重要条件致病真菌感染组织免疫组化研究

目的 探索在组织中鉴定重要条件致病真真的组织病理学方法。方法 以实验小鼠白念珠菌感染组织和可疑念珠菌、隐球菌和曲霉感染的临床组织病理标本进行ＰＡＳ染色和免疫组化染色，并比较了两种方法的敏感性。结果 兔抗白念株菌多克隆抗体、兔抗新生隐球菌多克隆抗体和鼠抗曲霉单克隆抗体可以分别鉴定组织中的白念珠菌、新生隐球菌和曲霉。免疫组经和ＰＡＳ染色的敏感性差异无显著性。结论 免疫组化为组织中确定真菌和鉴定真菌种属     

新生隐球菌荚膜多糖葡萄糖醛酸木糖甘露聚糖的意义

新生隐球菌是一种机会致病真菌,隐球菌病严重威胁着免疫缺陷人群.葡萄糖醛酸木糖甘露聚糖是新生隐球菌荚膜多糖的主要成分,是一种分子结构多样的线性多糖,与新生隐球菌的免疫原性和毒力密切相关.葡萄糖醛酸木糖甘露聚糖结合FcγRⅡB介导免疫抑制作用,并参与形成生物膜,从而抑制抗隐球菌感染免疫.葡萄糖醛酸木糖甘露聚精单克隆抗体和疫苗疗法等免疫疗法或许可以改善免疫抑制状态,为隐球菌病提供治疗思路,也使艾滋病等高危人群预防隐球菌病成为可能.     

细胞因子与新生隐球菌感染

了解白介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子在隐球菌感染过程中的变化和作用 ,以及影响上述因子分泌的菌体成分或其他因素 ,有助于进一步阐明宿主抗隐球菌免疫反应机制以及临床上应用细胞因子的治疗前景     

细胞因子与新生隐球菌感染

了解白介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子在隐球菌感染过程中的变化和作用，以及影响上述因子分泌的菌体成分或其他因素，有助于进一步阐明宿主抗隐球菌免疫反应机制以及临床上应用细胞因子的治疗前景．     

体内CD_8~+丁细胞缺失的小鼠感染高毒力株的新生隐球菌后存活率下降

新生隐球菌主要感染细胞免疫缺陷病人,尤其是AIDS病患者。一般由呼吸道起肺部感染,甚至脑膜炎。因此肺和全身的防御功能对预防隐球菌感染是必要的。但其机制尚未阐明。 已知细胞免疫对宿主抗隐球菌感染起重要作用。CD_4~+T细胞对低毒力和高毒力隐球菌都有保护作用,而CD_8~+T细胞(以下简称CD_8)对低毒力有保护作用,但对致死性高毒力感染尤其是播散性感染致死性脑膜炎的作用还不清楚。本实验为此而设计。实验方法:体内注射抗-CD_8单克隆抗体并证实CD_8数和功能完全缺失(以定量及MLR法)的小鼠和注射IgG作对照的小鼠分别气管内和静脉内注射高毒力新生     

真菌病

２００１０７９０重要条件致病真菌感染组织免疫组化研究／狄梅（北京大学一院皮肤科）…／／中华皮肤科杂志．－２０００，３３（５）．－３２４～３２６ 对实验小鼠白念珠菌感染组织的可疑念珠菌、隐球菌和曲霉感染的临床组织病理标本进行ＰＡＳ染色和免疫组化染色，并比较了两种方法的敏感性。结果表明，兔抗白念珠菌多抗、新生隐球菌多抗和鼠抗曲霉单抗可分别鉴定组织中的白念珠菌、新生隐球菌和曲霉。免疫组化和ＰＡＳ染色的敏感性差异无显著性。说明免疫组化方法有助于临床诊断。参９（张孝友）２００１０７９１玻璃珠－盐析法提取常…     

