白头翁体外对TNF、IL-1、IL-6产生的影响

目的 :观察白头翁对抑制脂多糖(LPS)刺激肝枯否氏细胞(KC)分泌肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素1(IL 1)和白细胞介素6(IL 6)的影响。方法:大鼠KC培养24h后,加入24孔板内(细胞终浓度为1×106 个/ml)静置4h。分4组:空白对照组:KC培养液 RPMI1640。LPS组:KS培养液 LPS(终浓度为20μg/ml) RPMI1640。白头翁Ⅰ组:KC培养液 LPS(终浓度为20μg/ml) 白头翁(终浓度为100μg/ml)。置37℃、5 %CO2 孵育箱中培养2、4、6、8、12、24h后取上清液,分别测定TNF、IL 1、IL 6的活性。结果:白头翁能明显抑制LPS刺激肝KC分泌TNF、IL 1和IL 6,且这种抑制作用随培养时间的延长而增强,并与药物浓度有关。结论:白头翁可能通过抑制LPS刺激肝KC分泌TNF、IL 1和IL 6而发挥抗炎作用     

氯喹对内毒素血症小鼠的保护作用以及对细胞因子的影响

目的　探讨氯喹对内毒素血症小鼠的保护作用以及抑制内毒素引起的细胞因子释放情况。方法　清洁级昆明小鼠 40只 ,随机分为LPS、氯喹、氯喹 +LPS和对照组 ,每组动物 10只。LPS组 ,给予 10mg kg的LPS ;氯喹组 ,给予 2 0mg kg的氯喹 ;LPS +氯喹组在给予 2 0mg kg氯喹后 ,立即给予 10mg kg的LPS ;对照组给予注射用水 ,注射体积为 2 0 0 μl 2 0g。观察尾静脉给药后 7h内小鼠的死亡率。体外培养小鼠ANA 1细胞 ,观察培养体系中预先加入氯喹 3h后 ,不同浓度的LPS引起的TNF α、IL 6的释放情况。结果　氯喹可降低内毒素引起的小鼠死亡 ,死亡率由 10 0 %降低为 5 0 % (P <0 0 5 ) ;培养体系中预先加入氯喹后LPS引起的TNF α、IL 6的释放显著降低 ,尤其以IL 6的下降最明显 ,在LPS(4 0 μg ml)刺激组IL 6降幅可达 68倍之多。结论　氯喹对内毒素血症小鼠具有显著保护作用 ,可明显抑制内毒素引起的细胞因子释放 ,提示氯喹可能是治疗内毒素血症的有效药物     

脂多糖结合蛋白多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子的影响

目的　研究脂多糖结合蛋白 (lipopolysaccharidebindingprotein ,LBP)多抗对内毒素 (lipopolysaccharide ,LPS)急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子表达的影响 ,探讨LBP多抗对LPS炎症反应减敏作用的部分机制。方法　将从 4 0只大鼠分离、培养的肺泡巨噬细胞随机分为 4组 ,A组为正常对照组 ,B组为LPS刺激组 ,C组为LBP LPS刺激组 ,D组为LBP多抗 LBP LPS组。运用RT -PCR和ELISA的方法 ,分别检测LBP多抗对LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后IL - 1β ,IL - 18的mRNA表达与TNF -α分泌量的变化。 结果　B组细胞分泌的TNF -α和IL -1β,IL - 18的mRNA表达显著高于正常对照A组 ,而C组细胞显著高于B组 ,D组却低于C组。LBP多抗显著减少LPS刺激的大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子TNF -α的分泌和IL - 1β ,IL - 18mRNA表达。 结论　LBP多抗可能降低LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后炎症因子表达 ,减少炎症因子分泌 ,对LPS炎症反应起减敏作用     

盐酸克林霉素对脂多糖刺激人牙周膜细胞分泌TNF α的影响

目的 研究盐酸克林霉素(clindamycin hydroehloride)对脂多糖(LPS)刺激的人牙周膜细胞(HPDLCs)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法 将原代培养的HPDLCs分为6组.空白对照组每孔只加入DMEM培养液;LPS组,每孔加100 μg/ml LPS于DMEM培养液;药物组同时分别加不同浓度盐酸克林霉素(2.5,10,40,160μ/ml)和100μg/ml LPS于DMEM培养液.采用酶联免疫方法(ELISA)检测各组中TNF-α的含量.结果 与空白对照组相比,LPS组TNF-α的水平显著升高;与LPS组相比,药物组TNF-α的水平呈降低趋势,且10,40,160αg/ml浓度的药物组与u)s组比较TNF-α表达具有统计学差异(P<0.05),而10,40,160 μg/ml浓度药物组之间比较,TNF-α表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 LPS能促进HPDLCs分泌TNF-α,盐酸克林霉素在浓度为10,40,60 μg/ml时能显著抑制LPS促HPDLCs分泌TNF-α的作用,揭示了盐酸克林霉素的抗炎作用机制.     

