乳腺癌血清p53抗体的临床意义及其与其他生物学参数间的关系

p53是一种抑癌基因，与细胞DNA修复、衰老、分化、凋亡和细胞周期的阻滞密切相关。野生型p53的缺失可导致基因的不稳定和细胞的恶性转化。有证据表明，p53突变会导致细胞内突变型p53的积聚，同时可以在患者血中检测到p53抗体。p53抗体在美国及欧洲妇女乳腺癌中出现率为15％～     

不同p53状态的肝癌细胞系DNA损伤修复能力的比较

目的 观察不同p53状态的肝癌细胞在DNA损伤因素存在下，探讨p53在肝细胞癌发生过程中的作用。方法 选用内源性表达野生型p53、突变型p53、p53全基因缺失的HepG2、PLC／PRF／5、Hep3B肝癌细胞系，将含有p53结合序列的CAT报告基因质粒分别转染各细胞，通过ELISA方法检测报告基因CAT活化情况，观察p53功能状态；用细胞生长曲线比较不同p53状态的细胞生长速度的差异；给予一定剂量的紫外线照射，检测各细胞程序外DNA损伤修复(UDS)能力；观察紫外线照射后细胞克隆形成情况，反映不同细胞系在紫外线照射后细胞存活率的不同。结果 报告基因CAT在HepG2细胞表达最强，而在PLC／PRF／5、Hep3B肝癌细胞均处于较低水平，说明HepG2细胞具有功能性的p53表达；HepG2细胞生长速度明显慢于其他两种细胞；紫外线照射后，HepG2具有较好的DNA损伤修复能力以及较高的细胞生存率。结论 野生型p53具有抑制肝癌细胞生长、保持细胞良好的DNA损伤修复的功能。     

p53转染对肝癌细胞系Hep3B的作用

目的：研究野生型和突变型p５３基因cＤＮＡ转染对肝癌细胞系Ｈep３Ｂ的作用。方法：通过采用脂质体介导转染技术,将野生型、突变型p５３的真核表达重组质空载体质粒分别导 入一种p５３和Ｒb基因缺失的肝癌细胞系Ｈep３Ｂ。结果：经Ｇ４１８筛选获得稳定的整合了野生型p５３的克隆（wide-type p53, wt-p53)、突变型p53细胞表达p53细胞的p２１＾wafl/cipl蛋白表达水平升高。wt-p53细胞生长较ＴＤＮ Ｐ５３、pＮeo细胞缓慢,但不出     

转染野生型p53基因对人肺腺癌细胞作用的研究

目的研究外源性野生型p53基因对人肺腺癌细胞系GLC-82的生物学作用.方法将含有野生型p53基因的pDOR-neo逆转录病毒载体,通过Lipofectin转染GLC-82细胞,采用流式细胞分析、电镜下观察、3H-TdR掺入试验、软琼脂培养集落形成率测试及裸小鼠成瘤性实验,观察野生型p53基因对GLC-82细胞的生物学效应.结果电镜下观察可见,转染野生型p53基因可使GLC-82细胞出现一些病理现象,如细胞质中有明显的空泡及线粒体肿胀;流式细胞仪分析结果显示,野生型p53基因可阻止GLC-82细胞周期停止于G1-S区域;3H-TdR掺入试验结果提示野生型p53基因能够抑制GLC-82细胞的DNA合成,软琼脂培养集落形成率减少及裸小鼠成瘤减慢.结论转染野生型p53基因可抑制GLC-82细胞恶性增殖.     

