质粒DNA对大鼠骨骼肌肌质网Ca2+-ATPase活性及ryanodine受体结合反应的影响

目的：观察质粒ＤＮＡ 对离体大鼠骨骼肌肌质网Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ 活性及ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 受体结合反应的影响。方法：参照Ｊｏｎｅｓ 等的方法比色测定肌质网Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ 活性;以３Ｈｒｙａｎｏｄｉｎｅ 作为配基,液闪测定肌质网Ｃａ２＋ 释放通道ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 受体与配体的结合。质粒ＤＮＡ 处理组预先将肌质网蛋白与质粒ＤＮＡ３７ ℃共同孵育３０ ｍｉｎ ,而后再测定肌质网Ｃａ２ ＋ＡＴＰａｓｅ 活性和ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 结合反应。结果：预先用１０、２０ 和３０ μｇ ｐｃＤＮＡ３ 及ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ处理后,肌质网Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ 活性分别较对照组升高４５％ （Ｐ＜ ０．０５） ,６８ ％（ Ｐ＜ ０．０１） 和１０９ ％ （ Ｐ＜ ０．０１） 及１０９ ％ ,１１８％ 和１４５％ （Ｐ值均小于０ ．０１） ;质粒ｐｃＤＮＡ３ 可明显降低ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 受体的亲和力,并使Ｂｍａｘ 增强。结论：质粒ＤＮＡ可能通过增强肌质网Ｃａ２ ＋ＡＴＰａｓｅ 的活性促进肌质网对Ｃａ２ ＋ 的摄入,通过影响ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 受体而调控肌质网Ｃａ２ ＋ 释放。     

质粒DNA对大鼠骨骼肌肌质网Ca^2＋转运的影响

目的：观察ＤＮＡ与骨骼肌肌质网蛋白结合后对肌质网功能的影响。方法：应用差速离心分离大鼠骨骼肌肌质网,并用＾４５ＣａＣｌ２作为示踪剂,观察质粒ＤＮＡ ｐｃＤＮＡ３和ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ对肌质网钙转运功能的影响。结果：两种质粒均可明显增加肌质网Ｃａ＾２＋摄取,呈明显的量效关系,并且也促进肌质网钙释放。结论：外源质粒ＤＮＡ可影响肌质网钙转运功能。     

质粒DNA对大鼠骨骼肌肌质网Ca^2＋—ATPase活怀及ryanodine受 …

目的：观察质粒ＤＮＡ对离体大鼠骨骼肌肌质网Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ活性及ｒｙａｎｏｄｉｎｅ受体结合反应的影响。方法：参照Ｊｏｎｅｓ等的方法比色测定肌质网Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ活性;以＾３Ｈ－ｒｙａｎｏｄｉｎｅ作为配基,液闪测定肌质网Ｃａ＾２＋释放通道ｒｙａｎｏｄｉｎｅ受体与配合的结合,质粒ＤＮＡ处理组预先将肌质网蛋白与质粒ＤＮＡ３７℃共同孵育３０ｍｉｎ,而后再测定肌质网ＣＡ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ活     

大鼠骨骼肌肌质网序列非依赖性的DNA结合蛋白

目的：观察大鼠骨骼肌肌质网上是否存在非核ＤＮＡ结合蛋白。方法：应用差速离心及蔗糖密度梯度离心法分离大鼠骨骼肌肌质网膜蛋白,用３２Ｐ标记的ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印记杂交。结果：在大鼠骨骼肌肌质网膜中存在两种ＤＮＡ结合蛋白,相对分子质量分别是８３０００、５８０００,这２种蛋白质可与不同的线状双链ＤＮＡ,环状ＤＮＡ及单链ＤＮＡ结合。结论：大鼠骨骼肌肌质网膜中存在两种序列非依赖性ＤＮＡ结合蛋白     

大鼠骨骼肌肌质网序列非依赖性的DNA结合蛋白

目的 观察大鼠骨骼肌多上是否存在的非核ＤＮＡ结合蛋白。方法 应用差速离心及蔗糖密度梯度离心法分离大鼠骨骼肌肌质网膜蛋白,用＾３２Ｐ－标记的ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印记杂交。结果 在大鼠骨骼肌肌质网膜中存在的两种ＤＮＡ结合蛋白,相对分子质量分别是８３０００,５８０００,这２种蛋白质要与不同的线状双链ＤＮＡ,环状ＤＮＡ及单链ＤＮＡ结合,结论 大鼠骨骼肌肌质网膜中存在两种序列非依赖性ＤＮＡ结合     

