仙茅对L02细胞代谢功能的影响

目的:探讨仙茅对体外培养肝细胞代谢功能的影响。方法:应用仙茅水提物大(400μg生药/ml)、中(200μg生药/ml)、小剂量(100μg生药/ml)作用于体外培养的正常人肝细胞株L02细胞,收集细胞培养液,应用氧化酶终点法检测葡萄糖(GLU);终点法检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC);双缩脲终点法检测总蛋白(TP);氧化酶法检测乳酸(LAC);酶标比色法测乳酸脱氢酶(LDH)。结果:仙茅水提物大(400μg生药/ml)、中剂量(200μg生药/ml)时可使L02细胞培养液中GLU、TP、LDH含量增加,TG、LAC含量降低,与空白组比较有显著差异。结论:仙茅可提高L02细胞糖、脂、蛋白的代谢及能量代谢。     

苔黑酚葡萄糖苷对L02细胞肝药酶CYP3A的调控作用研究

目的观察苔黑酚葡萄糖苷对体外培养的正常肝细胞株L02中CYP3A的影响,探讨苔黑酚葡萄糖苷是否通过cAMP-PKA信号通路调控CYP3A的活性。方法分别用cAMP-PKA信号通路中蛋白激酶A(PKA)激动剂环腺苷酸(cAMP)类似物8-溴-环腺苷酸(8-Br-cAMP)及其抑制剂H-89、苔黑酚葡萄糖苷干预L02细胞,MTT法检测细胞活力,完整细胞免疫组化法检测PKA蛋白表达,红霉素-N-脱甲基法检测CYP3A活性,Western blotting检测细胞中孕烷X受体(PXR)蛋白表达。结果与对照组(加入不含药的无血清培养基)相比,苔黑酚葡萄糖苷处理后的细胞CYP3A的活性增强,PKA、PXR蛋白表达增强,与8-Br-cAMP的作用相似。结论苔黑酚葡萄糖苷可通过cAMP-PKA信号通路调控CYP3A的表达,表明其可能是仙茅表现出辛热药性的主要成分之一。     

合成冰片对大鼠肝CYP450酶含量及CYP3A1 mRNA表达的影响

[目的]研究冰片对大鼠肝脏细胞色素氧化酶（cytochromeP450,CYP450）含量及其亚型CYP3AImRNA表达的影响。[方法] Wistar大鼠合成冰片（设0．3g／kg和0.03g／kg剂量组,1次／d,连续7d）灌胃,以溶媒羧甲基纤维素纳（CMC-Na）和苯巴比妥钠为对照组,钙沉积法提取肝微粒体,紫外分光光度法测定CYP450含量,实时定量RT-PCR法检测肝脏CYP3AImRNA的表达。[结果]0．3g／kg合成冰片口服可诱导大鼠肝脏CYP450酶含量增高（P〈0．05）,CYP3A1 mRNA表达上调（P〈0．05）。[结论]高剂量合成冰片口服可能影响肝脏药物代谢。     

何首乌6种成分对人孕烷X受体介导的CYP3A4的调控作用北大核心CSCD

该文探讨何首乌中6种化学成分(没食子酸、槲皮素、山柰酚、木犀草素、白藜芦醇、芹黄素)对人孕烷X受体(humanpregnant X receptor,PXR)介导的CYP3A4的转录调控作用。利用前期建立的PXR介导的CYP3A4药物诱导快速筛选技术,采用MTS细胞检测方法考察化学成分对细胞活性的影响,计算IC50;利用双荧光素酶报告基因系统,将PXR表达载体和含CYP3A4转录调控区的报告基因载体共转染HepG2细胞,10μmol·L-1利福平为阳性对照,10μmol·L-1酮康唑为阴性对照,用何首乌中6种成分--没食子酸、槲皮素、山柰酚、木犀草素、白藜芦醇、芹黄素(5,10,20μmol·L-1)分别处理24 h,进行双荧光素酶活性检测。结果表明,空载质粒pc DNA3. 1与p GL4. 17-CYP3A4共转染时没食子酸、白藜芦醇对CYP3A4的调控为抑制效应,槲皮素、山柰酚、木犀草素对CYP3A4产生诱导作用;pc DNA3. 14-PXR与p GL4. 17-CYP3A4共转染时,槲皮素、山柰酚、木犀草素、白藜芦醇、芹黄素均产生诱导效应。综上所述,6种成分对CYP3A4产生抑制或激活效应,PXR参与后,5种成分对CYP3A4产生诱导效应,其中3种成分的诱导效应具有显著性差异。该研究提示,在与何首乌联合用药时应注意潜在的药物相互作用,提高安全性和有效性。     

