RNA干扰技术在肿瘤基因治疗中的研究进展

RNA干扰(RNAi)技术是利用双链RNA,高效、特异性降解细胞内同源信使RNA,从而阻断特定基因表达,使细胞出现靶基因缺失的表型。与反义寡聚核苷酸技术相比,RNAi技术具有更高的特异性,是更有效的方法。目前,RNAi技术是肿瘤基因治疗领域的一个热点技术,它抑制癌基因表达及肿瘤血管生成,沉默细胞凋亡相关基因、肿瘤转移相关基因及肿瘤耐药相关基因,在肿瘤基因治疗领域显示出广阔的应用前景。     

RNA干扰技术在肿瘤基因治疗中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,也称为基因沉寂疗法(Gene Silencing),是利用双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)诱发对宿主细胞特异性RNA转录的抑制,从而抑制特异目的基因表达的方法.也即双链RNA在细胞内RNA酶Ⅲ的作用下,被裂解成21～23个核苷酸(nucleotide,nt)的小干扰性RNA(small interference RNA,siRNA),进而启动细胞内RNAi反应,特异性地阻断靶基因表达的过程.     

RNAi的研究进展

RNAi(RNA interference,即RNA干扰)是指通过反义RNA与正链RNA形成双链RNA特异性地抑制靶基因的现象,它通过人为地引入与内源靶基因具有相同序列的双链RNA(有义RNA和反义RNA),从而诱导内源靶基因的mRNA降解,达到阻止基因表达的目的[1-2].RNAi是最近几年发现和发展起来的新兴基因阻断技术.     

RNA干扰与卵巢癌基因治疗

RNA干扰(RNAi)是由外源性或内源性双链RNA诱发的转录后基因沉默机制,能高效特异性抑制突变基因表达,恢复正常基因功能。卵巢癌的发生是多基因参与并经多阶段演进而形成的疾病,RNAi现象的发现为卵巢癌的基因治疗提供了一种新的思路。通过RNAi技术可抑制卵巢癌致癌基因的表达,阻断细胞凋亡与分裂,增强卵巢癌传统化疗药物的敏感性,抑制肿瘤的浸润与转移,RNAi可能成为卵巢癌基因治疗的新策略。本文就RNAi的分子机制、特性以及RNAi技术在卵巢癌基因治疗领域的应用进行综述。     

RNA干扰技术在肿瘤基因治疗中的研究现状

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是利用双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),高效、特异性降解细胞内同源信使RNA(messenger RNA,mRNA),从而阻断特定基因表达,使细胞出现靶基因缺失的表型.1998年Fire等[1]首次应用RNAi技术将dsRNA正义链与反义链的混合物注入线虫体内,结果发现注入dsRNA比单独注入单链RNA引起的基因沉默要强得多,并可导致子一代同源基因的沉默.     

RNA干拢与卵巢癌基因治疗

RNA干扰(RNAi)是由外源性或内源性双链RNA诱发的转录后基因沉默机制,能高效特异性抑制突变基因表达,恢复正常基因功能。卵巢癌的发生是多基因参与并经多阶段演进而形成的疾病,RNAi现象的发现为卵巢癌的基因治疗提供了一种新的思路。通过RNAi技术可抑制卵巢癌致癌基因的表达,阻断细胞凋亡与分裂,增强卵巢癌传统化疗药物的敏感性,抑制肿瘤的浸润与转移,RNAi可能成为卵巢癌基因治疗的新策略。本文就RNAi的分子机制、特性以及RNAi技术在卵巢癌基因治疗领域的应用进行综述。     

RNA干扰及其在肿瘤研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是近年发展起来的一种阻抑基因表达的新方法,该技术通过双链RNA的介导,可以特异性地阻断或降低相应基因的表达。在肿瘤研究中,通过RNAi技术可以选择性地抑制人类肿瘤相关基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长。该技术的应用为癌症的基因治疗提供了新的方法。本文综述了小干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)的生成和作用机制以及RNAi在肿瘤研究中的应用。     

