环氧合酶-2 在肝细胞癌中的表达及其对肿瘤血管生成的影响

 目的 本研究通过检测肝细胞癌组织COX-2的表达,探讨COX-2与VEGF和MVD表达之间的关系,初步探讨COX-2在肝细胞癌血管生成的作用. 方法 应用免疫组化方法检测了45例肝细胞癌组织中COX-2和 VEGF、MVD的表达. 结果 肝癌、癌旁组织和正常肝组织中COX-2表达阳性率分别为73.3%、81.3%和100%.高分化癌组织中COX-2蛋白的表达显著高于中分化和低分化癌组织中的表达(P<0.05);癌组织中COX-2蛋白表达与年龄、性别、肿瘤大小、包膜、门静脉癌栓、AFP均无显著性差异(P>0.05).COX-2与VEGF表达和MVD有显著相关性(P<0.01,P<0.05). 结论 COX-2可通过增加VEGF的表达而促进肿瘤血管的生成.     

干扰素—α2b抗肿瘤作用临床Ⅱ期观察

自80年代初基因重组干扰素(IFN)问世以来,IFN的抗肿瘤作用的研究有了很大的进展。特别是IFN-α2b的临床研究较为深入。目前已知IFN-α2b对毛细胞白血病、慢性髓性白血病、肾癌,非何杰金淋巴瘤、恶性黑色素瘤等有肯定的疗效。IFN对其它肿瘤的疗效也正在研究中。近年来,我院用美国Schering公司提供的IFN-α2b(Intron A)治疗27例晚期肿瘤病人,现将初步临床观察结果报告如下。临床资料及给药方法 1986年5月～1989年3月共收治经病理证实的晚期肿瘤病人27例,其中可评价的病     

血管内皮抑制素对Calu-6裸鼠移植瘤的生物学效应

目的 探讨血管内皮抑制素对Calu-6裸鼠移植瘤生长及新生血管形成的影响.方法 在荷瘤裸鼠皮下注射不同剂量的血管内皮抑制素,观察注射后肿瘤体积的变化;应用免疫组化SABC法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、生存素(survivin)和环氧化酶-2(COX-2)蛋白的表达以及微血管密度(MVD)的变化;流式细胞术检测循环血管内皮细胞(CECs)的含量;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时定量PCR检测外周血中CD146和CD105 mRNA的表达.结果经血管内皮抑制素治疗后,荷瘤鼠肿瘤体积明显减小;肿瘤组织中VEGF、survivin和COX-2蛋白的表达以及MVD均下降,且各治疗组与阳性对照组间的差异均有统计学意义(均P＜0.05);外周血中CECs、CD146和CD105 mRNA的含量均明显下降;活化CECs的含量与肿瘤组织中survivin和VEGF的表达以及MVD的变化均呈正相关.结论 血管内皮抑制素可通过下调移植瘤中VEGF、survivin和COX.2蛋白的表达以及减少MVD抑制肿瘤生长;活化CECs将可能作为理想的预测抗血管形成治疗预后的标记物应用于临床.     

抑制NF-κB 对人肺癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响

 目的 探讨核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对肺癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法 人肺癌A549细胞接种于裸鼠皮下，建立肺癌裸鼠移植瘤模型，分为对照组和PDTC组，比较移植瘤重量，计算抑瘤率；RT—PCR检测移植瘤环氧化酶-2(COX-2)基因表达，免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)和FⅧ蛋白表达，并计数微血管密度(MVD)。结果 PDTC组移植瘤重量显著低于对照组(P<0．01)，抑瘤率为41．03％；COX-2、VEGF表达及MVD计数均显著低于对照组(P<0．01，P<0．01，P<0．05)。结论 PDTC可抑制肺癌裸鼠移植瘤的生长，该作用可能与其抑制COX-2、VEGF表达，从而抑制血管生成有关。     

