Stathmin 基因在非小细胞肺癌中的表达

目的：检测 Stathmin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达,探讨其与临床病理因素的关系。方法：用免疫组织化学 SP 法检测135例非小细胞肺癌及20例癌旁肺组织中 Stathmin 蛋白的表达,分析其与患者年龄、性别、肿瘤分化程度等临床病理特征之间的相关性。结果：小细胞肺癌组织中 Stathmin 基因蛋白的表达水平明显高于癌旁肺组织（P ＜0．05）,Stathmin 的表达与淋巴结转移有关（P ＜0．05）。结论：Stathmin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达显著上调;Stathmin 基因的表达与淋巴结转移有关,而与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、组织类型无关。     

反义Stathmin基因对胃癌细胞生长影响的观察

目的探讨反义Stathmin基因的核酸（antisense of stathmin ologodeoxynucleotides,ASODN）对人胃癌细胞系生长的影响及对裸鼠体内肿瘤生长的作用。方法免疫组化检测2010-01-2013-06山东省千佛山医院40例胃癌标本中癌组织及癌旁组织中Stathmin的表达;以人胃癌MCG803细胞系为靶细胞,分为ASODN转染细胞组、SODN转染组及未转染组3组,ASODN为阻断剂,观察ASODN对胃癌细胞的增殖的影响;40只腹腔种植胃癌细胞的裸鼠随机分为2组,观察转染ASODN在裸鼠体内对肿瘤生长的影响。结果Stathmin在胃癌组织中的阳性表达率为77.5%（32/40）,显著高于癌旁组织的32.5%（13/40）,差异有统计学意义,P〈0.001;未转染组及SODN转染组胃癌细胞倍增时间（20h）明显短于ASODN转染组（27h）;随时间进展,ASODN转染组细胞增殖能力均受抑制,差异有统计学意义,P〈0.001;转染ASODN胃癌细胞裸鼠的肿瘤组织体积平为（2.98±0.12）mm^3,小于未转染ASODN组肿瘤组织（7.61±0.21）mm^3,P=0.036。结论 ASODN对胃癌细胞的生长有抑制的作用,有望成为胃癌治疗的新靶点,以提高胃癌患者的生存时间。     

ELL2在人成骨肉瘤中的表达及对MG-63细胞增殖的影响

目的:研究ELL2在人成骨肉瘤中的表达情况以及其对人成骨肉瘤细胞增殖的影响.方法:运用RT-PCR检测ELL2在人成骨肉瘤组织及其正常毗邻组织中的表达,RT-PCR及Western-blot检测ELL2在人成骨肉瘤细胞系及人正常成骨细胞系中的表达.构建ELL2过表达载体,MTT和细胞计数试验检测过表达ELL2对人成骨肉瘤细胞系MG-63增殖的影响.结果:ELL2在人成骨肉瘤组织中的表达显著低于其正常毗邻组织(P=0.001).ELL2在人成骨肉瘤细胞系中的表达相比于人正常成骨细胞系明显下调(P<0.05).过表达ELL2能够显著抑制MG-63细胞的增殖(P<0.05).结论:ELL2在人成骨肉瘤中表达下调,其过表达能够抑制肿瘤细胞的增殖.     

Stathmin在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义

背景与目的:Stathmin是一种重要的微管调节蛋白,参与多种肿瘤的发生、发展.本研究旨在验证并探讨Stathmin在上皮性卵巢癌中的表达及意义.方法:利用免疫组化和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测22例卵巢正常上皮组织,16例良性肿瘤和50例上皮性卵巢癌组织中Stathmin的表达.结果:上皮性卵巢癌中Stathmin mRNA的表达明显高于卵巢良性肿瘤(P<0.05)和正常卵巢上皮(PO.05).进一步利用x2检验统计分析得出,Stathmin蛋白与卵巢癌的临床分期、病理分级、淋巴转移相关(P<0.05),而与年龄、病理类型及腹水量无相关性(P>0.05).结论:Stathmin在上皮性卵巢癌中高表达,可能与卵巢癌的发生、发展相关.     

