特异性核酶对肝星状细胞细胞周期蛋白D1基因表达及激活的影响

目的研究抗细胞周期蛋白D1核酶对大鼠肝星状细胞(HSC)细胞周期蛋白D1基因表达及激活的影响。方法构建抗细胞周期蛋白D1核酶的真核表达载体,将其转染入HSC-T6细胞,同时以空白及转染pLXSN作为对照,用G418筛选出阳性细胞克隆;分别用RT-PCR和Western印迹法检测细胞周期蛋白D1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果转染核酶832的HSC细胞周期蛋白D1 mRNA和蛋白表达均受到明显抑制,分别为对照组的42．22％(P<0．01)和58．29％(P<0．01),同时α-SMA mRNA和蛋白表达与对照组相比也显著下降(P值均<0．01)。结论载体表达的特异性核酶能有效地抑制HSC的细胞周期蛋白D1的表达和激活。     

肾母细胞瘤过度表达基因对大鼠肝星状细胞生物学行为的影响

目的:构建能表达靶向肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)的小干扰RNA(siRNA)的重组质粒,研究NOV对大鼠肝星状细胞(HSC)活化、增殖、凋亡、分泌细胞外基质(ECM)的影响方法:以NOV为目的基因,以质粒psiRNA- hHlneo为载体,构建能在真核细胞中表达的靶向NOV的siRNA的重组质粒psiRNA (psiRNA1,2,3)和阴性对照重组质粒pconsiRNA.限制性酶切和测序鉴定构建成功后,脂质体介导重组质粒转染HSC,依据转染质粒的不同将HSC分为psiRNA1组、psiRNA2组、psiRNA3组、阴性对照pconsiRNA组,并以未转染重组质粒的HSC为空白对照组.半定量RT-PCR检测HSC的NOV、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达情况,Western blot检测α-SMA蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡.结果:限制性酶切和测序鉴定表明成功构建了NOVsiRNA表达质粒:与阴性对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC内NOV、α-SMA的mRNA表达水平下降(73.0% vs 23.2%,51.4% vs 15.1%,均P<0.05),Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达水平明显下降(59.8% vs 17.0%,37.1% vs 6.6%,P<0.05),α-SMA蛋白表达水平下降.与空白对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC内HSC增殖活性显著降低(24 h:0.172±0.005 vs 0.318±0.018.P<0.05:48 h:0.296±0.004 vs 0.472±0.029,P<0.05:72 h:0.432±0.024 vs 0.672±0.050,P<0.05).psiRNA1组、psiRNA3组的HSC内NOV mRNA、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达及HSC增殖活性均无明显下降(均P>0.05).结论:NOV可促进HSC增殖、活化及分泌细胞外基质,提示NOV可以作为肝纤维化基因治疗的一个新的靶位点.     

大麻素受体2介导的N-花生四烯酸氨基乙醇对肝星状细胞增殖和活化的影响

目的 观察内源性大麻素N-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)及大麻素受体(CBR)2对肝星状细胞(HSC)增殖活化的影响,以探讨内源性大麻素及其受体系统在肝纤维化发展中的作用.方法 采用免疫荧光观察血小板衍生生长因子(PDGF)刺激前后HSC中CBR1和CBR2的表达.Western blot、PCR法观察不同浓度AEA及CBR2拮抗剂AM630对PDGF刺激下HSC增殖及活化的影响,同时用四甲基偶氮唑盐、流式细胞仪分析AEA对HSC活力及凋亡的影响.结果 HSC中CBR2的表达较CBR1高(F=116.797,P<0.01),且PDGF刺激后CBR2的表达明显增强(F=7.878,P<0.05).AEA可剂量依赖地抑制HSC的增殖,在浓度为10,20、50μmol/L时抑制率分别为7.12%±0.34%、12.52%±0.78%、80.13%±1.57%,差异有统计学意义(F=533.41,P<0.01);但对HSC凋亡的影响不明显.同时AEA可抑制HSC的活化指标α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及基质金属蛋白酶抑制因子等的表达,但这种抑制作用在给予CBR2拮抗剂AM630后明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CBR2在AEA引起的HSC增殖及活化抑制中起关键作用,AEA和CBR2可望成为肝纤维治疗的新靶点.     

