紫外线诱导晶状体上皮细胞凋亡的实验研究

目的 探讨紫外线对体外培养的牛眼晶状体上皮细胞凋亡作用。方法 以TUNEL技术和DNA片段分析法研究紫外线照射牛晶状体后不同时间晶状体上皮细胞发生凋亡的情况。结果 经紫外线照射后,TUNEL法显示,照射组晶状体上皮细胞中有凋亡细胞,对照组晶状体上皮细胞中无明显的凋亡细胞;DNA片段分析发现照射组晶状体上皮细胞有DNA“梯状”图谱,而对照组晶状体上皮细胞未见DNA断裂现象。结论 紫外线可诱导牛晶状体上皮细胞发生凋亡。     

转化生长因子β诱导晶状体上皮细胞凋亡

目的 探讨转化生长因子β（ＰＧＦ－β）对体外培养的牛眼晶状体上皮细胞凋亡的作用。方法 ＭＴＴ法测定细胞经不同浓度ＴＧＦ－β作用后的增殖情况;以ＴＵＮＥＬ技术研究ＴＧＦ－β作用不同时间后细胞凋亡的变化。结果 ＴＧＦ－β可显著抑制晶状体上皮细胞的增殖,抑制率高达３５％。原位凋亡测定显示ＴＧＦ－β作用３０ｍｉｎ至８小时可明显诱导晶体上皮细胞凋亡,阳性细胞核由边缘着色逐渐变为整个核均匀 以。结论 转化生长     

人及小鼠白内障晶状体上皮细胞凋亡的超微结构

目的 探讨人老年性白内障及小鼠先天性白内障与其晶状体上皮细胞凋亡的关系。方法 用透射电镜观察４例老年性白内障患者及２例先天性白内障小鼠晶状体上皮细胞凋亡的超微结构,并分别与同类正常晶状体上皮细胞超微结构进行比较。结果 老年性白内障患者及先天性白内障小鼠晶状体上皮细胞中均可见凋亡细胞,而正常晶状体未见凋亡细胞。结论 人老年性白内障及小鼠先天性白内障的发生均与其晶体上皮细胞的凋亡有关。     

晶状体上皮细胞凋亡与过氧化氢诱导白内障形成研究

目的 探讨晶状体上皮细胞凋亡与皮质性白内障形成的关系。方法用200μmol／L过氧化氢(H2O2)诱导离体兔晶状体白内障形成,TUNEL法检测H：0：作用1,6,18,24,48h的晶状体上皮凋亡细胞,同时测定晶状体超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果H2O2作用1h,晶状体保持透明,未发现凋亡上皮细胞。随着作用时间的延长,凋亡上皮细胞数量逐渐增多,晶状体逐渐变混浊。SOD活性早期无变化,18h后逐渐降低。结论晶状体上皮细胞凋亡是皮质性白内障形成的细胞学基础,其发生先于晶状体抗氧化机制的变化。     

晶状体上皮细胞凋亡的基因调控

晶状体上皮细胞凋亡是除先天性白内障以外的所有类型白内障形成的细胞学基础,是防治除先天性白内障以外的其它类型白内障的关键。凋亡相关基因调控的研究是解决晶状体上皮细胞凋亡机制的重要途径,我们综述了关于晶状体上皮细胞凋亡基因调控方面的研究进展。     

牛磺酸抑制晶状体上皮细胞凋亡的实验研究

目的 探讨牛磺酸对过氧化氢所诱发的晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用。方法 取兔晶状体离体培养，分为对照组、H2O2氧化损伤组、氧化损伤同时加牛磺酸共3组，每组64只晶状体，分别以不同时限观察各组晶状体混浊情况，DNA缺口末端原位检测法(TUNEL法)及DNA片段分析检测各组晶状体上皮细胞凋亡情况。结果 牛磺酸组的晶状体混浊情况和晶状体上皮细胞凋亡率均明显低于H2O2氧化损伤组，与对照组差别无统计学意义。DNA片段琼脂糖凝胶电泳：H2O2组培养24、36、48及72h各时限均呈现凋亡细胞的典型梯状条带；而培养24h的对照组、牛磺酸组均未出现此变化而仅呈现正常细胞电泳条带。结论 牛磺酸可抑制H2O2氧化损伤所诱导的兔晶状体上皮细胞凋亡，从而延缓或减轻白内障形成。     