中药有效成分对药物代谢酶的影响

目的:探讨与分析中药有效成分对药物代谢酶的影响。方法:选用人肝微粒体孵育法,将非那西丁、美分妥因、甲苯磺丁脲等作为探针药物,采用探针药物测定法测定探针药物代谢酶浓度水平。结果:4种药物均对单个或多个代谢酶的代谢产生明显的抑制作用,5种常见酶参与了80%药物在人体内的代谢作用。结论:为降低药物不良反应的产生,提高临床用药的合理性,必须加强中药有效成分对药物代谢酶的研究。     

核受体孕烷X受体和组成性雄甾烷受体介导的中草药对药物代谢酶的作用及其研究进展

 目的 概述我们对孕烷X受体（pregnane X receptor,PXR）和组成性雄甾烷受体（constitutive androstane receptor,CAR）作为中草药调节剂作用的最新认识及其研究进展。方法 首先对孕烷X受体和组成性雄甾烷受体作用机制及靶基因谱进行系统阐述,其次考察常用中草药对孕烷X受体和组成性雄甾烷受体的调节作用,以及探讨孕烷X受体和组成性雄甾烷受体作用于内源性物质的最新研究进展。结果与结论 孕烷X受体和组成性雄甾烷受体是控制一系列广泛基因表达的转录因子,它们不仅涉及到许多药物以及其他外源性化学物和内源性物质,如：胆汁,胆红素以及某些维生素在细胞间转运和生物转化,还包括脂代谢,糖代谢和炎症等各种生理和病理过程。     

沙苑子苷A对脂肪变L02细胞中三酰甘油水解及炎症介质的影响

目的：研究沙苑子苷A对脂肪变L02细胞的降脂效果和作用机制。方法：采用游离脂肪酸(FFA)诱导肝L02细胞脂肪变性,分为对照组、模型组、沙苑子苷A低剂量、中剂量、高剂量组(1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L),流式细胞仪检测细胞凋亡和脂肪堆积,按照试剂盒检测三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测三酰甘油水解酶(ATGL)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)mRNA的表达,蛋白质印迹法(Western Blotting)检测ATGL、PPAR-α、PPARγ、TNF-α、IL-6蛋白的表达。结果：沙苑子苷A能显著减少脂肪堆积,降低TG、TC、MDA含量,增加SOD活性,降低细胞凋亡率,减轻脂毒性造成的肝细胞损伤,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);沙苑子苷A能升高ATGL、PPAR-α、PPARγmRNA和蛋白的表达,同时降低TNF-α、IL-6...     

