牛肠碱性磷酸酶对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用途径

背景：肝移植以及广泛的肝叶切除等手术常见的病理过程为肝脏缺血再灌注损伤。研究表明，外源性碱性磷酸酶能通过对内毒素的脱磷酸作用而减轻其毒性作用。 目的：建立大鼠肝缺血再灌注损伤模型，观察牛肠碱性磷酸酶预处理对肝缺血再灌注损伤的保护作用。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007～04／11在南方医院消化科实验室完成。 材料：选用SD大鼠72只，用于建立大鼠肝缺血再灌注模型。方法：将72只肝缺血再灌注模型大鼠按随机数字表法分为3组（n=24）：①假手术组打开腹腔，不阻断肝脏供血。②生理盐水组阻断入肝血流20min，在再灌注前5min从尾静脉注射生理盐水1mL。③牛肠碱性磷酸酶预处理组阻断入肝血流20min，再灌注前5min从尾静脉注射牛肠碱性磷酸酶0、5U／g。 主要观察指标：3组大鼠分别于缺血再灌注后1，3，6，12h各时点分别取6只，分别采用鲎试剂终点显色法检测血清内毒素水平：采用酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素10水平；检测肝组织髓过氧化物酶活性；应用苏木精-伊红染色法观察肝组织病理改变。 结果：①生理盐水组及牛肠碱性磷酸酶预处理组血清内毒素、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平及肝组织髓过氧化物酶活性在再灌注后均高于假手术组（P〈0、05）。②肝脏缺血再灌注损伤后不同时点牛肠碱性磷酸酶预处理组血清内毒素、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平及髓过氧化物酶活性均低于生理盐水组（P〈0、05），白细胞介素10水平高于生理盐水组（P〈0、05），肝组织病理改变也轻于生理盐水组。 结论：牛肠碱性磷酸酶能减少血清内毒素含量，抑制促炎细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6的释放并促进抗炎细胞因子白细胞介素10的释放，减少中性粒细胞在肝组织的浸润活化，从而减轻肝脏缺血再灌注损伤。     

MAPK信号转导通路中ERK、JNK和P38在大鼠肝脏缺血再灌注和缺血后处理中表达的变化

背景:近年来,随着器官移植的不断开展和深入研究,人们逐渐认识到供肝原发性无功能足引起肝移植患者早期死亡的主要原因,而缺血再灌注损伤是导致供肝功能不良的重要因素.如何减轻或消除缺血再灌注损伤一直是临床研究的热点.目的:观察肝缺血再灌注损伤和缺血后处理后MAPK级联通路中P38,JNK和ERK活化的情况.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-05/10在中南大学湘雅医院动物实验中心完成.材料:102只Wistar大鼠随机分为假手术组6只,缺血30 min再灌注组48只和缺血后处理组48只,后2组又分为0,0.5,1,2,4,8,12,24 h不同时间处理亚组,每亚组6只.方法:建立大鼠刖:脏体内局部缺血再灌注一缺血后处理模型,于复灌后0,0.5,1,2,4,8,12,24 h取肝脏组织.主要观察指标:应用免疫组织化学的方法对磷酸化的P-P38、P-JNK和p-ERK进行免疫组化检测并作半定量分析.结果:①P-ERK,p-JNK在缺血后即有轻度增高,但在再灌注后30 min开始增高明显,持续到冉灌注后4 h,高峰出现在再灌注后2 h.缺血后处理组p-ERK,p-JNK的表达在再灌注后1,2,4 h较缺血再灌注组增高(P<0.05).②p-P38在缺血后即有轻度地增高,但在再灌注后30 min开始增高明显,高峰出现在再灌注后1 h,2 h后开始下降,表达程度维持在缺血后水平.与缺血再灌注组相比,缺血后处理组p-P38的表达增高,但仪在再灌注后1 h明显增高(P<0.05).结论:缺血后处理可通过增高ERK和P38的磷酸化水平,降低JNK的磷酸化水平减轻缺血再灌注导致的肝脏损伤.     

