慢病毒介导的Clusterin基因沉默抑制膀胱癌EJ细胞增殖及转移

目的探讨慢病毒介导的Clusterin(CLU)基因沉默的RNA干扰效果及其对膀胱癌EJ细胞增殖和转移的影响。方法构建靶向CLU基因的慢病毒干扰载体,用Westernblot检测其对膀胱尿路上皮癌细胞株EJ的干扰效果,用MTT、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验等方法分别检测CLU沉默后膀胱癌EJ细胞在增殖、侵袭和转移等方面的细胞生物学改变。结果靶向CLU基因的慢病毒干扰载体感染膀胱癌EJ细胞后,CLU基因在蛋白水平的表达明显下降。EJ细胞的增殖、侵袭和转移能力均受到抑制。结论 CLU慢病毒干扰载体可有效沉默膀胱癌EJ细胞内源性CLU基因,抑制膀胱癌EJ细胞的增殖、侵袭和转移。     

组织因子基因siRNA对胃癌侵袭力的影响

目的：探讨应用RNA 干扰技术抑制胃癌细胞组织因子(TF) 基因表达对胃癌侵袭能力的影响。 方法：构建pSUPER /TF-siRNA重组载体, 并将其转染入胃癌细胞SGC-7901中;RT-PCR和Western blot检测转染前后TF的表达水平;应用Boyden小室检测对胃癌细胞的侵袭能力。 结果：双酶切鉴定重组载体构建成功。RT-PCR和Western blot检测显示pSUPER /TF-siRNA1重组载体明显抑制SGC-7901细胞TF基因的表达(P<0.05)。Boyden小室体外侵袭实验证实, 转染pSUPER/TF-siRNA1 质粒的SGC-7901穿膜细胞均数较其他无干扰组的细胞均数明显减少(P<0.05)。 结论：以TF 基因作为靶点应用RNA 干扰技术抑制其表达可降低胃癌细胞体外侵袭移能力, 故其有望成为胃癌治疗的一个新靶点。     

沉默BC047440基因对HepG2细胞侵袭能力的影响

目的:观察沉默BC047440基因后对HepG2细胞侵袭能力的影响。方法:实验分为3组,即HepG2细胞转染siRNA的沉默组,HepG2细胞转染无关质粒组及未转染的HepG2细胞组。利用前期构建的BC047440基因的小干扰RNA（siRNA）沉默BC047440基因,然后用MTT法检测细胞黏附率,细胞划痕法检测细胞迁移能力,Boyden小室法检测细胞侵袭性。结果:沉默组的细胞黏附率在20 min和40 min时与HepG2细胞组和无关质粒组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,但在60 min时沉默组显著低于后2组(P＜0.05); 划痕实验显示划痕48h后,无关质粒组和HepG2细胞组划痕区已基本长满,而沉默组划痕依然明显; 接种16 h后无关质粒组和HepG2细胞组侵袭到Boyden小室下室面的细胞数明显多于沉默(P＜0.05)。而无关质粒组与HepG2细胞组间差异均无显著性（P＞0.05）。结论:沉默BC047440基因后可明显抑制HepG2细胞其在细胞外基质上的黏附能力、运动能力和体外侵袭能力,提示BC047440基因可增加肝癌的转移侵袭性。     

WT-PTEN高表达对膀胱癌EJ细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨外源性野生型人PTEN高表达对膀胱癌EJ细胞增殖和侵袭能力的影响.方法利用携带人PTEN基因的野生型、磷酸酶域突变型质粒体外转染人膀胱移行细胞癌EJ细胞,Western印迹法检测目的基因的表达.采用细胞生长实验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测EJ转染前后细胞增殖、细胞周期和细胞体外侵袭力的变化.以空载质粒作为对照.结果Western印迹法检测质粒转染后EJ细胞的PTEN蛋白表达明显增强,转染野生型质粒后对EJ细胞的生长有抑制作用(生长速度下降42.7%,P＜0.01),出现G0～G1期阻滞,Boyden小室法检测转染后体外侵袭力受到明显抑制(下降41.9%,P＜0.01).而转染突变型质粒的EJ细胞则无此作用(P＞0.05).结论野生型PTEN基因在体外对膀胱移行细胞癌EJ细胞增殖和侵袭能力有明显抑制作用,磷酸酶域突变型PTEN基因无此作用.增强野生型PTEN基因表达可望作为膀胱癌基因治疗的有效工具.     

CDH13表达下调对膀胱癌细胞迁移和侵袭及PI3K/Akt表达的影响

目的：研究膀胱癌5637细胞中CDH13表达下调后对细胞迁移、侵袭和PI3K/Akt表达的影响以及它们间的关系。方法应用 RNA 干扰技术抑制人膀胱癌5637细胞株中 CDH13的表达,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell 小室法检测细胞侵袭能力,Western blot 检测CDH13、PI3K及 Akt的表达水平。结果膀胱癌5637细胞中CDH13表达下调后细胞迁移和侵袭能力增强,PI3K及 Akt 的表达增加。结论膀胱癌细胞中 CDH13表达下调可能通过激活PI3K/Akt通路促进肿瘤细胞的迁移和侵袭。     