C/EBPα基因在大鼠肝星状细胞内的表达及意义

目的 初步探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C／EBPα)在肝星状细胞(HSC)激活过程中的作用。方法 采用免疫细胞化学、western blot及RT-PCR检测原代培养不同时间段HSC内C／EBPd蛋白和mRNA的表达，以及α平滑肌肌动蛋白(α SMA)、结蛋白、基质金属蛋白酶-2(MMP2)mRNA、Ⅰ型前胶原(α1)mRNA的表达；Lipofect AMINE2000介导的瞬时转染方法将pcDNA3．1(-)-C／EBPα真核表达质粒转染入激活的HSC内，采用免疫细胞化学方法鉴定转染成功及转染后HSC内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达；在相差显做镜下观察HSC在原代培养过程中形态的改变。结果 原代正常HSC中可以检测到C／FBPα mRNA和蛋白的表达，蛋白位于细胞质和细胞核内，但主要位于细胞质内，且除新鲜分离(0d)组以外，随着HSC培养至2、4、7、10d，C／EBPα蛋白和mRNA的表达呈逐步下降的趋势，而α-SMA、MMP2和Ⅰ型前胶原(α1)的表达则逐步增强；转染后24h，目的基因转染组HSC内C／EBPα的表达明显强于空载体对照组，而PCNA的阳性细胞数较空载体对照组明显减少；转染后36h，目的基因转染组细胞几乎全部死亡，残存的细胞形态变细，体积缩小，而空载体对照组细胞仍存括。结论 C／EBPα基因可能参与HSC的激活调控机制，且C／EBPα过表达对HSC的增殖存在抑制作用。     

抗转化生长因子β1核酶在胞外和肝星状细胞内对靶RNA的切割作用

目的研究抗转化生长因子B1锤头状核酶的胞外切割作用以及在肝星状细胞内的活性。方法运用计算机设计针对转化生长因子B1的锤头状核酶，制备核酶、失活核酶和靶RNA胞外转录物，进行核酶的胞外切割反应；构建编码核酶、失活核酶的真核表达载体，并转染入活化型肝星状细胞株内，分析核酶和TGFβ1的表达。结果该核酶在胞外具有良好特异的切割活性，在转染的肝星状细胞内高效表达且有效下调TGFβ1的表达；而失活核酶在胞外不具有切割活性，在胞内对TGFβ1表达的抑制作用轻微。结论此核酶在胞外具有特异切割活性，在肝星状细胞内抑制TGFβ1的表达，有望为肝纤维化的治疗提供新的手段。     

肝纤维化的治疗

当肝受到损伤时,炎症细胞和肝窦Kupffer细胞释放出活化因子激活肝星状细胞(hepatic stellatecell,HSC),使HSC转化为表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的肌成纤维细胞(myofibroblast),并且产生大量Ⅰ型胶原。活化的HSC胞膜上血小板衍生的生长因子(platelet-de-rived growth factor,PDGF)、转化生长因子(trans-forming growth factor-β1,TGF-β1)等增生性细胞因     

反义转化生长因子βⅠ型受体表达质粒对大鼠肝星状细胞功能的影响

目的　观察反义转化生长因子 (TGF) βⅠ型受体 (TβRⅠ )表达质粒对大鼠肝星状细胞 (HSC)增殖及细胞外基质分泌的影响。方法　双酶灌注和梯度离心法分离大鼠HSC ,将构建的反义TβRⅠ真核细胞表达质粒与 pcDNA3空质粒经脂质体转染培养活化的HSC ,通过RT PCR、Western印迹检测外源导入质粒在HSC中的表达 ,采用MTT法、3 H TdR掺入法检测细胞增殖情况 ,ELISA法检测TGF β1含量变化 ,并应用Western印迹检测HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达。结果　反义TβRⅠ真核细胞表达质粒可抑制活化HSC中TβRⅠmRNA及蛋白表达。与 pcDNA3转染组相比 ,反义TβRⅠ质粒表达可抑制HSC增殖 (P <0 .0 1) ,降低TGF β1含量 (P <0 .0 5 ) ,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌 (P <0 .0 5 )。结论　重组反义TβRⅠ表达质粒可在HSC中获得较好表达 ,并可显著抑制HSC增殖及细胞外基质分泌。     