拮抗凋亡转录因子基因在高转移人成骨肉瘤细胞系中的高表达

背景与目的：成骨肉瘤是青少年中最常见的恶性骨肿瘤,具有易发生肺转移的特点。尽管目前已能够成功地控制原发瘤,但是仍有30％以上的患者在5年内死于肺转移。更好地理解调节转移过程的分子机制,为设计有效的治疗方案提供生物学基础,我们用原位移植的方法建立了人成骨肉瘤细胞系SOSP－9607裸鼠转移模型,用这一模型筛选出了高转移细胞系SOSP－M。本研究旨在通过比较两个细胞系的基因表达水平来克隆与骨肉瘤转移相关的基因,探讨成骨肉瘤转移的分子机制。方法：采用抑制性消减杂交技术建立人成骨肉瘤高转移细胞株SOSP－M的消减文库;用差异筛选技术筛选出阳性克隆;对部分克隆进行测序和同源性分析,用Northern杂交后转录多聚酶链式反应技术对SOSP－M中表达上调的有意义的克隆在低转移细胞系SOSP－9607,OS－9901,高转移细胞系SOSP－M和裸鼠肺转移结节中的表达情况进行了分析。结果：在高转移细胞株SOSP－M中有2个阳性克隆均与人凋亡对抗转录因子（apoptosis antagonizing transciption factor)同源（99％同源）。Northern杂交及反转录PCR证实这个基因在高转移细胞和裸鼠肺转移结节中高表达,而在低转移人成骨肉瘤细胞系SOSP－9607和OS－9901中表达微弱。结论：对抗凋亡转录因子在促进肿瘤细胞转移中可能起重要作用。     

微管不稳定蛋白Stathmin在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的 探讨Stathmin蛋白在食管鳞癌组织中的表达及意义.方法 收集新乡医学院2006年4月至9月期间食管鳞癌切除标本及其相应癌旁组织31例,以免疫组织化学法检测Stathmin蛋白在所取标本中的表达情况.结果 在31例食管鳞癌标本中,Stathmin蛋白表达阳性的标本为23例,阳性率为74.2%,阳性颗粒可见于细胞质;分别按年龄、性别、组织类型、分化程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度及TNM分期将31例食管癌标本分组,Stathmin蛋白表达差异有统计学意义的因素有分化程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度及TNM分期(P＜0.05).结论 食管鳞癌组织中Stathmin蛋白高表达,其表达与食管鳞癌的分化程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度及TNM分期显著相关,Stathmin蛋白可能为人食管癌的生物治疗提供一个新靶点.     

凋亡相关基因Livin mRNA在骨肉瘤中的表达及意义

目的 探讨凋亡相关基因Livin mRNA在骨肉瘤的表达及其与骨肉瘤发生发展的关系.方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测47例骨肉瘤组织中Livin mRNA的表达情况.结合临床资料进行分析.结果 Livin mRNA在经病理证实的20例肿瘤外5cm的正常骨组织中均未检出,47例骨肉瘤组织中29例表达阳性,Livin mRNA的表达与Enneking分期有关（P〈0.05）,而与肿瘤部位和Dahlin病理分型无关（P〉0.05）.结论 Livin mRNA在骨肉瘤组织中的特异性表达可能在骨肉瘤的发生发展中起重要作用.阻断Livin mRNA的表达可为骨肉瘤的治疗提供新的途径.     

caspase-6基因诱导成骨肉瘤细胞凋亡

目的：探讨caspase6对成骨肉瘤细胞株的凋亡诱导作用。方法：应用RTPCR方法检测成骨肉瘤细胞株SOSP9607中caspase6基因的表达水平。以腺病毒adv5作载体，构建含caspase6基因的转基因载体，用脂质体包裹法转染SOSP9607细胞株， 用RTPCR方法检测转染后SOSP9607细胞中caspase6基因的表达。用MTT法检测转染caspase6对SOSP9607细胞株生长的影响。结果：成骨肉瘤细胞株SOSP9607中未检出caspase6表达。RTPCR法证实转染caspase6后SOSP9607中caspase6表达显著增强，MTT检测显示对SOSP9607细胞的生长有抑制作用，形态学观察及DNA电泳证实转染后的细胞株存在细胞凋亡特征。结论：caspase6对成骨肉瘤细胞的生长有抑制作用，并可诱导成骨肉瘤细胞凋亡。     

