应用飞行质谱技术筛选室间隔缺损的血清蛋白标志物

[目的]应用表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱技术筛选单纯性室间隔缺损血清蛋白标志物.[方法]采用病例对照设计,用CM10芯片检测56例单纯性室间隔缺损患儿、85例儿科常见病患儿及23例其他先天性心脏病患儿血清,筛选室间隔缺损血清差异蛋白,并通过构建血清诊断模型分析所筛选差异蛋白区分病例与对照能力.[结果]25个蛋白在3组之间的差异具有统计学意义(P<0.05),所构建诊断模型ROC曲线下面积、预测准确率、灵敏度及特异度分别为0.948、94.00%、88.24%、96.97%.[结论]单纯性室间隔缺损患儿、儿科常见病患儿及其他先天性心脏病患儿血清蛋白存在差异,筛选出的差异蛋白能够较好地区分病例与对照,这些蛋白质可能是室间隔缺损的血清标志物.     

血清蛋白质谱结合人工神经网络在胃癌诊断中的研究

目的 建立筛选胃癌血清蛋白质谱的人工神经网络(ANN)诊断模型.方法 将84例胃癌患者和75例对照者的血清样本按照随机数字表法随机分为训练集(106例)和测试集(53例).首先应用表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及弱阳离子交换表面芯片(CMl0)检测练集样本,结合反向传播ANN的方法建立诊断模型,进一步检测测试集样本并评价该模型的诊断价值.结果 胃癌患者与对照者血清蛋白质谱图有5个明显表达差异的蛋白质峰(P<0.05),质荷比分别为7567、6742、5262、4869、4256 m/z,5个蛋白质峰作为标志蛋白建立ANN诊断模型.利用该模型对胃癌患者进行盲法预测,结果表明其对胃癌的诊断灵敏度和特异度分别为90.0%和91.3%.结论 胃癌血清蛋白质谱结合ANN建立的诊断模型对胃癌诊断具有较高的灵敏度和特异度,可用于胃癌早期诊断与肿瘤标志物筛选研究.     

M蛋白阳性患者314例体液免疫特征分析

[目的]分析314例血清蛋白电泳M蛋白阳性患者血尿免疫学特征及其相关性。[方法]对华西医院门诊及住院患者采用琼脂糖凝胶电泳法作血清蛋白电泳检测,检出M蛋白带的患者,再作免疫球蛋白G、A、M、血轻链Kappa(κ)、Lambda(λ)和Kappa/Lambda(κ/λ)比值、尿游离轻链Kappa(κ)、Lambda(λ)检测,用免疫固定电泳鉴定M蛋白类型,采用t检验、配对秩和检验和相关分析比较其血尿蛋白免疫学特征及其相关性。[结果]3156例血清蛋白电泳筛检出M蛋白阳性314例,其中IgG型所占比例最大(66.6%)。血清蛋白电泳后,IgG和IgM型M带主要分布于γ区,较少分布在α2和β区;IgA型M带主要分布在γ区,其次分布在β区,较少分布在α2区。IgG、IgA、IgM型患者对应Ig的血清浓度均显著升高(P﹤0.01),IgG和IgA型患者的非对应Ig血清浓度明显低于正常(P﹤0.01),IgM型患者的IgG浓度明显低于正常(P﹤0.01),而IgA浓度略有降低但并不显著。M蛋白类型对应轻链的血清浓度均显著增高(P﹤0.01),非对应轻链均在正常范围内;各类型患者血清κ/λ值均明显异常。以免疫固定电泳的结果作为参考,观察各指标检测M蛋白的能力,其敏感性依次为血清κ/λ98.1%,血清Ig97.1%,血清轻链96.2%,尿轻链78.1%。[结论]应用免疫固定电泳结合血清蛋白电泳及免疫球蛋白定量等方法可以比较敏感地检测出M蛋白,并对其进行分类、分型,为临床诊断和治疗提供重要依据。     