败血症大鼠肝细胞核Ca2+摄取释放功能的改变

目的:观察败血症时肝细胞核Ca2+摄取及释放功能的改变。方法:通过结扎并穿刺盲肠制作大鼠败血症模型,差速离心制备细胞核,进行45Ca2+摄取和释放测定。结果:败血症早期组当介质中游离[Ca2+]为200、400、1000nmol·L-1时,核Ca2+摄取比对照组分别增加35%、95%、160%(P<0.01)。晚期组分别只有对照的87%～88%(P<0.05)。在10μmol·L-1三磷酸肌醇作用下,早期组1min内释出其摄入量的76%,而晚期组仅为52%,与对照组的63%差异有显著性(P<0.01)。结论:败血症时核钙摄取和释放功能呈早期增加,晚期减弱的双向变化。     

人钙调磷酸酶-B真核表达质粒的构建

目的 为研究钙振荡现象,构建人钙调磷酸酶-B(CNB)基因的真核表达质粒.方法 采用RT-PCR技术,从MCF-7细胞中扩增出人CNB基因序列;利用分子克隆技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.0中,并进行酶切鉴定和DNA测序.结果 琼脂糖凝胶电泳分析显示RT-PCR产物为预期分子量大小,酶切鉴定图谱正确,DNA测序结果经核实完全符合.结论 成功构建人CNB基因的真核表达质粒,为进一步研究钙振荡现象打下了基础.     

乌贼墨对H22癌细胞内Ca2+浓度、细胞核Ca2+/Mg2+-ATP酶活性及c-fos表达的影响

目的:研究乌贼墨对H22癌细胞内Ca2+浓度、细胞核Ca2+/Mg2+-ATP酶活性及c-fos表达的影响.方法:利用Fura-2/AM荧光探针和免疫组织化学方法,测定乌贼墨对H22癌细胞内Ca2+浓度、细胞核Ca2+/Mg2+-ATP酶活性及c-fos表达的变化.结果:乌贼墨使H22癌细胞内Ca2+浓度降低了69%和79%,细胞核Ca2+/Mg2+-ATP酶活性降低了21%和37%,c-fos表达明显减少.结论:乌贼墨可能通过降低细胞内Ca2+浓度,影响细胞核上Ca2+依赖性Ca2+/Mg2+-ATP酶活性,减少了Ca2+向细胞核内的转运,减弱了Ca2+对c-fos表达的促进作用,抑制了细胞的分裂增殖.     

红景天皂苷对雌性大鼠蛋白质和脂肪代谢的影响

目的 :探讨红景天皂苷对蛋白质及脂肪代谢的影响。方法 :用高脂肪饲料和基础饲料喂养Wistar大鼠 ,测定蛋白质消化率、生物价、脂肪消化率和血脂。结果 :红景天皂苷能够降低实验动物对蛋白质和脂肪的消化吸收率、蛋白质生物价以及高脂膳食动物的血脂。结论 :红景天皂苷不仅可以影响蛋白质体内代谢过程还影响高脂膳食动物脂代谢     

阿霉素对实验兔心肌细胞内游离钙和肌浆网Ca2+-ATP酶活性的影响

目的：探讨治疗剂量阿霉素（ADR）对心脏血流动力学及心肌肌浆网Ca^2 －ATP酶活性的影响。方法：实验兔每周静脉注射ADR（2mg/kg）1次，共8周，以健康同龄兔静脉注射等量生理盐水为对照组。这药3周后多普勒测定降主动脉血流量，以代表心输出量（CO），左颈总动脉和左心室插管测定血压（BP），平均动脉压（MAP），左心室收缩压（LVSP），左心室舒张末压（LVEDP）。应用荧光分光光度计测定心肌细胞内游离钙（MyoCa^2 ）浓度，无机磷酸根法测定心肌肌浆网（SR）Ca^2 －ATP酶活性。结果：阿霉素组CO、BP、MAP、LVSP均较对照组低，而VEDP则明显增高。阿霉素组使MyoCa^2 浓度显著增高，同时SR Ca^2 -ATP酶活性明显低于对照组。结论：治疗剂量阿霉素可使心脏功能下降，心肌细胞内钙超载及SR Ca^2 －ATP酶活性降低。     

