鼻息肉组织嗜酸粒细胞中水通道蛋白-1和抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达及意义

目的 明确水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)mRNA、抗凋亡基因Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织中的表达、分布及其相关性,探讨AQP-1 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞中表达的意义。方法 16例鼻息肉组织标本来源于鼻息肉切除的患者(女11例,男5例,年龄20-65岁);10例下鼻甲黏膜组织来源于有变应性鼻炎病史的鼻整形患者(女7例,男3例,平均年龄16-58岁)。上述标本取组织相邻切片,应用原位杂交方法检测AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA的表达;以麦格-姬姆萨(May-Griunwald-Giemsa,MGG)染色法鉴别嗜酸粒细胞。结果 16例鼻息肉组织嗜酸粒细胞中均有AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA表达,其阳性细胞表达率分别为(93.16±13.25)％;(84.74±12.10)％;而10例下鼻甲组织嗜酸粒细胞中均有Bcl-2 mRNA表达,但仅有4例表达AQP-1 mRNA;AQP-1mRNA和Bcl-2 mRNA在下鼻甲组织嗜酸粒细胞中阳性细胞表达率分别为(19.54±4.98)％和(16.45±3.12)％。AQP-1 mRNA与Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞的表达呈明显正相关(r=0.875,P<0.01)。结论 AQP-1能够平衡鼻息肉组织嗜酸粒细胞内外液体渗透压,维持其存活,在嗜酸粒细胞抗凋亡中具有重要的意义。     

鼻息肉组织嗜酸粒细胞中水通道蛋白-1和抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达及意义

OBJECTIVE: To study the significance of aquaporin-1 (AQP-1) expression in the eosinophils of nasal polyps. The expression and location of AQP-1 mRNA and apoptosis associated gene Bcl-2 mRNA in nasal polyps were explored. METHODS: Sixteen nasal polyp samples were collected from 11 women and 5 men aged 20-65 years during routine endonasal surgery. Nasal mucosa specimens from the inferior turbinates of 10 patients with allergic rhinitis (7 women and 3 men, aged 16-58 years), collected during septoplasty, were used as controls. The expression of AQP-1 mRNA and Bcl-2 mRNA was detected in serial adjacent sections by in situ hybridization and eosinophils were examined by stain MGG. RESULTS: AQP-1 mRNA expression was found in all 16 nasal polyps and in 4 of 10 inferior turbinate tissues, the mean expression rates were (93.16 +/- 13.25)% and (19.54 +/- 4.98)%, respectively. All 16 nasal polyps and 10 control nasal tissues expressed Bcl-2 mRNA, by the average rates of (84.74 +/- 12.10)% and (16.45 +/- 3.12)%, respectively. The expression of AQP-1 mRNA was positively correlated with Bcl-2 mRNA expression in nasal polyps (r = 0.875, P < 0.01). CONCLUSIONS: AQP-1 contributes to the survival of eosinophils in nasal polyps by keeping the permeation balance of eosinophils.     

水通道蛋白-1在鼻息肉中的表达及其调节机制

目的：研究水通道蛋白-1(aquaporin1, AQP1)在鼻息肉组织中的表达,探讨其 与鼻息肉水肿形成及发展的关系。方法：取鼻中隔偏曲矫正术患者下鼻甲黏膜30例和鼻息肉组织60例。鼻息肉组Ⅱ型1期10例, 2期15例, 3期25例,Ⅲ型10例。采用免疫组织化学检测AQP1在不同类型及不同临床分期鼻息肉和下鼻甲黏膜组织中的表达及在不同类型鼻息肉组织中的表达。结果：（1）鼻息肉上皮层AQP1阳性细胞数显著高于下鼻甲黏膜(Ｐ＜0 01); 不同分型分期鼻息肉上皮层AQP1的阳性细胞数又有差异,Ⅱ型3期和Ⅲ型鼻息肉显著低于Ⅱ型1期鼻息肉(Ｐ＜0 01); 而在鼻息肉血管内皮及腺体细胞中的AQP1的表达明显高于下鼻甲(Ｐ＜0 01); （2）Ⅱ型3期和Ⅲ型鼻息肉血管内皮中AQP1阳性细胞数显著高于Ⅱ型1期鼻息肉和下鼻甲黏膜上皮下组织(Ｐ＜0 01)。结论：AQP1在鼻息肉组织中的异常表达可能与鼻息肉的发生和发展密切相关, 具体机制有待进一步研究。     