老年性白内障晶状体上皮细胞凋亡的DNA片段分析及TUNEL检测

目的 探讨老年性白内障晶状体上皮细胞凋亡的生化特征。方法 用ＤＮＡ片段分析及ＴＵＮＥＬ法共检测３１例老年性白内障患者晶状体上皮细胞凋亡。结果 ＤＮＡ片段分析显示,老年性白内障患者晶状体上皮细胞有ＤＮＡ“梯状”图谱,而健康成年人晶状体上皮细胞未见ＤＮＡ断裂现象;ＴＵＮＥＬ检测发现,老年性白内障患者晶本上皮细胞中有凋亡细胞,而健康成年人晶状体上皮中无明显的凋亡细胞。结论 老年性白内障发生与晶状体上皮细     

紫外辐射诱导人晶状体上皮细胞凋亡机制中TGF-β2/Smad-4细胞信号传导通路的作用

目的 了解转化生长因子β2（TGF-β2）/Smad-4细胞信号传导通路是否参与B波段紫外线（UVB）辐射诱导人晶状体上皮细胞系（HLECs）的凋亡过程,探讨HLEC紫外线损伤的可能保护机制。方法 HLECs预先在含0.01μg/ml AF-302-NA的培养基中孵育24h,行480mW/cm2的UVB照射。采用流式细胞仪（FCM）和TUNEL方法检测细胞凋亡,采用RT-PCR检测TGF-β受体（TβRs）和bax mRNA表达水平的变化,免疫荧光染色方法进行Smad-4蛋白定位。结果 UVB照射组HLECs凋亡比例明显高于对照组;TβRs和凋亡促进子bax的mRNA表达水平增高,UVB照射后Smad-4表达量明显升高,并从HLECs细胞胞浆转移到细胞核内;AF-302-NA可以抑制UVB引起的Smad-4由细胞浆向细胞核的转移,部分抑制UVB照射引起的TβRs和bax mRNA表达量的增高,并可降低HLECs的凋亡比例。结论 在UVB诱导HLECs凋亡机制中,凋亡信号通过TGF-β2/Smad-4信号传导通路传递,阻断TGF-β2/Smad-4信号传导通路可以在一定程度上抑制UVB照射所引起的HLECs凋亡。     

晶状体上皮细胞凋亡与硒性白内障关系的实验研究

目的 探讨晶状体上皮细胞凋亡与亚硒酸钠诱发的硒性白内障形成的关系。方法 给ＳＤ大鼠注射亚硒酸钠后１,３,７天剥取日状体吓膜。用流式细胞仪（ＦＣＭ）计数晶状体上皮细胞凋亡百分率,ＤＮＡ片断凝胶电泳检测晶状体上皮细胞核提取物,并应用透射电镜观察晶状体上皮细胞凋亡的开矿学变化。结果 给药后第１天晶状体上皮细胞凋亡百分率即显著增高,第３天达高峰,以后逐渐下降。而晶状体混浊程度持续加重,给药后第７天形成典型     

紫外线辐射致白内障发生的研究现状

长期慢性的紫外线(UV)辐射被认为是老年性白内障形成的重要原因。皮质型和混合型白内障的发生与UV辐射关系密切。大量的流行病学研究表明,导致皮质型白内障发生的10%～30%相对危险因素可以归结于射线辐射。UV辐射,特别是UVB是皮质型白内障发生的重要危险因素。晶状体上皮细胞是晶状体代谢最活跃的部位,也是UV作用的重要靶组织。晶状体上皮细胞的过度凋亡以及晶状体蛋白损伤与白内障的发生、发展密切相关。     

紫杉醇诱导兔晶状体上皮细胞凋亡及细胞周期改变的研究

目的 探讨紫杉醇(Taxol)诱导兔晶状体上皮细胞(RLECs)凋亡和对细胞周期改变的作用以及对Fas和FasL基因表达的影响。方法 流式细胞仪分析检测Taxol诱导RLECs细胞周期的阻断；光镜和电子显微镜下观察细胞形态的变化；应用TUNEL法检测药物诱导的细胞凋亡；兔疫组化方法检测该药对Fas和FasL基因的表达。结果Taxol可将RLECs阻断于G2／M期并诱导其凋亡；可见凋亡小体；TUNEL染色显示散在的阳性细胞，且凋亡的细胞量随药物质量浓度的增加而增多；Taxol对RLECs的Fas及FasL基因的表达无明显影响。结论 Taxol不仅能阻断RLECs的分裂，还能诱导其发生细胞凋亡，但不是通过Fas／FasL途径介导的。     

