千佛菌对肺癌模型小鼠Cyclin Dl表达的影响及抑瘤作用

目的:探讨中药千佛菌对荷Lewis肺癌瘤株小鼠瘤组织原癌基因表达的影响及抑瘤作用。方法:检测肺癌小鼠瘤组织Cyclin Dl基因的蛋白表达及抑瘤率。结果:服用千佛菌肺癌小鼠的Cyclin Dl表达小鼠显著降低,且抑瘤率较高。结论:千佛菌能抑制肺癌小鼠Cyclin D1的表达,并有较强的抑瘤作用。     

肺积1号方对Lewis肺癌小鼠周期蛋白的影响

目的:研究肺积1号方对Lewis肺癌小鼠周期蛋白的影响。方法:构建Lewis肺癌小鼠模型,Western blot检测细胞周期相关蛋白ClylinD1、ClylinE的表达,免疫组化法检测肺积1号方对肿瘤组织Cyclin D1表达的影响。结果:Western blot结果显示,肺积1号方剂量组CyclinD1表达均较空白对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05),CyclinE的表达与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);免疫组化结果显示,肺积1号方中、大剂量组Cy-clinD1的表达均较模型组降低(P<0.05),与Western blot结果基本一致。结论:肺积1号方能够下调细胞周期蛋白Cyclin D1的表达。     

中药组方对小鼠Lewis肺癌细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 :探讨中药组方对小鼠Lewis肺癌细胞周期蛋白D1的表达及肺癌细胞转移的影响。方法 :复制小鼠lewis肺癌 ,用免疫组织化学方法检测中药组方对肿瘤细胞cyclinD1的表达 ,记数小鼠肺组织内肿瘤转移结节数量等数据。结果 :生理盐水组cyclinD1阳性表达率与中药组方组和替加氟组有显著性差异 ,而后两组差异无显著性 ;中药组和替加氟组转移瘤结节数量显著少于生理盐水组。结论 :中药组方能有效降低小鼠Lewis肺癌细胞cyclinD1的表达 ,抑制肿瘤细胞的转移     

中肺合剂抗小鼠Lewis肺癌肺转移作用及相关机制的实验研究

 目的 观察中肺合剂对小鼠Lewis肺癌抗肿瘤肺转移的作用,并探索其相关机制。方法 采用Lewis肺癌移植瘤C57BL/6小鼠模型观察中肺合剂抗肿瘤肺转移作用,并采用荧光定量QRT-PCR法测定中肺合剂对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织基质金属蛋白酶（MMP）-9表达的影响,采用EnVision法检测肿瘤组织血管内皮细胞生长因子（VEGF）和CD34蛋白的表达情况,并计数微血管密度(MVD)。结果 中肺合剂低、中、高剂量组（12.7,25.4,50.8 g·kg-1）和环磷酰胺（CTX）阳性对照组对移植性Lewis肺癌小鼠的肺转移抑制率为16.7%、45.8%、19.4%和80.6%,以中剂量组肺转移抑制作用最佳。中肺合剂能下调Lewis肺癌小鼠肿瘤组织MMP-9、VEGF蛋白的表达水平,并降低肿瘤组织MVD。MMP-9、VEGF表达和MVD之间呈正相关。结论 中肺合剂对小鼠Lewis肺癌具有显著的抗肿瘤肺转移作用,以中剂量组最佳。其作用机制可能与该药能降低肿瘤组织MMP-9、VEGF蛋白的表达水平,并降低肿瘤组织MVD有关。     

西黄滴丸对S180荷瘤小鼠PCNA及CyclinD1的影响

目的研究西黄滴丸对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机理。方法将S180荷瘤小鼠分为模型对照组,西黄丸组,西黄滴丸低、中、高剂量组及环磷酰胺(CTX)组。称取小鼠体重及瘤重,计算抑瘤率;并采用免疫组织化学的方法检测西黄滴丸对S180荷瘤小鼠肿瘤组织中PCNA及Cyclin D1表达的影响。结果西黄丸组,滴丸低、中、高剂量组及CTX组抑瘤率分别是26.28%,21.47%,26.92%,30.76%,35.85%。与模型对照组相比,滴丸高剂量组和CTX组瘤重有显著性降低(P0.01),滴丸高剂量组PCNA光密度值具有明显差异(P0.05)。与模型组相比,滴丸中剂量组及CTX组Cyclin D1光密度值具有显著性差异(P0.01)。结论西黄滴丸对S180荷瘤小鼠具有抗肿瘤的作用,其机理可能与下调肿瘤组织中PCNA及Cylin D1的蛋白表达有关。     

