P53,P16基因联合抑制人肝癌细胞生长的实验研究

目的;研究Ｐ５３、Ｐ１６基因联合抑制人肝癌细胞生长的效果。方法：利用基因重线的方法构建Ｐ５３、Ｐ１６的融合表达载体ＰｃＤＮＡ１６－５３,利用磷酸钙沉淀法半ＰｃＤＮＡ１６－５３融合表达载体转染到人肝癌细胞系ＳＭＭＣ７７２１细胞中,用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印染、,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印染及Ｗｅｓｔｅｒｎ印地检测Ｐ５３、Ｐ１６基因在人肝癌细胞中的转移、转录及表达,应用ＭＴＴ法检测Ｐ５３、Ｐ１６基因在人肝癌细胞中的     

反义C—myc寡核苷酸对人肝癌细胞SMMC—7721的生长抑制

针对Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ第二外显子起始妈ＡＵＧ及下游４个密码子设计合成了反义、正义及锚配寡核苷酸（ＯＤＮｓ）、并对合成的ＯＤＮｓ进行 硫代磷酸化修饰。在人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１培养体系中，对反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）抑制细胞增殖的作用进行了研究。发现（１）与正义和错配ＯＤＮｓ相比较，反义Ｃ－ｍｙｃＯＤＮ有明显抑制人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１生长的作用；（２）该生长抑制作用随ＡＳＯＤＮ剂量增加而增     

脂质体技术促进c—myc反义寡核苷酸导入人体肝癌细？…

目的 观察脂质体技术促进ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸导入人体肝癌细胞的作用。方法 采用新一代脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔ＾ＡＭＮＥ（ＬＲ）包裹针对肝癌表达基因ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）,借助ＦＩＴＣ荧光标记ｃ－ｍｙｃ－ＡＳＯＤＮ,应用细胞培养方法及荧光分光光度计以及荧光显微镜。结果 ＬＲ促进ＡＳＯＮ进入靶细胞并增强其对肿瘤细胞基因的特异性封闭作用。结论 脂质体作为一种安全、简便、有效的基因转移载体广     

肝细胞癌和癌旁肝组织中c—myc,N—ras癌基因的表达

应用生物素标记的ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓｃＤＮＡ探讨对２１例肝细胞癌石蜡切片进行原位杂交研究，结果显示，在２３１例肝癌组织中９例呈ｃ－ｍｙｃ阳性（４２．９％），４例为Ｎ－ｒａｓ阳性（１９％），而癌旁肝组织中仅有４例呈ｃ－ｍｙｃ弱阳性，１例呈Ｎ－ｒａｓ弱阳性，Ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ，ｍＲＮＡ多分布于肝癌细胞浆中，显微分光光度计检测结果显示，肝癌细胞中ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ，ｍＲＮＡ阳性信号明显高于癌六     

肝癌组织中bax,突变p53和c—myc蛋白测定

目的：检测肝癌组织中促细胞凋亡基因、癌基因和抗基因的治疗。方法 用免疫组化技术ＡＢＣ法,测定肝细胞中的ｂａｘ、ｐ５３和ｃ－ｍｙｃ蛋白。结果 ｐ５３基因突变、ｃ－ｍｙｃ基因激活导致肝癌的发生,同时,促细胞凋亡基因ｂａｘ基因增强,细胞凋亡剧烈。     

肝细胞癌和癌旁肝组织中c－myc，N－ras癌基因的表达

应用生物素标记的ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓｃＤＮＡ探针对２１例肝细胞癌石蜡切片进行原位杂交研究，结果显示，在２１例肝癌组织中９例呈ｃ－ｍｙｃ阳性（４２．９％），４例为Ｎ－ｒａｓ阳性（１９％），而癌旁肝组织中仅有４例呈ｃ－ｍｙｃ弱阳性，１例呈Ｎ－ｒａｓ弱阳性．Ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ，ｍＲＮＡ多分布于肝癌细胞胞浆中，显微分光光度计检测结果显示，肝癌细胞中ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ，ｍＲＮＡ阳性信号明显高于癌旁肝细胞．作者认为，ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ癌基因在肝细胞癌中均可呈较高水平表达．二者参与了肝癌的恶性转化过程并在肝癌的发生过程中相互协同以维持肝癌的恶性表型．     

