瘢痕疙瘩及周围皮肤成纤维细胞生长差异的生物学研究

目的 探讨正常皮肤，增生性瘢痕，瘢痕疙瘩周边部和中央部及瘢痕疙瘩周围皮肤（距瘢痕疙瘩边缘0.5cm范围内）的成纤维细胞呈现不同生物学性状的细胞生物学机理。方法 取手术切除的正常皮肤，增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织及周围皮肤各6例为标本，通过细胞培养6－10代后，应用流式细胞仪不同来源的成纤维细胞细胞周期的分布，同时比较它们在无血清培养条件下和在不同浓度FasMcAb作用下的细胞凋亡率。MTT比色法比较其细胞增殖活性。结果 正常皮肤成纤维细胞增殖及凋亡正常。增生性瘢痕增殖活跃且细胞凋亡状况不良，瘢痕疙瘩中央部成纤维细胞处于低增殖－不凋亡状况，瘢痕疙瘩周边部成纤维细胞处于高增殖－无凋亡状况；瘢痕疙瘩周围正常皮肤大量细胞也处于高增殖及低凋亡状况。结论 病理性瘢痕成纤维细胞增殖凋亡状况的异常可能是导致其不同生长特性的细胞生物学机理之一。     

三七总甙对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用

目的：观察三七总甙对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的作用，以寻找治疗人瘢痕疙瘩的有效药物。方法：体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞，分别应用噻唑蓝(MTT)比色法和H^3-脯氨酸掺入法检测三七总甙作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果：与空白对照组相比，三七总甙含量在0．5，1．0和1．5g／L时均能够显著抑制成纤维细胞增殖及胶原合成(P&;lt;0．01)，但在1．5g／L时对细胞具有毒性作用。结论：三七总甙具有体外抗纤维化作用，可能成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物。     

瘢痕疙瘩及周围皮肤成纤维细胞生长差异的生物学研究

目的探讨正常皮肤、增生性瘢痕、瘢痕疙瘩周边部和中央部及瘢痕疙瘩周围皮肤(距瘢痕疙瘩边缘0.5cm范围内)的成纤维细胞呈现不同生物学性状的细胞生物学机理。方法取手术切除的正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织及周围皮肤各6例为标本,通过细胞培养6～10代后,应用流式细胞仪不同来源的成纤维细胞细胞周期的分布,同时比较它们在无血清培养条件下和在不同浓度FasMcAb作用下的细胞凋亡率。MTT比色法比较其细胞增殖活性。结果正常皮肤成纤维细胞增殖及凋亡正常。增生性瘢痕增殖活跃且细胞凋亡状况不良,瘢痕疙瘩中央部成纤维细胞处于低增殖—不凋亡状况;瘢痕疙瘩周边部成纤维细胞处于高增殖—无凋亡状况;瘢痕疙瘩周围正常皮肤大量细胞也处于高增殖及低凋亡状况。结论病理性瘢痕成纤维细胞增殖凋亡状况的异常可能是导致其不同生长特性的细胞生物学机理之一。     

脾酪氨酸激酶与瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学性状改变的关系

目的：通过瘢痕疙瘩成纤维细胞(Keloid Fibroblasts，KFB)信号传递的研究，探讨脾酪氨酸激酶(Spleen Tyrosine Kinase，Syk)与KFB生物学性状改变的关系。方法：取瘢痕疙瘩和正常皮肤，采用组织块培养法进行成纤维细胞体外培养。Western Blotting检测传代早期瘢痕疙瘩成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞(Normal Skin Fibroblasts，NFB)中Syk的表达情况。结果：正常皮肤成纤维细胞中Syk表达减少或缺如，瘢痕疙瘩成纤维细胞中Syk表达显著增加，两者相比具有显著性差异(P=0．002，t=4．391)。结论：瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学性状的异常可能与Syk信号传递系统有关。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞P53基因突变检测

目的探讨瘢痕疙瘩体外培养成纤维细胞是否存在P53基因突变及形成发展机制。方法对所取新鲜组织标本进行细胞培养,设计P53基因外显子4,5,6的引物序列,从所培养各组成纤维细胞中提取细胞总DNA,采用PCR技术对所需基因片段进行扩增,并对目的基因进行测序。结果对PCR产物DNA序列分析后发现,所有体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(6/6)均存在P53外显子4的基因突变,有2例(2/6)P53外显子5存在基因突变,表现为点突变及移码突变,而正常皮肤成纤维细胞则未发现有任何形式的基因突变。结论瘢痕疙瘩成纤维细胞存在P53基因突变,这可引起其细胞增殖凋亡异常。     