P53、P16基因在骨肉瘤中表达及临床相关性研究

目的探讨P53、P16抑癌基因在骨肿瘤中的表达及临床相关性研究。方法采用免疫组化染色及原位杂交方法检测105例骨肿瘤P53、P16蛋白及基因的表达，其中骨肉瘤85例、骨软骨瘤20例，并对骨肉瘤主要临床资料和病理分级参数进行比较，用x^2检验进行统计学处理。结果骨肉瘤中P53蛋白及基因的阳性表达率为64．7％、65．9％，明显高于骨软骨瘤阳性表达率20．0％、20．0％，有显著性差异（P〈0．0005）呈正相关。骨肉瘤中P16蛋白及基因的阳性表达率为52．9％、54．1％，明显低于骨软骨瘤阳性表达率85．0％、90．0％，两者之间有显著性差异（P〈0．005，0．01），呈负相关。P53蛋白及基因在骨肉瘤Ⅱb期、Ⅲ期的表达率明显高于Ⅰ、Ⅱa期（P〈0．0005）。病理分级P53蛋白及基因阳性表达率分别为Ⅰ级35．0％、40％；Ⅱ级64．7％、64．7％；Ⅲ级83．8％、83．8％，有显著性差异（P〈0．005）。软组织浸润和转移P53蛋白及基因阳性表达率明显高于非浸润和非转移组（P〈0．0001，0．01）。P16蛋白及基因在骨肉瘤Ⅰ、Ⅱa期的表达率明显高于Ⅱb期、Ⅲ期（P〈0．0005，0．001）。病理分级P16蛋白及基因阳性表达率分别为Ⅰ级85．0％、85．0％；Ⅱ级52．9％、55．9％；Ⅲ级32．3％、32．3％，有显著性差异（P〈0．001）。软组织浸润和转移P16蛋白及基因阳性表达率明显低于非浸润和非转移组（P〈0．0005，0．005）。结论P53蛋白及基因在骨肉瘤中不同程度异常表达与骨肉瘤的病理分级、临床分期和浸润、转移密切相关，P16蛋白及基因在骨肉瘤中的异常表达与骨肉瘤的发生、发展中起重要作用，提示两种基因均可作为判断骨肉瘤进展及患者预后参考指标。     

shRNA沉默Survivin基因对人骨肉瘤MG-63细胞成瘤能力的影响

目的:研究Survivin-shRNA对骨肉瘤MG-63细胞成瘤能力的影响,并探讨其可能的机制.方法:采用皮下异种移植法构建裸鼠骨肉瘤模型,骨肉瘤MG-63细胞培养成功后,重组腺病毒Survivin-shRNA转染.细胞以1:5比例进行传代,挑选稳定转染的MG-63细胞并扩增,Survivin-shRNA组为Survivin-shRNA转染的细胞,GFP组和CON组为阴性对照组.每3天用卡尺测定肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线.颈椎脱臼法处死裸鼠,取骨肉瘤标本称重.Western blot法检测SUV、VEGF、PCNA及CAS-3蛋白的表达.结果:腺病毒介导的RNA干扰构建Survivin-shRNA载体,Survivin-shRNA组转染细胞的胞质及胞核可见绿色荧光,并伴有少量小颗粒物质.骨肉瘤生长曲线显示,与CON和GFP组相比,Survivin-shRNA组的肿瘤增长缓慢,表明Survivin-shRNA在体内能抑制骨肉瘤的生长.肿瘤的重量结果显示,Survivin-shRNA在体内能抑制骨肉瘤重量的增加.Western blot结果显示,SUV、VEGF的表达在Survivin-shRNA组中明显低于对照组,而CAS-3表达相反.结论:Survivin-shRNA可抑制骨肉瘤细胞增殖及成瘤能力,其机制可能是通过调节SUV、VEGF、CAS-3的表达及抑制肿瘤新生血管形成等来实现的.     

BRCA1基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞的影响

 目的　探索抑癌基因BRCA1基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP 96 0 7的影响。方法　通过细胞培养 ,测量细胞生长曲线、计算细胞集落形成率、检测细胞周期等 ,观察BRCA1基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞系SOSP 96 0 7的影响。结果　BRCA1基因反义寡核苷酸浓度为 1 0 μmol/L时 ,骨肉瘤细胞的生长速度变快 ,集落形成率明显增高 ;流式细胞仪检测发现其引起细胞周期变化 ,细胞增殖活性提高。结论　BRCA1基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP 96 0 7有明显的影响 ,使得骨肉瘤细胞恶性生物学特性更加显著 ,提示BRCA1基因在人骨肉瘤发展过程中起作用     