大鼠肺泡巨噬细胞内毒素耐受性与炎症因子表达的变化

目的　观察大鼠肺泡巨噬细胞对内毒素 (lipopolysaccharide,LPS)重复刺激的耐受性与炎症因子IL -1β,TNF -α ,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达变化 ,研究二者之间的联系。 方法　将从 30只Wistar雄性大鼠分离所得肺泡巨噬细胞 ,随机等分为正常对照组 (A) ,LPS单次刺激组 (B)和LPS二次重复刺激组 (C)。运用ELISA和RT -PCR方法分别检测各组大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF -α及IL - 1β ,TNF -α,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达的变化。 结果　大鼠肺泡巨噬细胞TNF -α分泌和IL - 1β ,TNF -α ,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达A组分别为 :(0 . 4 5± 0. 0 1) ,(0 . 91±0 . 0 5 ) ,(0 6 0± 0 . 0 7) ,(0 . 80± 0. 0 6 ) ,(0 . 75± 0. 0 5 ) μg/L;B组分别为 :(0 .76± 0 . 0 3) ,(1 .4 2± 0 . 11) ,(1. 2 3± 0. 0 8) ,(1 .77± 0 . 15 ) ,(1 .2 2± 0 . 12 ) μg/L,B组与A组比较显著增加 (P <0 .0 1) ;C组分别为 :(0 .4 9± 0 . 0 5 ) ,(0 . 84.± 0 0 6 ) ,(0 . 70± 0 . 0 5 ) ,(0 . 95± 0 .16 ) ,(0 . 87± 0. 0 5 ) μg/L,C组与B组比较 ,明显减少 (P <0 . 0 5 ,或 <0. 0 1)。结论　LPS重复刺激可使大鼠肺泡巨噬细胞对LPS产生耐受性 ;LPS耐受性的产生与IL - 1β,TNF -α,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达下降相关     

氧化低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞生物学功能改变的影响及阿托伐他汀干预作用

目的 :探讨氧化低密度脂蛋白 (oxLDL)对血管平滑肌细胞 (VSMC)分泌细胞因子的影响及三羟基三甲基戊二酰辅酶A抑制剂阿托伐他汀 (atorvastatin)的作用机制。方法 :兔血管平滑肌细胞分 6组处理。以酶联免疫法检测培养上清液中细胞因子TNFα、IL 6、IL 8水平。结果 :oxLDL(5 0 μg/ml)对TNFα、IL 6、IL 8分泌水平的增加于刺激后 1h即增至 1 2～ 1 4倍 (分别P >0 0 5 ,P <0 0 1,P <0 0 1) ,8h达 6 4～ 8 5倍 ,2 4h仍高达 1 2 6～ 5 0 5倍 (均P <0 0 1)。阿托伐他汀可完全逆转oxLDL的上述促细胞因子分泌作用。阿托伐他汀在浓度为 0 0 5～ 1μmol/L范围内 ,使各因子水平降低 (与对照组比较均P <0 0 5 ) ,此作用可被MVA阻止。 结论 :oxLDL可促进兔VSMC分泌细胞因子TNFα、IL 6和IL 8,他汀类药物阿托伐他汀可能通过抑制基础及oxLDL刺激的细胞因子分泌对VSMC生物学功能发挥较全面调控效用。     

大黄对体外内毒素诱生的肺泡巨噬细胞分泌功能的影响

采用细胞分离及培养技术观察了中药大黄对内毒素（LPS）体外诱生的肺泡巨噬细胞分泌细胞因子，如肿瘤坏死因子（TNF－α），白细胞介素-1（IL－1）和白细胞介素-6（IL－6）的作用。结果表明，大黄能够明显抑制LPS诱生的肺泡巨噬细胞分泌TNF－α、IL－1和IL－6，与对照相比P＜0．01。从而减轻由于TNF－α、IL－1、IL－6过度分泌所致的肺脏损害，这可能是大黄对肺脏具有保护作用的分子机制。     