瘢痕疙瘩组织及其周边正常皮肤成纤维细胞斑点粘合激酶表达差异的意义

目的：比较血小板源生长刺激因子刺激后瘢痕疙瘩组织（瘢痕疙瘩）和瘢痕疙瘩周边相对正常皮肤组织来源的成纤维细胞（周边）、正常人皮肤成纤维细胞（正常）斑点粘合激酶分子信号的表达及磷酸化差异，分析瘢痕特别是瘢痕发病过程中斑点粘合激酶的作用。方法：实验于2000—10／2002—10在日本国立神户大学医学部分子生物学实验室完成。5例瘢痕疙瘩成纤维细胞及瘢痕疙瘩周边相对正常皮肤成纤维细胞标本均来自日本国立神户大学附属医院形成外科及皮肤科瘢痕疙瘩切除患者，与患者说明目的并征得同意。以正常人皮肤成纤维细胞为标准对照组。应用免疫印迹方法检测瘢痕疙瘩及周边、正常皮肤成纤维细胞的斑点粘合激酶含量及其激酶蛋白磷酸化情况。结果：①无刺激条件下，瘢痕疙瘩成纤维细胞的斑点粘合激酶表达较瘢痕疙瘩周边及正常皮肤组织来源的成纤维细胞增强。②血小板源生长刺激因子-BB刺激后，瘢痕疙瘩及周边、正常皮肤来源的成纤维细胞斑点粘合激酶磷酸化均增强，但以瘢痕疙瘩成纤维细胞的斑点粘合激酶磷酸化更明显。③血小板源生长刺激因子一BB刺激后，瘢痕疙瘩成纤维细胞中斑点粘合激酶蛋白磷酸化明显高于瘢痕疙瘩周边及正常皮肤组织来源的成纤维细胞，但斑点粘合激酶含量无明显改变。结论：虽然瘢痕疙瘩成纤维细胞与瘢痕疙瘩周边相对正常皮肤成纤维细胞的斑点粘合激酶含量相同，但是斑点粘合激酶在瘢痕疙瘩成纤维细胞中高表达，表明斑点粘合激酶的磷酸化增强可能与瘢痕疙瘩的发生发展有关。     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的：研究苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(fibroblast，FB)作用的机制。方法：实验于2000-01／2004-06在武装警察部队总医院烧伤整形科实验室完成。将苦参碱以不同浓度梯度作用于体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞，采用四唑盐比色法检测苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响，采用免疫组织化学检测增殖性细胞核抗原(proliferativecell nuclear antigen，PCNA)的表达，采用流式细胞仪对异硫氰荧光素一连接素V／碘化丙啶双染情况(FITC-Armexin V／PI)检测细胞凋亡率。结果：苦参碱在O．10-10g／L对人瘢痕疙瘩成纤维细胞呈剂量依赖性增殖抑制作用；增殖性细胞核抗原经苦参碱作用后表达明显减弱；FTTC-Armexin V／P1示苦参碱组的凋亡率为40．7，对照组为1．6(P＜O．01)。     

人皮肤成纤维细胞的培养和鉴定

目的探索和建立人皮肤成纤维细胞体外分离、培养及鉴定的技术方法。方法通过酶消化法分离人皮肤外分泌汗腺，在外分泌汗腺生长的同时，成纤维细胞也在生长；用质量分数为0．25％的胰酶和0．02％的乙二胺四乙酸(EDTA)消化分离汗腺细胞和成纤维细胞；以Dulbecco改良的Eagle培养液(DMEM)为基础培养基，添加胎牛血清(体积分数10％)、青霉素(100kU／L)和链霉素(100mg／L)，置37℃、体积分数为5％CO2、95％空气、饱和湿度条件下培养。倒置相差显微镜和苏木素-伊红染色，观察成纤维细胞形态，并对培养细胞行波形蛋白免疫组化及染色体鉴定。结果分离的成纤维细胞可在体外快速贴壁生长、增殖，波形蛋白免疫组化染色为阳性，染色体分析为46条。结论该方法所获得的皮肤成纤维细胞可在体外稳定培养，为在细胞水平上研究伤口愈合的机制提供了充足、可靠的靶细胞。     

成纤维细胞培养与瘢痕形成

1人正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞的培养及生物学差异,见2010年50期9341页。2姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞周期及其核转录因子KB信号转导通路的影响,见2011年     

