骨桥蛋白反义核苷酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

背景:骨桥蛋白在血管损伤后新生内膜中的表达明显上调,而且能促进血管平滑肌细胞和外膜细胞的增殖、迁移.目的:探索骨桥蛋白反义核苷酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:培养大鼠A10主动脉血管平滑肌细胞,通过MTT比色法测定骨桥蛋白反义核苷酸对平滑肌细胞增殖的影响,流式细胞仪测定骨桥蛋白反义核苷酸对平滑肌细胞周期分布的影响;通过RT-PCR方法检测血管平滑肌细胞转染骨桥蛋白反义核苷酸对增殖细胞核抗原表达的影响.结果与结论:骨桥蛋白反义核苷酸对血管平滑肌细胞的增殖有明显的抑制作用,随时间延长对细胞增殖抑制率下降.骨桥蛋白反义核苷酸主要作用于G1/S限制点,能阻止血管平滑肌细胞由G0/G1期向S期推进,从而将血管平滑肌细胞阻滞于G0/G1期,抑制血管平滑肌细胞的增殖.血管平滑肌细胞转染骨桥蛋白反义核苷酸后,增殖细胞核抗原的表达水平均较对照组降低(P<0.05).因此,得出骨桥蛋白反义核苷酸通过阻止血管平滑肌细胞由G0/G1期向S期推进,从而抑制血管平滑肌细胞的增殖,进而抑制血管内膜增生.     

血管重塑与动脉成形术后再狭窄的关系

动脉成形术后再狭窄是一个血管损伤反应的新生内膜增生与血管重构过程，并且血管重塑对再狭窄的形成起着关键性作用。而动脉损伤后血管壁剪切力的改变、外膜纤维化、内膜增殖及功能紊乱、细胞外基质的形成与降解、生长因子等参与了动脉成形术后血管重塑的调节。因此血管重塑参与机制的了解，为研究再狭窄的防治开辟了一个新的领域。     

miR-181a调控血管紧张素Ⅱ诱导骨桥蛋白在血管平滑肌细胞的表达研究

目的明确miRNA-181a在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)中的骨桥蛋白(OPN)的作用及相关机制。方法分离培养出的VSMCs,使用100 nM AngⅡ处理后,检测不同时间点OPN蛋白表达水平的变化,同时利用q PCR检测miR-181a的变化后,将VSMCs分为空白对照组(不做任何处理)、AngⅡ刺激组(加入100 nM AngⅡ诱导)、阴性miRNA+AngⅡ刺激组(转入阴性miRNA并加入100 nM AngⅡ)以及miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组(转入miR-181a模拟剂并加入100 nM AngⅡ)。48 h后Western blotting检测OPN在蛋白水平的变化,并使用Annexin V/PI方式检测凋亡变化、transwell检测迁移的变化;随后VSMCs被分为CON与miR181a inhibitor组,48 h后使用Western blotting检测p53、Bax、p21变化。结果使用100 nM AngⅡ处理后,VSMCs的OPN蛋白表达水平不断上升;使用100 nM AngⅡ处理24 h后,miRNA-181a相对表达量100 n M组显著低于0 nM组; VSMCs在转入miR-181a模拟剂48 h后,miR-181a模拟剂显著高CON组;在空白对照组、AngⅡ刺激组、阴性miRNA+AngⅡ刺激组以及miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组中,相对于阴性对照组,AngⅡ刺激组OPN表达显著上升,而miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组OPN表达显著低于AngⅡ刺激组,略高于阴性对照组;在细胞凋亡中,与AngⅡ刺激组阴性组和miRNA+AngⅡ刺激组相比,miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组Annexin V阳性细胞比率明显减少,说明能够明显抑制细胞凋亡。在细胞迁移中,miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组能够明显抑制细胞迁移。VSMCs在转入miR-181a inhibitor后,相对于CON组,p53、Bax、p21表达均有明显的上升。结论 miR181-a抑制了AngⅡ诱导VSMCs的OPN,同时抑制了AngⅡ诱导的凋亡与增殖,而miR181-a的抑制所诱导的凋亡与p53通路相关。     