甲亢性心肌病中肾素-血管紧张素系统和肌浆网钙泵的变化

目的:探讨甲亢性心肌病的发病机制.方法:建立甲亢性心肌病模型,观察心肌肥厚指数、心肌细胞直径、心肌胶原容积分数、心肌羟脯氨酸含量、超微结构改变、肌浆网钙泵(myocardial sarco/endoplasmic Ca2+-ATPase,SERCA)活力及心肌血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin Ⅱreceptor type 1,AT1)mRNA表达的变化,以氯沙坦和福辛普利阻断肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)的不同部位,观察RAS在甲亢性心肌病模型中的作用.结果:L-甲状腺激素腹腔给药二周可致左右心室肌明显肥厚,胶原组织增生,肌浆网钙泵活力下降,AT1受体上调,氯沙坦和福辛普利可防止甲状腺素诱导的心肌肥厚形成.结论:RAS和SERCA在甲亢性心肌病的发生中起重要作用.     

8-甲氧沙林对黑素细胞内游离钙浓度及细胞骨架蛋白形成的影响

目的:观察8-甲氧沙林对体外培养黑素细胞内游离钙浓度、细胞骨架蛋白形成的影响.方法:正常人黑素细胞取自包皮环切术切取的包皮,用激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内游离钙浓度,用罗丹明结合毒伞素对细胞骨架蛋白进行特异性染色.结果:8-甲氧沙林可使细胞内游离钙离子浓度升高,促进黑素细胞骨架蛋白合成.结论:8-甲氧沙林可能通过诱导黑素细胞内钙离子浓度升高和细胞骨架actin蛋白生成,从而影响黑素细胞的迁移.     

肌浆网内钙容量减少对心肌细胞钙释放的影响

目的:较系统地研究肌浆网(SR)内钙容量的减少对心肌细胞钙释放的影响.方法:采用肌浆网膜的钙泵抑制剂thapsigargin(TG)耗减SR内钙容量,以喷咖啡因的方法估测SR内钙容量,以局部场刺激的方法诱发全细胞的钙释放.胞内钙信号的变化均采用激光共聚焦显微镜的方法记录.结果:SR钙泵抑制剂TG以剂量依赖和非线性的时间依赖方式引致心肌细胞SR内钙容量的耗减,而钙容量的耗减可相应地引起全细胞水平的钙释放减少.但二者的变化不完全平行,SR内钙容量的少量减少即可引起胞内钙释放的显著减少,而当SR内钙耗减到一定程度后(虽然此时SR内Ca2 仍远高于胞质内钙),场刺激已很难或无法引致钙释放.结论:心肌细胞SR内钙容量对胞内钙释放具有重要的非线性调节作用.     

同型半胱氨酸对大鼠心肌细胞钙摄取的影响

目的：研究同型半胱氨酸（ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ，ＨＣＹ）对心肌细胞钙摄取的影响及其作用机制。方法：采用同位素技术测定培养大鼠心肌细胞钙的摄取，观察不同ＨＣＹ浓度对培养心肌细胞钙摄取的影响及蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）抑制剂或蛋白磷酸酶抑制剂与ＨＣＹ同时培养对培养心肌细胞钙摄取的影响。结果：ＨＣＹ呈浓度依赖性促进心肌细胞钙的摄取，ＨＣＹ促进心肌细胞钙摄取的作用为ＰＫＣ抑制剂Ｈ７和多粘菌素（ｐｏｌｙｍｙｃｉｎＢ，ＰＢ）所抑制，并且受蛋白磷酸酶抑制剂Ｏｋａｄａｉｃａｃｉｄ作用而增强。结论：ＨＣＹ促进心肌细胞钙摄取，可能与ＰＫＣ所介导的蛋白磷酸化过程有关。     

肌内注射质粒DNA对蟾蜍骨骼肌收缩能力的影响

目的：应用蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本，观察肌内注射质粒DNA后不同时间对肌肉收缩功能的影响。方法：重组DNA制备pcDNA3/ANP。分别将任氏液、pcDNA3／ANP及载体pcDNA3注入对照组、pcDNA3／ANP及组pcDNA3组蟾蜍腓肠肌，间隔1h,2h,4h,8h,24h及48h后，处死动物，制备坐骨神经腓肠肌样本，利用BL－410计算机生物机能实验系统测肌肉的单收缩力和强直收缩力。结果：质粒pcDNA3及pcDNA3／ANP肌内注射后，肌肉的单收缩力及强直收缩力与对照组相比均呈现先降氏后升高的趋势（P均＜0．01）；而pcDNA3和pcDNA3／ANP2者对肌肉的作用差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：质粒DNA注射入骨骼肌细胞之后除目的基因的表达之外，还可以影响肌肉的收缩功能。