As2O3对人膀胱癌细胞凋亡和MDR1表达及细胞周期的影响

目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3 )对人膀胱癌细胞株BIU 87的凋亡诱导作用及对多药耐药基因 (MDR1)蛋白表达、细胞周期的影响。方法 :采用四氮唑蓝 (MTT)法检测As2 O3 不同浓度、不同作用时间对BIU 87细胞的生长抑制率 ;流式细胞术(FCM )检测不同浓度As2 O3 作用 72h后细胞中与凋亡有关蛋白Fas、bcl 2及MDR1蛋白表达、细胞周期变化。结果 :As2 O3 可有效抑制BIU 87细胞的生长增殖 ,与浓度、时间相关 ,P <0 0 5 ;Fas、bcl 2的表达分别与浓度增高呈正、负相关 ,P <0 0 5 ,且二者随浓度增高呈负相关 ,P <0 0 5 ;MDR1蛋白表达与对照组相比As2 O3 1μmol/L作用后升高 ,P <0 0 5 ,2、5 μmol/L作用后降低 ,P <0 0 5 ;随As2 O3 浓度升高 ,细胞周期被阻滞在G0 /G1期。结论 :As2 O3 可有效抑制人膀胱癌细胞的生长增殖 ,诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期可能起了重要作用     

As2O3对人膀胱癌细胞凋亡和MDR1表达及细胞周期的影响

目的：观察三氧化二砷(As2O3)对人膀胱癌细胞株BIU-87的凋亡诱导作用及对多药耐药基因(MDR1)蛋白表达、细胞周期的影响。方法：采用四氮唑蓝(MTT)法检测As2O3不同浓度、不同作用时间对BIU-87细胞的生长抑制率；流式细胞术(FCM)检测不同浓度As2O3作用72h后细胞中与凋亡有关蛋白Fas、bcl-2及MDR1蛋白表达、细胞周期变化。结果：As2O3可有效抑制BIU-87细胞的生长增殖，与浓度、时间相关，P＜0．05；Fas、bcl-2的表达分别与浓度增高呈正、负相关，P＜0．05，且二者随浓度增高呈负相关，P＜0．05；MDR1蛋白表达与对照组相比As2O3 1 μmol／L作用后升高，P＜0．05，2、5 μmol／L作用后降低，P＜0．05；随As2O3浓度升高，细胞周期被阻滞在G0／G1期。结论：As2O3可有效抑制人膀胱癌细胞的生长增殖，诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期可能起了重要作用。     

三氧化二砷对人膀胱癌细胞BIU-87作用的体外研究

目的观察三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人膀胱癌细胞株BIU-87的作用,并探讨其作用机制.方法采用四氮唑蓝(MTT)法检测As2O3不同浓度、不同时间对BIU-87细胞的生长抑制率,同时流式细胞仪检测不同浓度As2O3作用72 h后细胞中与凋亡有关蛋白Fas、Bcl-2的表达.结果As2O3可有效抑制BIU-87细胞的生长,具有浓度、时间依赖性特点.Fas、Bcl-2的表达分别与浓度增加呈正、负相关,P<0.05,且二者随浓度增高呈负相关,P<0.05.结论As2O3可有效抑制膀胱癌细胞生长,其作用机制与凋亡有关.     

三氧化二砷对膀胱癌BIU-87细胞增殖及生存素表达的影响

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对膀胱癌BIU-87细胞增殖及生存素表达的影响。方法:用As2O3处理膀胱移行细胞癌株BIU-87后,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖;用细胞流式仪检测细胞周期及凋亡,生存素(Survivin)表达的变化。结果:三氧化二砷作用BIU-87细胞后,细胞生长受到明显的抑制,Survivin的表达明显减少,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,且均具有浓度依赖性。结论:As2O3对人膀胱癌细胞株BIU-87有抑制其生长、增殖和诱导凋亡的作用,且呈现浓度依赖性。     

三氧化二砷对膀胱癌BIU-87细胞增殖及生存素表达的影响

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）对膀胱癌BIU-87细胞增殖及生存素表达的影响。方法：用As2O3处理膀胱移行细胞癌株BIU-87后,用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测细胞增殖;用细胞流式仪检测细胞周期及凋亡,生存素（Survivin）表达的变化。结果：三氧化二砷作用BIU-87细胞后,细胞生长受到明显的抑制,Survivin的表达明显减少,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,且均具有浓度依赖性。结论：As2O3对人膀胱癌细胞株BIU-87有抑制其生长、增殖和诱导凋亡的作用,且呈现浓度依赖性。     