364 78种生药提取物对人肝脏微粒体 CYP3A4和CYP2D6的抑制作用

探讨了78种生药提取物对人肝脏微粒体的药物代谢酶细胞色素P450（CYP）CYP3A4和CYP2D6的抑制作用。     

沙苑子苷A对L02细胞脂肪变性模型的降脂作用和机制探讨

目的建立人正常肝细胞株(L02)脂肪变体外模型,探讨沙苑子苷A对脂肪变性肝细胞的降脂作用及相关机制。方法采用1 mmol/L的游离脂肪酸FFA(油酸∶棕榈酸为2∶1)诱导24小时建立L02细胞脂肪变模型,然后分为空白组对照组、模型组、沙苑子苷A低、中、高剂量组(25、50、100μM),按照试剂盒检测甘油三酯(triglyceride, TG)、胆固醇(cholesterol, TC)、谷丙转氨酶(glutamic pyruvic transaminase,ALT)、谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的水平,Elisa法检测白介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,qPCR检测固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-binding protein 1C,SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase, FAS)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator activated receptorα,PPARα)、肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(carnitine Palmitoyltransferase 1A,CPT-1A) mRNA的表达,Western blot检测SREBP-1c、FAS、PPARα、CPT-1A蛋白的表达。结果与模型组比较,沙苑子苷A预处理能显著降低细胞TG、TC、ALT、AST、LDH、MDA的含量(P0.05,P0.01),显著升高SOD活性(P0.01),显著降低IL-6、TNF-α的水平(P0.01);同时,与模型组比较,沙苑子苷A预处理能显著降低肝细胞SREBP-1c、FAS mRNA和蛋白的表达量(P0.01),显著增加肝细胞PPARα、CPT-1A mRNA和蛋白的表达量(P0.01)。结论 FFA成功诱导了L02细胞的脂肪变性,沙苑子苷A对脂肪变的肝细胞具有良好的降脂和保肝作用,其降脂机制可能是通过抑制肝细胞SREBP-1c的表达,降低TG合成途径中限速酶FAS水平,降低TG合成速度;同时上调PPARα蛋白表达,提高脂肪酸β氧化途径中CPT-1A水平,加速脂肪酸的β氧化,减少TG合成,从两方面共同作用从而达到降脂和保肝效果。     

仙茅体内代谢过程与药物代谢酶CYP3A的相关性研究

目的:探讨仙茅体内代谢过程与药物代谢酶细胞色素P4503A(CYP3A)的相关性,为进一步研究机体CYP3A活性变化对仙茅性-效表达的影响奠定基础。方法:SD雄性大鼠随机分为2组,即正常组和利福平组。利福平组每天灌胃给予200mg/kg药物混悬液,正常组给予等体积蒸馏水,连续7d,第8天每组各取6只大鼠一次性灌胃仙茅水煎液(20g/kg)后,分别于20、50、90、180min时眼眶取血测仙茅入血成分苔黑酚葡萄糖苷血药浓度,其他大鼠断头处死,取肝、小肠、肾测定CYP3A活性。结果:利福平组大鼠肝微粒体CYP3A活性明显升高(P0.05),小肠、肾微粒体CYP3A活性有升高趋势;利福平组大鼠各时间点血药浓度均低于正常组,且在20、50、90时差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:利福平诱导后大鼠肝微粒体CYP3A活性升高,而苔黑酚葡萄糖苷血药浓度明显降低,说明仙茅体内代谢过程与药物代谢酶CYP3A相关。     

中药甘草中微量元素与有效成分相关性研究

为明确与甘草中有效成分密切相关的微量元素种类,揭示微量元素对甘草质量的影响,依据国家药典标准,采用HPLC测定甘草样品中有效成分甘草酸和甘草苷含量,采用电感耦合等离子体质谱法测定微量元素(Cu)、锌(Zn)、(锰)、铅(Pb)、硒(Se)、镉(Cd)、镍(Ni)、镧(La)、钠(Na)、铬(Cr)、镁(Mg)、铁(Fe)、钙(Ca)、铝(Al)、钾(K)、锶(Sr)的含量,用SPSS统计软件对有效成分含量与微量元素含量进行相关性分析。相关性分析结果表明,甘草药材中的甘草苷含量与Mn,Pb含量呈显著正相关关系,与Cu,Na含量呈显著负相关关系;甘草酸含量与Mg,Cd,La含量有显著正相关关系,与K,Fe含量呈显著负相关关系。综合分析研究结果,初步认为,甘草药材中有效成分与微量元素之间存在密切相关关系,但确切结论还需进一步进行量效关系研究分析。     