PUMA介导氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞凋亡

目的探讨PUMA在氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelialcell,HLEC)凋亡中的作用。方法体外培养的HLEC-B3,用50μmol·L-1H2O2刺激不同的时间后,Hoechst33258染色,凋亡细胞呈核固缩、碎裂形态,计数细胞凋亡率;采用West-ern blot方法检测PUMA及Caspase-3蛋白的表达水平。采用RT-PCR方法检测PUMAmRNA表达水平;设计合成针对人PUMA基因的小干扰片段(siPUMA1、siPUMA2)和一条阴性对照,用lipofectamine2000转染细胞后,验证干扰有效性,观察其对氧化应激诱导的HLEC凋亡的影响。结果 H2O2刺激HLEC4h、8h、12h后,细胞凋亡率分别为3.30%±0.25%、27.16%±0.31%、48.14%±0.57%,凋亡相关蛋白Caspase-3发生时间依赖的表达上调。H2O2可诱导PUMA mRNA及蛋白质表达上调。干扰PUMA的表达能减少H2O2诱导的细胞凋亡,H2O2处理HLEC-B312h后细胞凋亡率为48.24%±0.84%,而敲除PU-MA的表达后细胞凋亡率显著降低为13.72%±1.06%(siPUMA1)和17.56%±0.51%(siPUMA2)。结论 PUMA介导了H2O2诱导的HLEC凋亡,可能在白内障的发生发展中发挥重要作用。     

白藜芦醇对紫外线诱导人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨白藜芦醇对紫外线诱导人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法:人晶状体上皮细胞系传代培养,紫外线诱导细胞发生凋亡,20μmol/L白藜芦醇预处理细胞后,观察各项指标改变:流式细胞仪检测细胞凋亡率,比色法检测凋亡相关因子caspase-3及caspase-9的表达,透射电镜观察超微结构变化。结果:流式细胞仪检测发现,白藜芦醇可以抑制紫外线照射诱导的细胞凋亡,阳性对照组中caspase-3及caspase-9含量显著高于同时段阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组中caspase-3及caspase-9含量均低于同时段阳性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,伴随白藜芦醇作用时间的延长,透射电镜下人晶状体上皮细胞损伤的程度减轻。结论:白藜芦醇可以抑制紫外线诱导的晶状体上皮细胞的凋亡,对辐射性白内障具有预防作用,从而为寻求有效的防治白内障药物提供可靠的实验依据。     

Calpains在过氧化氢诱发大鼠晶状体上皮细胞凋亡中的机制探讨

目的 探讨calpains住过氧化氢(H2O2)诱发大鼠离体晶状体上皮细胞(LECs)凋亡中的可能机制。方法 离体培养大鼠品状体，阴性对照组培养液中不加H2O2；阳性对照组加H2O2；实验组同时加入H2O2和ealpains抑制剂PD150606。光学显微镜下观察3组品状体混浊程度的改变并行图像分析，秩和检验分析，用流式细胞术(FCM)检测H2O2对大鼠LECs凋亡的影响，单因素方差分析3组LECs凋亡数量的改变。结果 H2O2可明显诱发大鼠离体品状体产生白内障及LECs凋亡，PD150606可部分抑制H2O2诱发大鼠晶状体的混浊和LECs的凋亡，与阴性对照组和阳性对照组比较，差异有显著性意义(P=0．000，P=0．006)。结论 Calpains表达的激活并引发随之的大鼠LECs的凋亡，可能是H2O2诱发离体大鼠产生白内障的机制之。Calpains抑制剂PD150606可部分抑制H2O2诱发的大鼠LECs的凋亡，从而部分抑制大鼠白内障的产生。     

枸杞多糖对氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞凋亡的调控

目的 :研究枸杞多糖 (lyciumbarbarumpolysaccha rides,LBP)对实验性晶状体氧化损伤所致晶状体上皮细胞(lensepithelialcell,LEC)凋亡的影响。方法 :复制大鼠晶状体LEC凋亡模型 ,将 2 4只透明晶状体随机分为 4组 ,空白组、H2 O2 组、白内停组、枸杞多糖组。枸杞多糖组加入终浓度为1g/L的枸杞多糖共同孵育 2 4h ,采用TUNEL法检测LEC凋亡率 ,用透射电子显微镜观察LEC超微结构改变。结果H2 O2 组LEC凋亡率 (92 .0± 2 .5 5 )显著高于空白组 (3.5± 1.84 ) ,(t=6 2 .97,P <0 .0 1) ;枸杞多糖组LEC凋亡率 (16 .6±8.11)与白内停组比较 ,差异有非常显著性 (t=15 .5 0 ,P <0 .0 1)。透射电镜观察 ,H2 O2 组胞浆明显浓缩 ,核内染色质凝聚或成块 ,枸杞多糖组多数LEC形态改变轻微 ,表现为胞浆基质密度轻度升高 ,部分线粒体水肿 ,细胞间间隙增宽。结论 :枸杞多糖可明显抑制LEC凋亡 ,从祖国医药中寻求防治白内障的有效药物具有广阔前景。     