两种内淋巴积水动物模型中水通道蛋白1的表达

目的了解水通道蛋白1（aquaporin 1，AQP1）在手术及醛固酮引起的内淋巴积水豚鼠耳蜗及内淋巴囊中的表达情况。方法30只健康豚鼠随机分为手术组、醛固酮注射组和对照组，每组10只。通过手术阻塞内淋巴囊和腹腔注射醛固酮的方法制造出两种内淋巴积水动物模型，采用免疫组化染色及蛋白质印迹法检测豚鼠耳蜗及内淋巴囊中AQP1的表达，通过图像处理软件进行半定量分析。结果手术组出现中、重度内淋巴积水，以顶回最为明显，自顶回向底回减轻；醛固酮注射组出现轻、中度积水，积水多位于底回。两组积水动物模型中AQP1表达的部位与对照组相同，手术组耳蜗与对照组相比AQP1表达差异无统计学意义（t=0．718，P〉0．05）；醛固酮组耳蜗AQP1表达低于对照组（t=6．609，P〈0．01）；对照组与醛固酮组内淋巴囊AQP1表达差异无统计学意义（t=0．998，P〉0．05）。醛固酮组耳蜗外侧壁组织中AQP1蛋白定量低于对照组（t=13．626，P〈0．01）。结论AQP1在手术引起的内淋巴积水中表达没有改变，在醛固酮引起的内淋巴积水中表达下降。AQP1在豚鼠内耳中的表达可能受离子浓度的调节。     

变应性鼻炎患者血清嗜酸粒细胞阳离子蛋白在特异性免疫治疗中的变化

目的:通过观察变应性鼻炎患者接受特异性免疫治疗前后血清嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)的变化,评价免疫治疗的效果,探讨其治疗机制.方法:52例变应性鼻炎患者随机分为治疗组32例和对照组20例,治疗组用舌下含服变应原特异性免疫治疗,对照组给予布地奈德喷鼻,在治疗前后抽静脉血查ECP.结果:治疗组和对照组治疗前血清ECP分别为(26.2±5.9)μg/L和(27.4±6.3)μg/L,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后血清ECP分别为(18.3±3.4)μg/L和(23.2±3.7)μg/L,差异有统计学意义(P<0.01).两组治疗后与治疗前相比,血清ECP差异均有统计学意义(治疗组P<0.01,对照组P<0.05).结论:特异性免疫治疗能有效降低患者血清ECP,其可能的免疫机制是有效地抑制了嗜酸粒细胞在鼻腔的聚集与活化,降低其释放ECP的能力,起到治疗作用.     

抗分泌因子与水通道蛋白1和2在大鼠内耳中的表达及其相互作用

目的研究抗分泌因子（antisecretory factor，AF）与水通道蛋白1、2（aquaporin-1，2，AQP1，2）在大鼠内耳中的表达及其相互作用。方法选取6只健康雄性SD大鼠，采用Envision二步法免疫组化技术，观察AF、AQP1和AQP2在大鼠内耳中的表达情况；选取20只健康雄性SD大鼠，分别取其前庭及耳蜗组织，运用免疫共沉淀结合蛋白质印记方法，用抗AQP1的单克隆抗体和抗AQP2多克隆抗体分别特异性地沉淀前庭和耳蜗组织中的蛋白抗原，用抗AF的特异性抗体检测沉淀物。结果AF在内耳分布广泛，耳蜗血管纹边缘细胞、螺旋韧带Ⅰ-Ⅴ型纤维细胞、前庭膜、基底膜、壶腹嵴等部位呈轻中度阳性反应，圆窗膜呈中强阳性反应，耳蜗螺旋神经节及前庭、耳蜗神经纤维均有阳性分布；AQP1主要分布于血管纹的中间细胞、螺旋韧带Ⅲ型纤维细胞、基底膜以及圆窗膜，染色强度为中重度；AQP2主要表达于螺旋韧带Ⅱ型、Ⅳ及Ⅴ型纤维细胞，呈中重度阳性染色反应，圆窗膜也有轻度表达。以AF特异性抗体分别检测AQP1及AQP2特异性抗体沉淀物中有清晰的阳性条带，相对分子质量约60000，与AF的相对分子质量吻合，而未加AQP1及AQP2特异性抗体的对照实验中无反应条带出现。结论AF、AQP1及AQP2在内耳组织中的分布有一定的规律，多位于与内淋巴关系密切的部位，提示三种蛋白可能参与内淋巴中水的调节。AF的分布区与AQP1及AQP2均有重叠，AQP1、AQP2与AF之间均存在相互结合作用。     