干扰素α-1b对HepG2细胞MMP-2和TIMP-2表达水平影响的研究

目的:研究α干扰素(IFN-α-1b)对人肝癌细胞系HepG2细胞MMP-2和TIMP-2表达水平的影响,探讨IFN-α抗肝细胞癌生长与转移复发的相关分子机制.方法:培养HepG2细胞,在不同剂量的IFN-α干预下,于不同时间提取上清液,通过ELISA方法检测MMP-2、TIMP-2蛋白的表达浓度.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法半定量检测IFN-α干预组与对照组MMP-2、TIMP-2基因mRNA的表达.结果:在培养HepG2细胞24及48 h后,IFN-α剂量为3 000 IU/mL时的MMP-2蛋白浓度分别为(1 725.3±300.7)及(2 899.8±343.2)ρg/mL,与空白对照组相比明显降低,差异有统计学意义,P值分别为0.001和0.000;各时间段TIMP-2浓度与对照组比较差异均无统计学意义;MMP-2、TIMP-2浓度比值较对照组显著降低,差异有统计意义,P值分别为0.003和0.001.48 h干预组(3 000 IU/mL)与对照组比较MMP-2 mRNA表达水平差异有统计学意义,F=2.711,P=0.005.结论:大剂量IFN-α可通过抑制HepG2细胞MMP-2的表达水平下调MMP-2、TIMP-2浓度比值,并呈剂量效应关系.IFN-α对HepG2细胞MMP-2表达的抑制作用在其抗肝细胞癌生长与转移复发中发挥一定作用.     

肝细胞癌COX-2表达与新生血管生成关系的研究

目的:探讨环氧合酶2(cyclooxygenase2,COX2)表达上调与人肝细胞癌(HCC)新生血管生成的关系。方法:2002～2003年本院病理诊断为HCC的80例手术标本,采用免疫组化方法,检测癌组织中COX2和血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和CD34的表达情况,使用Weidner分析方法来计算CD34标记的肿瘤微血管密度(microvasculardensity,MVD)。结果:COX2和VEGF在HCC中表达率分别为75.00%(60/80)和62.50%(50/80)。VEGF在COX2强阳性组和中弱阳性组的免疫染色积分分别是5.98±1.16和3.30±0.22;VEGF在COX2强阳性组和中弱阳性组的表达率分别是71.43%(25/35)和28.00%(7/25),两组间差异非常显著(P<0.01),COX2与VEGF表达有明显相关性(P<0.01)。MVD在COX2强阳性组和中弱阳性组的评分分别为73.81±12.43和33.42±7.52,两组间差异非常显著(P<0.01),COX2与MVD有明显相关性(P<0.01)。结论:COX2高表达与HCC血管生成密切相关。     

UP－REGULATION OF CYCLOOXYGENASE－2 GENE EXPRESSION CORRELATES WITH TUMOR ANGIOGENESIS IN HUMAN BREAST CANCER

Prostaglandins(PGs) play a critical role in tumor development and growth by regulating numerous biologic processes, including tumor angiogenesis[1]. Cyclooxygenase-2 (COX-2) is an inducible enzyme that converts arachidonic acid to PGs. Overexpression of the COX-2 gene in mammary glands of transgenic mice was sufficient to induce tumorigenesis[2]. COX-2expression may contribute to the synthesis of PGs, which have been related to carcinogenesis and tumor progression. Recent studies have sh…     

重组干扰素α-2b抗肿瘤作用的Ⅱ期临床观察

本文报道了古巴重组干扰素α-2b(HU-rIFN alfa-2b)治疗70例恶性肿瘤的结果。IFN α-2b 用法为肌肉注射,每周2次,第一周3×10~6IU/次,第2周6×10~6 IU/次;第3至8周9×10~6IU/次。在62例可评价疗效的病人中,肾癌26例,1例 CR,1例 PR(有效比2/26);黑色素癌16例,2例 PR(2/16);恶性淋巴瘤7例,4例 PR(4/7);乳腺癌13例,2例 PR(2/13);总有效率为16.1%(10/62)。主要副作用为流感样症状。包括发热、寒战、乏力、肌痛、头晕等,还有不同程度的骨髓抑制及胃肠道反应。本组的结果提示,IFN α-2b 的毒性较小,可以初步考虑作为二线药物治疗肾癌、黑色素瘤和恶性淋巴瘤。     

干扰素协同重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊治疗HPV持续阳性的疗效

目的:探讨干扰素协同重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊对宫颈癌治疗后,高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）持续阳性的疗效。方法:选取我院166例宫颈癌治疗后HR-HPV持续阳性的患者随机分为两组,给予干扰素协同重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊两种药联合治疗为观察组。不用任何药物治疗的设为对照组。结果:两组患者12个月后HR-HPV阳性率均有所下降。联合用药组治疗后HR-HPV有效率为90.20%（92/102）,高于对照组68.75%（44/64）,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:干扰素协同重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊宫颈癌治疗后HPV阳性者疗效显著,值得临床推广应用。     