Survivin反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的:采用survivin反义寡核苷酸(ASODN)封闭骨肉瘤细胞survivin的作用,观察其对骨肉瘤细胞系MG63增殖和凋亡的影响。方法:以脂质体为载体,介导survivin反义寡核苷酸转染人骨肉瘤细胞系MG63,用MTT法测定细胞增殖;流式细胞仪检测转染survivin反义寡核苷酸后细胞凋亡率;Westernblot及半定量RTPCR检测转染survivin反义寡核苷酸后的骨肉瘤细胞survivin蛋白及mRNA表达。结果:脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染骨肉瘤细胞系MG63后,细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡率明显增加,骨肉瘤细胞survivin蛋白及mRNA表达均明显降低。结论:脂质体介导转染survivin反义寡核苷酸可以抑制细胞增殖,有效降低细胞内survivin基因的表达,促进细胞凋亡。     

微管解聚蛋白Ｓｔａｔｈｍｉｎ与肿瘤相关性的研究进展

微管解聚蛋白Ｓｔａｔｈｍｉｎ具有微管解聚活性,在细胞周期的转换过程中起着重要作用。在多种恶性肿瘤细胞中都可以检测到Ｓｔａｔｈｍｉｎ高表达。已有研究证实,Ｓｔａｔｈｍｉｎ蛋白的高表达能够影响某些作用于微管的化疗药物的疗效,抑制其表达可以提高这些药物的疗效。Ｓｔａｔｈｍｉｎ基因为肿瘤基因治疗提供了新的分子靶点。     

Stathmin基因表达与肿瘤的研究进展

Stathmin在多种恶性肿瘤细胞中都有高水平表达，Stathmin蛋白的主要作用是通过促进微管的解聚或阻止微管的聚合从而影响有丝分裂纺锤体的形成，通过抑制其表达可以干扰恶性肿瘤细胞的有丝分裂，影响肿瘤细胞的增殖与凋亡。同时，抑制stathmin表达能够协同增效某些化疗药物的抗癌疗效。Stathmin基因正成为肿瘤基因治疗的一个新靶点。     

Survivin基因反义寡核苷酸增强胃癌细胞对顺铂的敏感性研究

目的探讨survivin基因的反义寡核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)对胃癌细胞系(SGC7901)下调化疗药物的耐药性的研究.方法采用survivin基因反义ODN及其对照序列(空白对照和错配ODN)通过脂质体途径分别转染SGC7901细胞.经转染的各组SGC7901细胞分别采用蛋白印迹法观察survivin基因的表达、通过MTT法检测顺铂对癌细胞的毒性作用以及流式细胞仪(FCM)观察顺铂(CDDP)诱导各组SGC7901细胞的凋亡.结果经转染反义ODN之胃癌细胞出现survivin蛋白表达明显下降,反义ODN伴CDDP联合作用的细胞抑制率达49.9±2.1%,而单独应用CDDP或错配ODN联合CDDP的细胞抑制率分别为30.7±2.9%及34.8±3.4%,两者间呈明显差异(P＜0.01).细胞流式仪分析显示对照组、survivin反义ODN组、survivin错配ODN组的细胞凋亡率分别为8.1±0.9%、15.2±0.7%、8.5±0.8%,反义ODN组细胞凋亡率明显高于对照组、错配ODN组(P＜0.01).结论Survivin基因反义ODN能增强胃癌细胞株SGC7901对顺铂的敏感性,为临床提供一种增强化疗敏感性研究的途径.     

Livin反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞活性的影响

目的 探讨Livin在骨肉瘤细胞中的表达及Livin反义寡核苷酸（ASODN）对骨肉瘤细胞活性及功能的影响。方法 设计针对Livin的ASODN序列,根据转染效率评价结果,选择下调作用最强的ASODN序列制备脂质体-寡核苷酸复合物并转染 MG-63 细胞。采用免疫细胞染色法及Western blotting检测转染24 h后MG-63 细胞中Livin的表达情况,CellTiter-Glo法检测转染72 h后MG-63 细胞的增殖情况,划痕法检测ASODN对MG-63细胞迁移能力的影响,流式细胞仪检测转染24 h后 MG-63 细胞的凋亡情况和细胞周期。结果 Livin蛋白主要表达于MG-63细胞的胞质。选用下调作用最强的ASODN转染MG-63细胞后,Livin蛋白表达显著下降;不同浓度Livin ASODN 对 MG-63细胞的增殖及迁移有剂量依赖抑制作用;而ASODN 组的凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。结论 靶向Livin的ASODN可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力并促进其凋亡。     