质谱在乳腺癌血清蛋白组中的应用及其临床意义

目的研究乳腺癌患者血清蛋白,筛选候选肿瘤标志物并建立诊断模型,初步探讨所建立的诊断模型在乳腺癌早期诊断中的临床意义。方法对48例乳腺浸润性导管癌患者和26例乳腺良性肿瘤患者与52名健康人血清,采用弱阳离子交换型(WCX)纳米磁珠联合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱,检测各血清标本获得蛋白指纹图谱;用Biomarker Wizard找出差异蛋白,再用Biomarker Patterns建立诊断模型;扩大样本量,通过盲法分析进一步验证诊断模型。结果初步筛选出6个差异蛋白峰,差异有统计学意义(P<0.01),建立由3164、3403 m/z两个差异蛋白峰组成的乳腺癌诊断模型,其敏感率为90.0%,特异性为93.3%;扩大样本盲法验证结果其敏感性为77.8%,特异性为90.9%;另外26例乳腺良性肿瘤患者中有21例可以检出。结论由两个差异表达蛋白及其特定组合构成的诊断模型可以区分乳腺浸润性导管癌、乳腺良性肿瘤患者与健康人。     

建立胃癌高发区胃癌血清蛋白指纹图谱诊断模型的探讨

目的 应用表面加强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术分析胃癌血清蛋白质指纹图谱,筛选胃癌特异性血清蛋白组合,建立胃癌诊断模型.方法 利用强阴离子交换芯片(Q10)分别对山东省临朐县胃癌高发区36例胃癌患者和46例浅表性胃炎患者的血清蛋白指纹图谱进行检测,采用ZUCIPDAS蛋白芯片数据分析系统,建立高发区胃癌血清蛋白指纹图谱诊断模型,并利用盲筛法验证模型的正确性.结果 通过对26例胃癌患者及37例浅表性胃炎患者血清蛋白指纹图谱进行检测,筛选出差异具有统计学意义的6个蛋白质峰,质荷比分别为8587、6945、8243、3899、7035和9943,并建立胃癌蛋白指纹图谱诊断模型,该模型诊断胃癌的灵敏度达88.5%,特异度达97.3%.在完成建模后,选择19例患者血清进行盲筛,其中胃癌患者10例,浅表性胃炎患者9例.通过盲筛验证,该模型诊断胃癌的灵敏度为80.0%,特异度为88.9%.结论 初步建立了胃癌高发区胃癌血清蛋白指纹图谱诊断模型,该模型诊断胃癌的灵敏度和特异度均达到80%以上,该方法为胃癌的诊断提供了新的思路.     

妊娠期糖尿病患者特异性血清标志物筛查

目的:探讨并初步筛选妊娠期糖尿病患者的特异性血清标志物。方法:用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,检测30例妊娠期糖尿病患者和30例正常孕妇血清蛋白质的相对含量并绘制两者血清蛋白质谱图。结果:妊娠期糖尿病患者与正常孕妇血清蛋白质的相对分子质量/电荷比值(质荷比)在2 000~20 000范围内,有5个不同质荷比蛋白质的相对含量有明显差异。妊娠糖尿病患者血清中,质荷比为2 868.9、3 448.3、5 477.7的蛋白质相对含量(41.22±11.69)、(22.77±10.97)、(20.54±9.30)明显高于正常孕妇(9.34±5.60)、(10.42±6.23)、(8.26±3.84),两者比较,差异有统计学意义(P<0.05),而质荷比为4 695.5、4 786.7的蛋白质相对含量为(3.87±3.21)、(5.04±3.69),均低于正常孕妇的(10.13±9.72)、(15.08±10.92),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:妊娠期糖尿病患者与正常孕妇血清蛋白质质谱有差异;有5个不同质荷比相对应的蛋白质可能是妊娠期糖尿病特异性的血清标志物。     

裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型体内差异表达蛋白的检测

[目的]分析裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型体内血清中的蛋白指纹图谱,并与正常对照裸鼠比较,筛选差异表达蛋白,为鼻烟癌的早期诊断提供特有的血清蛋白标志物. [方法]采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白芯片技术检测12只正常裸鼠和45只裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型体内血清中的蛋白指纹图谱,用Ciphergen ProteinChip 3.0 软件进行数据的校正与分析,采用Ciphergen Biomaker Wizard 3.1版软件分析筛选对照与试验组间的差导表达蛋白. [结果]对照组与试验组间检出17个差异表达的蛋白质(P<0.0001),其质荷比(M/Z)分别为13447、14586、8948、8017、5553、6742、14743、11586、15675、9178、6423、14940、15492、11528、8615、6738、8102.分子量主要集中在20 000 D以内.大多数标志蛋白在试验组中表达明显增高,少数为低表达.在裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型体内随时间的推移而出现一些规律性表达的蛋白质、质荷化(M/Z)为6738、8017、8102、8615的4个蛋白质在接种癌细胞后表达逐渐增强,质荷比(M/Z)为14740、15484的两个蛋白质表达逐渐域弱. [结论]在正常裸鼠和裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型之间发现具有一定价值的差异表达蛋白,对鼻咽早期诊断的微量蛋白标志物的研究具有极其重要的意义.     