缺血预处理联合缺血后处理对肺移植中缺血再灌注肺损伤的影响

背景:研究显示缺血预处理和缺血后处理在缺血再灌注肺损伤中均具有明显的保护作用。目的:观察缺血预处理联合缺血后处理对肺移植中缺血再灌注损伤的累积保护效应。方法:将40只SD大鼠随机等分为假手术组、模型组、缺血预处理组、缺血后处理组和联合处理组。后4组建立缺血再灌注肺损伤动物模型,缺血预处理组、缺血后处理组和联合处理组在造模前或/和造模后反复3次阻断开放左侧肺门。结果与结论:与缺血预处理组和缺血后处理组相比,联合处理组大鼠肺组织的干质量比、丙二醛和髓过氧化物酶降低(P<0.05),而肺组织中超氧化物歧化酶活性升高(P<0.05),肺组织病理损伤程度明显减轻;缺血预处理组与缺血后处理组大鼠肺组织超氧化物歧化酶活性、丙二醛水平及髓过氧化物酶活性接近(P>0.05),且肺组织病理损伤程度基本相似。而且缺血预处理与联合处理组中超氧化物歧化酶、丙二醛和髓过氧化物酶水平呈正相关。提示缺血预处理和缺血后处理联合应用对于减轻中性粒细胞的侵润和激活及氧化反应对于肺组织的损伤有明显的累积保护效应,从而可以更好的减轻肺缺血再灌注损伤程度。     

牛磺酸对大鼠睾丸缺血再灌注损伤的影响

目的：睾丸扭转复位后的损伤是一种缺血再灌注损伤。本研究旨在探讨牛磺酸对睾丸缺血再灌注损伤的影响。方法60只成年雄性SD大鼠随机分为三组，对照组作左侧睾丸假手术；缺血再灌注组作左侧睾丸扭转，2h后复位；治疗组与缺血再灌注组用一样的外科手术，治疗组术后给予牛磺酸静脉注射，复位后4h或3个月行睾丸切除术，分析睾丸髓过氧化物酶活性（反映中性粒细胞数目的指标）、丙二醛水平（活性氧标志）和睾丸生精功能。结果单侧睾丸扭转复位引起该侧睾丸髓过氧化物酶活性、丙二醛水平明显升高，睾丸生精功能显著降低，牛磺酸治疗后睾丸髓过氧化物酶活性和丙二醛水平得到降低，睾丸生精功能得到显著提高。结论牛磺酸对睾丸缺血再灌注损伤具有明显的保护效应，该效应可能与减少睾丸内中性粒细胞数目和活性氧产生有关。     

p38MAPK和JNK在大鼠肾缺血-再灌注损伤模型中的表达及意义

目的 观察p38MAPK、JNK在肾缺血-再灌注损伤大鼠肾组织中的表达和活化,从而探讨p38MAPK、JNK信号转导通路与肾缺血-再灌注损伤的关系.方法 用缺血1 h再灌注1 h 制备缺血-再灌注模型,20只健康雄性SD大鼠[体质量(200±20)g]随机分为假手术组(n=10)、缺血-再灌注损伤组(n=10).检测肾组织丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活性及血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)浓度.观察肾组织光镜、电镜下的形态学变化,用RT-PCR技术检测两组肾组织p38MAPK、JNK mRNA的表达情况,Western印迹法观察p38MAPK、JNK的活化情况.结果 缺血-再灌注损伤后,大鼠肾功能和肾小管上皮细胞明显受损,BUN、Cr、MDA浓度均高于假手术组(P<0.01),SOD活性低于假手术组(P<0.01),p38MAPK、JNK磷酸化蛋白在假手术组呈少量散在表达或不表达,缺血-再灌注损伤后磷酸化p38MAPK、JNK呈阳性表达(P<0.01).p38MAPK、JNK mRNA在缺血-再灌注损伤组的表达较假手术组显著增高(P<0.01).结论 肾缺血-再灌注可增加p38MAPK、JNK的磷酸化水平及p38MAPK、JNK mRNA的转录水平,p38MAPK、JNK可能在肾缺血-再灌注损伤中起到至关重要的作用.     

