内皮抑素对裸鼠人舌鳞癌颈淋巴结转移的影响及机制

目的观察内皮抑素(endostatin)对人舌鳞癌肿瘤(squamous cell carcinoma)的颈淋巴转移的影响,并对内皮抑素抑制脉管生成可能的机制进行探讨。方法应用Tca83舌鳞癌细胞系建立裸鼠舌癌原位移植模型,将裸鼠随机分为处理组与对照组,A组为对照组,处理组分为B、C两组,分别给予A组皮下注射生理盐水0.1ml;B组皮下注射内皮抑素10mg/kg/d;C组皮下注射内皮抑素20mg/kg/d。每日注射药物一次,连续给予两周后处死所有动物,采取肿瘤及淋巴结标本进行病理学分析,采用HE染色及CK免疫组化染色观察舌癌动物模型肿瘤淋巴转移特点,采用LYVE-1免疫组化染色法标记病灶中的淋巴管来计数其在病灶当中的密度,采用VEGF-C免疫组化染色法检测VEGF-C的表达情况并计算其阳性率。结果 1高剂量组裸鼠较对照组和低剂量组淋巴转移率低,C组为0%,B组为20%,A组为50%,P<0.05。高剂量内皮抑素对肿瘤淋巴转移具有抑制作用。进一步计算各组标本微淋巴管密度,A组为6.2±0.92个/视野,B组为4.0±1.05个/视野,C组为2.2±0.92个/视野,P<0.01。表明内皮抑素对肿瘤淋巴管生成具有抑制作用,且随剂量增加,抑制作用增强。2A组VEGF-C阳性率为80%;B组VEGF-C阳性率为40%;C组VEGF-C阳性率为20%,P<0.02。高剂量内皮抑素可以下调肿瘤细胞VEGF-C的表达。结论 1肿瘤淋巴管生成在恶性肿瘤的侵袭转移过程中具有重要作用,高剂量内皮抑素可以抑制肿瘤淋巴管生成,从而抑制肿瘤淋巴转移。2内皮抑素可能是通过下调细胞VEGF-C的表达进而抑制肿瘤淋巴管生成。     

链球菌722制剂对人舌鳞癌Tca8113细胞直接作用的实验研究

本文作者报告了链球菌７２２制剂对人舌鳞状细胞癌Ｔｃａ８１１３细胞直接作用的观察，结果表明，虽然癌细胞在０．２～１．０ＫＥ／ｍｌ浓度持续作用下，丧失了集落形成的能力，镜下连续观察见细胞生长抑制；抽去７２２后细胞立即恢复原生长速度增殖。在荷人舌癌裸小鼠的瘤内、瘤周和腹腔内注射，由于裸小鼠先天缺乏Ｔ细胞免疫功能，均未见移植瘤缩小。提示：７２２对癌细胞的直接作用是暂时和可逆的，其抗癌作用主要是通过促进机体     

Zyflamend对人舌鳞癌细胞系Tea83增殖和凋亡的影响

目的 观察Zyflamend对人舌鳞癌细胞系Tca83的增殖和凋亡的影响.方法 采用MTT方法和Annexin V-FITC/PI 染色法观察Zyflamend对Tca83的增殖和凋亡的影响.结果 0.1、0.5、1μl/ml Zyflamend对Tca83细胞增殖有明显的抑制作用,随着Zyflamend浓度增大,抑制作用逐渐增强,呈一定浓度依赖关系.24h和48h时,0.1μl/ml Zyflamend诱导Tca83细胞凋亡率未见明显增加(P>0.05);0.25μl/ml Zyflamend诱导Tca83细胞凋亡率显著增加(P<0.01).结论 Zyflamend对人舌鳞癌细胞系Tca83有抑制增殖的作用,0.1μl/ml Zyflamend能够诱导Tca83细胞凋亡.     