三氧化二砷对人肝癌细胞生长增殖的影响

目的观察三氧化二砷（As2O3）对人BEL7402肝癌细胞株的作用及其机制。方法采用MTF法检测As2O3对BEL7402细胞的生长抑制率;流式细胞仪测定经不同浓度As2O3处理后的BEL7402细胞周期及增殖细胞核抗原（PCNA）变化,同时Annexin V—FITC／PI双染法检测细胞凋亡。结果三氧化二砷可显著抑制BEL7402细胞生长,且剂量-效应关系显著（r=0．9650,P〈0．01）,半数抑制浓度（IC50）为4．93μmol／L;BEL7402经As2O3处理后可发生凋亡。As2O3能显著下调PCNA蛋白表达（P〈0．01）,并使细胞周期阻滞在G2／M期。结论三氧化二砷可有效抑制人肝癌BEL7402细胞生长增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡、下调PCNA表达及阻滞细胞周期有关。     

As2O3对淋巴瘤Raji细胞抑制效应及其Id4基因表达的影响

目的:探讨As2O3对恶性淋巴瘤细胞的作用和对DNA结合抑制因子(Id4)基因表达的影响.方法:体外培养人Burkitt's淋巴瘤细胞株Raji细胞,设对照组和用不同浓度的As2O3作用不同时间处理Raji细胞的实验组.MTT比色法检测细胞生长;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡并分析As2O3对细胞周期的影响.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测处理前后Id4 mRNA的表达情况.结果:实验组MTT比色实验结果表明,AsO3各浓度组作用于Raji细胞24、48及72 h后抑制率为12.15%～92.17%,P<0.05;流式细胞术检测细胞凋亡结果显示.实验组As2O3各浓度组作用于Raji细胞48 h后出现明显的凋亡峰,对照组未见凋亡峰或仅有低平的凋亡峰;细胞周期分析结果显示,实验组As2O3各浓度组作用于Raji细胞48 h后,As2O3可阻滞Raji细胞于G0/G1期,且随着As2O3浓度的增加,阻滞作用增强,呈一定剂量依赖关系.随药物浓度增加,Raji细胞中Id4基因mRNA的相对表达量逐渐增加,呈一定剂量依赖关系.结论:As2O3体外对Raji淋巴瘤细胞生长具有明显的抑制作用;As2O3能诱导Raji细胞凋亡,且使G0/G1期细胞比例增加,同时S及G2/M期细胞比例减少.随着As2O3浓度增加Id4基因出现表达.     

As2O3联合L-OHP对HepG2肝癌细胞株的体外抑制作用

目的探讨As2O3联合L-OHP对HepG2肝癌细胞株的体外抑制作用。方法采用MTT法（四唑盐比色法）动态观察As2O3联合L-OHP对HepG2肝癌细胞的生长抑制作用,并采用两药相互作用系数（CDI）来评价两药相互作用的性质;应用流式细胞术（FCM）检测凋亡率和细胞周期分布。结果 As2O3与L-OHP联合应用,对HepG2肝癌细胞株的生长抑制、诱导凋亡作用均较相应的单药增强。流式细胞直方图上可见明显的＂凋亡峰＂,且As2O3使肝癌细胞周期阻滞于G2/M期,L-OHP使细胞周期阻滞于S期和G2/M期,两药合用使细胞周期阻滞于S期和G2/M期。结论中低浓度As2O3与L-OHP联合作用具有显著的协同效益,其主要机制可能是As2O3联合L-OHP诱导肝癌细胞凋亡作用及增强细胞周期阻滞作用。     

c-Myc和Fas在三氧化二砷体外诱导HL-60细胞凋亡中的变化与作用的研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)在体外诱导急性早幼粒白血病(acute promyelo-cytic leukemia,APL)细胞HL-60凋亡的分子机制。方法:采用MTT方法检测As2O3对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和Fas蛋白表达,RT-PCR检测c-Myc和Fas的mRNA表达。结果:4.0μmol/L的As2O3作用96h可抑制70%的HL-60细胞,并使细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞凋亡,P&lt;0.01;Fas蛋白表达升高,作用72h后阳性率由对照组的9.63%增加为32.84%,P&lt;0.01;Fas mRNA表达升高,c-Myc的mRNA表达降低,P&lt;0.01。结论:As2O3诱导HL-60细胞凋亡的机制在于引起细胞周期阻滞,上调Fas蛋白及mRNA表达,下调c-Myc的mRNA表达。     

