肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌中ESBLs和AmpC酶基因的研究

目的研究肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌中ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶的存在形式及其基因类型和转移方式。方法利用CLSI纸片法确认实验和APB纸片增强试验分别检测ESBLs和AmpC酶,基因芯片技术和序列分析测定两种酶基因的类型,接合转移实验了解肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌耐药基因转移方式。结果在对头孢西丁不敏感的72株肺炎克雷伯菌和20株产酸克雷伯菌中,以同时产生ESBLs和AmpC酶为主要形式,分别占54.2%和75.0%;单产ESBLs分别为22.2%和25.0%,肺炎克雷伯菌中单产AmpC酶占12.5%;肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌中的AmpC酶基因绝大多数为DHA型(测得DHA-1型基因),ESBLs则以SHV型为主(测得SHV-12型),它们均能通过接合转移方式将其质粒携带的耐药性传递至受体菌。结论同时存在的ESBLs和AmpC酶是肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌耐药的主要原因,耐药基因的转移可导致耐药性的传播扩散。     

产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的基因型分析与耐药性检测

目的研究湖南地区产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的检出和耐药情况,确定其基因型并对其流行病学特征进行研究。方法采用头孢西丁纸片扩散法进行肺炎克雷伯菌AmpC酶表型初筛,提取质粒采用多重PCR技术检测质粒介导AmpC酶基因,设计引物进行结构基因的全长扩增和测序;并应用重复一致序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行菌株同源性分析,用琼脂倍比稀释法检测产酶菌的药物敏感性。结果产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的检出率为19.1%,均为DHA-1型质粒介导AmpC酶;ERIC-PCR结果显示,21株肺炎克雷伯菌有6种图谱类型,产质粒介导AmpC酶菌株呈多药耐药,但对亚胺培南的敏感率为100.0%。结论湖南地区产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌检测率高,其质粒介导的ampC耐药基因为DHA-1型基因,产酶菌株存在质粒传播和克隆传播,治疗相关感染以碳青酶烯类抗菌药物为首选药物。     

产AmpC肺炎克雷伯菌质粒介导的多药耐药性与基因型研究

目的探讨产AmpC肺炎克雷伯菌耐药质粒介导的多药耐药性、耐药基因类型及转移方式。方法应用VITEK-2型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,头孢西丁纸片扩散法筛选出疑产AmpC酶阳性菌株,采用接合转移试验了解肺炎克雷伯菌耐药基因转移方式,通过K-B法检测受体菌的多药耐药性,并通过酶粗提物头孢西丁三维试验和PCR测序等试验分析其耐药基因。结果 820株临床分离的肺炎克雷伯菌筛选出疑产AmpC酶阳性菌株108株,阳性率为13.17%;108株疑产AmpC菌经接合试验、AmpC酶表型确认试验获53株产AmpC接合子;经基因测序单纯AmpC酶基因阳性菌株34株,阳性率64.15%;同时携带ESBLs和AmpC基因菌株检出19株,阳性率35.85%;其均能通过接合转移方式将其质粒携带的耐药性传递至受体菌。结论质粒介导AmpC酶是肺炎克雷伯菌产生多药耐药的重要原因,产酶株对多种抗菌药物耐药,耐药基因质粒的转移可导致耐药性的传播扩散。     

肺炎克雷伯菌中质粒介导的AmpC酶的检测及基因型的研究

目的:了解下呼吸道感染的肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC酶的产生情况及AmpC酶的耐药基因型。方法:采用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按NCCLS推荐的确证试验检测ESBLs;采用头孢西丁纸片扩散法筛选疑产AmpC酶阳性菌株,并通过酶粗提物头孢西丁三维试验、接合试验、PCR测序等实验分析该菌株的基因型。结果:97株肺炎克雷伯菌ESBLs阳性33株(34.02%);AmpC酶筛选阳性16株(16.49%),筛选阳性菌株经三维试验证实为AmpC阳性9株(9.28%);9株AmpC酶阳性菌株经接合试验得到9株接合子,经PCR测序证实此9株接合子与原菌株表型基本一致。9株AmpC酶阳性菌株均为ESBLs阳性菌株,基因型均未检出AmpC单独阳性株。AmpC酶阳性株的基因型:7株为DHA型,2株为CIT型。结论:下呼吸道分离的肺炎克雷伯菌ESBLs及AmpC酶产生率较高,AmpC酶以DHA基因型为主。产ESBLs和AmpC酶是肺炎克雷伯菌耐药的主要原因。     