水通道蛋白1及4在大鼠喉组织中的表达

目的：检测水通道蛋白1（AQP1）及4（AQP4）在大鼠喉组织中的表达,以探讨AQP1及AQP4在喉部的分布及在喉部疾病发病过程中可能的作用机制和意义。方法：正常大鼠喉组织标本8例,苏木精一伊红染色用于常规组织病理学检查,免疫组织化学染色用于观察AQP1及AQP4的表达部位。结果：AQP1主要表达于大鼠喉黏膜固有层的血管内皮细胞、喉黏膜腺体及肌细胞核膜上。AQP4主要表达于大鼠喉黏膜鳞状上皮、假复层柱状纤毛上皮、固有层黏膜腺体及肌细胞膜上。结论：AQP1及AQP4表达于大鼠喉的不同部位,在喉部水转运中起不同的作用,或许在喉部疾病中具有重要作用。     

外周血嗜酸粒细胞比例在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉分类中的作用

目的 探讨伴或不伴嗜酸粒细胞增多的慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)患者的临床特点以及外周血嗜酸粒细胞比例在分类中的作用.方法 回顾性分析119例确诊为CRSwNP患者的临床资料.根据术后鼻息肉组织病理检测结果,分为嗜酸粒细胞浸润组(ECRSwNP)与非嗜酸粒细胞浸润组(non-ECRSwNP).将两组患者血嗜酸粒细胞比例、血清总IgE水平、嗅觉评分、鼻窦CT Lund-Mackay评分以及皮肤点刺试验结果分别进行统计学分析,比较两组的差异.同时,将各指标与病理结果进行相关性分析,筛选与病理结果相关性较强的临床指标,采用ROC曲线方法计算曲线下面积及ECRSwNP的诊断截断值.以SPSS 17.0软件进行数据统计分析.结果 ECRSwNP患者组63例,non-ECRSwNP患者组56例.两组患者术前外周血嗜酸粒细胞比例(7.31％:3.90％)、血清总IgE水平(60.9 IU/L∶28.9 IU/L)、嗅觉评分分别为(5.8∶0.4),差异均有统计学意义(U值分别为620.01、1020.53、1092.52,P值均＜0.05).两组上颌窦Lund-Mackay 评分分别为2.0、2.5,差异有统计学意义(U=12.01,P＜0.05);两组额窦、前筛、后筛、蝶窦及窦口鼻道复合体区的Lund-Mackay评分差异均无统计学意义(U值分别为27.5、23.5、22.5、31.5、28.5,P值均＞0.05).两组皮肤点刺试验结果差异无统计学意义(x2=1.96,P=0.19).外周血嗜酸粒细胞比例与血清总IgE均与病理结果中嗜酸粒细胞浸润程度呈正相关趋势(r值分别为0.55、0.24,P值分别为0.001、0.01).ROC曲线下面积为0.818,外周血嗜酸粒细胞比例5.65％为ECRSwNP的诊断截断值.结论 伴或不伴嗜酸粒细胞增多的两组CRSwNP患者在临床特点上有显著差异;可根据患者术前外周血嗜酸粒细胞的比例是否大于5.65％进行初步分类.     

抑制水通道蛋白1对Hep-2细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察水通道蛋白1(AQP-1)对喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用MTT法、流式细胞仪及原位末端标记(TUNEL)法、免疫组织化学SABC方法多种技术分别检测AQP-1的抑制剂乙酰唑胺对细胞生长抑制率、凋亡率和细胞内AQP-1蛋白表达的影响。结果:乙酰唑胺在5×10-5mol/L浓度下对Hep-2细胞内AQP-1蛋白表达有明显的抑制作用,细胞生长抑制率和细胞凋亡率均随时间延长而增大,呈时间依赖性。并且TUNEL法检测的细胞凋亡率与免疫组织化学SABC方法检测的AQP-1蛋白抑制率呈明显正相关(r=0.784,P<0.05)。结论:乙酰唑胺在一定浓度下对AQP-1的抑制可显著诱导喉癌Hep-2细胞凋亡,提示AQP-1可能成为治疗喉癌新的靶点。     

豚鼠实验性变应性鼻炎最轻持续炎性反应模型的建立

目的 建立豚鼠实验性变应性鼻炎最轻持续炎性反应(minimal persistent inflammation,MPI)模型,并初步探讨其病理机制及意义.方法 60只健康雄性Hartley系豚鼠,随机分为A～D共4组,每组15只.A组为阳性对照组,B组为实验组即MPI组,C组为阴性对照组,D组为空白对照组.首先以含卵清蛋白和氢氧化铝凝胶的生理盐水混合液对A、B、C 3组行基础致敏和强化致敏,再分别用1%和0.01%的卵清蛋白溶液或生理盐水长期鼻腔激发.D组始终以生理盐水进行致敏和激发.观察豚鼠鼻腔激发后症状(喷嚏)变化并检测鼻黏膜中嗜酸粒细胞(eosinophils,EOS)浸润程度及上皮细胞内细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)的表达情况.结果 MPI模型组在以l%卵清蛋白溶液激发时,喷嚏平均次数明显多于D组(P<0.05),而与A、C组相比差异无统计学意义(P值均>O.05);改用0.01%卵清蛋白溶液鼻腔激发后,变应性鼻炎症状基本消失,与D组相比差异无统计学意义(P>0.05),但鼻黏膜内仍有少量EOS浸润,EOS计数明显多于D组(P相似文献   