反义VEGF硫代寡脱氧核苷酸抑制裸鼠人肝癌移植瘤生长的研究

目的 :检测硫代修饰的反义脱氧寡核苷酸 (ASPODN)抑制人肝癌血管形成和生长的作用 ,以探讨ASPODN的临床应用前景。方法 :传代培养的肝癌细胞系HepG2 ,接种于裸鼠颈背部皮下 ,自 4 8h始局部注射ASPODN和等量的PBS ,彩色多普勒能量图 (CDE)检测移植瘤内新生血管的数目和分布 ;LSAB法免疫组化染色检测移植瘤中微血管密度 (MVD) ;FCM分析裸鼠移植瘤细胞周期动力学和凋亡率。结果 :局部注射ASPODN组和PBS对照组 ,裸鼠人肝癌移植瘤瘤重及MVD平均值分别为 ( 1.2 8±0 .2 6)g、2 6.90± 7.4 2和 ( 3.4 6± 0 .86)g、50 .36± 10 .2 7(P <0 .0 1) ;局部注射ASPODN组 ,用CDE动态检测到移植瘤内的血管数目及血流丰富程度明显低于PBS组P <0 .0 1;经ASPODN治疗后的裸鼠人肝癌移植瘤细胞凋亡率 ( 7.4 8± 1.64) %高于PBS对照组 ( 2 .75± 0 .2 2 ) % (P <0 .0 1)。结论 :VEGFAS PODN明量抑制肝癌血管形成和生长 ,有望成为理想的抗肝癌血管生成基因治疗的新药     

CIK细胞对裸鼠肝癌移植瘤生长的抑制作用

目的：观察外周血单个核细胞(PBMC)体外经IFNγ， rIL2和antiCD3McAb诱导后细胞表型的变化及CIK细胞对裸鼠肝癌移植瘤的抑制作用。方法：采用成份血采血机采集6例健康自愿者PBMC，经多因子诱导后，计数活细胞数，流式细胞仪检测细胞表型；裸鼠肩胛下接种肝癌细胞，次日起连续6 d给予不同数量的CIK细胞，观察对肝癌生长的抑制作用。结果：诱导培养后13 d，效应细胞增殖7.1倍，CD3+CD56+双阳性细胞增殖约6倍。动物实验结果表明，CIK细胞可明显抑制肝癌移植瘤的生长，且肿瘤抑制率与CIK细胞的数量呈剂量效应关系。结论：PBMC细胞体外经多因子诱导成CIK细胞，其数量及抗肿瘤活性显著增加，对肝癌细胞的生长具有明显的抑制作用。     

海带多糖对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用

  目的  通过观察海带多糖(laminaria japonica polysaccharides, LJP)在体内外对人鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)细胞的抑制作用, 探讨其可能的抗癌机制。  方法  应用MTT法检测LJP对人NPC细胞株(HONE1和CNE2)增殖的抑制作用; 运用PI加Annexin V双染法检测LJP对HONE1细胞凋亡的影响; 以人NPC细胞株HONE1建立裸鼠皮下移植瘤模型及行体内抑瘤实验, 并在透射电镜(transmission electron microscopy, TEM)下观察移植瘤细胞超微结构。  结果  MTT显示LJP对人NPC细胞(HONE1和CNE2)的增殖有抑制作用, 且具有剂量相关性, 320 mg/L的LJP作用72h的抑制率分别为58.27%(P < 0.01)和55.00%(P < 0.01);流式细胞仪检测结果显示, LJP具有诱导HONE1细胞凋亡的作用, 凋亡率随着LJP浓度的增加而增高, 320mg/L的凋亡率为(49.51±1.89)%(P < 0.01)。体内实验中, LJP中、高剂量组抑瘤率分别为33.7%(P < 0.05)和47.0%(P < 0.01), 具有明显抑制移植瘤的作用, 而低剂量组的抑瘤率仅为16.4%(P > 0.05)。TEM结果提示癌细胞呈现凋亡特征的改变。  结论  LJP具有抑制NPC细胞生长的作用, 机制可能是通过诱导癌细胞凋亡而实现的。      

Gastrin-Enhanced Tumor Growth of a Xenotransplantable Human Gastric Carcinoma in Nude Mice