ICU感染患者分离肺炎克雷伯菌AmpC酶、 ESBLs基因检测及耐药性

目的 研究重症监护室(ICU)感染患者分离的肺炎克雷伯菌头孢菌素(AmpC)酶、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因检测情况，并分析耐药性。方法 选取2016年4月-2020年4月四川大学华西医院金堂医院ICU医院感染患者临床分离的498株肺炎克雷伯菌株，进行细菌分离与鉴定、AmpC酶耐药表型与基因型分析、接合转移试验，选出AmpC酶菌株并确证，聚合酶链式反应(PCR)、DNA测序分析AmpC酶基因型，同时进行药敏试验。结果 498株肺炎克雷伯菌株主要来自痰液(78.31%),共筛选出疑产AmpC酶阳性菌株102株，初筛阳性率20.48%,经接合试验、AmpC酶三维试验确证获得50株产AmpC接合子，产AmpC酶检出率49.02%(50/102);经基因测序单纯AmpC酶基因阳性菌株32株(64.00%),同时携带AmpC酶及ESBLs基因菌株18株(36.00%),DNA测序证实均为DHA-1型AmpC酶。>60岁人群产AmpC酶肺炎克雷伯菌检出率高于其他年龄段人群(P<0.05);同产ESBLs+AmpC酶的肺炎克雷伯菌耐药率高于单产AmpC酶(除头孢唑林、头孢呋辛、阿...     

多重PCR技术检测医院感染大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶基因型别

目的了解我地区大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌携带质粒介导AmpC酶的情况及基因型别. 方法用头孢西丁耐药表型筛选阳性可疑菌株,提取耐药质粒,然后采用多重PCR技术检测是否存在质粒介导的AmpC 基因及其基因型别;并对PCR产物进行测序. 结果 7株头孢西丁耐药的大肠埃希菌多重PCR均为阴性,4株肺炎克雷伯菌中3株多重PCR阳性,测序结果均为DHA-1型质粒AmpC酶. 结论多重PCR技术是一种灵敏、特异、快速的检测质粒AmpC酶及其基因型别的好方法;采用该方法在我地区首次检测出产DHA-1型质粒AmpC酶的肺炎克雷伯菌.     

产ESBLs与质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌的耐药性及基因型研究

目的探讨肺炎克雷伯菌耐药性及产ESBLs与AmpC酶的存在形式、基因类型和转移方式。方法采用K-B法和微量稀释法测定病原菌对17种抗菌药物的药敏率，用PCR法及基因测序分析两种酶基因的类型，采用接合转移试验了解肺炎克雷伯菌耐药基因转移方式。结果对头孢西丁耐药的55株肺炎克雷伯菌中单产ESBLs为主要形式，ESBLs基因绝大多数为CTX-M型，AmpC酶基因绝大多数为MIR和DHA型，它们均能通过接合转移方式将其质粒携带的耐药性传递至受体菌。结论同时存在的产ESBLs与AmpC酶是肺炎克雷伯菌耐药的主要原因，产酶株对多种抗菌药物耐药，耐药基因的转移可导致耐药性的传播扩散。     

耐头孢西丁肺炎克雷伯菌AmpC酶的检测及耐药性基因分析

目的对耐头孢西丁肺炎克雷伯菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)进行检测及其耐药基因进行分析,探讨产AmpC酶基因对其耐药表型的影响。方法采用头孢西丁三维试验检测AmpC酶,采用双纸片确诊试验测定ESBLs,PCR扩增AmpC酶与ESBLs基因及其序列测定确定其基因型。结果 72株耐头孢西丁肺炎克雷伯菌中AmpC酶阳性有45株,阳性率为62.5%(45/72),3株为CMY-2型,43株为DHA-1型,其中在1株菌株中同时存在CMY-2和DHA-1两种基因;45株AmpC酶阳性肺炎克雷伯菌中33株检测出ESBLs,检出率为73.3%(33/45),23株携带CTX-M基因,15株携带SHV基因,19株携带TEM基因。结论 AmpC阳性肺炎克雷伯菌菌株中ESBLs检出率高,加强监测高产AmpC酶耐头孢西丁肺炎克雷伯菌,治疗相关菌感染以亚胺培南和美罗培南为首选,合并产AmpC酶和ESBLs肺炎克雷伯菌比单产AmpC酶菌株对亚胺培南和美罗培南的耐药率低。     