锌对半乳糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的：研究锌对半乳糖诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)凋亡的影响。

方法：将培养的SRA01/04细胞系分为六组,对照组、半乳糖处理组、补锌组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组、缺锌联合半乳糖处理组。采用MTT法检测半乳糖对HLEC存活率的影响,荧光显微镜和流式细胞仪分别检测各实验分组细胞核形态和细胞凋亡率水平的变化。

结果：不同浓度半乳糖(0、25、50、75、100、125mmol/L)处理HLEC细胞后,细胞存活率分别为(100.0±5.4)%、(97.5±3.2)%、(91.3±5.3)%、(93.4±0.6)%、(86.6±1.4)%和(83.5±0.4)%,与未处理细胞相比,半乳糖浓度为100、125mmol/L时,细胞存活率显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光显微镜结果显示对照组和补锌组的细胞核呈现均一的染色,半乳糖处理组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组和缺锌联合半乳糖处理组中一些细胞的细胞核收缩,表现出典型的细胞凋亡形态。各组的细胞凋亡率分别为(1.5±0.1)%、(7.1±0.2)%、(1.4±0.1)%、(4.4±0.2)%、(5.5±0.2)%和(15.8±0.3)%。与对照组相比,半乳糖处理组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组和缺锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义(P < 0.05)。与半乳糖处理组相比,补锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),缺锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率则显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：补锌可以保护人晶状体上皮细胞抵抗由半乳糖引起的细胞凋亡,可能对白内障的形成有抑制作用。     

衰老晶状体上皮细胞对喜树碱诱导凋亡敏感性的研究

目的 探讨体外培养品状体上皮细胞(LECs)的衰老情况以及衰老LECs对凋亡诱导因素的敏感性.方法体外培养兔LECs并传代.对第1、4、7代LECs进行研究,β-半乳糖苷酶组织化学染色检测衰老细胞,分析细胞衰老百分数的差异;原位末端标记法(TUNEL)检测培养过程中细胞的凋亡状况;10μmol/L喜树碱诱导细胞凋亡,比较各代细胞对喜树碱诱导凋亡敏感性的差异. 结果 LECs在体外培养过程中表现为有限生长的特性,经过增生、传代后衰老细胞增加.各代LECs在不受干预的情况下不发生凋亡.第1、4、7代LECs对喜树碱凋亡诱导因素的敏感性差异有统计学意义.结论 LECs在体外培养过程中表现为有限生长的特性,增生的细胞以衰老为结局,衰老的LECs在不受外界干扰的情况下不发生凋亡,但对凋亡诱导因素的敏感性增加.     

晶状体上皮源生长因子对高浓度葡萄糖诱导凋亡晶状体上皮细胞的保护作用

目的:研究高浓度葡萄糖诱导人LECs凋亡以及LEDGF对LECs凋亡的影响。方法:采用终浓度为5.56,11.11,22.22mmol/L葡萄糖处理体外培养的LECs,诱导建立LECs凋亡模型。用终浓度为200ng/mL的LEDGF抗体进行干预。利用流式细胞仪对LECs凋亡情况进行检测。结果:流式细胞仪检测发现随着葡萄糖浓度增高,LECs凋亡百分率亦呈升高趋势,不同组间差异有显著性。LEDGF抗体能够增加由高糖引起的LECs凋亡百分率。结论:高浓度葡萄糖可在体外诱导兔LECs凋亡。LEDGF可保护LECs并减少其凋亡的发生。     

番茄红素对紫外线诱导人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：探讨番茄红素对紫外线诱导的人晶状体上皮细胞(hulan lens epithelial cells,HLEC)氧化损伤的保护作用及可能机制。
　　方法：HLEC传代培养,分为阴性对照组、氧化损伤组、番茄红素低剂量组和番茄红素高剂量组, MTT比色法检测细胞存活率,电子显微镜观察细胞形态学改变,DCFH-DA荧光探针检测胞内ROS变化,分光光度计检测上清液中超氧化物歧化酶( superoxide dislutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶( glutathione peroxidase, GSH )活性及丙二醛( lalondialdehyde,MDA)的含量。
　　结果：番茄红素能明显抑制紫外线诱导的细胞活性的下降,减少紫外线所致HLEC内ROS的生成,引起HLEC内SOD和GSH-Px水平的升高及MDA水平的下降。
　　结论：番茄红素通过提高细胞内SOD和GSH-Px含量,降低细胞内MDA含量,发挥其较强的抗氧化作用,从而为其用于白内障防治提供可靠的实验依据。