1α,25-二羟维生素D3通过上调MiR-146a表达抑制肝星状细胞活化

背景:1α,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]是维生素D在体内的最终活性形式,研究显示其具有一定的抗肝纤维化作用,但具体作用机制尚未完全明确。研究发现有多个微RNAs(miRNAs)参与了肝星状细胞(HSC)的增殖、活化,可促进或抑制肝纤维化发生、发展。目的:探讨1,25(OH)2D3是否可通过调控miRNAs表达而抑制HSC活化。方法:通过文献检索和q PCR技术筛选在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导激活的HSC与未活化HSC之间明显差异表达的miRNAs。分别以差异表达miRNA mimic、阴性对照mimic、1,25(OH)2D3和DMSO与TGF-β1共同干预HSC,采用CCK-8实验和流式细胞术检测细胞活力和细胞凋亡情况。结果:筛选显示miR-146a在活化HSC中的表达显著下调(P0.05)。与DMSO对照组相比,1,25(OH)2D3治疗组HSC中的miR-146a表达和细胞凋亡率显著增高,细胞存活率显著降低(P均0.05)。MiR-146a mimic转染组与阴性对照mimic转染组相比亦表现为miR-146a表达和细胞凋亡率显著增高,细胞存活率显著降低(P均0.05)。结论:1,25(OH)2D3调控miR-146a表达可能是其抑制TGF-β1诱导的HSC活化、促进细胞凋亡的重要机制之一。     

β-神经生长因子基因转染对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的研究β-神经生长因子(β-NGF)基因转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对细胞增殖、单克隆形成、细胞周期、细胞凋亡、细胞迁移相关功能的影响。方法将人源β-NGF基因重组的真核表达质粒(p EGFP-N1/β-NGF)转染至HUVEC,同时设置p EGFP-N1空载组、正常组(未转染质粒)、酪氨酸激酶受体A(Trk A)抑制剂组(β-NGF基因转染组加入1∶1000的K252a)。观察转染前后细胞形态学变化,利用real-time PCR和Western blot检测β-NGF基因转染表达效果,MTT法检测β-NGF基因转染对细胞增殖的影响,平板单克隆实验检测β-NGF基因转染对细胞单克隆形成能力的变化,流式细胞术检测β-NGF基因转染对细胞周期和细胞凋亡率的影响,Transwell方法检测转染前后细胞迁移能力的变化,Western blot检测β-NGF基因转染前后Trk A和血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化。结果β-NGF基因成功转染HUVEC 48 h后能够显著提高β-NGF mRNA和蛋白的表达水平(P0.05),同时促进细胞增殖、单克隆形成、细胞迁移能力,并影响细胞周期抑制细胞凋亡率(P0.05)。β-NGF基因转染HUVEC后Trk A和VEGF表达水平也随之显著上升(P0.05),但受到Trk A抑制剂的抑制。结论β-NGF基因能够成功转染HUVEC并显著表达,进而促进细胞增殖、单克隆形成、细胞迁移能力,并影响细胞周期抑制细胞凋亡率,而其发挥作用与Trk A结合诱导VEGF表达上调有关。     

α-亚麻酸对转化生长因子β1诱导的肝星状细胞的影响

目的:探讨α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)对转化生长因子1(transforming growth factor-β,TGF-β1)诱导的肝星状细胞(hepatic satellite cell,HSC)增殖及分泌功能的影响.方法:采用活化的HSC作为研究模型,将传代的细胞分为5组,以MTT比色法观察ALA对HSC的增殖效应,以ELASA检测细胞培养上清液中Ⅰ型及Ⅲ型胶原的含量,以Westernblot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达.结果:TGF-β1能诱导HSC增殖并促进胶原的分泌,ALA可不同程度抑制TGF-β1所诱导的HSC增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-SMA的表达(P<0.01),且呈剂量依赖性(P<0.05).结论:ALA在高浓度时对TGF-β1能诱导的HSC起抑制作用,可能对脂肪性肝纤维化及其引起的肝硬化有治疗作用.     