健脾补肾方对Lewis肺癌小鼠肿瘤细胞抑制作用及对Ki-67表达影响的研究

目的观察健脾补肾方对Lewis肺癌小鼠肿瘤细胞的抑制作用及对Ki-67表达影响。方法采用Lewis肺癌移植瘤C57BL/6小鼠模型观察健脾补肾方抗肿瘤的作用,并采用HE染色观察各组肿瘤细胞的凋亡情况,免疫组化法检测肿瘤组织中Ki-67增殖抗原蛋白的表达情况。结果与对照组相比,健脾补肾方低剂量组能增加荷瘤小鼠胸腺指数,有统计学意义(P<0.05)。低、高剂量健脾补肾方与CTX合用,能对CTX所致荷瘤小鼠胸腺萎缩有一定的拮抗作用。健脾补肾方能下调Lewis肺癌小鼠肿瘤组织Ki-67蛋白的表达水平。结论健脾补肾方对小鼠Lewis肺癌具有显著的抗肿瘤作用,以健脾补肾方高剂量加环磷酰胺组最佳。其作用机制可能与该药能降低肿瘤组织Ki-67蛋白的表达水平有关。     

苦参碱对小鼠Lewis肺癌的影响

目的 研究苦参碱对小鼠Lewis肺癌的作用,并初步探讨其作用机制.方法 建立小鼠Lewis肺癌模型,实验分为模型组、不同剂量苦参碱组、环磷酰胺组,计算原发瘤抑制率及肺转移灶数;采用Western blotting检测原发瘤组织基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)蛋白表达.结果 苦参碱各剂量组小鼠原发瘤抑制率、肺转移灶数与模型组比较差异显著(P<0.05、0.01);与模型组比较,苦参碱各剂量组MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低(P<0.01).结论 苦参碱明显抑制小鼠Lewis肺癌原发瘤的生长和转移,可能与其抑制肿瘤组织MMP-2和MMP-9蛋白表达有关.     

扶肺煎对Lewis肺癌移植瘤的抑制作用及机制研究

目的:观察扶肺煎对C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用,研究其对STAT3磷酸化水平及对Bcl-2、Bax、Cyclin D1、CDK4基因表达的影响。方法:70只雄性SPF级C57BL/6小鼠随机建立Lewis肺癌移植瘤模型,分别为空白对照组、模型对照组、扶肺煎低剂量组、扶肺煎中剂量组、扶肺煎高剂量组、顺铂组、扶肺煎中剂量联合顺铂组。每天观察动物一般情况及各组小鼠皮下结节情况并称重。第15天脱颈处死全部小鼠,完整剥离肿瘤组织并称重,计算各组抑瘤率及增效率,检测p-STAT3的表达及Bcl-2、Bax、Cyclin D1、CDK4基因的表达。结果:扶肺煎联合顺铂组的抑瘤率最高,为66%,扶肺煎对顺铂组的增效率为108%,表明其对顺铂具有较好的增效作用。各给药组p-STAT3表达均下降。各给药组Bcl-2、Cyclin D1、CDK4基因表达均下降,Bax基因表达上升。结论:扶肺煎联合化疗可降低C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤中磷酸化STAT3的表达并抑制肿瘤生长,降低Lewis肺癌移植瘤中Bcl-2、Cyclin D1、CDK4基因的表达,同时提高Bax基因的表达,起到控制细胞生长及分化、抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用。     

理肺消积丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的:观察理肺消积丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的影响作用。方法:将50只小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、理肺消积丸组[240μg/(g·d)]、顺铂组[0.5μg/(g·d)]、联合组[理肺消积丸240μg/(g·d)+顺铂0.5μg/(g·d)]。采用皮下接种法建立Lewis肺癌小鼠模型,制备模型次日进行药物干预。2周后分别采用活体成像技术检测小鼠体内肿瘤生长情况,HE染色评价肿瘤组织病理学形态,免疫组化技术观察肿瘤细胞增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(gene of phosphate and tension homology deleted on chromosome ten,PTEN)的表达情况,TUNEL技术评价肿瘤细胞凋亡情况。结果:模型对照组小鼠体内肿瘤增殖明显,肿瘤细胞异型性明显、核分裂象多见,PCNA蛋白表达程度极高,而细胞凋亡率及PTEN蛋白表达量极低。与模型对照组对比,理肺消积丸组的肿瘤生长受到抵制,肿瘤细胞异型性及核分裂象减少,PCNA蛋白表达下降,肿瘤细胞凋亡率升高,PTEN蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。而顺铂组和联合组除PTEN蛋白表达较模型对照组差异无统计学意义外,其余指标均有统计学意义。结论:理肺消积丸可显著抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长,其机制可能与其抑制肺癌细胞增殖、上调细胞凋亡和PTEN蛋白表达有关。     