瘢痕疙瘩成纤维细胞P53基因突变检测

目的：探讨瘢痕疙瘩体外培养成纤维细胞是否存在P53基因突变及形成发展机制。方法：对所取新鲜组织标本进行细胞培养，设计P53基因外显子4，5，6的引物序列，从所培养各组成纤维细胞中提取细胞总DNA，采用PCR技术对所需基因片段进行扩增，并对目的的基因进行测序。结果：对PCR产物DNA序列分析后发现，所有体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞（6／6）均存在P53外显子4的基因突变，有2例（2／6）P53外显子5存在基因突变，表现为点突变及移码突变，而正常皮肤成纤维细胞则未发现有任何形式的基因突变。结论：瘢痕疙瘩成纤维细胞存在P53基因突变，这可引起其细胞增殖凋亡异常。     

Interleukin-13 modulates collagen homeostasis in human skin and keloid fibroblasts

Interleukin (IL)-13 has been implicated in the pathogenesis of various diseases characterized by fibrosis. We describe the effects of IL-13 on collagen homeostasis from normal (NF) and keloid (KF) fibroblasts and compare these effects with those of IL-4 and transforming growth factor (TGF)-beta(1). Total collagen generation was up-regulated in NF after 48 h of stimulation by IL-13; in KF, IL-13 stimulated a more rapid collagen response. The kinetics and magnitude of collagen generation induced by IL-13 were equivalent to those induced by similar concentrations of IL-4 and TGF-beta(1). Collagen type I production paralleled total collagen generation from both NF and KF; however, IL-4-induced collagen type I and total collagen production from KF was more transient than that induced by either IL-13 or TGF-beta(1). Procollagen 1alpha1 gene expression was induced in KF by stimulation with IL-13 for 24 h. Moreover, IL-13 was unique among these three cytokines in its ability to induce gene expression for procollagen 3alpha1. Finally, IL-13 inhibited IL-1beta-induced matrix metalloproteinase (MMP)-1 and MMP-3 production and enhanced tissue inhibitor of metalloproteinase (TIMP)-1 generation from NF; although similar effects were observed with IL-4, TGF-beta(1) transiently enhanced MMP-1 and MMP-3 generation without effecting TIMP-1. In KF, IL-13 and IL-4 inhibited MMP-3, whereas TGF-beta(1) enhanced MMP-3; TIMP-1 was unaffected by any of the three cytokines. These data demonstrate both the profibrotic effects of IL-13 on collagen homeostasis and the potential differential regulation of collagen homeostasis in fibroblast subtypes by IL-13.     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的:研究苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(fibroblast,FB)作用的机制。方法:实验于2000-01/2004-06在武装警察部队总医院烧伤整形科实验室完成。将苦参碱以不同浓度梯度作用于体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,采用四唑盐比色法检测苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响,采用免疫组织化学检测增殖性细胞核抗原(proliferativecellnuclearantigen,PCNA)的表达,采用流式细胞仪对异硫氰荧光素-连接素V/碘化丙啶双染情况(FITC-AnnexinⅤ/PI)检测细胞凋亡率。结果:苦参碱在0.10～10g/L对人瘢痕疙瘩成纤维细胞呈剂量依赖性增殖抑制作用;增殖性细胞核抗原经苦参碱作用后表达明显减弱;FITC-AnnexinⅤ/PI示苦参碱组的凋亡率为40.7,对照组为1.6(P<0.01)。结论:苦参碱在体外能明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖活性,并促进其凋亡。     

瘢痕疙瘩组织及其周边正常皮肤成纤维细胞斑点粘合激酶表达差异的意义

目的:比较血小板源生长刺激因子刺激后瘢痕疙瘩组织(瘢痕疙瘩)和瘢痕疙瘩周边相对正常皮肤组织来源的成纤维细胞(周边)、正常人皮肤成纤维细胞(正常)斑点粘合激酶分子信号的表达及磷酸化差异,分析瘢痕特别是瘢痕发病过程中斑点粘合激酶的作用。方法:实验于2000-10/2002-10在日本国立神户大学医学部分子生物学实验室完成。5例瘢痕疙瘩成纤维细胞及瘢痕疙瘩周边相对正常皮肤成纤维细胞标本均来自日本国立神户大学附属医院形成外科及皮肤科瘢痕疙瘩切除患者,与患者说明目的并征得同意。以正常人皮肤成纤维细胞为标准对照组。应用免疫印迹方法检测瘢痕疙瘩及周边、正常皮肤成纤维细胞的斑点粘合激酶含量及其激酶蛋白磷酸化情况。结果:①无刺激条件下,瘢痕疙瘩成纤维细胞的斑点粘合激酶表达较瘢痕疙瘩周边及正常皮肤组织来源的成纤维细胞增强。②血小板源生长刺激因子-BB刺激后,瘢痕疙瘩及周边、正常皮肤来源的成纤维细胞斑点粘合激酶磷酸化均增强,但以瘢痕疙瘩成纤维细胞的斑点粘合激酶磷酸化更明显。③血小板源生长刺激因子-BB刺激后,瘢痕疙瘩成纤维细胞中斑点粘合激酶蛋白磷酸化明显高于瘢痕疙瘩周边及正常皮肤组织来源的成纤维细胞,但斑点粘合激酶含量无明显改变。结论:虽然瘢痕疙瘩成纤维细胞与瘢痕疙瘩周边相对正常皮肤成纤维细胞的斑点粘合激酶含量相同,但是斑点粘合激酶在瘢痕疙瘩成纤维细胞中高表达,表明斑点粘合激酶的磷酸化增强可能与瘢痕疙瘩的发生发展有关。     