阻断Wnt-β-catenin信号通路对肝星状细胞活化的影响

目的探讨活化的肝星状细胞（HSC）内是否存在功能性的Wnt-β-catenin信号通路的激活，以及阻断该信号通路对HSC活化的影响。方法免疫细胞化学染色检测β-catenin在HSC-T6细胞内的表达。通过转染T细胞因子（T-cellfactor，TCF）依赖的荧光素酶报告质粒（pTOPFI。ASH）测定HSC—T6细胞内的Wnt-β-catenin信号。将TCF的显性负性突变体dnTCF表达质粒转染HSC-T6阻断Wnt-β-catenin信号的转导，用Western印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原表达变化。结果HSC-T6细胞核内有β-catenin的表达；转染pTOPFLASH的细胞荧光素酶活性显著高于转染pFOPFLASH的对照组（P〈0．01）；与转染空质粒的对照组相比，转染dnTCF的HSC-T6细胞α-SMA及Ⅰ型胶原表达分别下降52．9％和37．5％（P〈0．05）。结论活化的HSC中存在Wnt-β-catenin信号通路的激活，阻断该信号通路可抑制活化HSC的功能。     

siRNA沉默β-Catenin对肝星状细胞工、Ⅲ型胶原表达的影响

目的 研究siRNA干扰β-Catenin表达、阻断Wnt/β-Catenin信号通路对肝星状细胞(HSC)Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法 将化学合成siRNA β-Catenin以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照,抽提细胞总RNA及蛋白质,收集培养上清液,应用反转录-聚合酶链反应和Western blot法检测细胞β-Catenin表达;Western blot法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达情况;细胞免疫荧光法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达与定位;酶联免疫吸附法检测培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量.结果 转染siRNA的HSC-T6细胞β-Catenin基因及蛋白表达水平明显下调,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达显著下调,免疫细胞化学提示转染siRNA β-Catenin后的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达均较对照组明显减弱;48 h和72 h时培养上清液中Ⅰ型胶原表达水平显著减少,分别比阴性对照下降(23.68±7.96)％和(38.42±6.58)％(F= 18.26,P＜0.01;F= 26.38,P＜0.01),Ⅲ型胶原含量于72 h时降低(39.68±4.92)％ (F= 37.68,P＜0.0t).结论 siRNAβ-Catenin能高效抑制HSC-T6细胞β-Catenin表达,阻断Wnt/β-Catenin信号通路,从而抑制HSC-T6细胞增殖,显著减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌,具有预防及治疗肝纤维化的潜力.     

柔肝冲剂对大鼠肝星状细胞表达转化生长因子β1和胶原的影响

[目的]观察柔肝冲剂对大鼠肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGF-β1)和胶原的影响.[方法]采用血清药理学方法处理HSC,以貂肺上皮细胞(Mv1Lu)生长抑制MTT法检测培养上清液中TGF-β1活性,免疫细胞化学染色检测HSC TGF-β1和胶原的表达.[结果]经柔肝冲剂处理的HSC培养上清液中TGF-β1的生物活性和细胞内TGF-β1的表达受到显著抑制,其中对纤维肝HSC的作用更明显,抑制作用优于秋水仙碱.柔肝冲剂能显著抑制纤维肝HSC表达胶原,对Ⅳ型和Ⅰ型胶原具有较高的抑制率.[结论]柔肝冲剂能抑制HSC产生TGF-β1和胶原,阻断肝纤维化时HSC合成胶原等细胞外基质的自分泌放大过程.     

扶正化瘀胶囊对肝星状细胞激活的干预

目的：观察扶正化瘀胶囊(319方)对肝星状细胞(HSC)激活的抑制作用。方法：①制备319方含药血清，温育原代HSC，并以正常血清为对照，观察HSC的增殖与I型胶原分泌。②用含药血清分别添加于损伤肝枯否细胞与传代HSC中培养，制备含药血清作用过的损伤肝枯否细胞条件培养液与传代HSC条件培养液，并以添加正常血清的条件培养液作为对照，温育HSC，观察HSC的增殖与I型胶原分泌。③测定枯否细胞条件培养液中转化生长因子-β(TGF-β)、血小板衍生生长因子(PDGF)、表皮生长因子(VEGF)及传代HSC条件培养液中VEGF。结果：①含药血清能明显抑制原代HSC的增殖与I型胶原分泌。②损伤肝枯否细胞与传代HSC可明显促进原代HSC的增殖与I型胶原分泌。含药血清可抑制这一促进作用。③损伤肝枯否细胞FGF-β、PDGF、VEGF与传代HSC中VEGF分泌明显增加，含药血清可抑制损伤枯否氏细胞TGF-β、PDGF及传代HSC中VEGF的分泌。结论：319方不仅可直接抑制HSC的增殖与I型胶原的分泌，并可抑制TGF-β1、PDGF、VEGF等细胞因子，抑制HSC激活的旁分泌与自分泌途径，这一作用可能是该药抗肝纤维化的机制之一。     