毫米波对人舌鳞癌细胞增殖抑制作用的研究

目的　探讨毫米波对人舌鳞癌细胞增殖的影响。方法　用频率为 3 6.9GHz、功率密度为 5～ 2 5mW /cm2 的毫米波 (mmW )照射人舌鳞癌细胞。采用四唑盐比色试验 (MTT测定法 ) ,观察mmW对人舌鳞癌细胞增殖的影响。结果　mmW以时间依赖、非功率密度依赖方式抑制Tca8113细胞增殖 ( p <0 .0 1) ,导致癌细胞致死性变化。结论　mmW抑制人舌鳞癌细胞Tca8113增殖 ,可辅助治疗舌鳞癌。     

中药"参阳"方对人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用

目的:前瞻性研究表明,中药“参阳”方能够延长口腔癌患者的生存期并提高生存率,但其抗癌机制尚不十分明确。本研究的主要目的是观察中药“参阳”方对人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将体外培养的人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞接种于裸鼠皮下,建立人舌鳞癌移植瘤模型,共48只,随机分为4组:“参阳”方A组、B组、阳性对照组和阴性对照组。采用灌胃方法进行药物干预,共30d,观察各组的抑瘤效果及对裸鼠一般状况、生存时间和脾脏指数的影响。结果:每只鼠每天喂养“参阳”方72.8mg,能轻度抑制Tca8113细胞移植瘤的生长,抑瘤率为22.04%;裸鼠的脾脏指数明显提高(t检验,P<0.05);生命延长率为18.9%。主要脏器的组织学检查未见病理改变,表明所用剂量药物无明显的毒副反应。结论:“参阳”方对荷瘤鼠的直接抗癌作用较弱,其对口腔鳞癌的治疗作用可能是通过调节机体的免疫功能而实现。     

吉西他滨对舌鳞癌细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的:了解吉西他滨对舌鳞癌Tca8113细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)和碘化丙锭(PI)染色法,检测细胞增殖抑制率和细胞周期变化;采用TRAPPCRELISA法检测细胞端粒酶活性,PAGE-银染法显示端粒酶电泳图像。数据采用SPSS10.0中独立样本t检验法或单因素方差分析法进行统计学检验。结果:吉西他滨能够显著抑制Tca8113细胞增殖,并具有时间和浓度依赖性,5.0μg/ml组72h增殖抑制率均值为72.2%,高于0μg/ml组(F=161.854,P<0.05)。细胞周期检测显示:吉西他滨作用72h后,S期细胞比例下降,5.0μg/ml组均值为18.1%,低于0μg/ml组38.5%(t=5.801,P<0.05)。TRAPPCRELISA法检测细胞端粒酶活性(A值)随吉西他滨作用浓度增加和时间延长而下降:72h,0和5.0μg/ml组A值分别为1.32±0.12、0.28±0.02(F=811.208,P<0.05)。结论:吉西他滨能够有效抑制Tca8113细胞增殖,可以降低细胞端粒酶活性。     

Stat3抑制剂Stattic抑制人舌鳞癌细胞增殖的机制研究

目的:观察Stat3小分子抑制剂Stattic对人舌鳞癌细胞的增殖抑制作用.方法:用不同浓度Stattic处理人舌鳞癌细胞SCC-4与SCC-25,采用CCK-8试剂盒检测Stattic对两株细胞增殖的影响.采用Western Blot方法检测Stat3 Ser727,Stat3 Tyr705磷酸化水平以及Rictor...     

人内皮抑素基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞生长的影响

目的 探讨人内皮抑素(hES)基因导入舌鳞癌Tca8113细胞后的表达情况及其抑制肿瘤生长效应。方法 以脂质体为载体将hES基因导入Tca8113细胞,通过动物实验观察转基因Tca8113细胞移植瘤生长情况,免疫组织化学检测肿瘤组织中hES及血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达,Weidner法行肿瘤微血管密度(MVD)计数,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率。结果 移植瘤生长第27天,实验组肿瘤组织中hES的表达率高于对照组(P<0.01);VEGF的表达率低于对照组(P<0.01)。实验组MVD计数低于对照组(P<0.01),而肿瘤细胞凋亡率则明显高于对照组(P<0.01)。hES基因转染对肿瘤生长的抑制率78.9％。结论 hES基因转染舌鳞癌细胞可体内诱导hES蛋白高效表达并具有抑制移植瘤生长的效应。     