RNAi在肿瘤治疗中应用的研究进展

RNA干涉(RNAi)是近年发展起来的一种阻抑基因表达的新方法,该技术通过双链RNA的介导,可以特异性地阻断或降低相应基因的表达。在肿瘤研究中,通过RNAi技术可以选择性地抑制人类肿瘤相关基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长。该技术的应用为癌症的基因治疗提供了新的方法。本文综述了RNAi在肿瘤研究中的应用。     

RNA干扰技术及应用

目的综述RNA干扰(RNAi)技术的发现、作用机制、作用特点以及应用研究新进展。方法检索国内外有关RNAi技术研究资料并整理总结。结果RNAi技术是利用双链小片段RNA高效、特异性的降解细胞内同源mRNA,从而阻断体内基因表达,使细胞出现靶基因缺失的表型。结论RNAi技术是一项较新的研究技术,可用于基因功能、基因治疗以及新的药物筛选等研究领域。     

VEGF基因RNA干扰质粒的构建与鉴定

目的构建干扰血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因RNA表达的重组质粒。方法设计3组针对VEGF基因的核糖核酸干扰（RNA interference,RNAi）序列,应用基因重组技术克隆入载体pcDNA3.1中,重组质粒分别命名为pcDNA3.1-VEGF-LH1、pcDNA3.1-VEGF-LH2和pcDNA3.1-VEGF-LH3,用DNA直接测序法和双酶切法鉴定构建的重组质粒。结果 DNA测序证实克隆入载体pcDNA3.1（-）中的序列正确,双酶切证实RNA干扰序列正确插入载体pcDNA3.1（-）。结论成功构建针对VEGF基因的RNAi质粒,为进一步研究该RNAi质粒在脉络膜新生血管形成中的作用奠定了基础。     

小分子RNA在原发性胆囊癌治疗中的研究进展

RNA干扰现象自从被发现以来,已经在疾病的基因治疗方面取得了极大的成功。RNA激活(RNAa)是最近发现的一种由双链RNA诱导促使目的基因表达上调的现象,与RNA干扰有相似的分子特征和作用特点。虽然RNAa的作用机制尚未完全清楚,但其在肿瘤的治疗中具有显著的应用潜力。该文对RNA干扰和RNA激活在原发性胆囊癌治疗中的应用前景予以概述。     

RNA干扰在肾间质纤维化研究中的应用

肾间质纤维化(RIF)是所有慢性进行性肾脏疾病进展到终末期肾衰竭的共同形态学特点。RNA干扰(RNAi)是近年发展起来的一种新兴基因沉默技术,它是由双链RNA介导的靶向基因序列特异性转录后沉默机制。目前RNAi技术已广泛应用于基因功能研究及疾病治疗,在RIF的疾病发生机制方面也取得了一些进展,现综述如下。     

短发夹RNA及其在头颈肿瘤研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是一种分子生物学上由双链RNA(dsRNA)诱发的特定基因沉默现象。随着该项技术的不断发展,以质粒、病毒为载体表达的短发夹RNA(shRNA)具有更强大的基因沉默作用,可使目的基因在细胞内稳定增殖并获得长效剔除效应。近年来,以shRNA为工具的RNAi技术开始在体内外各项实验中应用并取得突破,包括功能基因组学、药物靶点筛选、细胞信号转导通路分析及疾病治疗等,尤其在肿瘤领域显示出广阔的应用前景。     

RNAi在大肠癌基因治疗中的研究现状

RNA干扰（RNAinterference）即转录后基因沉默，是由外源或内源性的双链RNA（doublestandedRNA）导入细胞而引起同源的mRNA降解，进而抑制其相应的基因表达。作为一项新技术，目前广泛地应用于生物体基因功能研究和多种肿瘤的研究。现针对大肠癌有关基因诊疗进行了积极的探索，并取得了突破性的进展。     

RNA干扰与呼吸系统疾病的治疗

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的由特定酶参与的特异性基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。RNAi作为一种强大的基因沉默技术,具有高效性和高特异性等特点,被广泛应用于生物医学等各个研究领域,其在呼吸系统疾病的治疗研究方面也取得了很多突破性的进展,广泛用于病毒感染、肺癌、哮喘等疾病的分子生物学机制的研究与治疗。本文对RNAi技术的发现、作用机制及在呼吸系统疾病治疗上的应用进行了综述。     