骨肉瘤miR-96的表达与细胞增殖和凋亡

背景与目的:微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性的非编码小分子RNA,其主要通过与靶mRNA作用抑制转录后的翻译。miR-96是在多类肿瘤细胞中高表达的小RNA分子。本研究旨在检测miR-96在骨肉瘤组织中的表达,并研究其在骨肉瘤细胞的增殖、细胞周期及凋亡中的意义。方法:运用TagMan MGB探针法检测40例骨肉瘤组织及对应的骨组织中miR-96的表达;应用反义技术降低骨肉瘤细胞(U2-OS和MG-63)中miR-96的表达;采用MTT比色法检测细胞增殖的改变;应用流式细胞技术检测骨肉瘤细胞细胞周期和凋亡情况。结果:在40例骨肉瘤组织中,62.5%(25/40)的骨肉瘤组织miR-96表达明显高于对应骨组织(P<0.05);反义miR-96转染骨肉瘤细胞U2-OS和MG-63后,miR-96的表达明显降低,U2-OS和MG-63骨肉瘤细胞生长受到明显抑制,其生长主要停滞在G0/G1期,而S期和G2/M期细胞的比例下降。另外,降低miR-96的表达,U2-OS和MG-63骨肉瘤细胞早期凋亡明显增加。结论:miR-96在骨肉瘤组织中表达明显上调,降低其表达能明显抑制U2-OS和MG-63骨肉瘤细胞的生长,并诱导细胞早期凋亡增加,miR-96可能成为骨肉瘤基因表达调控的新靶点。     

hTERT基因反义核酸对K562细胞端粒酶活性的影响

探讨人类端粒酶逆转录酶（ｈｕｍａｎ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ,ｈＴＥＲＴ）基因的反义寡核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,ＡＳＯＮＤ）对Ｋ５６２细胞端粒酶活性的影响。方法：采用多聚酶链反应－酶联免疫测定（ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ）方法检测人工合成的反义脱氧寡核苷酸处理Ｋ５６２细胞前后端粒酶活性的改变,以逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）分     

Down-regulation of stathmin is required for TGF-beta inducible early gene 1 induced growth inhibition of pancreatic cancer cells

Transforming growth factor-beta (TGF-beta) inducible early gene 1 (TIEG1) is known to induce apoptosis in TGF-beta sensitive pancreatic cancer cells, yet its effect on TGF-beta resistant cancer cells remains unclear. In this study, TIEG1 was found to induce apoptosis in TGF-beta resistant cancer cells and concurrently enhanced gemcitabine chemosensitivity. Down-regulation of stathmin was noted to associate with TIEG1 expression, whilst ectopic overexpression of stathmin prevented TIEG1 mediated growth inhibition of tumor cells. Small interfering RNAs targeting stathmin inhibited pancreatic cancer cell growth. These suggest that stathmin is a downstream target of TIEG1.     

骨肉瘤MG-63细胞中Survivin的表达及其反义寡核苷酸对细胞增殖与凋亡的作用

目的 探讨Survivin在骨肉瘤细胞中的表达及Survivin反义寡核苷酸（ASODN）对骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法 设计针对Survivin的ASODN和正义核苷酸（SODN）序列,制备脂质体-寡核苷酸复合物并转染MG-63细胞,分为空脂质体（Lip）组、脂质体介导的SODN（Lip-SODN）组和脂质体介导的ASODN（Lip-ASODN）组。采用免疫细胞染色法检测MG-63细胞中Survivin的表达情况,Western blotting检测各组转染48h后的Survivin蛋白水平,MTT法检测转染24、48和72h后MG-63细胞的增殖情况,流式细胞仪检测转染48h后MG-63细胞的凋亡情况。结果 Survivin主要表达于MG-63细胞的胞核。Lip-ASODN组的Survivin蛋白水平均低于Lip-SODN组和Lip组。不同浓度Survivin ASODN对MG-63细胞的增殖抑制程度不同,Lip-ASODN组的细胞增殖抑制率高于Lip组,且呈浓度依赖性;而Lip-SODN组的增殖抑制率与Lip组的差异无统计学意义（P＞0.05）。Lip-ASODN组的凋亡率为（88.47±0.79）％,高于Lip组的（10.01±0.90）％和Lip-SODN组的（4.12±0.25）％,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 靶向Survivin的ASODN可以显著抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖能力,并促进其凋亡。