p53基因对胶质瘤细胞系U251生长抑制作用的研究

背景与目的：肿瘤抑制基因p53是调节多种与细胞周期、凋亡、DNA修复等有关基因表达的转录因子。p53基因在大约30％的胶质瘤中发生突变，在胶质瘤的发生和发展中起重要作用。本文主要探讨野生型p53基因过表达对脑胶质瘤细胞系U251细胞生长抑制的机制。方法：通过p53腺病毒表达载体pAdCMV-p53及空载体pAdCMV-lacZ分别感染U251细胞系，RT-PCR及Westem blot方法检测转染效率；并通过MTT检测生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期及TUNEL检测分析细胞凋亡等指标观察p53基因对U251细胞生长的影响。结果：MOI为100时，野生型p53基因的过表达可引起U251细胞G0、G1期阻滞、诱导U251细胞凋亡以及引起U251细胞生长抑制。结论：p53基因可以通过细胞周期G0、G1期阻滞及诱导细胞凋亡抑制胶质瘤细胞系U251的生长。     

腺病毒介导野生型p53基因诱导膀胱癌细胞凋亡

p53基因是一种抑癌基因,它在肿瘤发生过程中有重要作用.p53基因的突变可引起细胞增殖,导致悼瘤的发生.迄今已在许多恶性肿瘤细胞中发现p53基因的突变.将外源野生型p53基因导入p53基因突变的肿瘤细胞,能抑制其恶性增殖,逆转其恶性表型.这些研究为肿瘤的基因治疗奠定了基础;值得注意的是,至今大多数研究均用有p53基因缺失或突变的肿瘤细胞,但并非所有的肿瘤细胞都发生p53基因突变;本文将外源野生型p53基因导入表达内源野生型p53基因的膀胱癌细胞株EJ,观察其抑制效应及凋亡的诱导作用.     

mdm2与p53基因相互作用分子机理研究新进展

mdm2基因是与人类肿瘤密切相关的癌基因,它与p53基因间存在相互调节关系,p53能刺激mdm2基因的表达,mdm2’基因可以促进p53蛋白降解、抑制p53基因介导的反式激活和细胞凋亡功能.mdm2对p53基因功能的负性调节在部分含有野生型p53基因肿瘤的发生、发展中可能起着重要的作用,阻断两者间的相互作用以恢复p53基因的抑癌功能为恶性肿瘤基因治疗的研究提供了新思路.本文综述两者相互作用分子机理研究的最新进展.     

传染野生型p53基因对人肺腺癌细胞作用的研究

目的 研究外源性野生型p53基因对人肺腺癌细胞系GLC-82的生物学作用。方法 将含有野生型p53基因的pDOR-neo逆转录病毒载体,通过Lipofectin转染GLC-82细胞,采用流式细胞分析、电镜下观察、^3H-TdR掺入试验、软琼脂培养集落形成率测试及裸小鼠成瘤性实验,观察野生型p53基因对GLC-82细胞的生物学效应。结果 电镜下观察可见,转染野生型p53基因可使GLC-82细胞出现一些病理现象,如细胞质中有明显的空泡及线粒体肿胀;流式细胞仪分析结果显示,野生型p53基因可阻止GLC-82细胞周期停止于G1-S区域;^3H-TdR掺入试验结果提示野生型p53基因能够抑制GLC-82细胞的DNA合成,软琼脂培养集落形成率减少及裸小鼠成瘤减慢。结论 转染野生型p53基因可抑制GLC-82细胞恶性增殖。     

抑癌基因p16INK4a与p53抑制白血病细胞株生长作用的比较

目的比较野生型p16INK4a、p53抑癌基因的表达对白血病细胞株K562和HL60的生长抑制。方法采用脂质体介导野生型p16INK4a、p53抑癌基因转染K562、HL60细胞并进行G418筛选,免疫印渍检测p16INK4a、p53基因的表达,通过细胞生长曲线检测细胞活力,流式细胞仪进行细胞DNA周期分析及细胞凋亡分析,采用联苯胺氧化试验检测K562细胞的分化。结果转染后p53、p16INK4a在K562及HL60细胞中表达;与对照细胞相比,实验组细胞生长受到明显的抑制,G1期细胞数增加,S期细胞减少。与p16INK4a相比,抑癌基因p53使细胞表达Annexin V增加,显示出更强的致凋亡现象,尤其在HL60细胞株。结论抑癌基因p16INK4a、p53能有效抑制白血病细胞株的生长,可能更适合复发、难治性白血病的基因治疗。     