质粒介导的DHA型AmpC酶在肺炎克雷伯菌中的表达及对耐药性的影响

目的 研究质粒介导的DHA型AmpC酶在肺炎克雷伯菌中的基因表型及耐药性。方法根据美国临床实验室标准协会（CLSI）的标准,用琼脂稀释法检测MIC值和K-B法确证ESBLs,利用3-氨基苯酚硼酸对AmpCβ-内酰胺酶（AmpC酶）的抑制作用检测肺炎克雷伯菌的AmpC酶表型;用基因芯片技术及聚合酶链反应（PCR）检测ESBLs与AmpC酶的基因型。结果 DHA型AmpC酶肺炎克雷伯菌同时具有产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）为94.2%,以DHA＋TEM＋SHV的基因表型最多38.3%;AmpC酶肺炎克雷伯菌的MIC50均〈0.25μg/ml、MIC90均〈0.5μg/ml,该类菌对头孢他啶的耐药率（85.7%）高于对头孢噻肟的耐药率（60.0%）,但MIC50和MIC90基本相同;34株产酶菌的耐药基因经质粒接合试验,分别有14株接合成功,5株在头孢噻肟和头孢西丁两种选择性平皿培养基中同时接合成功,2株在和头孢西丁平皿培养基中接合成功,7株在头孢噻肟平皿培养基中接合成功。结论 解放军总医院质粒介导的DHA型AmpC酶,在肺炎克雷伯菌中以DHA＋TEM＋SHV的基因表型为主,同时具有ESBLs占94.1%;41.2%的可以将耐药质粒结合给大肠埃希菌。     

产ESBLs与AmpC酶肠杆菌科细菌表型检测及基因型分析

目的了解肠杆菌科细菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与Amp C酶基因型特征。方法对临床分离的287株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌筛选产ESBLs/AmpC酶的菌株进行表型确证试验。对常见的SHV、TEM超广谱β-内酰胺酶基因型和DHA-1、ACT-1 AmpC酶基因型进行PCR扩增,并对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。结果表型确证产酶大肠埃希菌SHV、TEM、DHA-1、ACT-1基因的阳性率分别为46.5%、49.5%、50.9%、32.1%,产酶肺炎克雷伯菌SHV、TEM、DHA-1、ACT-1基因的阳性率分别为50.0%、26.7%、62.5%、45.8%。部分分离菌株同时携带2种或以上基因型。结论临床分离的产ESBLs与AmpC酶大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌携带多种耐药基因比率较高,临床检出多重耐药细菌逐年升高,临床对产酶的多重耐药菌的防治迫在眉睫。     

质粒介导产AmpC酶大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌AmpC基因型检测与分析

目的了解台州、温州两地临床分离的由质粒介导的产AmpC酶大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌ampC耐药基因型。方法采用酶提取三维试验、头孢西丁三相试验、氯唑西林双纸片协同法等方法测定大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌AmpC酶;采用PCR法测定大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌ampC耐药基因型。结果在20株产AmpC酶的大肠埃希菌中,检测到DHA基因有5株（25%）,检测到MIR基因有2株（10%）,检测到FOX基因有2株（10%）;在20株产AmpC酶的肺炎克雷伯菌中,检测到DHA基因有7株（35%）,检测到MIR基因有1株（5%）;在产AmpC酶的大肠埃希菌中,有1株ESBLs阳性的菌株,AmpC氯唑西林协同试验阳性,但AmpC三维试验与头孢西丁三维试验均阴性,在质粒中同时检测到DHA基因与MIR基因。结论两地临床分离的由质粒介导的大肠埃希菌以DHA基因为主,阳性率25%,MIR、FOX基因为辅,阳性率各10%;由质粒介导的肺炎克雷伯菌ampC耐药基因以DHA基因为主,阳性率35%,MIR基因为辅,阳性率为5%;未检到其他ampC耐药基因。     