LPS急性肺损伤老年大鼠肺巨噬细胞TLR4与IL-18 mRNA表达变化的对比研究

目的　观察脂多糖 (LPS)致急性肺损伤 (ALI)老年大鼠肺巨噬细胞Toll样受体 4(TLR4)及IL -18mRNA表达的变化 ,探讨TLR4与IL -18在ALI时老年鼠与青年鼠的作用差别。方法　运用RT -PCR与ELISA检测TLR4和IL-18mRNA的表达及肺巨噬细胞培养液上清TNF -α浓度。结果　老年鼠LPS急性肺损伤组TLR4与IL -18mRNA表达显著高于青年鼠组 ( 0 63± 0 0 7vs 0 2 5± 0 0 3 ,0 5 8± 0 0 2vs 0 2 6± 0 0 3 ) ,TNF -α分泌显著多于青壮年鼠组 ( 0 67±0 0 6vs 0 45± 0 0 2 )ng/ml。结论　LPS急性肺损伤时老年鼠肺巨噬细胞TLR4功能及其介导的信号转导作用加强 ,IL -18分泌增加 ,表明两者在急性肺损伤中起重要作用 ,也可能是老年患者肺部感染时症状相对严重和难治的原因之一。     

内毒素结合肽在烧伤合并内毒素血症大鼠模型中的作用

目的　观察重组人内毒素结合肽蛋白在烧伤合并内毒素血症大鼠中的作用。方法　采用烧伤合并内毒素血症大鼠模型 ,分为模型组 (n =3 6)、治疗组 (n =3 6)及对照组 (n =6)。模型组在烧伤后立即腹腔内注射 1mg/kg内毒素(用 1ml生理盐水配制 ) ;治疗组腹腔内注射 1mg/kg内毒素 (用 0 5ml生理盐水配制 )后 ,再注入 40 0 μg/kg制备好的内毒素结合肽 (用 0 5ml生理盐水配制 ) ;模型组和治疗组分别在处理后 1、3、6、12、2 4、48h取血和肝、肺组织 ,对照组仅在脱毛后腹腔内注入 1ml生理盐水 ,取血和肝、肺组织作总体对照。采用生化速率法、ELISA法及组织学切片染色和电镜制样等方法 ,测定血清中丙氨酸转氨酶 (ALT)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)、白介素 6(IL 6)的含量变化以及光、电镜观察肝、肺组织的病理学变化。结果　模型组于伤后 1h血清TNFα显著高于对照组 (P <0 0 1) ,6h达峰值 ;治疗组与模型组比较各时相点血清TNFα含量均显著降低 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。血清IL 6含量测定结果 ,模型组于伤后 1h血清IL 6显著高于对照组(P <0 0 1) ,12h达峰值。治疗组 3～ 48h各时相点血清IL 6含量均显著低于模型组 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。大鼠血清中谷丙转氨酶的动态变化提示 ,模型组大鼠血清ALT水平较正常组显     

脂多糖对人工关节磨屑诱导单核细胞分泌功能的影响

目的探讨脂多糖（LPS）促进人工关节松动的可能性。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定在不同剂量LPS作用下超高分子聚乙烯微粒（UHMWPE）诱导人外周血单核细胞（MOs）,培养3,6,12,24,48h肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）的含量变化。结果与空白对照组A组相比LPS组、UHMWPE组、及不同浓度的LPS联合UHMWPE刺激组刺激3h后TNF—α、IL-6显著升高（均P〈0．05）,12h达高峰,TNF-α、IL-6分泌与LPS呈现浓度依赖性,刺激12,24,48hF组TNF—α、IL-6分泌明显高于A、B、C、D、E组（P〈0．05）。结论LPS能有效地促进由于UHMWPE刺激MOs所致的TNF—α、IL-6的分泌,增强了人工关节置换术后由微粒诱导的骨溶解。     

脂多糖及细胞因子刺激大鼠C6星状胶质细胞中瓜氨酸-NO循环相关酶的表达

①目的 了解在炎症递质脂多糖(LPS)及细胞因子的刺激下，一氧化氮合酶(NOS)的底物精氨酸的来源。②方法 采用Northern印迹杂交及Western免疫印迹杂交方法，检测LPS、干扰素γ(IFNγ)及肿瘤坏死因子α(TNFα)刺激大鼠星状胶质C6细胞中精氨酸的再生体系-瓜氨酸-NO循环相关酶的表达。③结果 LPS及细胞因子刺激C6细胞后，iNOS被诱导生成；同时精氨酸代琥珀酸合成酶(AS)在mRNA及酶蛋白水平表达增高；培养液中加入精氨酸，可见N0的合成；用瓜氨酸代替精氨酸，亦可出现NO的合成。④结论 在活化的C6细胞中，精氨酸的再生体系——瓜氨酸-NO循环对于合成NO是非常重要的。     