靶向沉默维生素D受体基因对前列腺癌细胞迁移及侵袭性的影响

目的:探讨小干扰RNA靶向沉默维生素D受体(VDR)对前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响。方法:构建VDR-shRNA慢病毒载体,用RT-PCR和Western印迹法分别检测VDR的mRNA和蛋白表达水平;通过细胞划痕愈合实验和Transwell小室检测VDR被沉默后的PC-3细胞迁移能力和侵袭性的变化。结果:VDR-shRNA质粒显著干扰VDR表达,并成功筛选VDR-shRNA干扰稳定的细胞株;细胞划痕实验结果显示划痕愈合率VDR干扰组为59%明显低于空白对照组73.6%和LV3阴性对照组的77.8%,组间差异有显著性(P0.05),空白对照组和LV3阴性对照组组间差异无显著性(P0.05)。Transwell小室实验显示VDR干扰组透膜细胞数量明显低于空白对照组和LV3阴性对照组约为50%,细胞组间差异有显著性(P0.05),空白对照组和LV3阴性对照组组间差异无显著性(P0.05)。VDR干扰组细胞的迁移和侵袭能力明显低于对照组细胞。结论:VDR基因表达水平能影响前列腺癌细胞的迁移及侵袭能力,VDR低表达可致前列腺癌细胞迁移及侵袭能力下降。     

RNA干扰REG1A基因抑制人膀胱癌EJ细胞增殖并降低其侵袭

目的 观察小干扰RNA(siRNA)抑制REG1A(REG1A)基因的表达对人膀胱癌EJ细胞增殖及侵袭的影响.方法 化学合成针对REG1A基因的3对siRNA,使用脂质体转染EJ细胞.实时定量聚合酶链反应( Real-time PCR)和免疫印迹(Western blot)法分别检测转染细胞REG1A的mRNA及蛋白表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测转染细胞的增殖,流式细胞术检测转染细胞的周期,Transwell侵袭小室检测转染细胞的侵袭能力.结果 REG1A siRNA转染组EJ细胞与空白对照Mock组比较,REG1A的mRNA及蛋白表达明显下调,分别下调了(75.58±1.17)％及(51.22±6.63)％ (P ＜0.01);REG1A siRNA转染组EJ细胞增殖速度较空白对照Mock组及阴性对照NC组明显减慢(P＜0.05),且G0/G1期细胞百分比明显增多,为(43.37±2.15)％(P＜0.01);REG1AsiRNA转染组EJ细胞穿过Transwell小室的数目为(95.84±6.49)个,明显少于空白对照Mock组的(179.93 ±8.38)个和阴性对照NC组的(186.96±6.28)个(P＜0.01).结论 REG1A siRNA能抑制体外培养的膀胱癌EJ细胞增殖并降低其侵袭能力.     

RNAi沉默pyk2基因对鼠脑胶质瘤细胞增殖、侵袭能力的影响

目的 探讨pyk2小干扰RNA表达载体对小鼠脑胶质瘤G422细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 用以pGenesil-1质粒为载体,以pyk2为靶基因,构建短发夹状小干扰RNA表达载体.用pyk2短发夹状小干扰RNA表达载体转染体外培养的人脑胶质瘤G422细胞,反转录聚合酶链反应和Western blot法检测pyk2基因和蛋白表达的改变,噻唑蓝(MTT)比色法检测转染后细胞的增殖情况,Transwell小室法测定转染细胞体外侵袭能力.结果 构建了pGenesil-1-pyk2重组质粒,并成功转染G422细胞.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)显示pyk2 siRNA转染G422细胞后显著降低pyk2mRNA的表达,以48 h为著,下降近70%;Western blot证实转染后pyk2蛋白的表达下降近65%;G422细胞的活力降低为(67.1±5.2)%;Transwell小室测定转染细胞体外侵袭能力明显下降.结论 pGenesil-1-pyk2 siRNA重组质粒明显下调pyk2在胶质瘤细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞增殖,抑制其侵袭能力.     

短发卡状RNA抑制AKT2对肝癌细胞增殖及侵袭的影响

目的 探讨短发卡状RNA(siRNA)抑制AKT2对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭转移的影响.方法 设计并合成特异性靶向AKT2的siRNA片段并构建SMMC7721AKT2 siRNA表达质粒,将其转染SMMC7721细胞,通过G418筛选出稳定株.MTT法检测肝癌SMMC7721细胞的生存率变化;流式细胞术检测细胞周期;Western- blot检测P27、CyclinD1;Transwell实验和划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变.结果 MTT检测显示AKT2干扰可抑制SMMC7721细胞的生长,与其他组比较差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术显示AKT2干扰组细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降.Western- blot检测显示CyclinD1表达下降,P27的表达上升.Transwell试验和划痕试验显示AKT2干扰组的侵袭和转移能力受到抑制.结论 AKT2基因沉默可明显抑制肝癌SMMC7721细胞的生长并阻滞细胞周期.AKT2基因沉默可抑制肝癌SMMC7721细胞的侵袭和转移能力.     

特异性siRNA下调Cr-1基因表达对人结直肠癌细胞侵袭的影响

目的探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默Cr-1(Cr-1)基因对人结直肠癌细胞侵袭的影响。方法应用Cr-1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理结直肠癌SW480细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和蛋白质印迹检测Cr-1基因mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力。结果 siRNA转染组Cr-1mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。体外试验发现,Cr-1siRNA可有效抑制结直肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关(P<0.05)。结论 Cr-1在结直肠癌细胞侵袭中起着重要的作用,采用Cr-1siRNA转染可抑制结直肠癌细胞侵袭。     

膝关节后交叉韧带断裂治疗临床分析

目的 对35例膝关节后交叉韧带断裂治疗进行临床分析,重点探讨了有关交叉韧带断裂的治疗问题。方法 经明确诊断后,分析采用胫骨附着处撕脱骨折复位固定手术治疗26例、早期髌韧带中1／3移植重建3例、单纯长腿石膏固定6例。结果 本组病例全部进行随访,随访时间13个月－5年,胫骨附着处撕脱骨折复位固定及髋韧带中1／3移植重建29例为优良、单纯长腿石膏固定6例为差。结论 后交叉韧带断裂后应该及时给予手术修复;膝后外侧手术入路,操作简单,暴露充分;少于3个月的陈旧性病例仍适应手术治疗。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。