水通道蛋白1在小鼠内淋巴囊的超微结构定位

目的研究水通道蛋白1（aquaporin1，AQP1）在小鼠内淋巴囊表达的精确定位，进一步探讨AQP1在内淋巴囊的作用。方法选取正常昆明小鼠30只，断头分离内耳内淋巴囊，应用冰冻切片免疫荧光染色法研究AQP1在内淋巴囊的组织分布情况，借助免疫电镜观察AQP1在内淋巴囊的超微结构定位。结果AQP1在内淋巴囊上皮下结缔组织层有表达。在纤维细胞胞膜特别是细胞突起的胞膜上可见大量胶体金颗粒标记，而上皮细胞的胞膜未见胶体金颗粒的标记。结论富含AQP1的内淋巴囊上皮下组织可能与内淋巴的吸收及平衡调节密切相关。     

豚鼠自身免疫性梅尼埃病模型的主要内耳抗原分析

目的 探寻导致豚鼠自身免疫性梅尼埃病(autoimmune Meniere's disease,AIMD)的主要内耳组织抗原成分.方法 采用同种粗制内耳抗原免疫豚鼠,观察听觉功能、前庭功能及内耳组织形态学方面的变化,判断AIMD模型与非模型动物.采用免疫印迹法(Western blotting)对比分析模型动物与非模型动物血清内针对内耳组织抗原不同成分特异性免疫反应的差异,寻找只针对AIMD模型动物的特异性成分.结果 内耳组织所含抗原成分较多,免疫后酶联免疫吸附试验(ELISA)结果显示,AIMD模型与非AIMD模型动物均不同程度地存在针对内耳组织抗原的血清抗体水平升高.听功能检测,非AIMD模型动物听力损失不明显.Western bohting结果显示,AIMD模型动物出现针对相对分子质量为68 000、58 000、42 000及28 000蛋白质成分的反应条带,而非AIMD模型动物则未显示这些条带的特异性抗原抗体反应.结论 可能只有出现针对导致内耳自身免疫性疾病的主要抗原成分的特异性免疫反应,才会造成明显的内耳免疫病理损伤和功能障碍.相对分子质量为68 000、58 000、42 000及28 000的内耳组织抗原可能是导致豚鼠自身免疫性膜迷路积水的主要抗原成分.     

Transepithelial migration of eosinophils in experimental nasal allergy in guinea pigs

We examined eosinophil-migration through the nasal epithelium into nasal cavity in a guinea pig model exhibiting 8-day passive cutaneous anaphylaxis antibody-dependent nasal allergy. Transmission electron microscopic observation of this process revealed that eosinophils traversed the epithelium through the intercellular space and split the tight-junctions of epithelial lining cells. Freeze-fracture studies of this process showed that the morphology of tight-junction was not changed after eosinophil-migration. These observations may indicate that tight-junctions close after eosinophil-migration.     

实验性变应性鼻炎最轻持续炎性反应对豚鼠鼻黏膜的影响

目的 建立豚鼠实验性变应性鼻炎最轻持续炎性反应(minimal persistent inflammation,MPI)模型,观察长期处于MPI状态下鼻黏膜的改变,初步探讨这一过程中转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表达的变化.方法 健康雄性Hartley系豚鼠30只,随机分为MPI模型组和对照组,每组15只.首先以含卵清蛋白(ovoalbumin,OVA)和氢氧化铝凝胶的生理盐水混合液行基础致敏和强化致敏,再以低浓度OVA长期鼻腔激发,建立豚鼠变应性鼻炎MPI模型.通过阿辛蓝-过碘酸-希夫(alcian blue-periodic acid-Schiff,AB-PAS)染色和Masson三色胶原染色(Masson's triehrome,MT),分别检测鼻黏膜上皮内杯状细胞的数量以及基底膜内胶原的含量;采用双霞免疫荧光法标记TGF-β1和MMP-9,激光共聚焦显微镜下观察两种因子在鼻黏膜内的分布及表达情况.结果 与对照组相比,MPI模型组豚鼠鼻黏膜内杯状细胞数量明显增多,差异具有统计学意义(t=13.720,P＜0.05);基底膜明显增厚,胶原含量增多(t=4.542,P＜0.05).对照组豚鼠鼻黏膜内,TGF-β1几乎没有表达,MMP-9只在纤毛上皮细胞内有轻微的表达.MPI模型组豚鼠鼻黏膜内,两种因子均有表达.TGF-β1主要表达于黏膜上皮细胞及固有层内浸润的炎细胞胞质和细胞外基质;MMP-9主要表达于黏膜上皮细胞及固有层内浸润的炎细胞胞质中,其在黏膜上皮细胞内的表达强度高于对照组(t=25.218,P＜0.05).结论 长期处于变应性鼻炎MPI状态下,豚鼠鼻黏膜内出现了具有组织重塑特征的改变,TGF-β1和MMP-9可能在这一过程中发挥作用.     