MiR-125b对心肌梗死后成纤维细胞的调控机制研究

目的探讨微小核糖核酸125b(miR-125b)对成人心脏成纤维细胞(HCF-a)合成胶原、增殖、活化、迁移、凋亡的调控作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)通路的影响。方法体外培养HCF-a细胞,分为空白对照组和miR-125b模拟物转染组。采用RT-PCR和Western blot法检测胶原-Ⅰ、胶原Ⅲ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3基因和蛋白表达情况;采用MTT法检测HCF-a细胞增殖情况;采用Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与空白对照组相比,miR-125b过表达可明显上调Col-Ⅰ和Col-Ⅲ、α-SMA m RNA和蛋白的表达,促进细胞增殖、迁移和凋亡(P0.05)。另外,经RT-PCR检测,与空白对照组比较,miR-125b过表达可明显促进TGF-β1 m RNA的表达水平(P0.05);经Western blot检测,与空白对照组比较,miR-125b过表达对HCF-a细胞Smad2/Smad3蛋白磷酸化水平均有明显上调作用(P0.05)。结论Mi R-125b可以通过调控TGF-β1/Smad通路参与心肌纤维化进程。     

大鼠Smad7真核表达质粒的构建及在肝星状细胞中的表达

目的:构建并鉴定大鼠Smad7真核表达质粒,观察外源Smad7对肝星状细胞HSC-T6的转染.并进一步研究其对TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA达水平的影响.方法:采用基因重组技术将Smad7 cDNA插入真核表达载体pcDNA3.1( ),构建大鼠Smad7真核表达质粒.脂质体介导转染HSC-T6细胞,分为正常对照组、空质粒组及转染组,G418筛选,挑取阳性细胞,运用Western blot检测Smad7蛋白表达情况,RT-PCR检测Smad7、TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平.结果:酶切和测序结果证实Smad7真核表达质粒构建成功.Smad7转染组与正常对照、空质粒组比较,Smad7 mRNA表达显著增加(1.053±0.009 VS 0.984±0.054,0.986±0.044,P<0.01或0.05),蛋白水平显著上调(0.083±0.02 VS0.058±0.050,0.056±0.064,均p<0.05:Smad7转染组TGF-β1、Ⅰ型胶原mRNA表达降低(0.961±0.013 VS 1.039±0.013,1.032±0.037;0.592±0.096 VS 0.767±0.085.0.770±0.090,均P<0.01);Ⅲ型胶原mRNA表达差异无统计学意义.正常对照、空质粒组Smad7 mRNA和蛋白水平、TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNAA达差异无统计学意义.结论:smad7可能参与TGF-β/smad信号转导,在一定程度上具有抗纤维化的生物学活性.     