人舌鳞癌Tca8113细胞荷瘤裸鼠体内诱导耐药性的实验研究

目的：探讨人舌鳞癌细胞荷瘤裸鼠体内化疗药物持续刺激状态下,肿瘤的生长及其耐药性的变化情况。方法：采用BALB／c-nu／nu裸鼠皮下接种Tca8113细胞悬液,待裸鼠成瘤后,采用卡铂（Carboplatin,CBP）进行小剂量长期暴露法诱导肿瘤耐药,以观察体内肿瘤耐药性的产生、肿瘤的生长变化及其各种耐药蛋白的表达。用免疫组化法检测部分耐药蛋白表达情况,RT-PCR检测相关耐药基因表达情况。结果：诱导后Tca8113／卡铂在免疫组化和RT-PCR检测中,MRP、GST-π等表达升高,TopoⅡ表达降低。结论：利用荷瘤裸鼠体内给药诱导肿瘤耐药性的产生可以更好地模拟临床舌鳞癌MDR的发生发展过程及其生物学特性,为多药耐药性及其逆转的进一步研究提供了一个有价值的研究平台。     

p75NTR对舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的影响

目的:探讨p75NTR基因对舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的影响。方法:流式细胞技术分选Tca8113细胞系中p75NTR阳性细胞及阴性细胞,对阳性细胞用脂质体瞬时转染荧光标记的p75NTR siRAN,实时定量RT-PCR检测p75NTR基因,western blot检测p75NTR蛋白表达;流式细胞仪Annexin V/PI双染色标记法进行凋亡检侧;MTT检测细胞增殖的影响。结果:p75NTR表达阳性的Tca8113细胞经p75NTR siRNA转染后p75TNR的表达被抑制;细胞凋亡率明显增加(P<0.05),细胞增殖率明显降低。结论:p75NTR在Tca8113细胞凋亡中具有调控作用。     

反义hTR对舌鳞癌细胞系Tca8113作用的初步探讨

目的：观察反义hTR对人舌鳞癌细胞系Tca8113的影响及其与细胞周期和凋亡的关系。方法：脂质体介导真核表达载体PBBS212－hTR转染Tca8113细胞系，运用流式细胞仪技术观察细胞周期的改变和凋亡，并结合免疫组化和原位杂交技术分析转染前后某些基因表达的变化，结果：转染反义hTR的Tca8113细胞克隆生长减缓，群体倍增时间较未转染和转染空质粒组明显延长，流式细胞仪显示转染细胞PI指数下降，有亚二倍体凋亡峰出现，转染后细胞p21基因表达水平显著增高，裸鼠移植瘤实验显示转染后的Tca8113致瘤性减弱，结论：反义hTR可引起细胞通过细胞周期关卡受阻而显著抑制Tca8113细胞的生长，同时激活了某些凋亡程序而导致细胞凋亡，端粒酶可能是肿瘤基因治疗的理想靶点。     

人共刺激分子4—1BBL表达载体的构建及转染Tca8113细胞的研究

目的：克隆人肿瘤坏死因子配体超家族tumor necrosis factor superfamily，TNFSF）成员4—1BBL基因，构建其真核表达载体，并检测4—1BBL基因在Tca8113中的表达。方法：从淋巴细胞中提取RNA，用RT—PCR方法将4—1BBL的编码序列cDNA扩增。然后将该基因的编码序列插入真核荧光蛋白载体pEGFP—C1质粒中，构建成最终的表达载体DEGFP—C1—4—1BBL。运用脂质体方法将pEGFP—C1—4—1BBL转染Tca8113细胞，转染24h后，荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达．RT—PCR和免疫印迹检测4—1BBL在该细胞中的表达。经G418筛选后。用有限稀释法建立稳定高表达的带有4—1BBL基因的Tca8113细胞系。结果：从淋巴细胞中提取的RNA经RT—PCR扩增出目的基因4—1BBL，其全长大小为768bD。测序鉴定该序列与GenBank中的序列相同。转染pEGFP—C1—4—1BBL载体的靶细胞Tca8113中．荧光显微镜下可见其表达绿色荧光蛋白，RT—PCR方法检测到目的基因4—1BBL的768bp大小的cDNA扩增产物。裂解的4—1BBL／rca8113基因转染细胞膜蛋白中相对分子质量约27．5Kd的特异性条带。结论：转染4—1BBL基因细胞株的建立．为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础。     

