胸腺内注射脾细胞诱导神经移植的免疫耐受反应

背景:心脏等移植时常采用胸腺内注射脾细胞抑制或减弱移植排斥反应,而在神经移植中很少有报道.目的:应用大鼠胸腺内注射脾细胞的方法,诱导大鼠同种异体坐骨神经产生特异性免疫耐受.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-06/2008-06在哈尔滨医科大学动物实验中心完成.材料:选用清洁级雄性SD大鼠30只为受体,随机分为自体神经移植组,异体神经移植组,异基因抗原注射组,每组10只.雄件Wistar大鼠20只为供体.方法:异体神经移植组大鼠在显微镜下,从犁状肌下孔0.5 cm处整齐剪下长约1 cm的坐骨神经,将供体神经桥接于神经缺损处.自体神经移植组神经缺损处进行自体神经移植.异基因抗原注射组在异体神经移植后注入供体异基因抗原.主要观察指标:移植后2 周进行运动神经传导速度、病理学、混合淋巴细胞培养和血清白细胞介素检查.结果:运动神经传导速度异基因抗原注射组与自体神经移植组无显著差别(P0.05),但明显优于异体神经移植组(P<0.05).病理学及透射电镜观察,与运动神经传导速度检测结果一致.混合淋巴细胞培养和白细胞介素水平异基因抗原注射组明显优于异体神经移植组(P<0.05).结论:胸腺内注射异基因抗原可以诱导大鼠对异体坐骨神经移植的免疫耐受.     

同种异体成骨细胞移植的免疫学研究

目的:组织工程骨移植的排斥反应将主要取决于成骨细胞的抗原成分,对不同种系成骨细胞植入后体液免疫水平进行检测,探讨组织工程骨组织植入体内后可能的免疫排斥机制,并为应用于工程骨的种子细胞寻找可靠的种系来源。方法:行成骨细胞同胎、间种异体、同种异基因及自体细胞腹直肌袋内移植,分别于术后1,2,4,8周行免疫学及组织形态学检测。结果:各组动物在移植后一两周内均可检测到特异性抗体,同种异基因移植组持续时间最久,异基因组组织学指标高于同种异体组。结论:自体、同胎及同种异体或同种异基因细胞均可作为组织工程骨移植可靠的细胞来源。     

同种异体成骨细胞移植的免疫学研究

目的：组织工程骨移植的排斥反应将主要取决于成骨细胞的抗原成分，对不同种系成骨细胞植入后体液免疫水平进行检测，探讨组织工程骨组织植入体内后可能的免疫排斥机制，并为应用于工程骨的种子细胞寻找可靠的种系来源。方法：行成骨细胞同胎、同种异体、同种异基因及自体细胞腹直肌袋内移植，分别于术后1，2，4，8周行免疫学及组织形态学检测。结果：各组动物在移植后一两周内均可检测到特异性抗体，同种异基因移植组持续时间最久，异基因组组织学指标高于同种异体组。结论：自体、同胎及同种异体或同种异基因细胞均可作为组织工程骨移植可靠的细胞来源。     