A human tumor line serially transplantable in nude mice, originatingfrom a well-differentiated papillo-tubular adenocarcinoma ofthe stomach, was established. The growth of this tumor was enhancedby daily injection of C-terminal tetrapeptide gastrin into themice. Although there was little difference in histology, thegastrin-stimulated tumor had larger glandular spaces filledwith mucin-like substance than the control tumor. ³H-thymidine uptake of the gastrin stimulated tumor was higherthan that of control, as shown by microradiography and countingof radioactivity in tissue homogenates. The plasma membrane fraction of the tumor revealed positivebinding for gastrin and the cytosol fraction contained cyclicAMP dependent- and independent protein kinases. Incubation oftumor slices with gastrin caused a conformational change inthe enzymes. Therefore we conclude that this G4 tumor line xenotransplantablein nude mice is sensitive to gastrin in its trophic and secretorymechanisms.     

NK细胞对人鼻咽癌细胞CNE2裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

 目的 研究同种异体NK细胞对人鼻咽癌细胞（CNE2）裸鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法PCR-SSP法检测CNE2细胞HLA-A、B、Cw表型、NK细胞KIR表型（选择3例健康者为试验对象）,磁珠分离法分离NK细胞并进行体外培养扩增,LDH释放法测定NK细胞对CNE2细胞的体外杀伤活性。12只BALB/c裸鼠分为两组,每组6只,对照组裸鼠每只皮下接种1×106CNE2细胞,治疗组裸鼠每只皮下接种1×106CNE2细胞,同时每只经尾静脉注入3×107NK细胞,观察两组裸鼠成瘤时间、成瘤率、肿瘤体积变化、计算抑瘤率。结果 CNE2细胞表面HLA-A、B、Cw表型为A2,24;B18,35;Cw4,7,3例健康者均表达KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、KIR3DL2。效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时,NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性分别为（9.37±2.14）%、（27.14±1.82）%、（36.40±4.28）%and（54.67±2.80）%。对照组和NK细胞治疗组肿瘤出现时间分别为（10.00±2.68）d、（18.80±1.64）d,（P〈0.01）,成瘤率分别为100%（6/6）、83.33%（5/6）,对照组和NK细胞治疗组裸鼠的瘤重分别为（2.22±0.09）g、（1.42±0.09）g,（P〈0.01）,NK治疗组的抑瘤率为36.04%。肿瘤组织石蜡切片病理学鉴定为低分化鳞状上皮细胞癌,NK细胞治疗组可见角化肿瘤细胞,较多的淋巴细胞浸润和大量细胞坏死区。结论 NK细胞对鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤有明显的抑制作用,有希望成为治疗鼻咽癌的新方法。     

p27mt对裸鼠肝癌移植瘤侵袭性生长的影响

目的 研究外源性突变型p27基因(p27mt)对裸鼠皮下肝癌移植瘤侵袭性生长的影响。方法 应用细胞移植法把人原发性肝癌细胞株SMMC-7721种于BALB／c裸鼠皮下,构建人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,将PBS液(100μl)、腺病毒介导的突变型p27(Ad-p27mt, 5.0×109 pfu, 100μl)及Lac Z(Ad Lac Z, 5.0×109 pfu, 100μl)分别注射到瘤体后,每隔3天测量肿瘤体积,计算肿瘤生长抑制率。于处理后21天取材行冰冻切片,免疫组织荧光化学法观察各组移植瘤的P27蛋白、CD44v6及Ⅷ因子的表达,数码成像后,用Image-Pro Plus软件计算荧光亮度和细胞总数,测量积分吸光度（integrated optical density,IOD）,计算平均吸光度（Average optical density,AOD）,以平均吸光度来反映细胞因子表达水平。结果 与Ad-Lac-Z、空白对照组比较,Ad-p27组移植瘤P27mt蛋白表达明显增高（P<0.01),并且过表达的P27mt蛋白明显减小了移植瘤体积,抑制了肿瘤的生长速度;血管大体观发现Ad-p27组血管不仅细而且分支少,Ⅷ因子免疫组织荧光化学观察发现瘤体内血管密度明显降低;同时Ad-p27组也明显降低了肿瘤细胞CD44v6 （P<0.05)。结论 Ad-p27mt能在裸鼠SMMC-7721肝癌皮下移植瘤过表达P27mt蛋白,不仅通过抑制血管的生成而抑制肿瘤的生长,而且通过降低肿瘤细胞CD44v6的表达而显著抑制移植瘤的侵袭性。     