仙茅不同炮制品对腺嘌呤致肾阳虚大鼠的作用机制分析

目的:研究仙茅不同炮制品水提液对腺嘌呤所致肾阳虚大鼠的补肾壮阳作用机制。方法:以桂附地黄丸为阳性组(给药剂量2. 466 g·kg-1),采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)比较仙茅不同炮制品水提液(给药剂量2. 742 g·kg-1)灌胃4周后对腺嘌呤所致肾阳虚大鼠血清中促甲状腺激素(TSH),雌二醇(E2),睾酮(T),17-羟皮质类固醇(17-OHCS),三碘甲状腺原氨酸(T3),甲状腺素(T4),皮质醇(COR)水平的影响;采用Nash比色法测定各组大鼠肝、肾微粒体细胞色素P450 3A(CYP3A)的活性。结果:仙茅各炮制品水提液对腺嘌呤所致肾阳虚大鼠的下丘脑-垂体-靶腺轴功能均有一定程度的改善作用,各炮制品总评分排序为萸仙茅(29分)盐仙茅(25分)酒仙茅(23分)生仙茅(17分)姜仙茅(11分);仙茅各炮制品组均能不同程度上调肾阳虚状态下大鼠肝、肾微粒体CYP3A活性,其中盐仙茅和萸仙茅效果较优。结论:仙茅各炮制品均能有效治疗大鼠肾阳虚证,其中萸仙茅、盐仙茅补肾壮阳效果较为显著。     

基于P糖蛋白研究仙茅对顺铂耐药非小细胞肺癌细胞的增敏机制

目的：探究中药仙茅水煎液及其主要入血成分苔黑酚葡萄糖苷(OG)对非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂耐药细胞(A549/cis)耐药性的影响及其潜在机制。方法：用AutoDock Vina分子对接软件评估P糖蛋白(P-gp)与OG的结合能力;CCK-8法检测顺铂、仙茅水煎液、OG及其联用对A549/cis细胞活力的抑制率;蛋白质免疫印迹法检测A549/cis中P-gp的表达水平。结果：P-gp与OG模拟分子对接的结合自由能为-7.6 kcal/mol(1 cal=4.184 J),二者具有良好的结合活性;顺铂对A549/cis的半抑制浓度(IC₅₀)约为5.5μg/mL,仙茅水煎液与OG在梯度浓度下对A549/cis活力均无明显影响;顺铂低剂量(1.5μg/mL)与仙茅水煎液高、低剂量(1 000μg/mL、500μg/mL)或OG高剂量(5×10^-5mol/L)联用组、顺铂中剂量(4μg/mL)与仙茅水煎液高、低剂量(1 000μg/mL、500μg/mL)或OG高、低剂量(5×10^-5mol/L、1×10^-5     

菟丝子、仙茅、巴戟天对人精子体外运动和膜功能影响的研究

观察菟丝子，仙茅，巴戟天对人精子体外运动和膜功能的影响。取不同浓度的菟丝子、仙茅、巴戟天水煎剂与人体精子混匀，３７℃孵育３０ｍｉｎ，通过精子毛细管穿透试验，精子运动速度和活力指数计算评估精子活动功能，采用精子低渗肿胀试验评价其膜功能。精子的运动功能，膜功能均显著改善，其中以菟丝子最佳，仙茅次之，巴埋戟天则较差，菟丝子对精子的运动能力和膜功能有促进作用。故有益于治疗男性不育并可能有助于提高人工授精的     