高钙、高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化过程中骨桥蛋白表达的动态变化

目的观察大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）在高钙、高磷条件下骨桥蛋白（OPN）表达的动态变化及其分布特点,探讨其与血管钙化的关系。方法应用大鼠原代VSMCs进行体外实验,细胞生长至80％融合后更换不同培养基进行培养。根据培养基中钙磷浓度不同分为3组：对照组、高钙组和高磷组。更换培养基当天定义为D0。应用原子分光光度计检测细胞内钙含量。应用免疫组化染色观察各组第3、6、10和17天OPN的在细胞中的表达：同时收集第4、8、12天各组细胞,提取总蛋白,Western blot方法检测OPN表达。最后应用电镜、免疫电镜观察OPN在VSMCs的分布。结果对照组未观察到钙盐沉积,VSMCs钙含量在10天内无明显变化,高钙组VSMCs钙含量D2有明显增加,D8、D10进一步增加;高磷组钙含量D8、D10明显增加,与D0比较差异均有显著性（P〈0．01）。在D0-D10,高钙组、高磷组VSMCsOPN的表达逐渐增强。但这以后,无论是D12 Western blot结果,还是D17免疫组化结果均显示OPN表达下调。对照组OPN表达一直很弱,且随时间变化无明显性。D10高钙组和高磷组VSMCs在电镜下可见细胞外基质沉积,为丰富的胶原纤维,其间可见直径100～200nm的小泡。高密度电子致密物主要呈颗粒样沿胶原纤维沉积;也可见于小泡的泡壁。免疫电镜显示,高钙组和高磷组VSMCs胞浆中均可见较多与OPN相结合的胶体金颗粒,而在细胞外基质中仅偶见。结论大鼠VSMCs在高钙和高磷条件下培养发生钙化过程中, OPN表达呈先增强再减弱的变化：对照组OPN的表达一直在一个很低的水平。免疫电镜显示OPN主要表达于细胞胞浆中,细胞外基质分布很少。     

整合素受体信号在血管平滑肌细胞增殖及迁移中作用机制研究进展

肺血管重构是肺动脉高压的病理学特征,血管重构中肺血管平滑肌细胞增殖、迁移是当今心血管领域的研究热点。近年来,发现整合素与细胞外基质的相互特异性作用导致许多细胞内结构性和调节性因子的聚集和传递细胞信号,参与调节细胞骨架的组装和解聚,调节肌动蛋白纤维丝的稳定和更新,在细胞表型的转换中也起着重要作用。因此,探讨整合素受体信号在血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用机制对于寻找干预肺血管重构的新途径具有重要意义。     

恒磁场对大鼠主动脉平滑肌细胞骨桥蛋白基因表达的影响

背景:适当强度的恒磁场可抑制血管平滑肌细胞增殖,可能用于抑制经皮冠状动脉介入治疗术后再狭窄。目的:观察不同磁感应强度恒磁场对培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞骨桥蛋白基因表达的影响,以探讨磁场是否能用于经皮冠状动脉介入治疗术后再狭窄的防治。设计:随机分组,对照观察。单位:解放军第四军医大学西京医院心内科。材料:实验于2006-02/12在解放军第四军医大学西京医院心内科实验室(全军心血管病研究所)完成。纯种雄性SD大鼠,体质量200～250g。方法:用含体积分数为0.1小牛血清的DMEM培养液体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验随机分为对照组,1Gs恒磁场组、5Gs恒磁场组、10Gs恒磁场组、50Gs恒磁场组,其中对照组不予磁场干预,其他各组分别给予磁场干预继续培养48h。应用反转录-聚合酶链反应及蛋白免疫印迹技术结合吸光度扫描分析,观察恒磁场对血管平滑肌细胞骨桥蛋白及骨桥蛋白mRNA表达的影响。主要观察指标:各组血管平滑肌细胞骨桥蛋白及骨桥蛋白mRNA的表达。结果:对照组细胞表达一定量的骨桥蛋白及骨桥蛋白基因,各恒磁场组均较对照组降低,差异显著(P<0.05)。不同磁场强度组间分析显示,恒磁场的刺激作用具有磁场强度依赖性,随磁场强度加大,抑制骨桥蛋白及骨桥蛋白mRNA表达作用增强。结论:适当强度的恒磁场能在基因水平上抑制血管平滑肌细胞骨桥蛋白的表达,磁场对经皮冠状动脉介入治疗术后的再狭窄可能具有防治作用。     

白细胞介素4与血管活性多肽对大鼠血管平滑肌细胞增殖的调节作用

以＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法观察内皮素（ＥＴ）、血管紧张素Ⅱ及白细胞介素４（ＩＬ－４）单独作用和联合作用时对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响。结果发现ＩＬ－４能抑制培养的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的＾３Ｈ－ＴｄＲ的掺入（最低浓度为５ｎｇ／ｍｌ），并存在剂量效应关系，而对正常血压大鼠（ＷＫＹ）的ＶＳＭＣ无影响；但预先以ＥＴ或ＡＧ－Ⅱ刺激ＷＫＹ的ＶＳＭＣ的增殖，则ＩＬ－４表     

超声造影剂对血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨超声波联合超声造影剂对平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响.方法体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）.采用MIT法、Millicell小室、Annexin V-FITC/PI双标染色和流式细胞仪,检测VSMC的增殖、迁移能力和凋亡,观察血小板衍生生长因子--BB（PDGF-BB）对VSMC增殖、迁移和凋亡的影响,频率1 MHz、声强0.3 W/cm^2的连续波超声联合声学造影剂辐照VSMC后上述指标的变化.结果PDGF-BB对VSMC的凋亡无影响,但可促进VSMC增殖和迁移.超声联合造影剂辐照VSMC 30 s即可显著抑制PDGF-BB所致的VSMC增殖（P〈0.05）,同时细胞凋亡比例显著增高（P〈0.01）,辐照60 s可显著抑制PDGF-BB所致的VSMC迁移（P〈0.05）,随着辐照时间延长,以上作用增强,辐照60 s时对VSMC增殖的抑制程度最强.结论低强度超声波辐照联合超声造影剂可抑制VSMC增殖、迁移,并促进细胞凋亡.     