p53基因对人胚肺成纤维细胞周期影响的研究

背景与目的:研究野生型和179位残基突变型p53基因在HELF细胞周期调控中的作用.探讨p53基因的179位残基突变对细胞生长的影响.材料与方法:用野生型p53(pcDNA3-wtp53)和179位残基突变的突变型p53(pcDNA3-mtp53)转染HELF细胞,观察细胞生长情况,绘制细胞生长曲线;用流式细胞仪分析细胞周期;用RT-PCR和Western blotting方法检测p53基因转染后HELF细胞周期相关基因mRNA和蛋白的表达.结果:野生型p53表达的上调使HELF细胞周期阻滞于G1期,细胞体积减小,并下调cyclin D3、cyclin E、Cdk2和Cdk4的表达,同时上调p21的表达.而179位残基突变的突变型p53表达的上调则促进细胞周期从G1期到S期的转换,同时细胞体积增大,上调cyclin A和Cdk4的表达.结论:p53的179位残基突变对于HELF细胞cyclin A和Cdk4的表达有诱导作用,并可能借此促进细胞周期进程.     

p53基因对人胃癌细胞生长及致瘤性的抑制作用

p53基因异常是人类肿瘤中最常见的基因变异之一．是最有希望用于肿瘤基因治疗的目的基因。在人胃癌组织中有较高频率的p53基因缺失和突变，为探讨p53基因用于胃癌治疗的可行性，我们采用脂质体介导方法将外源性野生型p53基因转染一株p53基因有部分缺失的人胃癌BGC823细胞，获得较高的转染效率，对转染后细胞DNA，RNA和蛋白进行分析．结果表明外源性p53基因已整合人细胞并获稳定表达，表达有外源性野生型p53基因的细胞生长速度，软琼脂集落形成率及裸鼠致瘤性均有部分抑制。这一结果进一步证明p53基因在胃癌发生发展过程中起重要作用．本研究为采用野生型p53基因转染进行胃癌基因治疗提供了细胞学实验依据。     

野生型p53基因与双脱水二乙酰卫矛醇联合诱导肝癌HLE细胞凋亡的研究

背景和目的：p53基因是抑癌基因,研究发现在人类肿瘤中p53基因常发生突变。实验证明野生型p53基因不但抑制肿瘤细胞增殖,而且诱导肿瘤细胞凋亡。但是,单独应用野生型p53基因诱导肿瘤细胞凋亡的作用不很明显。因此,野生型p53基因与药物的联合作用来提高肿瘤细胞凋亡率是目前对肿瘤研究的一新领域。本实验通过转染野生型p53基因联合双脱水二乙酰卫矛醇(1,2：5,6-dianhydro-3,4-diacetylgalactitol,DADAG)作用于肝癌细胞株HLE,研究联合诱导肿瘤细胞的凋亡作用。方法：野生型p53基因通过脂质体Lipofectamine介导转染人肝癌细胞株HLE,同时加入DADAG。96h后,用流式细胞仪、DNA电泳方法进行细胞凋亡分析。结果：流式细胞仪分析细胞凋亡结果：阴性对照组为1．4％、转染pUHD10-3组为3．5％、DADAG处理组为32．6％、转染pUHD10-3-p53组为43．4％、转染p53基因及DADAG处理组为74．6％。DNA电泳发现,转染p53基因及DADAG处理组有到DNA梯形条带。结论：野生型p53基因与DADAG均可诱导人肝癌细胞HLE发生凋亡,转染野生型p53基因与DADAG联合作用,有促进肝癌细胞凋亡的作用。     