胸腺内注射异基因抗原对同种异体鼠坐骨神经移植免疫反应的影响

目的:降低移植神经的抗原性、抑制异体神经移植中的排斥反应是目前的研究焦点。观察小鼠胸腺内注射异基因抗原对异体鼠坐骨神经移植存活的干预作用。方法:实验于2006-06/2007-05在哈尔滨医科大学附属第四医院实验室完成,实验方法符合动物伦理学要求。①选用雄性C57BL/6(H-2b)供体鼠32只,雌性Balb/c(H-2d)受体鼠44只,将坐骨神经移植受体鼠按随机数字表法分为4组(n=11):主要组织相容性复合物(H-2b)抗原注射组自供体小鼠的脾细胞中提取抗原注入受体鼠胸腺内,于2周后移植供体鼠坐骨神经;免疫抑制剂组移植前3d开始腹腔注射环孢霉素A;异体神经移植组、自体神经移植组单纯进行异体及自体神经移植。②于神经移植3周后进行电生理学、组织学及免疫学检测。结果:44只受体鼠全部进入结果分析。①坐骨神经移植段的神经传导速度:异体神经移植组显著小于主要组织相容性复合物(H-2b)抗原注射组(P<0.05),自体神经移植组显著大于主要组织相容性复合物(H-2b)抗原注射组(P<0.05),主要组织相容性复合物(H-2b)抗原注射组与免疫抑制剂组差异无显著性意义(P>0.05)。②组织学检查证明自体神经移植组及主要组织相容性复合物(H-2b)抗原注射组均有大量神经纤维再生,并已通过移植体。③混合淋巴细胞反应及迟发型超敏反应结果:主要组织相容性复合物(H-2b)抗原注射组对供体小鼠淋巴细胞反应呈特异性减弱,与异体神经移植组及免疫抑制剂组比较其差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:胸腺内注射异基因主要组织相容性复合物抗原可诱导对异体坐骨神经移植的特异性免疫耐受,神经恢复效果优于单纯异体神经移植,等同于免疫抑制剂使用组。     

胸腺内注射异基因抗原诱导特异性神经移植耐受的实验

背景:主要组织相容性复合物抗原不匹配是发生移植排斥的主要原因,诱导免疫耐受是防止器官移植排斥的理想途径,在胸腺内通过阴性选择可获得对自身耐受的T细胞,胸腺内异基因抗原注射是否可获得对该抗原的免疫耐受?目的:观察胸腺内注射异基因抗原在同种异基因神经移植免疫耐受中的作用。设计:对照观察实验。单位:哈尔滨医科大学免疫学教研室,哈尔滨医科大学第四临床医院骨科。材料:供体鼠C57BL/6(H-2b)30只,雄性,6～8周龄,体质量18～22g,由黑龙江省兽医研究所提供;受体鼠Balb/c(H-2d)60只,雌性,6～8周龄,体质量18～22g,由北京实验动物中心提供。主要组织相容性复合物(H-2b)抗原由哈尔滨医科大学免疫教研室制备,蛋白浓度为4.4g/L。方法:实验于2002-06/11在哈尔滨医科大学免疫教研室完成。将受体鼠Balb/c随机分为4组:胸腺内注射组、同系同基因移植组、异体神经移植组、免疫抑制剂组。自供体鼠C57BL/6(H-2b)的脾细胞中提取MHC抗原,注入受体鼠Balb/c(H-2d)胸腺内,两周后移植供体坐骨神经。移植后3周做单向混合淋巴细胞培养,诱导迟发型超敏反应。主要观察指标:各组混合淋巴细胞反应、诱导迟发型超敏反应的差异。结果:纳入供体鼠C57BL/6(H-2b)30只和受体鼠Balb/c(H-2d)60只,全部进入结果分析。①混合淋巴细胞反应结果:同系同基因移植组、胸腺内注射组和免疫抑制剂组细胞增殖均明显低于异体神经移植组[(546.1±75.1),(2668.3±533.8),(3101.3±429.1),(4312.3±534.1)min-1,P<0.05]。②诱导迟发型超敏反应结果:同系同基因移植组、胸腺内注射组和免疫抑制剂组两侧足垫的厚度差均明显低于异体神经移植组[(41.1±3.7),(72.1±5.1),(57.6±11.3),(86.2±13.2)μm,P<0.05]。结论:胸腺内注射异基因H-2b抗原可以诱导特异性神经移植耐受。     