泽漆汤对小鼠Lewis肺癌抑制作用及survivin蛋白表达的影响

目的:观察泽漆汤对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤体的抑制作用及其对survivin蛋白表达的影响,探讨其作用机理。方法:C57BL/6小鼠在右前腋皮下接种Lewis肺癌细胞造模,观察低、中、剂量泽漆汤对荷瘤小鼠抑瘤率、胸腺指数和肿瘤细胞增殖周期的影响,并通过免疫组化染色观察泽漆汤对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织sur-vivin蛋白的表达。结果:低、中、高剂量泽漆汤对Lewis肺癌荷瘤小鼠的瘤重抑制率分别为24.55%、28.74%和35.93%;与模型组比较,泽漆汤能抑制肿瘤细胞的增殖周期,下调Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织凋亡抑制蛋白survivin的表达水平(P0.01)。结论:泽漆汤在体内具有明显的抗肿瘤作用,这一作用可能与其能下调肿瘤细胞的凋亡抑制蛋白survivin的表达相关。     

整合素连接激酶在C57小鼠Lewis肺癌中的表达及肺岩宁方对其的调控作用

目的探讨肺岩宁方对整合素连接激酶（integrin-linked kinase.ILK）mRNA及蛋白表达的影响。方法建立C57小鼠Lewis肺癌模型。将C57BL-6纯系10周龄雄性小鼠随机分为正常组、模型组、顺铂（DDP）组、肺岩宁方组,每组10只。正常组正常饲养;模型组以0.9%NaCl溶液0.4ml灌胃;顺铂组在造模后第5天开始给药,在开始给药的第1、3、5天,DDP溶液1ml（含DDP0.1mg）腹腔注射,0.9%NaCl溶液0.4ml灌胃;肺岩宁方组在造模后第5天开始给予肺岩宁方药液0.4ml（生药含量36.1g/kg）灌胃。采用Real time PCR和Western blot方法分别检测ILK在移植瘤组织和转移灶发生的肺组织中mRNA、蛋白水平的表达。结果与正常组比较,模型组肿瘤肺转移率、转移灶及Ilk基因表达差异均有统计学意义（P〈0.01）,说明模型成功。与模型组比较,肺岩宁方组可以显著降低肺转移灶的发生的作用（P〈0.01）。各组移植肿瘤组织中,肺岩宁方组ILK基因表达与模型组比较显著降低（P〈0.01）;各组肺组织中,与模型组比较,肺岩宁方组ILK基因表达显著下降（P〈0.01）,而化疗组ILK基因表达反而升高（P〈0.01）。与模型组比较,肺岩宁方组ILK蛋白的表达明显降低（P〈0.01）。结论肺岩宁具有显著降低ILK基因表达的作用,调控Snail信号途径的关键信号分子ILK基因有可能是肺岩宁方抗肿瘤转移的有效作用靶点所在。     

康莱特注射液对Lewis肺癌小鼠增殖细胞核抗原表达的影响

目的通过检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,阐明康莱特注射液的抑瘤作用及其可能的作用机制。方法50只C57小鼠复制Lewis肺癌模型后,随机分为5组。分别腹腔注射相应药物14 d后处死,称瘤质量,计算抑瘤率,免疫组化法检测各组小鼠肺癌组织中PCNA蛋白表达。结果CTX组、康莱特低剂量组、康莱特中剂量组、康莱特高剂量组抑瘤率分别为60.71%,45.24%,47.02%,55.36%;PCNA的阳性表达率分别为(90.78±5.51)%,(53.63±3.56)%,(72.87±4.12)%,(67.61±3.23)%,(53.51±3.20)%。结论抑制PCNA在肿瘤细胞中的表达可能是康莱特注射液抑制肿瘤生长的机制之一。     

调衡方对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤组织与肺组织Foxp3、IL-10、TGF-β表达的影响