用裸鼠移植瘤为模型筛选和鉴定卵巢癌血清标志物

[目的]探索以浆液性囊腺癌细胞系SK-OV-3裸鼠移植瘤为模型筛选人类卵巢癌血清标志物的可行性.[方法]建立人卵巢癌细胞SK-OV-3的裸鼠移植瘤模型,收集血清,采用蛋白质芯片-飞行时闻质谱技术(Surface-en-hanced later desorption/ionization-time of flight,SELDI-TOF-MS),比较荷瘤鼠和正常对照小鼠血清蛋白谱表达差异,以发现与卵巢癌发生发展相关的标志物或分子. [结果]通过SELDI蛋白芯片分析发现:在分子量3 000-20 000 Da范围内,与正常对照小鼠和荷人肝癌小鼠相比,卵巢癌小鼠血清中有10个蛋白质分子明显上调,13个明显下调.经数据库检索(Aldenta软件,http://expasy.com)并结合文献综合分析,初步鉴定了8个可能的蛋白质,分别为:急性反应蛋白(Serum amyloid A2和Serum amyloid A3,简称为SAA2和SAA3),在卵巢癌血清中表达上调;趋化因子(CXCL12,CXCL14).在卵巢癌血清中表达上调;细胞因子(IL-7),在卵巢癌血清中表达下调;免疫调节分子(denfensin beta),在卵巢癌血清中表达下调. [结论]本研究表明以裸鼠移植瘤为模型,应用蛋白质组学方法来筛选人类肿瘤标志物是可行的.     

血清蛋白质谱结合人工神经网络在宫颈癌诊断中的应用

目的:采用蛋白质芯片表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测宫颈癌病人血清蛋白指纹图谱,通过差异蛋白组学筛选特有的蛋白标记物。方法:应用SELDI-TOF-MS技术和WCX2(弱阳离子)芯片采集58例宫颈癌患者和57例健康人血清蛋白质指纹图谱,采用Biomarker Wizard软件筛选差异蛋白质组。将115例血清随机分为两组:以训练组30例宫颈癌患者和30例健康人建立人工神经网络(ANN)模型,以验证组28例宫颈癌患者和27例健康人血清标本用于模型的双盲法验证。结果:宫颈癌患者与对照组血清蛋白质指纹图谱有145个差异表达的蛋白质峰(P0.05),筛选出质荷比(M/Z)分别为5912、5642、8702、4320、6432的标志蛋白(P10-6),建立人工神经网络模型,其对宫颈癌的诊断敏感性为92.86%,特异性为88.89%,阳性预测值为89.66%,阴性预测值为92.31%。结论:特征蛋白在宫颈癌患者较正常人血清明显的高表达或低表达,可能对宫颈癌的早期诊断和治疗后随访具有重要的指导意义。     

SELDI技术筛选胃癌相关血清蛋白质指纹图谱的临床研究

目的 应用SELDI-TOF-MS技术筛选胃癌相关血清蛋白质多肽谱指纹并建立辅助诊断胃癌模型.方法 采用CMIO弱阳离子芯片,结合表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测50例首次就诊且病理诊断为胃癌患者和16例健康人血清样本并记录其蛋白质多肽谱指纹,利用Biomarker Wizard软件比较两组间的血清蛋白质指纹图谱.Biomark-er Patterns软件进行分析,建立胃癌的特异指纹模型.结果 胃癌患者血清蛋白质多肽谱与健康人相比,有34个蛋白质差异有统计学意义,其中m/z为6016,6744,2822,4474,7892和3242的六个蛋白质组成的诊断模型能达到鉴别胃癌患者和健康人的最佳诊断效果,在测试模式下,灵敏度和特异度分别为96.0%和93.8%,准确度为95.5%.结论 SELDI-TOF-MS技术用于胃癌患者血清蛋白质多肽谱分析可筛选出有意义的差异表达蛋白组多肽谱指纹,可用此方法建立胃癌的辅助诊断模型.