转化生长因子β1质粒对静脉移植的影响

背景:大量实验表明,转化生长因子β1质粒在神经移植过程中可抑制或减弱移植排斥反应,而对静脉移植的影响却很少有行报道.目的:探讨大鼠局部注射转化生长因子β1质粒诱导同种异体异基因股静脉移植免疫耐受的作用途径.设计、时间及地点:随机分组,动物实验观察,于2007-03/2008-04在哈尔滨医科大学动物实验中心完成.材料:供体Wistar大鼠18只,受体SD大鼠48只随机分为自体移植组,异体移植组,免瘦抑制剂组,转化生长因子β1质粒组,每组12只.方法:免疫抑制剂组在移植前3 d开始腹腔内注射环孢霉素A(10 mg/kg),1次,d,直到处死.转化生长因子β1质粒组大鼠于局部股静脉两断端内注射40 μg/只的转化生长因子β1质粒.自体移植和异体移植组仅进行静脉移植.主要观察指标:于2周后进行影像学、组织学、免疫学检测.结果:自体移植组:内皮细胞扁平,核膜增厚.异体移植组;脱落内皮细胞及碎片,可见内膜下层.免疫抑制剂组:血管内皮细胞核膜增厚,广泛粗面内质网扩张.转化生长因子β1质粒组:血管内皮细胞可见粗面内质网扩张,线粒体空泡变.相邻细胞间可见紧密连接.转化生长因子β1质粒组优于免疫抑制剂组和异体移植组.4组混合淋巴细胞培养A值分别为1.07±0.14、4.15±0.67、1.77±0.23和1.38±0.23.转化生长因子β1质粒组与异体血管移植组和免疫抑制剂组比较,有显著差异(P<0.05).异体血管移植组对供体大鼠淋巴细胞的刺激呈正常反应,转化生长因子β1质粒组对供体鼠淋巴细胞的刺激反应性减弱,与免疫抑制剂组比较,差异有显著性意义(P<0.05).结论:局部注射转化生长因子β1质粒可以协同减轻移植后产生的免疫排斥反应.     

同种异体骨移植愈合生物学特征

同种异体骨移植在宿主的愈合过程与自体骨移植有许多不同,主要表现为同种异体移植骨的成骨与血管穿入的速度和程度都不及自体骨,且同种异体移植骨更易被吸收。移植骨与宿主的愈合分为3型。Ⅰ型:愈合过程与自体骨移植相似,没有疲劳骨折,移植16周后移植骨与宿主骨连接,移植骨的成骨量,塑形均与自体骨移植接近,表明供体与宿主的组织相容性抗原(MHC)差异很小或没有差异。Ⅱ型:愈合过程缓慢,表现为(1)较多发生骨不连接或延迟连接;(2)移植骨周边被吸收或移植骨体积变小;(3)移植骨内部被吸收范围扩大,延伸至间质板层;(4)移植骨机械强度明显下降,表明供者与宿主MHC有较大差异。Ⅲ型:没有修复征象,移植骨迅速地被吸收、骨折、骨不连接。同种异体骨移植愈合生物学过程不同于自体骨移植,其愈合主要是依靠骨的爬行替代,其次为骨诱导成骨作用。     

胸腺诱导对大鼠肝移植的免疫影响

背景:异体肝脏移植由主要组织相容性抗原可诱发免疫排斥反应,免疫抑制剂会对机体产生不良反应,目前通过移植前对供受体进行预处理等策略,可以诱导受体产生免疫耐受,在移植中具有广阔的应用前景.目的:用大鼠胸腺诱导的方法,对大鼠肝移植进行处理,从胸腺诱导方面,研究胸腺诱导与移植免疫排斥反应的关系.方法:供体为清洁级雄性SD大鼠40只,受体为清洁级雄性Wistar大鼠30只和清洁级雄性SD大鼠10只,分为同种基因移植组、同种异基因移植组、环孢素组、胸腺修饰诱导组,各10对.采用改良Kamada二袖套法并加以改进建立稳定的大鼠原位肝移植模型,造模后,环孢素组每天腹腔注射环孢索(50 mg/kg),持续5 d,胸腺修饰诱导组胸腺左右两叶各注射50 μL主要组织相容性抗原,持续5 d,其他组不给予任何干预措施,记录各组大鼠生存时间并分别于移植后3,7,14,21,28 d进行病理学观察和混合淋巴细胞培养.结果与结论:经胸腺修饰诱导的肝移植大鼠生存时间则显著延长(>60d),移植肝内组织损伤程度显著减轻,肝脏局部免疫排斥反应减少,淋巴细胞减少,肝移植效果与同种基因移植大鼠接近,且优于环孢素干预大鼠(P<0.05).提示胸腺诱导可减轻大鼠肝移植后产生的免疫排斥反应.     