脑梗死患者脑小动脉平滑肌细胞表型转化与血管修复的相关性

目的：观察两种血管收缩功能相关蛋白在脑梗死患者小动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)中免疫组织化学表达变化，以期了解脑小动脉病变中VSMC的表型转化及细丝蛋白在表型转化中的意义，指导临床小动脉硬化型脑卒中的准确防治：方法：选取尸解脑标本，分为脑梗死组及对照组；免疫组化显示脑小动脉α平滑肌肌动蛋白及细丝蛋白的表达变化，并进行定量分析。结果：对照组α平滑肌肌动蛋白及细丝蛋白表达强度(PU)分别为53．50&;#177;2．00和34．21&;#177;2．36；梗死组为57．40&;#177;2．43和36．10&;#177;1.51，与对照组相比F值为15．273和4．592，P值为0．001和0．046，梗死组阳性表达强度增高，差异有统计学意义。讨论：硬化小动脉中膜数目减少。内膜下VSMC显著增生，并可能同时存在合成及收缩表型VSMC，分别代偿性的高表达细丝蛋白及α平滑肌肌动蛋白，以维持血管构型及收缩能力。     

血液动力学因素对血管平滑肌细胞的作用与机制

血液动力学因素直接影响血管平滑肌细胞的形态、迁移、增殖和凋亡,也通过调节内皮细胞来控制血管平滑肌细胞的行为,进而影响血管壁的结构和功能。通过综述血液动力学对平滑肌细胞的作用及机制,认为今后重点在于采用多种体外实验模型,模拟多种力、复杂流动对血管平滑肌细胞的影响,研究力学因素作用下血管平滑肌细胞结构和功能改变的分子生物学机理。     

Apoptosis and vascular remodeling

Cell death by apoptosis plays a major role in the homeostasis of the vascular system. Apoptosis of vascular cells, and of endothelial and smooth muscle cells, can be triggered by intrinsic signals related to the cell differentiation phenotype, or by extrinsic signals, including free radicals, inflammatory cytokines or oxidized LDL. Apoptosis contributes to normal physiological modelling of arteries after birth as well as to capillary rarefaction occurring during ontogenic development. Apoptotic processes have been found in several pathological conditions, including atherosclerosis, hypertension or restenosis following percutaneous transluminal angioplasty. However, a direct causal relationship between apoptosis and occurrence of these afflictions remains to be established.     

Vasoactive substance and vascular remodeling]

Vascular remodeling is characterized by the dysfunction of endothelial cells, vascular smooth muscle cell (SMC) proliferation and migration, and the increased accumulation of extracellular matrix. Angiotensin II causes SMC growth and migration, and stimulates the expression of vascular remodeling-related genes. Angiotensin II activates a diversity of intracellular signal transduction cascades, and transactivation of epidermal growth factor and platelet-derived growth factor receptors via AT1 receptor seems to be responsible for the development of vascular remodeling. Not only angiotensin II but also endothelin-1, nitric oxide, c-type natriuretic peptide and adrenomedullin play an important role in the development of vascular remodeling.     

Osteopontin and arthritis

Osteopontin is an RGDS-containing protein which acts as an intercellular signaling molecule as well as a cellular attachment protein. Expression of osteopontin has been observed in the joints of patients with rheumatoid arthritis as well as osteoarthritis. However, the functions of osteopontin in such diseased articular components have not yet been elucidated. Recent investigations using knockout mice lacking osteopontin indicated that the presence of osteopontin could play a role in the development of arthritis induced by injection with monoclonal antibodies raised against type II collagen.     

骨桥蛋白与妊娠相关性疾病

骨桥蛋白(OPN)是细胞外基质(ECM)中的一种分泌型磷酸化糖蛋白,主要由体内间叶组织细胞分泌,广泛分布在各种组织和体液中,通过与其主要受体整合素相互作用,介导细胞与细胞、细胞与ECM间的黏附、增殖、迁移、侵袭等过程,发挥多种生物学活性,参与多种器官和组织的生理病理过程。大量生殖医学领域的研究表明,OPN在对滋养细胞侵袭力的调节、胚胎植入和胎盘形成及妊娠相关性疾病中发挥重要的作用。