新生隐球菌格鲁比变种、新生变种和格特隐球菌的多重聚合酶链反应鉴定

目的 建立一种基于核糖体基因内间隔区（IGS）的多重聚合酶链反应（PCR）,用于快速鉴定新生隐球菌新生变种、格鲁比变种和格特隐球菌。方法 选取新生隐球菌和格特隐球菌IGS中变异度最高的Ⅰ区（IGS1）为靶点,经ClustalW2多重比对,并结合Oligo6软件在不同序列位点设计针对新生隐球菌新生变种、格鲁比变种和格特隐球菌的引物用于多重PCR分析。通过51株新生隐球菌（VNⅠ-VNⅣ和VNB基因型）和41株格特隐球菌（VGⅠ-VGⅣ基因型）对该方法进行验证,并将该方法与已报道的CGB显色培养和采用特异性引物GPA1A、CLA4D和SOD1gattii扩增格鲁比变种、新生变种和格特隐球菌的单一引物PCR方法进行比较。结果 基于IGS的多重PCR分析成功鉴定所有92株新生隐球菌和格特隐球菌,对其他常见致病酵母的扩增均阴性,显示所设计引物较高的特异性;已报道的基于GPA1A和CLA4D引物PCR分别在鉴定2株和1株格特隐球菌时出现假阳性结果;CGB培养基在鉴定1株格鲁比变种和1株新生变种时出现假阳性结果。上述方法在鉴定时均未出现假阴性结果。结论 建立的多重PCR可快速准确地鉴定新生隐球菌新生变种、格鲁比变种、AD杂合子和格特隐球菌,且优于已报道的单一引物PCR 或CGB显色培养法。     

艾滋病合并新生隐球菌性脑膜炎41例临床分析

目的:探讨艾滋病合并新生隐球菌性脑膜炎患者的临床特征及疗效。方法:回顾性分析2011年4月——2018年6月该院收治的41例艾滋病合并新生隐球菌性脑膜炎患者的临床特点、实验室和辅助检查及疗效等。结果:所有患者中临床表现为发热者25例(61.0%),头痛者23例(56.1%),恶心呕吐者8例(19.5%)及颈项强直者29例(70.7%)。CD4⁺T淋巴细胞计数<100×10⁶个/L者40例(97.6%);脑脊液压力>180 mmH₂O者34例(82.9%),脑脊液墨汁染色阳性者34例(82.9%),脑脊液培养示新生隐球菌阳性者28例(68.3%),6例脑脊液隐球菌荚膜多糖抗原检查均阳性(100%),合并新生隐球菌败血症者23例(56.1%);头颅影像学检查异常者12例(29.3%)。经规范化抗隐球菌治疗,有效率为70.7%(29例),病死率为29.3%(12例),其中复发率为2.4%(1例)。结论:对疑似艾滋病合并新生隐球菌性脑膜炎感染患者应及时行腰椎穿刺术、脑脊液病原学检测及隐球菌荚膜多糖抗原检查,对疑似患者...     

颅内接种热灭活隐球菌对小鼠隐球菌脑膜脑炎作用的研究

目的 研究脑内接种热灭活的隐球菌(H-CN)在中枢神经系统隐球菌感染中的作用及对小鼠脑和脾白介素-1β(IL-1β)、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达的影响。方法 建立脑内接种隐球菌造成中枢神经系统感染的小鼠模型,分实验组(给予2次脑内接种H-CN)、对照组(给予2次脑内接种生理盐水),分别取2组小鼠的脑和脾用RT-PCR方法检测IL-1β、IFN-γ及TNF-α的mRNA表达,然后给予2组小鼠脑内接种致死量的隐球菌,观察2组小鼠的生存时间及脑组织中菌落形成单位的变化。结果 实验组与对照组相比小鼠生存时间显著延长,小鼠脑组织中隐球菌菌落形成单位明显减少。小鼠脑组织总RNA以IL-1β、IFN-γ、TNF-α引物进行的RT-PCR产物,实验组IL-1β表达阳性,IFN-γ、TNF-α均表达阴性;对照组IL-1β、IFN-γ、TNF-α均表达阴性。小鼠脾组织总RNA以IL-1β、IFN-γ、TNF-α引物进行的RT-PCR产物2组均表达阳性,差异无显著性。结论 给予小鼠脑内接种H-CN可提高中枢神经系统对隐球菌感染的抵抗力,中枢神经系统抗隐球菌机制很可能与H-CN引起局部细胞因子IL-1β的分泌有关。     