Incorporation of L-leucine and D-glucosamine into skin fibroblasts derived from cystic fibrosis and normal individuals

Cultured skin fibroblasts from patients with diagnosed cystic fibrosis were compared with those from normal individuals in respect to incorporation of l-leucine or d-glucosamine into the subcellular components, to uptake of α-isobutyric acid and calcium, and to (Na⁺-K⁺)ATPase activity, etc. No significant difference which could be attributed to the disease-specific basic metabolic abnormality was demonstrated. Cystic fibrosis skin fibroblasts may not express the primary genetic defect at the level of generalized transport mechanism and overall protein metabolism.     

脾酪氨酸激酶与瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学性状改变的关系

目的 通过瘢痕疙瘩成纤维细胞 (Keloid Fibroblasts,KFB)信号传递的研究,探讨脾酪氨酸激酶( Spleen Tyrosine Kinase,Syk)与 KFB生物学性状改变的关系. 方法 取瘢痕疙瘩和正常皮肤,采用组织块培养法进行成纤维细胞体外培养. Western Blotting检测传代早期瘢痕疙瘩成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞 (Normal Skin Fibroblasts, NFB)中 Syk的表达情况. 结果 正常皮肤成纤维细胞中 Syk表达减少或缺如,瘢痕疙瘩成纤维细胞中 Syk表达显著增加,两者相比具有显著性差异( P=0.002, t=4.391). 结论 瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学性状的异常可能与 Syk信号传递系统有关.     

苏拉明对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学特性的影响

目的探讨苏拉明（suramin）对立体培养条件下瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFb）的药物学作用。方法建立以人纤维蛋白原为支架的KFb三维培养系统,分别通过测定细胞的生长曲线。细胞的胶原合成量及I型前胶原mRNA的表达情况来观察苏拉明对KFb影响及其与转化生长因子(TGF－β1)的相互作用。结果苏拉明对KFb的生长及胶原合成均有抑制作用,且能明显抑制TGF－β1对KFb胶原合成的诱导作用。结论苏拉明能明显抑制KFb的生物学功能且对TGF－β1有明显的拮抗作用,这可能使其成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物之一。     

己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

背景:近年来发现己酮可可碱有广泛的抗纤维化作用,但己酮可可碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制作用却少见报道,且其最大抑制剂量尚无定论.目的:观察己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用,并筛选己酮可可碱的最大抑制浓度.方法:以人瘢痕疙瘩组织作成纤维细胞原代培养,传至第5～8代后将细胞分为实验组和对照组,实验组加入质量浓度为0.1,0 25,0.5,1.0,2.0,3.0 g/L的己酮可可碱,利用MTT比色法检测成纤维细胞的增殖活性.结果与结论:与对照组相比,实验组成纤维细胞增殖抑制率较高(P＜0.05),质量浓度在0.1～2.0 g/L范围内呈明显的量效、时效关系,96 h处于较高水平.实验组最大抑制率为53.37%,最大抑制质量浓度为2.0 g/L.结果表明己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用,最适抑制质量浓度为2.0 g/L,发挥抑制作用最强的时间为给药后96 h.     

(Mg+ Ca-ATPase activity in plasma membrane enriched preparations of human skin fibroblasts: Decreased activity in fibroblasts derived from cystic fibrosis patients

Plasma membrane enriched preparations obtained from cultured human skin fibroblasts by differential centrifugation and sucrose density centrifugation techniques were found to contain a Mg²⁺-dependent Ca²⁺-stimulated ATPase activity. The specific activity of the (Mg²⁺ + Ca²⁺-ATPase present was 4–5-fold higher than that present in crude membrane preparations and 80–100-fold higher than that present in homogenates. The (Mg²⁺ + Ca²⁺-ATPase activity of both crude and plasma membrane enriched preparations of cultured fibroblasts from cystic fibrosis patients was significantly reduced compared to that activity observed in age-matched controls. This study corroborates our previous observations made in crude homogenate preparations of fibroblasts and indicates another cell type where (Mg²⁺ + Ca²⁺-ATPase activity may be altered in cystic fibrosis.