某院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs基因检测及分型

目的了解某院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生的超广谱β 内酰胺酶（ESBLs）基因型。方法采用表型确证试验测定并收集该院产ESBLs大肠埃希菌（40株）和肺炎克雷伯菌（20株）,提取质粒DNA。采用特异性引物扩增TEM、SHV和 CTX M系列基因,测序后进行序列分析。结果60株表型确证试验阳性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,聚合酶链反应（PCR）扩增均阳性,包括TEM、SHV、CTX M 3组和CTX M 9组4种基因型。大肠埃希菌中上述4种基因型阳性率分别为37.50%（15株）、2.50%（1株）、62.50%（25株）、50.00%（20株）;肺炎克雷伯菌上述4种基因型阳性率分别为40.00%（8株）、90.00%（18株）、65.00%（13株）、40.00%（8株）。100.00%的大肠埃希菌和80.00%的肺炎克雷伯菌产生blaCTX M,12.50%(5/40)的大肠埃希菌和25.00%(5/20)的肺炎克雷伯菌携带2种CTX M酶基因。23例TEM基因皆为TEM 1型;19例SHV型基因包括SHV 1型6株、SHV 11型6株、SHV 12型5株及SHV 25型2株,仅SHV 12为ESBLs基因,且均来源于肺炎克雷伯菌;66例CTX M型基因,其中CTX M 14在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别为45.00%和35.00%,CTX M 55检出率均为35.00%,CTX M 15检出率分别为20.00%和15.00%,检出少量CTX M 3、CTX M 65、CTX M 101及CTX M 123基因型。结论该院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs基因型以CTX M 为主,其次为SHV 12。CTX M基因型中以CTX M 14最为常见,CTX M 101及CTX M 123型ESBLs为山东省首次检出。     

阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶与AmpC酶基因及其流行病学研究

目的分析医院2008-2010年临床分离阴沟肠杆菌产ESBLs和AmpC酶及其对抗菌药物的耐药性,并了解其耐药基因的传播机制。方法采用改良三维试验筛选AmpC酶,双纸片扩散法检测ESBLs,聚合酶链反应(PCR)检测ESBLs和AmpC酶的基因,采用微量肉汤稀释法分析细菌耐药性,质粒接合试验分析耐药基因的传播特点。结果同时产ESBLs和AmpC酶菌株对三、四代头孢菌素及含酶抑制剂药物的耐药率均>50.0%;45株改良三维试验阳性,14株ESBLs确证试验阳性,ESBLs和AmpC酶的基因阳性者分别为25、38株,分别以TEM-1型、MIR-3型为主,其次为CTX-M-3、DHA-1型,SHV-11型广谱β-内酰胺酶2株,未检测到CIT、MOX、FOX、ACC型AmpC酶的基因,5株接合试验成功。结论阴沟肠杆菌主要携带TEM-1型广谱β-内酰胺酶、CTX-M-3型ESBLs和MIR-3型AmpC酶,耐药现状严重,应采取积极有效的措施预防多药耐药菌株的播散与暴发流行。     

维吾尔族与汉族新生儿感染产超广谱β-内酰胺酶与头孢菌素酶病原菌的耐药性及基因型分析

目的 了解乌鲁木齐地区维吾尔族与汉族新生儿中肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与头孢菌素酶(AmpC酶)的耐药性及基因型分布.方法 采用纸片扩散(K-B)法测定299株病原菌对22种抗菌药的耐药率;利用多重PCR技术检测产ESBLs或AmpC酶菌株耐药基因,并用DNA序列分析确认基因亚型;采用数字表法随机抽取产ESBLs的TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-9组阳性菌株及产AmpC酶的DHA、CIT阳性菌株共148株进行测序.耐药率采用世界耐药监测网Whonet 5.4软件进行统计,数据对比应用医学PEMS 3.1统计软件采用卡方检验进行统计学处理,P＜0.05认为差异有统计学意义.结果 在耐药率方面,维吾尔族与汉族新生儿中产ESBLs肺炎克雷伯菌对复方新诺明[80.0%(40/50)和56.0%(28/50),x2=6.6176,P=0.0101]、产ESBLs大肠埃希菌对头孢哌酮+舒巴坦[54.2%(32/59)和94.0%(47/50),x2=21.4512,P=0.0000]、产AmpC酶肺炎克雷伯菌对头孢哌酮+舒巴坦[100.0%(20/20)和72.2%(26/36),x2=6.7633,P=0.0093]和对阿米卡星[65.0%(13/20)和25.0%(9/36),x2=8.6246,P=0.0033]耐药率差异有统计学意义.基因测序结果显示,ESBLs基因型除SHV在大肠埃希菌中维吾尔族新生儿只检出3.4%(2/59)而汉族新生儿未检出外,其他TEM、CTX-M-1、CTX-M-9组基因检出率均在38.0%(19/50)以上;其中TEM、CTX-M-1组基因分别为单一的TEM-1型和CTX-M-15型,SHV、CTX-M-9组阳性基因分别检出SHV-1、2、11、12、27、61、99和CTX-M-9、14、24、27、65等不同型别基因.肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中检出2种或2种以上ESBLs基因型的菌株占56.7%(42/74)～90.0%(63/70).携带AmpC酶基因的2种菌在2个民族新生儿中基因型都只集中在DHA-1和CMY-44型,其他型未检出.2个民族新生儿间只有产TEM型的ESBLs大肠埃希菌检出率为维吾尔族新生儿高于汉族新生儿[71.2%(42/59)和50.0%(25/50),x2=5.1291,P=0.0235],其余各种耐药基因型检出率差异无统计学意义(x2＜3.7780,P＞0.05).结论 2个民族新生儿间部分菌株耐药率和耐药基因型分布差异有明显统计学意义,而且肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌携带多种耐药基因并对β-内酰胺类抗生素呈高耐药性.