目的研究调衡方对Lewis肺癌荷瘤小鼠血清白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)水平及瘤组织、肺脏组织中Foxp3、IL-10、TGF-β表达的影响,探讨调衡方对荷瘤体免疫抑制细胞的调节机制。方法将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、荷瘤组、贞芪组及调衡方高、中、低剂量组,每组10只。除正常组外,其余组均将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于小鼠右腋皮下建立肺癌模型。接种24 h后,贞芪组给予贞芪扶正胶囊41.5 g/kg灌胃,调衡方低、中、高剂量组分别给予调衡方流浸膏12.5 g/kg、25 g/kg、50 g/kg灌胃,荷瘤组给予等容量生理盐水灌胃,均1次/d,连续8 d。灌胃结束后,HE染色观察瘤组织及肺组织细胞形态,ELISA法检测血清IL-10、TGF-β水平,免疫组化法检测瘤组织及肺组织中Foxp3、IL-10、TGF-β表达情况。结果HE染色显示:荷瘤组小鼠瘤组织中瘤细胞坏死面积很小,有少量的凋亡瘤细胞;肺组织可见细胞排列混乱的肿瘤转移灶,病理性的核分裂较多,肿瘤实、间质间边缘不清。调衡方各组瘤组织中多处瘤细胞核固缩,瘤细胞胞膜皱缩不完整,瘤细胞残留坏死物随处可见,尤其是调衡方高、中剂量组明显;调衡方低剂量组肺组织可见肿瘤细胞,调衡方中、高剂量组未见明显的肿瘤细胞聚集,且调衡方高剂量组细胞排列与正常肺组织形态接近。荷瘤组血清IL-10、TGF-β水平均明显高于正常组(P均<0.05);贞芪组和调衡方各组血清IL-10、TGF-β水平均明显低于荷瘤组(P均<0.05),调衡方高剂量组均明显低于调衡方低、中剂量组(P均<0.05);调衡方各组血清IL-10水平与贞芪组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),调衡方高剂量组血清TGF-β水平明显低于贞芪组(P<0.05)。贞芪组和调衡方各组瘤组织及肺组织中Foxp3、IL-10、TGF-β蛋白表达阳性率均明显低于荷瘤组(P均<0.05),调衡方高剂量组均明显低于调衡方低剂量组(P均<0.05)。结论调衡方可能通过下调Lewis肺癌荷瘤小鼠Foxp3、IL-10、TGF-β表达,改善肿瘤微环境中免疫抑制状况而发挥抑瘤作用。     

四逆汤联合环磷酰胺对C57BL/6小鼠Lewis肺癌Caspase-3表达的影响

目的:探讨不同剂量四逆汤联合环磷酰胺(CTX)对C57BL/6小鼠Lewis肺癌的抑制作用机制。方法:通过建立C57BL/6小鼠肺癌模型,随机分为6组:空白对照组,CTX组,四逆汤组,CTX+四逆汤低、中、高剂量组,每组16只,连续灌胃给药21d,随机抽取各组10只于第21天处死小鼠。采用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹技术检测小鼠肿瘤组织中Caspase-3的表达。结果:CTX组、CTX+四逆汤中剂量组小鼠21d时肿瘤组织Caspase-3mRNA和蛋白表达均较空白组显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论:中剂量四逆汤联合CTX可上调C57BL/6小鼠Lewis肺癌Caspase-3表达促进肿瘤细胞凋亡。应用中剂量四逆汤联合CTX对治疗Lewis肺癌可能有较好的辅助作用。     

扶正方对LA795肺癌模型鼠EGFR和PCNA的影响

为研究扶正方(主药：黄芪、当归、黄精等)的抗癌机制，40只T739小鼠接种LA795后，均分为4组：中药组(A，接种24h后灌喂扶正方连续13d，第6d起腹腔注射生理盐水)；化疗组(B，接种24h后灌喂生理盐水，6d后腹腔注射环磷酰胺，连续5d)；中药 化疗组(C，综合A、B组治疗方法)；模型组(D，以生理盐水灌喂并腹腔注射)。13d后处死小鼠，取瘤称重，计算抑瘤率，并以免疫组化和图像分析法，比较各组小鼠肿瘤组织的EGFR和PCNA。结果：三种治疗方法均有一定的抑瘤作用，并均可调低EGFR和PCNA，其中A、B组相仿，C组最佳。提示扶正方具有与环磷酰胺相仿的抑制肿瘤生长的作用，其机理可能与其能调低EGFR和PCNA有关；两种药物问有一定的协同作用。     

康莱特注射液对Lewis肺癌小鼠增殖细胞核抗原表达的影响

目的通过检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，阐明康莱特注射液的抑瘤作用及其可能的作用机制。方法50只C57小鼠复制Lewis肺癌模型后。随机分为5组。分别腹腔注射相应药物14d后处死，称瘤质量，计算抑瘤率，免疫组化法检测各组小鼠肺癌组织中PCNA蛋白表达。结果CTX组、康莱特低剂量组、康莱特中剂量组、康莱特高剂量组抑瘤率分别为60．71％，45.24％，47.02％，55.36％；PCNA的阳性表达率分别为（90．78±5.51）％，（53.63±3．56）％，（72．87±4．12）％，（67．61±3．23）％，（53.51±3．20）％。结论抑制PCNA在肿瘤细胞中的表达可能是康莱特注射液抑制肿瘤生长的机制之一。     