桂枝茯苓胶囊及其活性成分组合物免疫调节活性及其机制研究

该文对桂枝茯苓胶囊及其15个活性成分组合物进行免疫调节活性评价,并对其作用机制进行初步探索。实验通过MTT法检测脾脏淋巴细胞体外增殖活化能力,观察桂枝茯苓胶囊及其活性成分组合物促淋巴细胞增殖作用;通过流式细胞术检测脾脏淋巴细胞中CD80/86,CD3CD25,CD3CD69的比例变化,评价桂枝茯苓胶囊及其活性成分组合物对脾脏淋巴细胞活化的影响。MTT结果显示400 mg·L^-1的桂枝茯苓胶囊可以明显促进脾淋巴细胞的体外增殖,与对照组比较,差异具有统计学意义(P≤0.01);15种活性成分组合物也具有相同的作用,在25~800 mg·L^-1,与对照组比较, 差异具有统计学意义(P≤0.01),且在6.25~400 mg·L^-1呈现明显的量效关系。流式细胞术结果显示400 mg·L^-1桂枝茯苓胶囊与200 mg·L^-1的15种活性成分组合物对脾淋巴细胞中CD80和CD86的表达均具有明显的促进作用;对CD3⁺细胞中CD69和CD25的表达亦具有明显促进作用。综上,桂枝茯苓胶囊与其活性成分组合物具有一定的免疫调节活性,其机制可能与活化淋巴细胞密切相关。     

糖皮质激素诱导大鼠不同状态下CYP3A和GST活性变化研究

目的:研究糖皮质激素诱导不同状态大鼠CYP3A和GST活性变化差异。方法:SD雄性大鼠随机分为3组。氢化可的松组肌注氢化可的松琥珀酸钠注射液,地塞米松组肌注地塞米松磷酸钠注射液,正常组肌注等体积生理盐水。检测血清T3、T4、TSH、COR、E2、T水平及肝、小肠CYP3A及肝和血浆GST活性。结果:地塞米松组肝CYP3A和GST活性均显著升高,而氢化可的松组仅GST活性显著升高;2模型组大鼠小肠CYP3A和血浆GST活性未见显著变化。结论:糖皮质激素诱导不同状态下药物代谢酶CYP3A和GST活性存在差异。     

多花黄精内生菌群落结构多样性及其与有效成分含量相关性研究

目的 通过分析多花黄精Polygonatum cyrtonema内生菌菌群结构多样性及其与主要有效成分含量之间的相关性,探讨多花黄精内生菌对其药材品质的影响.方法 收集不同产地多花黄精样品,采用高通量测序对内生菌群落结构进行分析,并测定多糖、总皂苷等有效成分含量,通过双因素关联分析探究菌群多样性及其与有效成分之间的关系...     

水飞蓟宾对硫代乙酰胺所致肝损伤状态下CYP3A的调节作用及机制

目的：水飞蓟宾（sB）是植物奶蓟的主要成分,长期以来被用于治疗各种肝脏疾病。由于肝病往往伴随有CYP450酶的功能失调,因此本文以硫代乙酰胺（TAA）引起的大鼠肝损伤为模型,研究水飞蓟宾的肝保护作用和对CYP3A的调控作用之间的关系。方法：血清生化指标检测和肝脏病理切片实验评价水飞蓟宾的保肝作用。免疫组化实验测定0【一SMA的表达,ELISA试剂盒测定大鼠肝脏炎症因子的表达。实时定量PCR和westernblot实验考察CYP3A和PXR的mRNA和蛋白表达水平变化,咪达唑仑4一羟基化反应测定CYP3A的活性。siRNA转染实验沉默PXR后考察PXR在硫代乙酰胺细胞毒和CYP3A调节中的作用。结果：水飞蓟宾表现出明显的保肝、抗炎、抗纤维化作用,并能有效逆转硫代乙酰胺导致的大鼠肝脏CYP3A和PXR表达减少以及PXR的入核减少。PXR沉默实验显示PXR参与了水飞蓟宾的细胞保护和CYP3A调控过程。结论：PXR是参与CYP3A调控的重要因子,很可能是水飞蓟宾在硫代乙酰胺导致的大鼠肝损伤模型中的作用靶点,同时也提示在治疗肝脏疾病时要注意与水飞蓟宾合用的药物可能与水飞蓟宾之间存在潜在的药物相互作用。