墨西哥隐球菌脑膜炎患者中新生隐球菌格特变种的首次报导

近来据文献报导新生隐球菌格特变种(Cryptococcus neoformans var.gattii)可发生在艾滋病患者及非流行区,且与新生隐球菌新型变种(Cryptococcus neoformans var.neoformans)所致隐球菌脑膜炎的临床经过有所不同,因此有必要对隐球菌脑膜炎的病原体的鉴定、分布和临床特点进行研究。作者对此作了研究。 患者来源于墨西哥国立神经病学、神经外科学研究所。1989～1994年共有20例隐球菌脑膜炎患者,隐球菌从患者脑脊液中分离。用二     

“酵母鉴定系统”对鉴定医学上重要酵母的评价

作者利用新近市售的“酵母鉴定”(Yeast-IDENT,Y-I)系统对9属医学重要酵母91株进行了评价。该鉴定系统中含有酵母尿素、磷酸对硝基酚等,另以一般鉴定法包括光镜形态学、碳原同化、发酵试验、其他营养试验及(或)API20C 试验等进行对照。结果显示:Y-I 鉴定系统对白念珠菌、伪热带念珠菌,白色隐球菌、新生隐球菌、红色隐球酵母,绿色掷孢酵母、念珠隐球菌菌光滑球拟酵母、二组符合率为100%。对其他菌如克柔念     

新生隐球菌热休克反应对两性霉素B敏感性的影响

目的:探讨新生隐球菌热休克反应在体外药物敏感性实验中对两性霉素B敏感性的影响,以及热休克蛋白70(Hsp70)在新生隐球菌致病中的作用。方法:根据NCCLS的M-27-p方案,测定新生隐球菌在热休克(42℃×30min)前后两性霉素B对新生隐球菌的最小抑菌浓度(MIC)。随机抽取其中7株新生隐球菌,采用鼠抗人、猪、狗等的Hsp70抗体,通过Western印迹法来检测其Hsp70,根据实验信号强弱定性判断在不同刺激条件下的Hsp70产量。结果:①在热休克后两性霉素B对新生隐球菌的MIC较热休克前有明显提高(P=0.002)。②在42℃×30min热应激下新生隐球菌Hsp70产量较在30℃培养下增加。结论:新生隐球菌对两性霉素B的敏感性下降受其热休克反应的影响。结合临床,在较难治愈的病例中Hsp70表达量增加,热休克反应增强;并可能产生与人体Hsp70的交叉免疫反应,推测其对新生隐球菌的致病性可能有一定的作用。     

新生隐球菌的基因结构分析

综述了近年来克隆和鉴定的新生隐球菌基因,并对其基因结构进行了分析。新生隐球菌基因的克隆,有助于研究新生隐球菌的分类地位,种系发生来源以及进行流行病学调查,更可为发展抗真菌治疗药物提供全新的靶目标。     

新生隐球菌的基因结构分析

综述了近年来克隆和鉴定的新生隐球菌基因，并对其基因结构进行了分析，新生隐球菌基因的克隆，有助于研究新生隐球菌的分类地位，种系发生来源以及进行流行病学调查，更可为发展抗真菌治疗药物提供全新的靶目标。     

播散性隐球菌病

报告1例免疫功能正常的播散性隐球菌病.患儿女,11岁.全身包括肺、淋巴结、骨髓、肝脾、脑及皮肤等多器官受累,表现为痤疮样皮损.患儿临床症状进展缓慢,全身中毒症状轻微,嗜酸性粒细胞升高.皮损、淋巴结组织病理检查示组织细胞内、外大量隐球菌酵母细胞,PAS染色阳性.皮损、骨髓、淋巴液真菌培养阳性,菌种鉴定为新生隐球菌,经PCR扩增测序为新生隐球菌grubii变种.     