百合地黄汤对失眠模型大鼠行为学及不同脑区单胺类神经递质的影响

目的：研究百合地黄汤对失眠模型大鼠行为学及大鼠皮层、脑干和海马组织中多巴胺（DA）和5-羟色胺（5-HT）的影响,探讨百合地黄汤治疗失眠的作用机制。方法：采用腹腔注射对氯苯丙氨酸（PCPA,0.4 g·kg-1）复制失眠模型大鼠,将造模成功的大鼠随机分为模型组、地西泮组（0.92 mg·kg-1）、百合地黄汤高剂量组（28 g·kg-1）和百合地黄汤低剂量组（7 g·kg-1）,另设空白组,连续给药7天,采用旷场实验测定行为学评分,翻正反射实验评价百合地黄汤对大鼠睡眠的影响,高效液相色谱电化学检测法（HPLC-ECD）检测大鼠皮层、脑干和海马中DA和5-HT的含量。结果：百合地黄汤可以降低失眠模型大鼠的中央格停留时间、修饰次数和粪便颗粒数（P < 0.05）,缩短睡眠潜伏期并延长睡眠持续时间（P < 0.05）,大脑皮层、脑干和海马中5-HT含量明显升高（P < 0.05）,大鼠皮层中DA含量显著降低（P < 0.05）;与模型组相比,P < 0.05。结论：百合地黄汤可改善失眠模型大鼠行为学和睡眠,对DA和5-HT的调节作用可能是其治疗失眠的作用机制。     

益气养阴方抗C57小鼠Lewis肺癌转移作用与调节MMP-9、TIMP-1蛋白表达的实验研究

目的免疫组化法观察益气养阴方对C57BL／6小鼠Lewis肺癌瘤体MMP-9、TIMP-1蛋白表达的影响以及抗肺转移作用,探讨该方抗转移作用的机理。方法24只C57BL／6小鼠随机分为3组,每组8只,接种Lewis肺癌瘤株,造模后第2天按如下方案进行干预：荷瘤对照组：0.9％NaCl溶液灌服;中药组：益气养阴方煎汤灌服;顺铂组：顺铂溶液腹腔内注射。第20天处死全部小鼠,称瘤重计算抑瘤率,计数肺转移数,计算抑制肺转移率,免疫组化Envision二步法测定瘤体MMP-9、TIMP-1蛋白表达情况。结果中药组和顺铂组的抑瘤率分别为35.02％和41.18％,具有统计学意义（P〈0.05）。中药组和顺铂组的抑制肺转移率分别为54.20％和39.02％,差异无统计学意义。瘤重与肺转移数之间存在正相关。荷瘤对照组MMP-9和TIMP-1阳性率均为100％,中药组MMP-9阳性率显著低于对照组,TIMP-1阳性表达与对照组比较差异无统计学意义,但中度及强阳性率明显低于对照组。MMP-9和TIMP-1的表达与肺转移数成正相关,两者之间亦存在正相关。结论益气养阴方具有较好的抑瘤作用和抑制肺转移的作用;肺癌均表达MMP-9和TIMP-1蛋白,是促进转移的重要机理和判断指标;益气养阴方能够显著下调肺癌MMP-9的表达,影响TIMP-1的表达,这是其抑制肺癌转移的机理之一。     

丁学屏运用经方辨治糖尿病经验撷英

介绍丁学屏教授以麋含白术泽泻汤合兰草汤、黄连阿胶汤、百合地黄汤、百合知母汤、防己黄芪汤、葵子茯苓散合猪苓汤等为基础方,治疗糖尿病及其并发症的临床经验。     

百合地黄汤加味联合西药用于更年期郁证的临床研究

目的：探讨百合地黄汤加味联合西药治疗妇女更年期郁证的临床疗效。方法：将54例更年期郁证患者随机分为治疗组27例和对照组27例,对照组口服帕罗西汀片20mg,每日1次,治疗组在对照组用药基础上加用百合地黄汤加味（方药组成：百合60g,生地黄15g,丹参30g,川芎20g,菊花15g）治疗。结果：两组比较,治疗组临床症状改善情况优于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：百合地黄汤加味联合西药治疗更年期郁证疗效显著。