白细胞介素-13对肾小球系膜细胞TNF-α表达的影响

目的：研究白细胞介素—13(IL—13)对肾小球系膜细胞(MC)表达TNF—α的调节作用。方法：采用ELISA法测定MC培养上清中TNF—α。用逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)检测MCTNF—α mRNA表达。并用凝胶成像分析系统作半定量比较。结果：未经任何刺激的MC不分泌TNF—α，亦无TNF—αmRNA表达。经脂多糖(LPS)(10mg／L)刺激，MC高表达TNF—αmRNA及其蛋白。IL—13浓度1mg／L、10mg／L、100mg／L时均显著抑制LPS诱导MCTNF—αmRNA表达及其蛋白分泌。IL—13(100mg／L)几乎完全抑制MC表达TNF—αmRNA及其蛋白分泌，IL—13(0．1mg／L)则无抑制作用。结论：IL—13可能通过抑制MC分泌炎症细胞因子而延缓，肾内炎症过程。     

人脐带间充质干细胞对大鼠肺泡巨噬细胞表达细胞因子的影响

目的 研究人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)对受脂多糖(LPS)刺激的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383表达炎性细胞因子的影响。方法 从人脐带中分离hUCMSCs细胞,与NR8383在Transwell内间接共培养,hUCMSCs接种于上室,下室LPS浓度为100μg·mL^-1刺激NR8383释放炎性因子。设对照组(NR8383只加培养液)、LPS组(NR8383+LPS)、hUCMSCs处理组(NR8383+LPS+hUCMSCs)、hUCMSCs预处理组(NR8383+hUCMSCs+LPS)。实时荧光定量(qRT-PCR)测定NR8383细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6以及IL-10的mRNA表达;ELISA法检测各组NR8383细胞培养液中四种细胞因子的动态变化。结果 与对照组相比,LPS组的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达及蛋白水平均升高(P均<0.05);细胞培养液中,hUCMSCs处理组的IL-10含量均较LPS组升高,TNF-α、IL-6含量均降低(P<0.05);与hUCMSCs...     

内毒素耐受对THP-1细胞分泌TNF-α和IL-10的影响

目的:观察细菌脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)反复刺激人单核细胞株THP-1细胞,诱导产生的内毒素耐受对该细胞分泌炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和抗炎因子白细胞介素(interleukin,IL)-10的影响?方法:采用1 μg/ml牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)LPS或1 μg/ml大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)LPS刺激THP-1细胞24 h,洗脱后,分别采用相同LPS再刺激24 h,构建内毒素耐受模型?采用ELISA技术检测细胞条件培养液中TNF-α和IL-10分泌水平的变化?结果:P.gingivalis LPS或E.coli LPS刺激THP-1细胞24 h后,TNF-α和IL-10分泌水平均较刺激前明显增高(P < 0.05)?2种LPS重复刺激后,TNF-α分泌水平较第1次刺激后明显降低(P < 0.05),IL-10分泌水平则较第1次刺激后明显增高(P < 0.05)?结论:内毒素耐受能抑制THP-1细胞分泌TNF-α,促进该细胞分泌IL-10,进而可能影响牙周组织的炎症和免疫反应?     

血液透析滤过对慢性肾衰患者LPS、IL-1β、TNFα的影响

目的 :研究血液透析滤过 (HDF)对外周血细菌内毒素 (LPS)、白细胞介素 - 1β(IL - 1β)、肿瘤坏死因子(TNFα)的清除作用。方法 :14例慢性肾功能衰竭 (CRF)患者 ,随机选择 7例HDF和血液透析 (HD)交替 ,另 7例设为对照组 ,只予HD。酶联免疫法检测首次治疗前、后及治疗三个月后血LPS、IL - 1β、TNFα浓度。 结果 :(HDF HD)组首次治疗后血清LPS、IL - 1β较治疗前有所下降 ,治疗后与HD组比较LPS、IL - 1β水平下降 ,治疗前、后及组间比较均有显著差异。治疗三个月后 (HD HDF)组血清LPS、IL - 1β、TNFα浓度较HD组降低 ,P <0 .0 5。结论 :HDF可部分清除LPS、IL - 1β ,且可使CRF病人血清TNFα水平下降。     

葛根提取物体外对TNF,IL—1及IL—2产生的影响

体外用LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞（PMψ）分泌TNF及IL-1，用PHA刺激小鼠脾细胞分泌IL－2的方法来观察葛根提取物对这些细胞因子分泌的影响。结果表明葛根提取物在0．08～2μg／mL浓度时，对LPS刺激PMψTNF的分泌无影响，而对LPS刺激PMψ分泌IL-1，PHA刺激脾细胞分泌IL－2有抑制作用。在10μg／mL时，对TNF、IL－1及IL－2的分泌均呈抑制作用。     

