榄香烯增强瘤苗免疫原性的研究

目的 在基因水平上通过与热休克处理对比探讨榄香烯增强肿瘤细胞免疫原性的分子机制。方法 人肝癌细胞HepG2经50μg/ml榄香烯或42℃热休克处理后，与未经处理的对照组一起，分别提取总RNA、逆转录成cDNA、体外转录制备生物素标记的cRNA，应用含有12550条人类基因的表达谱芯片，与热休克对比分析经榄香烯处理的人肝癌细胞HepG2基因表达谱的改变。结果 榄香烯能使HepG2细胞的24条基因表达明显改变，在这24条基因中有14条基因在热休克处理时未发生表达变化。结论 榄香烯有可能在基因水平上改变肿瘤细胞的免疫原性，并可能诱生与热休克不同的免疫原性物质。     

榄香烯复合瘤苗的HSP70表达及其主动免疫预防效应

为进一步阐明本室专利榄香烯复合瘤苗(EC-TCV)的主动免疫效应与其HSP70-肿瘤肽之间的关系,本文以42℃热休克(H)为对照,首先检测了榄香烯(E)、丝裂霉素C(MMC)、戊二醛(G)单独或复合处理时对小鼠HCa-F肝癌、L615白血病细胞膜HSP(HSP70、HSP90)表达的影响,发现只有膜HSP70的表达在两种榄香烯复合瘤苗中均升高,随后以E-MMC复合处理的HCa-F细胞中提纯的HSP70-肿瘤肽(HHSP70)为免疫原,以小鼠HCa-F肝癌细胞为模型,研究了HHSP70的主动免疫预防效应及其特异性。结果表明,E、MMC、G同H相似,也具有应激原作用,能诱导应激蛋白HSP70的表达;而且HSP70在HCa-F和L615两种肿瘤细胞均以E-MMC-G三者复合处理时为最高;HHSP70能诱发机体产生主动抗瘤效应,且这种效应有一定的肿瘤特异性。     

脂质体槲皮素抑制热休克后 人肝癌HEP G-2和肾癌ORSC-2细胞系HSP70表达

目的比较不同浓度脂质体槲皮素(LQ)对人肝癌HEPG-2细胞和肾癌ORSC-2细胞热疗后热休克蛋白70的表达变化及其作用机制。方法用旋转蒸发法制备LQ。将细胞分为37℃培养组、42℃培养组和槲皮素干预组。MTT法检测细胞抑制率,优选出合适浓度。用10、15和30 mg/L的LQ处理上述两种肿瘤细胞,于热休克后2、4、6、8和10 h取出细胞。流式细胞计量术检测细胞凋亡,RT-qPCR检测HSP70mRNA的表达,Western blot检测细胞HSP70的表达水平。结果 42℃热疗后人肝癌HEPG-2细胞和肾癌ORSC-2细胞的HSP70在基因和蛋白水平上均明显升高(P0.05)。随着脂质体槲皮素浓度的增加,HSP70表达逐渐降低。结论脂质体槲皮素能通过抑制热休克状态肿瘤细胞HSP70的表达诱导肝癌和肾癌肿瘤细胞凋亡。     

β-榄香烯、丝裂霉素C及热休克对小鼠H22肝癌细胞HSP 70表达的影响

为了进一步阐明肿瘤疫苗的特异性主动免疫治疗机理,采用β-榄香烯、丝裂霉素C(MMC)及热休克在体外单独及复合处理小鼠H22肝癌细胞,经间接免疫荧光染色,流式细胞仪分析,结果显示.上述处理因素均能明显地诱导H22细胞表达HSP70(以阳性率增高表示).在单因素中,以β-榄香烯效果最佳,阳性率为69.16%,MMC次之;在复合因素中.以β-榄香烯与MMC复合处理的效果最佳,阳性率为95.13%;三种因素联合处理的效果为85.34%.提示瘤苗的抗肿瘤免疫作用是与HSP70表达程度有关.     

热应激对A549细胞HSP70、XPA修复酶表达的影响

目的研究热应激作用下A549细胞热休克蛋白70（HSP70）和XPA修复酶的表达规律及其可能的意义。方法利用免疫印迹方法（Western blot）检测A549细胞中HSP70、XPA修复酶的表达水平。结果A549细胞接受不同温度（39、41、42、43℃）处理2h后,HSP70表达水平随温度的增高而逐渐增加,并在42℃应激时表达最高,与对照组相比有统计学意义（P〈0.05）;细胞接受42℃应激1～4h,HSP70表达水平随应激时间的增加而递增,与对照组相比,细胞在42℃应激2～4h时HSP70表达显著上调（P〈0.05）。两处理组细胞XPA修复酶表达水平均无明显变化（P〉0.05）。结论高温能诱导HSP70的表达,并呈一定的温度-效应和时间-效应关系,而对XPA修复酶未见明显影响。     

细胞外HSP70/HSP70-PCs对人肝癌HepG2细胞上皮-间充质转化的影响及机制研究

 目的：探讨细胞外热休克蛋白70(HSP70)/HSP70肽复合物(HSP70-PCs)对肝癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响和可能机制。方法：将HepG2细胞分为3组：正常对照组、HSP70/HSP70-PCs组（终浓度2 mg/L）和LY294002+HSP70/HSP70-PCs组。应用real-time RT-PCR与Western blotting法检测上皮细胞表面标志E-cadherin和间质细胞表面标志α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达变化,以及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和缺氧诱导因子1α(HIF1-α)的表达变化。结果：细胞外HSP70/HSP70-PCs可以促进HepG2细胞EMT的发生。HepG2细胞的EMT过程伴随HIF-1α和PI3K表达增加。应用LY294002阻断PI3K后,HepG2细胞没有发生EMT,同时细胞外HSP70/HSP70-PCs上调HIF-1α表达的作用消失。结论：细胞外HSP70/HSP70-PCs可以通过PI3K/HIF-1α促进肝癌细胞发生EMT。     