As2O3联用IFN-α诱导肾癌细胞株789-0凋亡的实验研究

目的:研究不同浓度As2O3对肾癌细胞株789-0的凋亡影响及联用IFN-α有无协同作用,并探讨其作用机制.方法:采用MTT法检测As2O3单用及联用IFN-α对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测其对细胞周期和凋亡的影响.结果:(0.5-4)μmol/L的As2O3对肾癌789-0细胞的增殖均有一定抑制作用,且随浓度增加呈增强趋势.联用1000IU的IFN-α后,肾癌细胞的增殖抑制率明显高于相应浓度的单用As2O3组,具协同作用.2.83μmol/L.(IC50)的As2O3作用于肾癌789-0细胞48h后呈现G2/M期阻滞,凋亡特征明显;联用IFN-α后呈现Go/C1期、G2/M期阻滞,凋亡率显著增高.结论:As2O3能抑制肾癌789-0细胞的增殖并诱导细胞凋亡,联用IFN-α可产生协同作用.其机制可能与干扰细胞周期的不同时相有关.     

三氧化二砷对膀胱癌细胞BIU-87耐药相关基因的影响

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）对耐羟基喜树碱的膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT耐药性逆转的机制。方法：用As2O3与羟基喜树碱联合处理BIU-87/HCPT细胞后,用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、P-gp、MRP1、GST-π和生存素（survivin）表达的变化。结果：As2O3与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU-87/HCPT细胞后,细胞生长受到明显抑制。单独应用As2O3的凋亡率为11.07%,As2O3联合羟基喜树碱后的凋亡率为18.23%,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,As2O3明显增加羟基喜树碱的作用（P〈0.05）。As2O3使P-gp、MRP 1、GST-π和sur-vivin的表达明显减少,且均具有浓度依赖性（P〈0.05）。结论：As2 O3可减少耐药相关基因的表达,部分逆转膀胱癌细胞的耐药性,促进凋亡,且呈现浓度依赖性。     

三氧化二砷对膀胱癌细胞BIU-87耐药相关基因的影响

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对耐羟基喜树碱的膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT耐药性逆转的机制.方法:用As2O3与羟基喜树碱联合处理BIU-87/HCPT细胞后,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、P-gp、MRP1、GST-π和生存素(survivin)表达的变化.结果:As2O3与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU-87/HCPT 细胞后,细胞生长受到明显抑制.单独应用As2O3的凋亡率为11.07%,As2O3联合羟基喜树碱后的凋亡率为18.23%,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,As2O3明显增加羟基喜树碱的作用(P<0.05).As2O3使P-gp、MRP 1、GST-π和survivin的表达明显减少,且均具有浓度依赖性(P<0.05).结论:As2O3可减少耐药相关基因的表达,部分逆转膀胱癌细胞的耐药性,促进凋亡,且呈现浓度依赖性.     

三氧化二砷对膀胱癌细胞耐药性的影响

目的探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）对膀胱癌细胞株BIU-87耐药性的影响。方法用As2O3与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU-87后,用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和生存素（survivin）表达的变化。结果三氧化二砷与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU-87细胞后,细胞生长受到明显的抑制s,urvivin表达明显减少,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,且均具有浓度依赖性。结论 As2O3可增强化疗药物作用,部分逆转膀胱癌的耐药性,并促进凋亡,且呈现浓度依赖性。     

PI3K/AKT信号通路阻断药联合小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用

目的 探讨采用磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制药——LY294002抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路联合小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用.方法 采用MTT法检测细胞增殖情况;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布情况;采用Western blot检测细胞中PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2、BAX蛋白表达情况.结果 随着小檗碱作用浓度的增加,DU145细胞的增殖率逐渐降低;不同浓度小檗碱与LY294002联合处理对DU145细胞增殖的抑制作用均较相同浓度小檗碱单独处理增强(P﹤0.05).与空白对照组相比,小檗碱组DU145细胞的凋亡率增高(P﹤0.05),G0/G1期细胞所占比例增高(P﹤0.05),PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2蛋白表达水平均下调(P﹤0.05),BAX蛋白表达水平上调(P﹤0.05).与小檗碱组和空白对照组相比,小檗碱+LY294002组DU145细胞的凋亡率增高(P﹤0.05),G0/G1期细胞所占比例增高(P﹤0.05),PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2蛋白表达水平均下调(P﹤0.05),BAX蛋白表达水平上调(P﹤0.05).结论 小檗碱能够抑制DU145细胞增殖,并促进细胞凋亡和细胞周期阻滞,采用LY294002阻断PI3K/AKT信号通路能够明显增强小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用.     