TRPM1在舌癌组织及Tca8113细胞中表达的研究

目的 观察瞬间受体势M亚基1(Transient Receptor Potential Melastatin-1,TRPM1)在舌癌组织及舌癌Tca8113细胞系中的表达情况。方法 选取25例舌癌组织作为实验组,15例正常舌组织作为对照组,应用免疫组化及Western-blot的方法检测TRPM1蛋白在舌癌组织及Tca8113细胞与正常舌组织中的表达;应用RT-PCR方法检测TRPM1 mRNA在舌癌细胞与正常舌组织中的表达。结果 免疫组化实验结果显示,23/25例舌癌组织中TRPM1呈强阳性表达,2/25例呈阴性表达;12/15例正常舌体组织中TRPM1呈阴性表达,3/15例呈弱阳性表达。TRPM1在舌癌与正常舌组织中的表达有显著性差异(P<0.05);Western-blot实验显示舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113细胞中TRPM1蛋白的表达水平高于其在正常舌组织的表达;RT-PCR实验结果也证实TRPM1 mRNA在Tca8113细胞中的表达高于正常舌组织。结论 TRPM1与舌癌的发生可能存在相关性。     

TRPM8在舌癌组织及Tca8113中的表达及其意义

目的 观察瞬时受体电位M8(transient receptor potential melastatin type 8,TRPM8)在舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113中的表达,探讨其在肿瘤生成与发展中的意义.方法 应用免疫组织/细胞化学方法检测TRPM8在舌癌组织、Tca8113细胞株、舌乳头状瘤组织和正常舌体组织中的表达;应用Western blot检测TRPM8在舌癌组织、Tca8113细胞及正常舌体组织中的表达.结果 免疫组织化学显示:TRPM8在舌癌组织中100%(22/22)呈强阳性表达;而在舌乳头状瘤组织中18%(2/11)呈强阳性表达,45%(5/11)呈弱阳性表达,余为阴性表达;正常舌体组织中10%(1/10)呈弱阳性表达,余为阴性表达.TRPM8在舌癌、舌乳头状瘤及正常舌体组织中的表达有统计学差异(P＜0.05).免疫细胞化学显示:TRPM8在舌癌细胞Tca8113中呈阳性表达.Western blot结果显示舌癌细胞及组织中TRPM8表达水平明显高于正常舌体组织.结论 TRPM8在舌癌中的高表达提示肿瘤的发生发展可能受到离子通道蛋白的调节.     

ADAM15在舌癌耐药细胞系Tca8113／ADM表达的实验研究

目的研究舌癌阿霉素（adriamycin;ADM）耐药细胞系Tca8113／ADM及其亲本细胞系Tca81t3肿瘤转移相关蛋白去整合素一金属蛋白酶15（adamalysin15,ADAM15）的表达水平,从肿瘤耐药的角度对舌癌的耐药与ADAM15的关系进行初步探讨。方法用蛋白免疫印迹技术检测Tca8113／ADM及Tca8113亲本细胞系的AD-AM15蛋白表达水平。结果ADAM15在Tca8113亲本细胞系和Tea8113／ADM细胞系的表达分别为0．244±0．231和1．217±0．494,两者差异具有统计学意义（P=0．001）。结论肿瘤转移相关蛋白ADAMt5在ToaS113／ADM细胞系的表达高于其在亲本细胞的表达,提示舌癌的阿霉素耐药细胞系的转移一洼可能比其亲本细胞更强。     

聚乙二醇-聚谷氨酸纳米微球介导双自杀基因对Tca8113细胞的杀伤作用

目的:观察聚乙二醇-聚谷氨酸(PEG-PBLG)纳米微球介导双融合自杀基因CDglyTK对舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用,为口腔鳞癌的治疗探索新的途径和方法。方法:以PEG-PBLG纳米微球为载体介导携双自杀基因CDglyTK的真核表达质粒pcDNA3.1( )-CDglyTK转染Tca8113细胞,通过RT-PCR检测CDglyTK的mRNA表达,MTT法描绘细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡并评价其疗效。统计分析采用SPSS10.0统计软件包完成,两样本均数的比较采用t检验。结果:PEG-PBLG纳米微球可介导质粒pcDNA3.1( )-CDglyTK转染Tca8113细胞,RT-PCR可检测到转染细胞中CDglyTK的mRNA表达。转染后,细胞在滴加5-FC和GCV后生长受到明显抑制,5-FC和GCV联合使用对Tca8113细胞的生长抑制作用明显优于单用5-FC或GCV。5-FC和GCV联合使用组,凋亡指数显著高于对照组(P<0.01),同时也高于单独使用5-FC或GCV组(P<0.05)。结论:PEG-PBLG纳米载体介导双自杀基因CDglyTK,可有效杀伤舌鳞癌Tca8113细胞,为舌鳞癌的基因治疗提供了新的途径。     

雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113作用的实验研究

目的 观察雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113的抑制作用,并与传统化疗药物顺铂的作用相比较,评价其作为抗头颈部恶性肿瘤药物的价值.方法噻唑蓝比色法检测雷公藤内酯醇和顺铂对Tca8113增殖的抑制作用,形态学观察经药物作用后细胞的生长情况.结果雷公藤内酯醇对Tca8113的增殖有明显抑制作用,呈量-效、时-...     

4、5、7-三羟基异黄酮对人舌癌细胞株Tca8113体外迁移侵袭能力的影响

目的观察4、5、7-三羟基异黄酮(Genistein)对舌癌细胞株Tca8113体外迁移侵袭能力及金属基质蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达的影响。方法以细胞划痕实验及Transwell侵袭实验检测Genistein对Tca8113细胞侵袭的影响;采用明胶酶谱法及凝胶图像分析系统检测Genistein对胞外分泌MMP-2蛋白的影响;采用WesternBlot及细胞免疫组织化学检测Genistein对胞内MMP-2蛋白表达的影响。结果Genistein可明显抑制Tca8113细胞的迁移侵袭,Genistein组与对照组之间有明显的差异(P<0.01);Genistein可使细胞外分泌的活性MMP-2及MMP-2表达下调,活性MMP-2下调18.75%,MMP-2下调28.31%;WesternBlot及细胞免疫组织化学均检测到Genistein组与对照组相比能降低胞内MMP-2蛋白的表达。结论Genistein可以明显抑制Tca8113舌癌细胞株的体外迁移侵袭能力,并减少Tca8113胞内和胞外分泌的MMP-2蛋白的表达。     

稀土离子镧与镨对人舌癌细胞的抑制作用

目的:观察稀土离子镧与镨(LaCl3、PrCl3)对体外培养的人舌癌Tca8113细胞的影响及两种稀土离子作用的差别。方法:!用三种浓度的LaCl3、PrCl3处理体外培养的人舌癌Tca8113细胞并测定细胞生长曲线、用MTT法检测细胞增殖活性、以琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:!Tca8113细胞经镧与镨离子作用后细胞增殖活性明显下降并出现明显的细胞凋亡;镧与镨对细胞的抑制作用比较差异无显著性。结论:稀土离子镧与镨对人舌癌Tca8113细胞有生长抑制作用,且作用呈剂量依赖性和时间依赖性;二者均能引起细胞凋亡,细胞凋亡率也呈剂量依赖性。两种稀土离子的细胞抑制作用差异无显著性。     

茶多酚对舌鳞状细胞癌细胞增殖和端粒酶催化亚基的抑制作用

目的观察茶多酚对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和端粒酶催化亚基(hTERT)的影响。方法实验分0.025、0.050、0.100、0.200g/L茶多酚组和空白培养基组。采用噻唑蓝比色法检测茶多酚对Tca8113细胞增殖的影响,逆转录PCR法检测hTERT基因表达,Western-blot法测定细胞中hTERT蛋白表达量。所有数据采用ANOVA单因素方差分析和Student-Newman-Keuls检验进行统计学检验。结果茶多酚能明显抑制Tca8113细胞增殖,并存在时间和浓度依赖性。72h时,0.200、0.100、0.050和0.025g/L茶多酚组细胞增殖抑制率分别为69.75%±3.24%、63.17%±3.19%、50.35%±4.21%和34.75%±3.71%。72h时,0.100、0.050g/L组hTERT mRNA和蛋白表达均低于空白对照组(P<0.05)。结论茶多酚能够抑制人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株的增殖及端粒酶催化亚基的转录和表达,抑制端粒酶催化亚基可能是茶多酚抗舌癌的机制之一。