乙肝病毒x蛋白对肝癌细胞中PUMA表达的影响

目的:探讨乙肝病毒x蛋白（hepatitis B virus x protein,HBx）对肝癌细胞中PUMA表达的影响及其机制。方法:利用质粒转染技术对p53基因不同状态的肝癌细胞转染野生型HBx基因,用RT-PCR检测转染后肝癌细胞中HBx mRNA表达和荧光定量PCR检测NFκB mRNA表达,Western blot检测HBx、p53、NFκB、PUMA蛋白表达。结果:转染后随着HBx的表达,在p53野生型肝癌细胞BEL-7402和p53突变型肝癌细胞Huh-7中NFκB mRNA和蛋白上调而p53蛋白表达下降,BEL-7402细胞PUMA蛋白表达下降而Huh-7细胞中PUMA蛋白表达略有下降。加入NFκB抑制剂PDTC后并随着PDTC浓度逐渐增加,BEL-7402细胞NFκB蛋白表达逐渐下降而p53蛋白和PUMA蛋白表达逐渐上升;但在Huh-7细胞中随着NFκB蛋白表达的抑制,p53蛋白逐渐上升而PUMA蛋白上升不明显。结论:结果提示转染HBx基因可以抑制肝癌细胞中PUMA蛋白表达,在p53野生型肝癌细胞这种抑制可能与HBx通过NFκB 的激活有关。     

乳腺导管内增生病变中p53表达与外显子突变的研究

目的：肿瘤抑制基因p53异常是浸润性乳腺癌发生发展中常见事件,而其与包括普通型增生（usualductal hyperplasia,UDH）、不典型增生（atypical ductal hyperplasia,ADH）及导管内原位癌（ductal carcinoma insitu,DCIS）的乳腺导管内增生性病变关系不明。本研究旨在探讨乳腺导管内增生性病变中p53外显子突变及突变型p53蛋白表达情况,以期了解p53突变及蛋白表达在乳腺癌发生发展中的作用。方法：用高分辨率熔解曲线（high-resolution melting,HRM）结合测序研究140例乳腺导管内增生性病变中p53外显子5-8的突变情况。用免疫组化研究240例乳腺导管内增生性病变中突变型p53蛋白表达情况。结果：经过HRM分析,共17例患者DNA熔解曲线与野生型标准品熔解曲线大于阈值结合测序分析结果发现,其中16例出现p53外显子突变。p53在UDH、ADH及DCIS中的突变率为0.0%（0/40）,12.7%（8/63）和21.6%（8/37）,三者间差异显著（P〈0.05）。40例UDH中未出现突变型p53蛋白阳性表达,在14.6%（19/130）的ADH出现阳性表达,在31.4%（22/70）的DCIS中出现阳性表达,三者间差异显著（P〈0.05）。Spearman相关性分析示突变型p53蛋白表达与p53外显子突变呈正相关（r=0.792,P〈0.01）。结论：p53外显子突变及突变型p53蛋白表达发生于乳腺导管内增生性病变中的ADH与DCIS,其可能为乳腺癌发生发展中的早期事件。     

p53基因增加肿瘤放射治疗敏感性的机制

在肿瘤放疗过程中,p53基因的正常功能对肿瘤细胞的凋亡和提高放射敏感性起了关键性作用。野生型p53基因通过激活或抑制一系列基因,使肿瘤细胞周期阻滞,抑制肿瘤细胞放射损伤的修复,促进肿瘤细胞的凋亡,以及在乏氧环境中对促进肿瘤细胞凋亡至关重要,增强了肿瘤细胞对放疗的敏感性。     

p53基因增加肿瘤放射治疗敏感性的机制

在肿瘤放疗过程中,p53基因的正常功能对肿瘤细胞的凋亡和提高放射敏感性起了关键性作用。野生型p53基因通过激活或抑制一系列基因,使肿瘤细胞周期阻滞,抑制肿瘤细胞放射损伤的修复,促进肿瘤细胞的凋亡,以及在乏氧环境中对促进肿瘤细胞凋亡至关重要,增强了肿瘤细胞对放疗的敏感性。     