骨髓细胞胸腺内注射对大鼠小肠移植急性排斥反应的影响

目的了解异基因骨髓注射在大鼠小肠移植中的免疫耐受作用和意义.方法选用近交系大鼠F344/N和Wistar/A进行全小肠异位移植,试验组在行异基因移植前7 d取供体骨髓细胞（BMC）行受体胸腺内注入,对照单纯同基因及异基因大鼠移植模型了解异基因供体骨髓在受体胸腺内注射能否减少移植后急性排斥反应的发生.结果异基因大鼠异位全小肠移植术后第3、5、7天可出现典型的轻、中、重度排斥反应,而同基因组和试验组未出现排斥反应.异基因移植组术后3 d血清可溶性白细胞介素-2受体（sIL-2R）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平明显高于其他组（P＜0.01）,且随排斥反应的加重,进一步增高.而异基因骨髓胸腺内注射组血清sIL-2R及TNF-α水平仅在第3、5天轻度升高,并呈下降趋势,与同基因移植组无显著性差异（P＞0.05）.结论 移植术前7 d异基因供体骨髓在受体胸腺内注射能明显减少小肠移植后急性排斥反应的发生;血清sIL-2R和TNF-α检测有可能作为早期诊断小肠移植急性排斥反应的敏感免疫指标.     

同种异体骨软骨柱移植治疗关节软骨缺损

背景:同种异体骨软骨移植修复关节软骨损伤可以解决自体骨软骨来源有限的问题,但存在免疫排斥问题.目的:观察以深低温保护剂保护的同种异体骨软骨柱移植修复兔关节软骨缺损的效果,并与自体关节软骨移植作比较.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008 05/10在武汉协和医院骨科实验室完成.材料:24只成年健康新西兰兔中8只用于异体骨软骨柱的制备,16只随机分成同种异体移植组和自体移植组,每组8只.方法:使用横穿钉套筒提取兔股骨内侧髁骨软骨柱,将骨软骨柱在4℃条件下放入盛有10%二甲基亚砜的冻存管中2 h,将冻存管移入程序冷冻仪内以1℃/min速率降至-75℃,放入-196℃液氮罐底部保存3周备用.用横穿钉钻头在兔左膝关节股骨内侧髁垂直于软骨面制造缺损,缺损深4 mm,直径4.45 mm,自体移植组取右膝关节内侧髁骨软骨柱植入到左侧膝关节相应缺损处,异体移植组将经过程序性深低温冷冻保存的同种异体骨软骨柱移植到相应缺损处.主要观察指标:术后12周观察兔关节活动度、修复组织的质地等情况.以苏木精-伊红染色观察关节软骨组织的病理变化,以半定量改良Wakitani score法进行评估.以免疫组织化学染色观察Ⅱ型胶原分泌情况.结果:两组实验动物关节活动度正常.异体移植组移植处关节软骨面较光整,与周围正常关节软骨高度一致,结合紧密,颜色接近,与自体移植组相似.两组移植后,兔关节缺损处被透明软骨覆盖,潮线整齐,细胞排列有序,分泌大量基质,异体移植组移植处软骨深层及软骨下骨处可见微小裂隙,未见淋巴细胞和浆细胞浸润.同种自体与异体骨软骨移植组Wakitaniscore评分结果无统计学差异,总分接近,修复软骨Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均强阳性.结论:冷冻同种异体骨软骨柱移植可修复全层小面积关节软骨缺损,术后近期软骨细胞存活,可分泌软骨基质,未见明显排斥反应,与自体骨软骨柱修复的兔关节软骨缺损在组织学上相近.