Survivin基因siRNA真核表达载体的构建及其对转染膀胱癌细胞Survivin表达的抑制作用

目的构建针对Survivin基因的siRNA(smallinterferenceRNA)真核表达载体,并观察其对转染的膀胱癌细胞中Survivin基因表达和细胞凋亡的影响。方法应用siRNA设计软件设计针对Survivin基因的特异性短链寡核甘酸,化学合成后经退火形成双链siRNA模板,通过克隆到质粒pSilencer1.0-U6构建siRNA真核表达载体并用酶切和测序鉴定;然后将其转染人膀胱癌细胞株BIU-87,以反义Survivin寡核甘酸(ASODN)抑制效果为对照,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法和DNA原位末端标记(TUNEL)法检测BIU-87细胞生长抑制率(IR)和凋亡指数(AI),半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot检测BIU-87细胞中SurvivinmRNA及其蛋白的表达。结果酶切和测序证实siRNA真核表达载体构建成功。siRNA对BIU-87细胞的IR和AI(62.14%和33.77%)均分别显著高于ASODN(39.33%和23.98%)和空白对照组(1.98%和3.75%),P均<0.05,SurvivinmRNA及其蛋白相对表达水平均显著低于ASODN和空白对照组。结论构建的siRNA真核表达载体能有效地抑制Sur-vivinmRNA的转录和表达,诱导BIU-87细胞凋亡和抑制细胞生长,为膀胱肿瘤的基因治疗提供新的方法和手段。     

膀胱癌雌激素受体表达与他莫昔芬拮抗治疗的研究

背景与目的： 探讨他莫昔芬(TAM)联合阿霉素(ADM)对膀胱癌BIU-87细胞株生长的抑制作用。 材料与方法： 采用免疫组织化学法检测雌激素受体的表达;应用MTT法测定不同浓度的TAM(1、5、10 μmol/L)及ADM(0.1、1、10 μmol/L),单独和联合作用对BIU-87细胞的生长抑制率,观察TAM的增敏作用;采用原位杂交法检测各实验组bcl-2 mRNA的水平。 结果： 膀胱癌BIU-87细胞表达雌激素受体;TAM单独作用在低浓度时(1 μmol/L)对BIU-87生长无抑制作用;TAM联合ADM作用时,对BIU-87细胞生长的抑制率增加,其中TAM 10 μmol/L组增加显著(P<0.05),显示TAM能提高ADM的敏感性,起到化疗的增敏作用;随着TAM浓度的增加和时间的延长,BIU-87细胞bcl-2 mRNA的表达下调。 结论： 他莫昔芬能增加膀胱癌细胞株BIU-87对化疗药物ADM的敏感性,并抑制细胞增殖;其增敏的作用机制可能与bcl-2的表达下调有关。     

三氧化二砷对人肺腺癌细胞的细胞毒作用及其机制

背景与目的:三氧化二砷(arsenictrioxide,As2O3)应用于急性早幼粒细胞性白血病(acutepromyelocyticleukemia,APL)的临床化疗已显示较好疗效。目前,已开展了将As2O3用于治疗胃癌、头颈部癌和食管癌等实体瘤的实验研究。本研究旨在探讨As2O3对人肺腺癌SPCA1细胞的毒性及其作用机制。方法:MTT法检测As2O3对SPCA1细胞的生长抑制作用;流式细胞术测定经不同浓度As2O3处理后的SPCA1细胞的细胞周期改变、凋亡相关蛋白Fas和Bcl-2阳性细胞百分率及细胞内钙离子(IECa2+)含量变化。结果:As2O3可显著抑制SPCA1细胞生长增殖,且呈剂量-效应关系(r=0.973,P<0.05),其IC50为8.56μmol/L;As2O3能显著增加Fas蛋白表达和IECa2+含量(P<0.05),并使细胞周期阻滞在G2/M期,但对Bcl-2表达无影响(P>0.05)。结论:As2O3对SPCA1细胞有显著的毒性作用,其机制可能与上调Fas表达和增加IECa2+含量及阻滞细胞周期有关。