p53突变与食管癌发生、预后的研究进展

食管癌是我国最常见的癌症之一,五年生存率低于30％^[1],其发生和发展的确切机制仍未阐明。已有研究探讨了食管癌中癌基因和抑癌基因的改变^[2]。p53基因是最重要的抑癌基因之一,也是各种人类肿瘤包括食管癌中最常见有突变的基因之一。野生型p53具有抗细胞增生的功能,p53基因突变可损害其DNA结合性和转录因子功能,使其控制细胞周期和细胞增殖的正常功能受到抑制。     

乳腺导管内增生病变中p53表达与外显子突变的研究

目的 肿瘤抑制基因p53异常是浸润性乳腺癌发生发展中常见事件,而其与包括普通型增生(usual ductal hyperplasia,UDH)、不典型增生 (atypical ductal hyperplasia,ADH)及导管内原位癌 (ductal carcinoma in situ,DCIS)的乳腺导管内增生性病变关系不明.本研究旨在探讨乳腺导管内增生性病变中p53外显子突变及突变型p53蛋白表达情况,以期了解p53突变及蛋白表达在乳腺癌发生发展中的作用.方法 用高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)结合测序研究140例乳腺导管内增生性病变中p53外显子5-8的突变情况.用免疫组化研究240例乳腺导管内增生性病变中突变型p53蛋白表达情况.结果 经过HRM分析,共17例患者DNA熔解曲线与野生型标准品熔解曲线大于阈值结合测序分析结果发现,其中16例出现p53外显子突变.p53在UDH、ADH及DCIS中的突变率为0.0%(0/40),12.7%(8/63)和21.6%(8/37),三者间差异显著(P<0.05).40例UDH中未出现突变型p53蛋白阳性表达,在14.6%(19/130)的ADH出现阳性表达,在31.4%(22/70)的DCIS中出现阳性表达,三者间差异显著(P<0.05).Spearman相关性分析示突变型p53蛋白表达与p53外显子突变呈正相关(r=0.792,P<0.01).结论 p53外显子突变及突变型p53蛋白表达发生于乳腺导管内增生性病变中的ADH与DCIS,其可能为乳腺癌发生发展中的早期事件.     

p53基因治疗肺癌及p53与mdm2基因相互调控的实验研究

p53基因是一种重要的抑癌基因,mdm2是P53肿瘤抑制蛋白的一个靶基因,mdm2能和P53酸性活化区域结合,导致p53基因的失活.p53和mdm2在调节细胞分裂、增殖方面存在一相互调控作用.我们将pDOR-wp53重组载体通过LiPofetimin转染GLG-82细胞,观察野生型p53对GLC-82细胞的生物学效应,并将pDOR-mdm2表达载体转染进含有野生型p53的GLC-82细胞,研究mdm2基因对野生型p53的拮抗作用.     

p53基因网络的研究进展

肿瘤抑制基因p53与其上、下游功能相关基因组成了一个复杂的基因网络。p53基因位于人染色体17q13．1区带,编码的野生型p53蛋白包含N—末端的转录激活结构域、DNA结合结构域、四聚体化结构域和C—末端调节域。p73、p5l、p63等基因由于在结构上与p53基因具有同源性,因而被归为p53基因家族。p53是联系不同遗传应急和细胞应答的中间环节,离子辐射、化疗药物及异常的细胞生长信号均能刺激p53基因表达。p53表达升高后,可通过p53-mdm2、p14^ARF—mdm2环路对p53表达水平进行精确调节,p53功能的发挥还同时需要p33^MG1b基因的协同作用。磷酸化和乙酰化是细胞内调节p53活性功能的主要途径。p53可以调控下游多种基因表达,其功能主要表现在阻滞细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组稳定性和抑制肿瘤血管生成四个方面。认识p53基因网络的功能将有助于理解p53及其相关基因间的具体作用机制。