人肝细胞总基因组DNA与c—myc,c—N—ras基因甲基化的改变

分别用两种方法研究了人原发性肝细胞癌基因组及特定癌基因片段的ＤＮＡ甲基化情况，并进行对比研究，以＾３Ｈ－ＳＡＭ掺入法研究总基团ＤＮＡ甲基化水平，以限制性内切酶切，Ｓｏｕｔｈ－ｅｒｎ吸印法对ｃ－ｍｙｃ，ｃ－Ｎ－ｒａｓ两种癌基因状况进行分析，结果：发现人肝细胞癌区和癌旁区组织内ｃ－ｍｙｃ，ｃ－Ｎ－ｒａｓ癌基因分别有不同程度的低甲基化，且有癌区总基因ＤＮＡ甲基化水平明显下降，本文结果提示，两种方法检测均     

人肝癌细胞肿瘤抑制基因转染对阿霉素敏感性的影响

目的为了解肿瘤抑制基因ｐ５３和Ｒｂ基因与肝癌对药物敏感性之间的关系，本实验用逆转录病毒介导将野生型ｐ５３或Ｒｂ基因导入人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１并观察其药物敏感性的改变。方法将野生型ｐ５３ｃＤＮＡ或ＲｂｃＤＮＡ克隆在逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ，转染人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１，筛选阳性克隆，同时以空载体ｐＬＸＳＮ和反义ｐ５３基因作为对照，免疫组化检测ｐ５３或Ｒｂ基因的表达。加入化疗药物４８ｈ后掺入３Ｈ－ＴｄＲ，１８ｈ后检测ＣＰＭ值。结果成功地构建了分别含野生型ｐ５３、Ｒｂ或反义ｐ５３的逆转录病毒载体，转染ＳＭＭＣ７７２１细胞系后获得了ｐ５３或Ｒｂ的表达；与亲代７７２１细胞相比，ｐ５３或Ｒｂ的表达阳性的７７２１细胞的生长速度均明显减慢，ｐ５３表达阳性的７７２１细胞对阿霉素的敏感性明显增强，同样条件下，Ｒｂ在７７２１细胞系内的表达则对阿霉素敏感性无影响。结论野生型ｐ５３基因转染能提高人肝癌７７２１细胞对阿霉素的敏感性     

N-ras和C-myc反义寡核苷酸与p53和p16基因联合抑制人肝癌细胞生长的实验研究

目的 :研究反义癌基因与抑癌基因联合抑制肝癌细胞生长的效果。方法 :利用基因重组方法构建携带 p1 6基因、p53基因的融合表达载体 (pc DNA1 6～ 53) ,利用基因合成仪体外合成 N- ras、C- myc反义寡核苷酸 ,并将 N- ras、C- myc反义寡核苷酸与 pc DNA1 6～ 53融合表达载体转染到人肝癌细胞系 SMMC772 1细胞中 ,观察肝癌细胞生长情况及软琼脂集落形成能力。结果 :联合治疗组肝癌细胞增殖速度最慢 ,软琼脂集落形成个数最少 ,只有 2个。结论 :利用相关基因联合治疗效果明显优于利用个别基因的治疗效果。     

重庆地区HBV、HCV感染的肝癌组织中癌基因与抑癌基因的表达

提示重庆地区肝癌患者ＨＢＶ和／或ＨＣＶ的感染与癌组织中癌基因和抑癌基因表达之间的联系。方法：应用免疫组织化学方法检测ＨＢＶ和ＨＣＶ抗原以诊断ＨＢＶ和ＨＣＶ感染,癌基因ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ－２和抑癌基因Ｐ５３蛋白的表达也用免疫 经方法检测。结果４６例肝癌患者中,ＨＢＶ感染３４例,ＨＣＶ感染２０例;其癌组织中ｒａｓ ｐ２１、ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ－２和Ｐ５３蛋白表达阳性率分别为５８．７％     

人红白血病细胞株c-myc/N-ras/P_(53)mRNA的表达及其与细胞生物学特性的关系

本实验用一定浓度的苦参碱作用Ｋ５６２细胞１６ｈ, ２４ｈ,４８ｈ,采用分子生物学Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ和Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ杂交技术分析ｃ－ｍｙｃ,Ｎ－ｒａｓ及Ｐ５３ ｍＲＮＡ在Ｋ５６２细胞诱导分化过程中表达水平改变,以探讨其表达水平与细胞生物学特性的关系。结果显示苦参碱作用Ｋ５６２细胞２４ｈ时,Ｎ－ｒａｓ基因ｍＲＮＡ表达活化;Ｐ５３－基因表达增强：作用４８ｈ时,ｃ－ｍｙｃ　ｍＲＮＡ水平表达明显受抑。说明苦参碱在诱导Ｋ５６２细胞分化启动时,能明显改变早期相关癌基因的表达。提示ｃ－ｍｙｃ,Ｎ－ｒａｓ和Ｐ５３等癌基因是一类重要的细胞增殖、分化调控因素。     