去甲肾上腺素对大鼠肝星状细胞作用的实验研究

目的 探讨交感神经系统在肝纤维化发生和发展中的作用. 方法采用免疫荧光和RT-PCR检测体外培养的肝星状细胞(HSC)中α1、β2-肾上腺素能受体的表达;用四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度的去甲肾上腺素(NE)对HSC增殖活性的影响.同时用RT-PCR检测受NE作用后HSC的活化指标胶原蛋白-1、转化生长因子β(TGF β)及α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的表达.用高效液相色谱-电化学法测定活化的HSC中交感神经递质NE的水平. 结果α1和β2-肾上腺素能受体表达于HSC的胞膜和胞质内;NE可呈剂量依赖性地促进HSC增殖,在浓度为100μmol/L时达到最大效应,F=140.464,P<0.05,差异有统计学意义.以NE 100 μmol/L作用细胞24h后,可显著促进反应HSC活化的指标上升,胶原蛋白-1表达为0.3022±0.0610,TGF β表达为2.2080±0.2151,α-SMA mRNA表达为0.5469±0.0108,与对照组胶原蛋白-1(0.1040±0.0556)、TGF β(1.1190±0.0070)、α-SMA mRNA表达(0.0759±0.0449)比较,t值分别为-4.160、-8.763和-17.651,P值均<0.05,差异均有统计学意义.HSC可以合成并释放NE,且受血小板衍生生长因子(10ng/ml)刺激后HSC中NE含量为(14.24±0.21)ng/ml,对照组为(11.34±0.15)ng/ml,两组比较,t=-32.907,P<0.05,差异有统计意义.结论 抑制交感神经系统使HSC活性降低对临床上治疗肝纤维化有一定的指导意义.     

腺病毒介导的IL-10基因转染肝星状细胞对TNFα诱导其细胞凋亡及caspase-3表达的影响

目的研究腺病毒介导的IL-10基因(Ad-IL-10)转染肝星状细胞(HSC)对TNFα诱导的细胞凋亡及caspase-3表达的影响,探讨IL-10在HSC凋亡中的作用。方法体外以293细胞包装构建重组腺病毒载体系统Ad5-hIL10-IRES-EGFP。将体外培养的人HSC分为5组:空白对照组、空载组、TNFα(10 ng/mL)组、空载组+TNFα(10 ng/mL)组、Ad-IL-10+TNFα(10 ng/mL)组。荧光显微镜观察IL-10表达量;RT-PCR法测定IL-10 mRNA表达水平;TUNEL法测定HSC细胞的凋亡率;Western blot测定HSC细胞IL-10、caspase-3蛋白水平。结果成功构建Ad5-hIL10-IRES-EGFP;RT-PCR和Western blot检测显示Ad-IL-10转染3 d后HSC表达IL-10 mRNA和蛋白含量均增加,且随MOI增大而表达增强;TUNEL染色显示,TNFα诱导使HSC凋亡率显著增加,Ad-IL-10干预可使HSC凋亡率下降;Western blot检测显示,TNFα诱导后caspase-3蛋白水平显著增加,而Ad-IL-10干预可使caspase-3蛋白水平下降。结论 IL-10能抑制TNFα诱导HSC细胞发生凋亡,其信号途径涉及caspase-3。     

整合素连接激酶在重组结缔组织生长因子诱导大鼠肝星状细胞表型转化中的作用

目的研究整合素连接激酶(ILK)在重组结缔组织生长因子(rCTGF)诱导大鼠原代肝星状细胞(HSC)表型转化中的作用。方法应用胶原酶原位灌注+密度梯度离心法分离SD大鼠原代HSC,细胞贴壁培养24 h后以rCTGF处理,24 h后转染ILK小干扰RNA(siRNA)或对照siRNA,设rCTGF对照及空白对照。应用RT-PCR及Western Blot检测转染siRNA 24、48及72 h时HSCα平滑肌肌动蛋白(αSMA)、ILK及I型胶原基因表达水平变化。计量资料采用t检验。结果与空白对照相比,rCTGF处理可显著上调大鼠HSCαSMA、ILK蛋白及I型胶原mRNA表达。转染ILK siRNA可特异性抑制rCTGF诱导的ILK表达上调,与rCTGF对照相比,转染ILK siRNA 24、48及72 h时,HSC ILK蛋白表达分别下调72%±6%(t=21.39,P0.01)、87%±9%(t=68.25,P0.01)及47%±3%(t=18.25,P=0.003);αSMA蛋白及I型胶原mRNA表达分别下调5%±1%(t=2.52,P0.05)及6%±3%(t=1.63,P0.05)、31%±7%(t=34.77,P0.01)及20±5%(t=6.71,P0.05)和67%±8%(t=58.82,P0.01)及43%±6%(t=15.21,P0.01);转染对照siRNA时,HSC ILK、αSMA及I型胶原mRNA表达在相同时点无显著变化。结论 ILK可能部分介导了rCTGF诱导的大鼠HSC表型转化。