细菌内毒素体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮实验模型的条件优化

目的优化细菌内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生NO实验模型的条件。方法采用Hank’s液灌洗小鼠腹腔,收集腹腔留
居巨噬细胞,利用铜绿假单胞菌脂多糖（LPS）作为内毒素刺激巨噬细胞产生NO,以Griess法检测培养上清液中NO的浓度,考
察细胞浓度、LPS浓度、LPS刺激时长、培养液体积等因素对巨噬细胞产生NO的影响,优化实验条件,并用已知药物验证模型的
可靠性。结果本实验条件下,细胞浓度对NO的产生具有关键性影响,最适浓度为6×10
6个细胞/ml,96孔板中每孔100μl;LPS
浓度<1μg/ml时,NO的产生随LPS浓度的增加而增加（P<0.001）,LPS浓度>1μg/ml时,NO的增加的幅度明显下降,当LPS
浓度为10μg/ml时,NO产生达到峰值;NO的产生随LPS刺激时间的延长,其含量相应增加,24与48h之间的增加幅度大于
48h与72h之间的增加幅度（P<0.05）;培养上清中NO的含量与培养液的体积有一定关系,100μl时的NO含量最高。阿司
匹林(1mmol/L)、地塞米松(10μmol/L)、环孢霉素A(10μmol/L)均能明显抑制LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生NO（P<0.001）。
结论巨噬细胞浓度、LPS浓度、LPS刺激时长是建立内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮实验模型的主要影响因素。推
荐方案为：巨噬细胞浓度5×10
6个细胞/ml,100μl/孔;LPS浓度10μg/ml;LPS刺激时长24h或48h;培养液体积100~200μl。
     

脂多糖对人肺微血管内皮细胞骨架及TNF-α和IFN-γ表达的影响

目的 探讨脂多糖 (LPS) 直接诱导人肺微血管内皮细胞 (HPMVEC)后细胞骨架的改变,肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)mRNA的表达及细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ的表达水平的改变.方法 HPMVEC生长至80 %以上融合时,加入LPS 以 500 ng/mL浓度刺激细胞分别至 0、4、6、8 h,经鬼笔环肽染色后采用激光共聚焦显微镜观察HPMVEC细胞骨架的变化.至预定时相点离心收集培养液上清液,利用实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α、IFN-γ mRNA的表达,采用 ELISA方法测定细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ的表达水平,并进行统计学分析.结果 LPS 刺激培养后,8 h组细胞开始出现细胞骨架改变;4 h组TNF-α、IFN-γ mRNA表达与0 h组差异无统计学意义(P>0.05),6 h组TNF-α、IFN-γ mRNA表达高于0 h组(P<0.05),8 h组TNF-α、IFN-γ表达高于0 h组(P<0.05);4 h 组细胞培养上清液TNF-α、IFN-γ的表达水平与0 h组比较差异无统计学意义(P>0.05),6 h 组细胞培养上清液TNF-α、IFN-γ的表达水平高于0 h组(P<0.05),8 h组细胞培养上清液TNF-α、IFN-γ的表达水平高于0 h组(P<0.05).结论 细菌致病因子LPS能直接刺激HPMVEC使细胞结构发生改变,同时影响细胞因子的分泌,使促炎因子TNF-α和IFN-γ分泌升高,参与肺损伤.这可能是LPS发挥其毒性作用诱发急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的一个重要途径.     

白藜芦醇对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO和炎性因子生成的调控

目的探讨白藜芦醇（Res）对内毒素（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞核因子-κB（NF—κB）活化及炎性细胞因子（TNF—α、IL—1β、IL-6）基因表达的调节，为Res的临床运用提供理论依据。方法分别用LPS或Res＋LPS处理体外培养的小鼠巨噬细胞，采用电子顺磁共振（EPR）自旋捕集技术直接检测巨噬细胞产生的NO，电泳迁移率改变分析法（EMSA）检测细胞中NF—κB活性，逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞中TNF—α、IL—1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达。结果表明LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量在刺激后2—12h明显高于正常对照组（P〈0．01），而Res＋LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量均显著低于LPS组（P〈0．01）。结论提示LPS可诱导巨噬细胞NF—KB活化，导致TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达增强，而Res能抑制NF—κB活化而调节TNF—α、IL-1β、IL-6基因的表达。