Abstract：

Objective This study aimed to investigate drug resistance and genotypes of the extended spectrum β-lactamase (ESBLs) and AmpC β-lactamase-producing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae isolated from Uygur and Han newborns in Urumqi. Methods Disk diffusion test (Kirby-Bauer) was used for detecting drug resistance of 299 strains to twenty two kinds of antibiotics. Resistance genes of the ESBLs and AmpC β-lactamase-producing strains were amplified by multiplex PCR and subtypes were confirmed by DNA sequence analysis. Total 148 strains were selected with random number table and sequenced,which included TEM-, SHV-, CTX-M-1-, or CTX-M-9- positive ESBLs-producing strains and DHA-,or CIT- positive AmpC β-lactamase-producing strains. Antibiotic resistant rates were analyzed by Whonet 5.4 and statistic analysis was performed by chi-square ( x2 ) test with PEMS 3. 1. Results The antibiotic resistant rates between Uygur and Han newborns significantly differ in ESBLs-producing Klebsiella pneumoniae to Suffamethoxazolum-Trimethoprimum (80. 0% (40/50) and 56. 0% (28/50) ,x2 = 6. 6176,P = 0. 0101 ) ,in ESBLs-producing Escherichia coli to Sulbactam and Cefopcrazone (54. 2% (32/59) and 94. 0% (47/S0), x2 = 21.4512, P = 0. 0000 ), and in AmpC β-lactamase-producing Klebsiella pneumoniae to Sulbactam and Cefopcrazone ( 100. 0% (20/20) and 72. 2% (26/36) ,x2 =6. 7633 ,P =0. 0093) and to Amikacin (65.0% (13/20) and 25.0% (9/36), X2 = 8.6246, P= 0.0033). Although SHV gene of ESBLs-producing Escherichia coli was detected from Uygur newborns at only 3.4% (2/59) and not detectable from Han newborns, TEM, CTX-M-1, and CTX-M-9 group genes were all detected over 38.0%(19/50). Among the detected strains,the subtypes of TEM and CTX-M-1 were mainly TEM-1 and CTX-M-15,respectively; whereas the subtypes of SHV and CTX-M-9 included SHV-1,2,11,12,27 ,61,99 and CTX-M-9,14,24,27,65, respectively. The strains of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae carrying two or more kinds of ESBLs genotypes were 56. 7% (42/74) -90. 0% (63/70). Two species carrying the AmpC gene in two kinds of newborns were only grouped in the subtypes of DHA-1 and CMY-44 ,and other subtypes were not detected at all. Moreover,TEM-positive ESBLs-producing Escherichia coli were detected from Uygur newborns at the higher rate than that from Han newborns (71.2% (42/59) and 50. 0% (25/50), x2 =5. 1291 ,P= 0. 0235 ), while there was no difference in other genotypes detected between two kinds of newborns ( x2 ＜ 3. 7780, P ＞ 0. 05 ). Conclusion There were significant differences in antibiotic resistance and genotype distribution of Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli between two nationality newborns, and these two bacteria detected in this study carried multi-resistance genes and showed high resistant to β-lactamase antibiotics.     