PPARγ基因RNA干扰慢病毒载体构建及干扰Leydig细胞株建立

目的：通过靶向过氧化物酶体增殖因子活化受体PPARγ基因阻断,建立稳定干扰Leydig细胞株TM3。方法：采用慢病毒四质粒包装系统构建特异靶向小鼠PPARγ基因的RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒载体,用以建立PPARγ基因稳定沉默的Leydig细胞株TM3。结果：经测序证实,成功构建编码表达PPARγ短发夹结构RNA（sh—PPARγ）的慢病毒载体LV3-sh—PPARγ及对照载体LV3-Control。病毒载体转导Leydig细胞株TM3后,荧光显微镜证实细胞转染效率〉90％,Real—timePCR测定实验组TM3细胞PPARγ的mRNA表达比未处理细胞下降70％（P〈0．05）,对照组与未处理细胞差异无显著性（P〉0．05）。Westernblot显示实验组PPARγ蛋白表达量比未处理细胞明显下降（P〈0．05）,对照组与未处理细胞差异无显著性（P〉0．05）。结论：成功构建特异靶向小鼠PPARγ基因的RNAi慢病毒载体LV3-sh。PPARγ及对照载体LV3-Control,并成功建立PPARγ表达稳定干扰的小鼠Leydig细胞株TM3,为PPARγ生殖毒性研究提供了新的细胞模型。     

RNA干扰原理及其在肿瘤研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是一种在动植物中广泛存在的、由双链RNA诱发的、同源mRNA特异性沉默的过程,包括小干扰RNA生成的起始阶段及靶mRNA降解的效应阶段。已成为分子生物学研究中最为活跃的热点之一;在肿瘤研究中,RNAi在抑制肿瘤抗凋亡基因、沉默癌基因、调控细胞周期、抗血管生成、增强放化疗敏感性及基因功能研究等有较广泛的应用。     

Cav2.2e37a基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建针对Cav2.2e37a基因的RNAi慢病毒载体,为抑制Cav2.2e37a基因表达治疗神经痛的实验研究打下基础。方法针对已经筛选确定的Cav2.2e37a基因RNAi有效靶序列,构建pLL3.7-Cav2.2e37a干扰质粒,测序鉴定。pRsv-REV,pMDlg-pRRE,pMD2G,pLL3.7-Cav2.2e37a共转染293T细胞,Real-time PCR测定病毒转导滴度。结果成功构建Cav2.2e37a shRNA的慢病毒载体LVshCav2.2e37a。浓缩病毒悬液的滴度为1×10^9Tu/ml。结论成功构建了Cav2.2e37a基因的RNAi慢病毒载体。     

RNAi逆转肾癌细胞MDR1基因表达导致的替尼泊苷耐药

目的：研究RNA干扰（RNAinterference,RNAi）对肾癌细胞多药耐药基因（MDRl）表达的抑制作用,并分析干扰前后肾癌细胞对替尼泊苷（VM一26）敏感性的变化。方法：根据MDRI基因设计3条小干扰RNA（smalJinterferingRNA,siRNA）序列,在质粒的介导下转染肾癌A498细胞,RT—PCR法分析转染前后MDRlmRNA表达水平,筛选出干扰效率最高的siRNA序列;进而利用慢病毒包装siRNA重组质粒,感染A498细胞,RT—PCR法筛选沉默效果最好的细胞株进行克隆,Westernbolt法检测MDRl蛋白表达水平,MTT法对比干扰前后替尼泊苷对细胞半抑制浓度（ICSO）的变化。结果：3条siRNA序列均能不同程度地抑制细胞MDRl基因的表达,其中siRNA一1序列能更有效地封闭MDRl基因,使MDRlmRNA表达水平下降67％;筛选出的稳转细胞株与未干扰细胞株相比,MDRl蛋白表达量明显下降,并使替尼泊苷对细胞的IC50降低约79．8％,差异具有统计学意义（P〈O．01）。结论：RNAi可抑制肾癌A498细胞MDRl基因的表达从而逆转其对替尼泊苷的耐药,使肾癌细胞化疗耐药逆转成为可能。