人肝癌组织裸鼠原位种植模型体内筛选化疗药物可行性研究

目的利用人肝癌组织裸鼠原位种植模型筛选针对供瘤患者敏感的化疗药物。方法荷瘤鼠随机分为对照组和表阿霉素(E-ADM)、5氟脲嘧啶(5-Fu)、丝裂霉素(MMC)3个治疗组,每周腹腔化疗1次,共4周次。化疗期间B超观测其移植瘤大小,选择敏感的化疗药物试用于供瘤患者。结果对照组移植瘤随时间的推移,肿瘤体积逐渐变大,而3个化疗组肿瘤体积均在化疗过程中逐渐减小,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0·05)。应用MMC和5-Fu对供瘤患者化疗1个疗程,患者疼痛缓解,SPECT示个别转移灶消失,多个转移灶缩小。结论荷瘤鼠敏感的化疗药物同样也对供瘤患者敏感,提示该模型能较好筛选具有针对性的化疗敏感药物。     

突变型flk-1基因转染抑制肝癌在裸鼠体内血管形成、生长和转移

为了研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体(flk-1)系统在人肝癌血管形成、生长和转移过程中的作用,探讨预测和防治肝癌转移和复发的新途径,我们采用了仅表达flk-1蛋白的膜外和跨膜部分的突变型基因片段,与逆转录病毒载体pLXSN构建重组体,经过病毒包装,体内原位转染荷人肝癌转移瘤株LCI D-20裸鼠.结果显示,在被突变型flk-1转染的皮下肿瘤生长缓慢,21天时的平均体积为102.2mm~3,对照组为1374.5mm~3,两组相比P<0.01;肿瘤组织中新生血管极少,团状排列的肿瘤细胞被大量的纤维组织包裹,对照组新生血管丰富.细胞增殖活跃;肝内接种肿瘤转染后肺转移灶亦明显少于对照组,P<0.05.结果提示,VEGF/flk-1系统在肝癌血管形成、生长和转移过程中发挥重要作用,是预测和防治肝癌转移和复发较为理想的靶分子.     

蜂毒素对人肝癌裸鼠移植瘤的抗血管生成作用

目的探讨蜂毒素对人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响及其抗血管生成作用。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察蜂毒素对肿瘤生长的影响。采用免疫组织化学法,检测肿瘤组织微血管密度（microvessel density,MVD）及碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）、缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）和核转录因子κB（nuclear factorκB,NF-κB）的水平。结果蜂毒素低、中、高剂量组相对肿瘤增殖率分别为48.78%、38.33%和33.82%。与生理盐水组比较,蜂毒素处理组肿瘤体积明显缩小（P〈0.01）。免疫组化结果显示,蜂毒素可降低肿瘤组织MVD,且蜂毒素处理组bFGF、HIF-1α和NF-κB蛋白水平明显低于生理盐水组（P〈0.01）。结论蜂毒素可抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,其作用机制可能是降低NF-κB活性,抑制HIF-1α转录,进而下调bFGF表达,最终阻碍肝癌血管生成。     

5-杂氮-2'-脱氧胞苷抑制人喉癌裸鼠移植瘤的机制探讨

目的:探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷对Hep-2人喉癌裸鼠移植瘤生长的影响,寻找喉癌治疗的新靶点.方法:建立喉癌裸鼠移植瘤模型,用5-杂氮-2'-脱氧胞苷处理裸鼠,观察移植瘤的生长情况并绘制其生长曲线.用RT-PCR和免疫组织化学技术检测死亡相关蛋白激酶(Death-associated protein kinase DAPK)基因mRNA及蛋白表达的变化.结果:5-杂氮-2'-脱氧胞苷对人喉癌裸鼠移植瘤处理后用药组和对照组之间裸鼠的体重无明显差异(t=0.011,P＞0.05),而移植瘤的体积用药组较对照组明显减小,统计学差异有显著性(t=10.11,P＞0.01).在喉癌移植瘤组织中,对照组DAPK均不表达,而用药组出现表达.结论:5-杂氮-2'-脱氧胞苷在体内能使因甲基化而失活的抑癌基因再转录,诱导其表达,进而抑制喉癌移植瘤的生长.