呼吸重症监护室产质粒介导AmpC酶和ESBLs细菌的耐药性及基因型

目的了解深圳地区2所三级综合医院呼吸重症监护室（RICU）分离的革兰阴性（G-）菌产AmpC酶和超广谱β 内酰胺酶（ESBLs）情况及其耐药性与基因型特征。方法选择分离自上述2所医院RICU的对第一、二代及1种以上第三代头孢菌素耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,采用纸片扩散法及E test进行药敏试验,酶提取物三维试验检测单产AmpC酶,美国临床实验室标准化研究所 (CLSI)推荐的表型筛选和确证试验检测产ESBLs菌株,聚合酶链反应（PCR）通用引物扩增AmpC酶和ESBLs基因及其序列测定以确定基因亚型。结果检出单产AmpC酶、单产ESBLs、合产AmpC酶和ESBLs的菌株分别为9株（9.38%）、52株（54.17%）和10株（10.42%）。单产AmpC酶菌株对头孢吡肟和亚胺培南具有较高的敏感性,耐药率分别为33.33％和0.00%;单产ESBLs菌株对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦及头孢哌酮/舒巴坦的敏感性较高,耐药率分别为0.00％、34.62％和19.23%;合产AmpC酶和ESBLs的菌株仅对亚胺培南敏感,未发现耐药株。检出AmpC酶基因型为DHA 1和ACT 1,分别占76.92％和26.08%;ESBLs基因型为CTX M系列和SHV 5,分别占96.77％和3.23%。结论该2所综合医院RICU存在产质粒介导DHA 1、ACT 1型AmpC酶和CTX M、SHV型ESBLs的G-菌流行株,其对大多数新型广谱β 内酰胺类抗生素耐药,对亚胺培南敏感,值得临床关注。     

大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌质粒β-内酰胺酶检测

目的了解大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产质粒β-内酰胺酶的类型、检测方法及耐药性. 方法用NCCLS确证试验检测超广谱β-内酰胺酶,根据表型、纸片协同试验及头孢西丁三相试验检测AmpC酶. 结果 835株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,共检测出产超广谱β-内酰胺酶菌株220株,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌总ESBLs发生率为26%;根据头孢西丁三相试验结果,表现为产AmpC酶的菌株共有36株,检出率为4.31%,表型鉴别高产AmpC酶,表现为产AmpC酶的菌株共有37株,检出率为4.43%,与头孢西丁三相试验符合率为97.3%;纸片协同试验表现为产AmpC酶的为32株,检出率为3.83%,与头孢西丁三相试验符合率为88.9%. 结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶为主;表型筛选法检测AmpC酶结果可靠、方法简便,易于在临床实验室中推广应用.     

肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶的基因型研究

目的检测质粒AmpC酶的基因型及耐药特性,指导临床合理使用抗菌药物,减少耐药菌株的流行及传播。方法选择华中科技大学同济医学院附属同济医院细菌室2004年1-12月,非重复分离肺炎克雷伯菌218株,改良三维试验筛选产AmpC酶菌株,多重PCR和基因测序检测质粒AmpC酶基因型别,琼脂稀释法检测其对15种抗菌药物的最低抑菌浓度。结果改良三维试验检出13株AmpC酶,检出率为5.96%,经多重PCR测定,7株菌约在405 bp出现阳性条带,经基因测序证实为DHA-1型质粒AmpC酶,检出率为3.2%;7株质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌对头孢西丁、头孢唑林、头孢呋辛及酶抑制剂联合制剂阿莫西林/克拉维酸全部耐药,对其他头孢类、单环β-内酰胺酶类、含酶抑制剂药物、氨基糖苷类及氟喹诺酮类药物普遍耐药,只有亚胺培南对其显示较好抗菌活性,尚未见耐药菌株出现。结论同济医院肺炎克雷伯菌中检出DHA-1型质粒AmpC酶,检出率为3.2%,产酶株显示多重耐药特性。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌多重β-内酰胺酶基因型研究

目的:研究医院感染碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和质粒介导的AmpC酶基因型的分布。方法:筛选出产KPC酶肺炎克雷伯菌,采用改良的Hodge试验、接合试验、聚合酶链反应(PCR)等方法确定多重β-内酰胺酶基因型。结果:收集并证实产KPC-2型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌26株,其中CTX-M型ESBL检出率最高;3株细菌同时编码ESBL和AmpC基因,其中2株细菌同时携带blaCTX-M-3、blaSHV-12和blaDHA-1三种β-内酰胺酶基因。结论:产KPC酶肺炎克雷伯菌同时携带有其他β-内酰胺酶耐药基因,CTX-M型ESBL最为常见,使细菌耐药性更为严重。