中国致病格特隐球菌的基因亚型分析

目的 探讨中国致病格特隐球菌的基因亚型与世界范围内格特隐球菌的分子流行病学关系。方法 扩增受试格特隐球菌IGS1、PLB1和GEF1位点的部分可变区,检索GenBank上相应位点的序列信息,进行多位点的序列比对和系统发育分析。结果 ①我国VGⅠ基因型和α交配型菌株在3个位点的序列与以菌株WM276为代表的一种基因亚型相同,国内首株VGⅡ基因型和α交配型菌株的序列与温哥华岛致病株R272一致。②针对GEF1基因部分片段的聚类分析准确鉴定受试格特隐球菌的基因型和交配型。结论 中国致病格特隐球菌VGⅠ基因型与世界上分布较广的一种基因亚型相似,首株VGⅡ基因型菌株与温哥华岛致病性弱的VGⅡb基因亚型相似。     

快速协助诊断新型隐球菌感染

关于新型隐球菌的实验诊断,方法较多,我科从1978年开始对新型隐球菌感染的实验诊断进行了研究,现将此方法报道如下.     

两性霉素B对新生隐球菌酚氧化酶活性的影响

新生隐球菌作为一种重要条件致病菌日益受到重视,黑素是新生隐球菌重要的致病因子之一,在新生隐球菌黑素合成过程中,酚氧化酶起着关键性的作用,是催化产生黑素的惟一酶类,并且酚氧化酶的含量影响着黑素的产生。本实验试图揭示两性霉素B对新生隐球菌酚氧化酶活性的影响。     

见于扎伊尔艾滋病患者的新型隐球菌格蒂变种所引起的脑膜炎

艾滋病诱发隐球菌性脑膜炎者甚多见,主要由新型隐球菌所引起,作者首次报告由新型隐球菌格蒂变种所引起的一例.患者为扎伊尔28岁异性恋男性,铜矿工人,因突发阵发性剧烈头痛二日入院,伴神志模糊、尿沉渣检查有许多红,白细胞,脑脊液检查:淋巴细胞5/mm~3,蛋白55mg//dl,糖67mg/dl,涂片印度墨汁染色找到带荚膜的圆及棒形菌,沙氏葡萄糖琼脂37℃有新型隐球菌生长,经鉴定为格     

抗人毛乳头细胞造血干细胞016基因多克隆抗体的制备

目的:在大肠杆菌中重组表达人毛乳头细胞造血干细胞(HSPC)016基因功能序列,制备特异性多克隆抗体。方法:采用PCR技术从pcDNA3.1( )/HSPC016中扩增出目的基因克隆至pMD18-T载体,酶切回收目的片段连接至表达载体pET-28a( )。重组质粒经酶切及测序鉴定后转化工程菌E.coliBL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对目的蛋白N-端氨基酸测序鉴定后免疫日本大耳白兔,制备兔抗HSPC016多抗血清,以双向免疫扩散、ELISA、Westernblotting检测抗体效价及特异性。结果:在大肠杆菌中高效表达了相对分子质量约7200的HSPC016蛋白,目的蛋白N-端氨基酸测序结果与预期序列完全一致。双向免疫扩散显示兔抗HSPC016多克隆抗体效价为1∶16;ELISA分析兔抗HSPC016血清的滴度可达320000EU;Westernblotting显示抗血清可与原核表达的HSPC016蛋白特异结合。结论:成功制备了兔抗HSPC016多抗血清,为进一步研究HSPC016蛋白的结构与生物学意义奠定了基础。