测细胞胞浆有棕黄色颗粒沉着，呈阳性表达。⑥神经干细胞复苏后的存活率：冻存1，4，8，12周的神经干细胞存活率基本相似[（80．2&;#177;1．8）％，（80．1&;#177;1．2）％，（79．9&;#177;0．8）％，（80．1&;#177;2．1）％，P〉0．05]。结论：成功地从人胚胎大脑皮质中分离得到了神经干细胞。经体外培养证明：人胚胎神经干细胞具有自我更新增殖能力和向神经元样细胞、星形胶质样细胞分化的潜能。     

人胚胎神经干细胞分离、培养、纯化及增殖潜能的特点

目的:探讨获取和培养人胚胎神经干细胞的方法。方法:实验于2003-09/2004-12在重庆医科大学基础研究所完成。人胚胎来源为7～12周人工药物流产胎儿,由重庆医科大学附属第二医院及重庆市妇幼保健院提供,征得产妇本人同意。①从人胚胎大脑皮质中分离、培养、纯化原代神经干细胞,经体外反复传代培养以获得能在体外长期生存的神经干细胞。②免疫细胞化学鉴定神经干细胞特异性表达抗原。③观察不同种植细胞密度对神经干细胞增殖的影响,分析其生长特点并绘制生长曲线。④采用悬浮细胞培养法扩增细胞,冷冻复苏后观察细胞的生物学特性。结果:①人胚胎神经干细胞体外生长特点:从7～12周流产胎儿大脑皮质中获得了能在体外长期生存的神经干细胞。经体外传至15代,神经干细胞细胞数量扩增至200倍。②神经干细胞接种密度对增生的影响:当种植细胞的密度为1×105L-1,1×107L-1时,体外培养30d后仍呈单细胞贴壁状态。以1×109L-1细胞密度接种时,12h后即见多个单细胞聚成的小球,悬浮生长。③神经干细胞自我更新能力的检测结果:多数单个细胞在培养后24～48h分裂为2～4个细胞的小克隆,7～10d均发展为上百个细胞的较大的克隆。④nestin抗原的表达:培养的神经干细胞神经球nestin免疫细胞染色均呈阳性。⑤神经干细胞多向分化能力检测:NSE和GFAP免疫细胞化学染色显示,被测细胞胞浆有棕黄色颗粒沉着,呈阳性表达。⑥神经干细胞复苏后的存活率:冻存1,4,8,12周的神经干细胞存活率基本相似[(80.2±1.8)%,(80.1±1.2)%,(79.9±0.8)%,(80.1±2.1)%,P>0.05]。结论:成功地从人胚胎大脑皮质中分离得到了神经干细胞。经体外培养证明:人胚胎神经干细胞具有自我更新增殖能力和向神经元样细胞、星形胶质样细胞分化的潜能。     

幽门螺杆菌临床分离株尿素酶基因B的原核表达、纯化及免疫活性

目的:在大肠杆菌中表达幽门螺杆菌临床分离株尿素酶B(UreB),纯化重组蛋白并分析其免疫活性.方法:将pGEX-4T-1-UreB重组菌BL21复舒,挑单菌落接种于含氨苄的LB培养基中.0.5 mmoL异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白的表达,使用纯化的重组蛋白免疫小鼠.ELISA检测血清抗体效价,并使用感染患者血清进行Western-blotting鉴定重组蛋白反应原性.结果:SDS-PAGE示在约87 kD相应分子量可见融合蛋白表达,产物主要在表达上清以可溶形式存在,纯化蛋白免疫小鼠能诱导产生特异性体液免疫应答,ELISA检测特异性IgG效价为1:51 200.Western blotting示重组蛋白能被幽门螺杆菌感染患者血清识别.结论:UreB在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物具有较好的免疫原性及反应原性.     

Renal effects of tolazoline in newborn and adult rabbits

The effect of tolazoline on renal function was studied in normoxemic newborn and adult anesthetized rabbits. Adult animals responded to 1 mg/kg + 1 mg/kg/h of tolazoline with a marked increase in systemic blood pressure and renal vascular resistance along with a decrease in urine flow rate, glomerular filtration rate and renal blood flow. Blood pressure also increased in newborn rabbits given a similar dose of tolazoline, but the same renal parameters remained remarkably stable. The renal effect of tolazoline in adult animals probably corresponds to a partial alpha-agonist action of tolazoline. It is suggested that a relative adrenergic renal immaturity present in the newborn rabbit protects him from the deleterious effect of tolazoline.