肾上腺髓质素基因注入大鼠骨骼肌对肢体缺血再灌注肝脏的影响

背景:以往研究直接采用肾上腺髓质素药物来研究多种器官缺血再灌注损伤后肾上腺髓质素的保护作用,但转肾上腺髓质素基因对肢体缺血再灌注后引起的肝脏损伤是否有保护作用却少见报道.目的:探讨大鼠肾上腺髓质素真核表达载体对大鼠肢体缺血再灌注后肝脏的作用.方法:成年雄性SD大鼠32只,随机分成4组,假手术组、缺血再灌注模型组、转肾上腺髓质素基因组和空载体组,每组8只,除假手术组其余各组大鼠制成缺血再灌注模型.转肾上腺髓质素基因组和空载体组采用直接注射法于腓肠肌分别注射肾上腺髓质素真核表达载体和肾上腺髓质素(700 μg/kg)盐水溶液1 mL;假手术组和缺血再灌注模型组注射生理盐水1 mL心脏采血测定血浆谷丙转氨酶、谷草转氨酶和乳酸脱氢酶的活性,测定肝组织总超氧化物歧化酶、丙二醛的含量;免疫组化检测术侧腓肠肌中肾上腺髓质素的表达情况;显微镜观察肝组织的形态学变化.结果与结论:与假手术组比较:缺血再灌注模型组血浆谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶水平及肝组织丙二醛含量均明显升高(P＜0.01),肝组织超氧化物歧化酶活性明显降低(P＜0.01),显微镜下可见肝细胞水肿、结构紊乱等组织损伤明显;与缺血再灌注模型组比较:转肾上腺髓质素基因组血浆谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶及肝组织丙二醛含量明显降低(P＜0.01),肝组织超氧化物歧化酶活性明显升高(P＜0.01),显微镜下可见肝细胞水肿等组织损伤有所改善.免疫组化结果显示转肾上腺髓质素基因组腓肠肌中肾上腺髓质素表达上调.结果表明,转肾上腺髓质素基因对大鼠肢体缺血再灌注后肝脏具有保护作用,其机制可能与提高抗氧化能力、降低肝酶渗出相关.     

NF-κB参与低氧预适应对自体原位肝移植大鼠JNK通路的影响

背景:在肝脏缺血再灌注损伤中,NF-κB与JNK通路的串扰方式决定了细胞的死亡或存活.而将低氧预适应用于肝移植过程所导致的细胞凋亡现象,尚未见有报道.目的:探讨低氧预适应后NF-κB的表达对移植肝JNK通路的影响及保护作用.方法:采用经门静脉灌注法建立大鼠自体原位肝移植模型,SD大鼠随机分为正常对照组:不接受任何处理;自体移植组:行自体原位肝移植;低氧预适应组:移植前体积分数8%氮氧混合气体的低氧预处理90 min,然后行自体原位肝移植.分别于移植后 1,6,24 h处死大鼠取肝脏标本检测肝组织丙二醛、超氧化物歧化酶水平,免疫组化方法测定大鼠肝组织p-JNK蛋白,RT-PCR检测肝脏 NF-κB mRNA含量,透射电子显微镜下观察肝细胞的超微结构变化.结果与结论:与对照组比较,两移植组肝组织丙二醛水平升高,超氧化物歧化酶水平降低(P < 0.05);与自体移植组比较,低氧预适应组丙二醛水平显著降低、超氧化物歧化酶水平显著升高(P < 0.05).与正常对照组比较,两移植组各时相p-JNK蛋白的表达、NF-κB mRNA的转录水平显著升高 (P <0.05);与自体移植组比较,低氧预适应组NF-κB mRNA转录水平显著增高(P < 0.05),p-JNK蛋白的表达明显降低(P < 0.05).透射电镜下自体移植组肝细胞出现典型的凋亡征象,而低氧预适应组肝细胞无明显凋亡形态.提示,肝移植大鼠低氧预适应后可能通过上调NF-κB的表达,减少活性氧释放,抑制JNK通路的持续激活,从而抑制肝细胞凋亡,减轻肝脏缺血再灌注.     