变应性鼻炎豚鼠模型上下气道炎症一致性研究

目的通过鼻致敏豚鼠模型抗原激发后上下气道炎症反应测定来研究上下气道的炎症一致性。方法 Hartley系雄性豚鼠,随机分为实验组和对照组,每组10只。用卵清蛋白（ovalbumin,OVA）制备鼻致敏豚鼠模型,OVA滴鼻激发。通过上下呼吸道行为学观察;鼻灌洗液（nasal lavage fluid,NLF）及肺灌洗液（bronchoalveolarlavage fluid,BALF）的细胞分类;酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测外周血、NLF及BALF中嗜酸细胞阳离子蛋白（eosinophilcationic protein,ECP）、OVA特异性免疫球蛋白（OVA-SIgE）、白细胞介素-5（interleukin-5,IL-5）浓度;鼻黏膜及支气管黏膜病理组织HE染色,计算嗜酸细胞（eosinophils,Eos）浸润程度。结果①实验动物滴鼻激发后,实验组均出现典型的鼻部症状及呼吸频率改变,实验组的行为学评分和呼吸频率与对照组比较,有统计学差别（P〈0.01）。②外周血、NLF和BALF中,实验组OVA-sIgE、ECP和IL-5与各自对照组比较,其差别均有统计学差别（P均〈0.05）;实验组NLF和BALF中,OVA-SIgE和ECP含量比较,其差别有统计学意义（P均〈0.05）,但IL-5含量比较,差别无统计学意义（P=0.770）。③实验组NLF和BALF中淋巴细胞和Eos计数同对照组比较,有显著性统计学差别（P分别为0.000和0.002）;实验组NLF和BALF的淋巴细胞和Eos计数比较,有统计学意义（P均〈0.05）。④实验组下鼻甲黏膜、支气管黏膜和肺组织内Eos计数,与对照组比较,有显著性统计学意义（P〈0.01）;实验组的下鼻甲黏膜、支气管黏膜和肺组织黏膜Eos计数相比较,差别有显著性统计学意义（P〈0.01）。结论上下呼吸道炎症反应具有一致性,且上呼吸道变应性炎症较下呼吸道明显。     

豚鼠老化模型听反应阈检测及基因多态性标记分析

目的 建立D-半乳糖致豚鼠老化模型,应用扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析检测与听力损失相关的分子生物学标记,寻求老年性聋发病的分子机制.方法 51只豚鼠随机分为三组:A组(模型实验组)21只,5%D-半乳糖腹腔注射(200 mg·kd-1·d-1),共6周;B组(模型对照组)15只,仅给予生理盐水注射.A、B两组注射前后分别进行听性脑干反应(ABR)检测,将两组豚鼠置于噪声环境中7 d,每天噪声暴露8 h,结束后再次检测ABR阈值.C组(空白对照组)15只,不加任何处理,仅予以同步检测ABR阈值.用比色法检测三组肝和脑组织的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)含量.提取三组豚鼠内耳组织DNA,应用AFLP技术筛选差异位点.结果 注射后A组豚鼠ABR阈值较B组提高,但两组阈移之间差异无统计学意义(t=1.14,P>0.05),噪声暴露后,A组ABR阈值(峰等效声压级)平均提高(22.97±10.56)dB,B组提高(14.16±7.36)dB,组间差异具有统计学意义(t=2.78,P<0.05).A组肝和脑组织中SOD活性明显低于B组,MDA含最则明显高于B组,其差异具有统计学意义(P值均<0.01).AFLP分析发现有与耳聋一致的多态性标记.结论 D-半乳糖可以诱导豚鼠衰老,此模型豚鼠听反应阈虽无明显提高,但对噪声的敏感性增加,AFLP检测到的差异位点可能与其对噪声敏感有关.