顺铂对肝癌细胞凋亡中wtp53,C—myc基因表达的影响

目的 研究顺铂对抑癌基因ｗｔｐ５３及癌基因Ｃ－ｍｙｃ在肝癌细胞凋亡过程中表达的影响。方法 用抑癌药顺铂诱导凋亡,通过细胞形态学检查,ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳证明调亡发生,采用原位杂交技术检测ｗｔｐ５３,Ｃ－ｍｙｃ基因在人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１凋亡过程中的表达。结果 ｗｔｐ５３基因在顺铂作用后１ｈ开始表达,６ｈ达到高峰,１２ｈ则明显下降。Ｃ－ｍｙｃ基因在顺铂作用后表达逐渐增强,１２ｈ达到高峰。结论     

p53、c-myc基因蛋白产物及增殖细胞核抗原在肝细胞癌中的同步检测

目的为弄清Ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ基因和细胞增殖活性与肝细胞癌（ＨＣＣ）发生发展的关系。方法应用免疫组化方法检测了３０例肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中Ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ基因蛋白产物以及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。结果Ｐ５３,ｃ－ｍｙｃ基因表达率分别为４６．７％和５６７％。ｐ５３在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级肝癌组织的表达率有递增趋势;而ｃ－ｎｌｙＣ基因在三级间的表达率却无明显区别。ｐ５３与ｃ－ｍｙｃ基因的同时表达率为２３３％。ＰＣＮＡ阳性细胞的分布在ＨＣＣ中呈四种类型：散在型、边缘型、镶嵌型和弥漫型。ＰＣＮＡ标记指数与ＨＣＣ的分级相关。ｐ５３阳性的ＨＣＣ中ＰＣＮＡＬＩ为５３．８±２４．３,阴性的为３３．１±１５．７（Ｐ＜０．０５）;ｃ－ｍｐｃ基因表达阳性与阴性的ＰＣＮＡＬＩ分别为３８、７±２２．９、４２．８±２１．６（Ｐ＞０．０５）。结论ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ基因均与ＨＣＣ的发生、发展有关,但两者之间无依存关系;伴有ｐ５３基因突变的ＨＣＣ中癌细胞增生活跃,恶性程度高。     

原发性肝癌中 HBV X、S、Pre-S、C 基因片段整合与 ras、myc 癌基因表达的关系

用地高辛标记的ＨＢＶ基因组探针检测了６６例肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）中ＨＢＶ的存在状态，从中筛选出３２例仅有ＨＢＶＤＮＡ整合的ＨＣＣ作为研究对象，进一步检测了ＨＢＶＸ基因、Ｓ基因、Ｐｒｅ－Ｓ、Ｃ基因ＤＮＡ片段的整合情况，并探讨了ＨＢＶ４种基因亚片段整合与ｒａｓ、ｍｙｃ癌基因表达的关系。结果显示，ＨＢＶＸ、Ｓ、Ｐｒｅ－Ｓ和Ｃ基因片段的整合率分别为８７．５％（２８／３２）、６２．５％（２０／３２）、６２．５％（２０／３２）和２５．０％（８／３２）。ｐ２１ｒａｓ、ｐ６２ｍｙｃ在ＨＣＣ中的表达率分别为５０．０％（２０／４０）、８１．２％（２６／３２）。通过对ＨＣＣ中４种ＨＢＶ基因片段整合与ｐ２１ｒａｓ、ｐ６２ｍｙｃ表达之间关系的研究，显示ｐ６２ｍｙｃ的表达与ＨＢＶＸ、Ｐｒｅ－Ｓ基因整合关系密切，ｐ２１ｒａｓ的表达则主要与ＨＢＶＸ基因整合有关（Ｐ＜０．０５）。提示ＨＢＶＸ、Ｐｒｅ－ＳＤＮＡ片段在宿主细胞染色体上的整合可能直接或通过其蛋白启动ｍｙｃ和（或）ｒａｓ癌基因的表达。     