复方甘草酸苷对兔骨骼肌缺血再灌注损伤的影响

背景:甘草酸苷对缺血再灌注损伤保护作用的研究主要集中于心、肾、肠等器官,对骨骼肌的研究甚少.目的:验证复方甘草酸苷对兔骨髂肌缺血再灌注损伤的保护作用.设计、时间及地点:血清学及组织形态学水平的随机对照动物实验,于2008-02/09在重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室完成.材料:选用24只新两兰大白兔,按随机数字表法分为3组,即假手术组、模型组及复方甘草酸苷组,每组8只.方法:模型组动物制备右后肢骨骼肌缺血损伤模型,缺血4 h后再灌注24 h;复方甘草酸苷组动物缺血4 h后给予复方甘草酸苷20 mg/kg,再灌沣24 h:假手术组动物仅游离山股动脉不进行缺血,4 h后缝合切口并给予等量生理盐水.主要观察指标:观察肌肉损伤后甘草酸苷对血浆乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性及丙二醛浓度,肌组织髓过氧化物酶活性、湿质量/干质量比值及P-选择索mRNA表达水平的影响;光镜下观察骨骼肌的组织形态学改变.结果:假手术组的血浆肌酸激酶、乳酸脱氢酶活性和丙二醛浓度显著低于缺血再灌注组及复方甘草睃苷组(P<0.05),复方甘草酸苷组显著低于缺血再灌注组(P< 0.01).假手术组的骨骼肌组织髓过氧化物酶活性和湿质量/干质量比值显著低于缺血再灌沣组及复方甘草酸苷组(P<0.01),复方甘草酸苷组显著低于缺血再灌注组(P<0.01).10倍镜下坏死肌纤维数缺血再灌注损伤组显著大于复方甘草酸苷组(P<0.05).骨骼肌组织中P-选择素mRNA表达水平假手术组显著低于缺血再灌注组(P<0.01),复方甘草酸苷组显著低于缺血再灌注组(P<0.05).结论:复方甘草酸苷对骨骼肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用.     

缺血预处理联合缺血后处理对肺移植中缺血再灌注肺损伤的影响

背景：研究显示缺血预处理和缺血后处理在缺血再灌注肺损伤中均具有明显的保护作用。目的：观察缺血预处理联合缺血后处理对肺移植中缺血再灌注损伤的累积保护效应。方法：将40只SD大鼠随机等分为假手术组、模型组、缺血预处理组、缺血后处理组和联合处理组。后4组建立缺血再灌注肺损伤动物模型,缺血预处理组、缺血后处理组和联合处理组在造模前或/和造模后反复3次阻断开放左侧肺门。结果与结论：与缺血预处理组和缺血后处理组相比,联合处理组大鼠肺组织的干质量比、丙二醛和髓过氧化物酶降低（P〈0.05）,而肺组织中超氧化物歧化酶活性升高（P〈0.05）,肺组织病理损伤程度明显减轻;缺血预处理组与缺血后处理组大鼠肺组织超氧化物歧化酶活性、丙二醛水平及髓过氧化物酶活性接近（P〉0.05）,且肺组织病理损伤程度基本相似。而且缺血预处理与联合处理组中超氧化物歧化酶、丙二醛和髓过氧化物酶水平呈正相关。提示缺血预处理和缺血后处理联合应用对于减轻中性粒细胞的侵润和激活及氧化反应对于肺组织的损伤有明显的累积保护效应,从而可以更好的减轻肺缺血再灌注损伤程度。     

丹参对原位肝移植大鼠供肝冷保存再灌注损伤的保护作用

目的:研究表明,丹参对心、脑、肝等重要器官的缺血再灌注损伤有保护作用.制备大鼠异体原位肝移植模型,验证丹参对大鼠肝移植缺血再灌流损伤的保护作用.方法:实验于2006-10/2007-08在南方医院中心实验室及动物实验中心完成,动物实验方法符合动物伦理学要求.①实验材料及分组:选用SD大鼠40只,按随机数字表法分为假手术组、模型对照组和丹参注射液组,假手术组8只,模型对照组、丹参注射液组各8对(供体与受体).②实验方法:建立原位肝移植模型,在供肝灌注冷保存时,以4 ℃乳酸林格氏液为基液,丹参注射液组灌注保存液中加60 mL/L丹参注射液;模型对照组不加丹参.③实验评估:移植术后6 h处死各组大鼠取样,检测血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶及乳酸脱氢酶活性;测定肝组织中丙二醛含量及超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性,并对比观察移植肝病理形态学改变.结果:模型对照组和丹参注射液组16只受体大鼠及假手术组8只大鼠全部进入结果分析,无脱失.①丹参注射液组和模型对照组移植肝再灌注后血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及乳酸脱氢酶活性均高于假手术组(P < 0.01);丹参注射液组低于模型对照组(P < 0.01).②丹参注射液组肝组织中丙二醛含量较模型对照组明显下降(P < 0.01),超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性则明显升高 (P < 0.01).③丹参注射液组较模型对照组肝组织肝细胞坏死程度减轻,炎性细胞浸润减少,肝组织再灌注损害程度减轻.结论:丹参对原位肝移植肝脏的缺血再灌注损伤有保护作用,从而减轻氧自由基及脂质过氧化,保护细胞膜,改善肝功能.