鼠巨细胞病毒感染细胞热休克蛋白70与细胞毒T细胞活性的相关性研究

目的体外研究小鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus,MCMV）感染细胞热休克蛋白70与细胞毒T细胞（CTL）活性相关性。方法体外培养小鼠胚肺细胞,在加入MCMV后16、24、48、72、120h分别收获细胞,用免疫组织化学方法检测HSP70表达情况;CTL活性检测组：体外培养小鼠胚肺细胞,设以下各组：正常细胞对照组,病毒感染组,病毒感染＋放线菌素组,病毒感染＋槲皮素组,病毒感染＋HSP70抗体组,分别在以上时相选用^51Cr释放试验检测CTL活性。结果MCMV感染诱导小鼠胚肺细胞表达HSP70,与正常细胞对照组比较,各时相HSP70表达强度差异均具有显著性,其中16h始升高,120h表达最强。病毒感染组：CTL活性升高,与其它各组比较,各时相差异均具有显著性意义,自16h始升高,120h达最高;放线菌素组、槲皮素组、HSP70抗体组,CTL活性均无显著性差异,自16h始升高,120h达最高,与正常细胞对照组比较,CTL活性均升高。结论MCMV感染细胞热休克蛋白70与CTL的活性具有一定相关性。     

热休克蛋白70-肿瘤肽的免疫保护效应的实验研究

目的 :在多种应激条件下 ,细胞的一种适应性变化是基因表达谱明显改变 ,一组进化上高度保守的被称之为热休克蛋白 (ＨＳＰ)的家族 ,合成明显增加 ,其中ＨＳＰ70是最保守和最受应激诱导的热休克蛋白。热休克蛋白能参与肿瘤特异性免疫 ,肿瘤组织中的ＨＳＰ70 -肽复合物具有肿瘤疫苗的作用 ,在体内外均能诱导出肿瘤特异的杀伤性γδＴ细胞。在本室榄香烯 /丝裂霉素Ｃ复合瘤苗专利基础上 ,本文进一步探讨了榄香烯复合处理的肿瘤细胞疫苗 (ＴＣＶ)的抗瘤效应同ＨＳＰ70 -肿瘤肽免疫效应间的关系。方法和结果 :通过ＡＤＰ -琼脂糖亲和层析系统 ,从…     

小鼠不同组织器官热休克蛋白70表达的研究

目的　研究热休克恢复期小鼠大脑、垂体、肾、肾上腺中HSP70的表达规律。　方法　昆明系小鼠随机分为对照组和实验组。实验组动物 :1 分别以 40℃ ,42℃ ,44℃ ,46℃热休克处理 30min ,恢复 2h和 8h ;2 以46℃热休克处理 30min ,恢复 2、4、6、8、12、2 4、48、72h ,以免疫组织化学结合图像分析技术观察HSP70的表达。　结果　 1 42℃ ,44℃ ,46℃均能诱导肾、肾上腺表达HSP70 ,44℃、46℃可诱导大脑、垂体表达HSP70 ,但均以 46℃组阳性免疫反应面积最大 (P <0 0 1) ;2 HSP70的合成高峰在大脑和垂体为热休克恢复期 4～ 8h(P <0 0 1) ,肾和肾上腺为 8～ 12h(P <0 0 1) ;3 HSP70阳性免疫反应定位于大脑神经膜和郎飞结 ,垂体神经膜 ,肾小管、肾上腺网状带和束状带细胞质 ,肾中HSP70阳性免疫反应肾小管较肾小球强 ,肾髓质较肾皮质强。　结论　热休克反应中不同组织器官HSP70的表达存在明显差异性 ;HSP70合成迅速且降解缓慢 ;大脑和垂体有较强的耐热能力     

异种HSP70及固相抗体法体外扩增人γδT细胞的比较

目的：比较异种HSP70及固相抗体法体外扩增人γδT细胞。方法：分别用固相抗体法、HSP70BCG及小鼠榄香烯复合瘤苗热休克蛋白70-肽复合物(HSP70m-肽复合物)体外扩增人PBMCs的γδT细胞，流式细胞仪检测细胞表型及亚型分布，RT-PCR检测各亚型基因的取用。MTT检测γδT细胞的细胞毒作用。结果：培养14天后，抗体法扩增的PMBCs总数增加30～40倍，御细胞的比率由3.2％提高到86．7％；HSP70BCG组PBMCs总数增加7—8倍，7趼细胞的比率由3．2％提高到71．32％；HSP70m-肽复合物组PBMCs总数增加4～5倍，γδT细胞的比率由3.2％提高到27.26％。抗体及HSP70BCG扩增的γδT细胞以表达Vγ9/Vδ2亚型为主，且Vδ1、Vδ2、Vδ3三种基因均得到取用，对Daudi具较高的杀伤活性。结论：抗体及HSP70BCG均能扩增出高纯度的γδT细胞，且具有完整的受体库，扩增的γδT细胞具细胞毒活性。     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.