癌基因H-ras在肝癌转移中作用初步研究

研究表明 ,癌基因Ｈ ｒａｓ与肿瘤转移有关。我们应用基因转移技术 ,研究了癌基因Ｈ ｒａｓ对肝癌细胞株ＳＭＭＣ 772 1细胞转移的影响 ,以探讨Ｈ ｒａｓ基因与肝癌转移行为的关系。1　材料与方法1 1　材料　　载体质粒ＰＳＶ2 -ｎｅｏ及载有活化的Ｈ ｒａｓ基因的重组质粒ＰＳＶ2 ｎｅｏ ｒａｓ由上海复旦大学生物物理系赠 ,人肝癌细胞株ＳＭＭＣ 772 1由本所细胞室提供。磷酸钙转染试剂盒购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司。ＤＡＣＤ ｐ2 1ｒａｓ抗体购自Ｓｉｇｍａ公司 ,它可特异性识别ｐ2 1Ｈ ｒａｓＣ末端 12 6～ 14 0氨基酸区域ｃⅣａｓｅ抗体 …     

抑癌基因MTS1真核表达载体的构建及其在卵巢癌细胞系HO-8910中的表达

目的：构建多肿瘤抑制基因１（ＭＴＳ１）的真核表达载体,将其转入人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中,并得到稳定表达,为进一步研究其对卵巢癌细胞的影响奠定实验基础．方法：利用ＢａｍＨⅠ与ＥｃｏＲⅠ从ｐＵＣ１９－ｐ１６质粒上切下ＭＴＳ１ｃＤＮＡ片段并克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３上,构建成ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６;利用脂质体（Ｆｕ－ＧＥＮＥＴＭ６）介导的基因导入法将ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６导入人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中;采用ＡＢＣ法对转染后的不同代数细胞进行免疫细胞化学检测,观察ｐ１６蛋白的表达．结果：成功构建了ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６,并进行酶切鉴定;转染后经Ｇ４１８筛选２ｗｋ出现阳性克隆８９１０－ｐ１６,并检测到其中有ｐ１６蛋白的稳定表达．结论：成功构建ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６,并可在人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中得到稳定表达．     

r—干扰素对过度增生的血管平滑肌细胞癌基因表达的抑制作用

本实验建立了兔腹主动脉球囊扩张（ＢＡ）动物模型。以地高辛标记的ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ癌基因探针进行ＢＡ术后血管段组织的原位杂交，以生物素标记的ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ探针以经ＢＡ组织培养液刺激的、培养的血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）进行细胞的原位杂交。结果显示：（１）ＢＡ术后再狭窄的血管段中ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ－Ｎ－ｒａｓ三种癌基因表达均增高，而且表达颗粒主要分布于粥样斑块再狭窄     

抑癌基因p53与癌基因mdm2在肺腺癌细胞系GLC—82中的相互作用

探讨抑癌基因ｐ５３和癌基因ｍｄｍ２在肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２中的相互关系和作用。方法；采用脂质体Ｌｉｐｏｆｅｔｉｎ介导的ＤＮＡ转染法。用含有野生型ｐ５３基因和ｍｄｍ２基因的ＰＤＯＲ－ｎｅｏ逆转录病毒载体分别或共转染ＧＬＣ－８２细胞。结果：转染野生型ｐ５３基因可阻止ＧＬＣ－８２细胞生长；抑制ＧＬＣ－８２细胞ＤＮＡ合成；软琼脂培养集落形成率减少及裸小鼠成瘤性减慢，而ｍｄｍ２转染可拮抗野生     

癌基因p21pan-ras和p62c-myc在皮肤T细胞淋巴瘤中的表达及其意义

目的：研究癌基因在皮肤Ｔ细胞淋巴瘤中的作用。方法：采用免疫组织化学技术检测了３２例蕈样肉芽肿／Ｓéｚａｒｙ综合征（ＭＦ／ＳＳ）皮肤组织中癌基因ｒａｓ和ｍｙｃ蛋白产物ｐ２１和ｐ６２的表达。结果：３２例ＭＦ／ＳＳ中有１２例ｐ２１阳性，有１７例ｐ６２阳性，有１０例同时示ｐ２１和ｐ６２阳性。其中有皮肤外播散的进展期ＭＦ／ＳＳ比局限于皮肤的早期ＭＦ／ＳＳ增高明显。结论：ｐ２１ｐａｎｒａｓ和ｐ６２ｃｍｙｃ的表达，与ＭＦ／ＳＳ细胞增殖转化相关。ｒａｓ和ｍｙｃ癌基因可能在ＭＦ／ＳＳ的多阶段发病过程中起协同作用。     

反义寡核苷酸抑制血管平滑肌细胞增殖

目的 证实反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸阻遏血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的效应。方法 人工合成正义、反义及错配反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸,转入体外培养的ＶＳＭＣ中,分别于作用后１～５ｄ进行细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定。结果加入反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸的ＶＳＭＣ增殖受到抑制,崦正义和错配反义寡核苷酸对ＶＳＭＣ增殖没有明显影响。结论 反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸可有效阻遏