低氧诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡的研究

目的初步探讨低氧环境诱导人牙周膜成纤维细胞(PDLCs)凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法体外正常氧(20%O_2)或低氧(1%O_2)状态下培养PDLCs,光学显微镜观察比较低氧诱导前后PDLCs形态学变化;台盼蓝染色实验检测PDLCs细胞死亡率的差异;凋亡实验比较各组PDLCs凋亡水平的变化。Western免疫印迹检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、p53、Caspase-3、Bcl-2与Bcl-x L蛋白的表达水平。采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果随着低氧处理时间延长,人PDLCs细胞数量减少,体积逐渐变小,细胞胞质浓缩。台盼蓝染色实验与凋亡实验均证实低氧处理48 h后PDLCs死亡率(t=3.855,P=0.018)与凋亡率(t=6.621,P=0.003)显著增高。Western免疫印迹结果显示PDLCs中HIF-1α、p53、Caspase-3蛋白随着低氧刺激时间延长逐渐升高,Bcl-2与Bcl-x L蛋白逐渐降低。结论低氧能促进PDLCs形态变化、凋亡及凋亡相关蛋白的表达。     

p53基因变异的B细胞淋巴瘤小鼠甘氨酸脱羧酶表达研究

目的了解p53基因变异和B细胞淋巴瘤甘氨酸脱羧酶（GLDC）表达的关系。 方法基于免疫组化染色结果,BALB/c裸鼠分为p53蛋白阳性组和p53蛋白阴性组。采用实时荧光定量PCR检测B细胞淋巴瘤组织甘氨酸脱羧酶mRNA表达,采用免疫印迹实验检测B细胞淋巴瘤组织甘氨酸脱羧酶蛋白表达。设计GLDC特异性siRNA转染人B淋巴瘤细胞系Raji细胞。采用t检验比较GLDC mRNA和GLDC蛋白表达组间的差异,并采用方差分析比较阴性对照siRNA组、空白对照组和GLDC siRNA转染组增殖能力的差异。 结果相对于p53蛋白阴性组,p53蛋白阳性组GLDC mRNA和蛋白表达都升高,GLDC mRNA表达在p53蛋白阴性组为2.38±0.26,在p53蛋白阳性组升高到11.32±1.65,差异具有统计学意义（t=6.74,P<0.01）。相对于阴性对照siRNA组（0.61±0.06）和空白对照组（0.51±0.04）,GLDC siRNA转染组（0.22±0.01）细胞增殖能力明显降低,差异具有统计学意义（t=3.74,P<0.05）, 结论p53基因变异和B细胞淋巴瘤GLDC表达有直接的关系。GLDC基因能促进p53基因变异B细胞淋巴瘤增殖。GLDC的研究可能为治疗B细胞淋巴瘤提供新的靶点。     

麝香通心滴丸对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨麝香通心滴丸（STDP）对心肌细胞缺氧/复氧的保护作用。 方法建立心肌缺氧/复氧模型。将H9c2细胞分为5组：对照组（细胞正常培养,不做任何处理）、模型组、STDP组（在复氧前40 min给予STDP 50 mg / L）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）组（在复氧前40 min给予3-MA 5 mmol / L）及STDP + 3-MA组（在复氧前40 min分别给予STDP 50 mg / L及3-MA 5 mmol / L）。采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测各组细胞存活率,并测定各组细胞乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛及肌酸激酶水平。采用流式细胞仪检测各组细胞的细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测信使RNA（mRNA）自噬相关基因Beclin-1、Atg5的表达水平,并通过Western-blotting检测各组细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ / LC3Ⅰ、低氧诱导因子1α（HIF-1α）、Bcl-2 /腺病毒E1B 19 kDa相互作用蛋白3（BNIP3）、Beclin-1、Atg5的表达水平。 结果各组细胞存活率比较,差异有统计学意义（F = 85.893,P = 0.028）,且STDP组细胞存活率较模型组、3-MA组及STDP + 3-MA组细胞存活率均显著升高[（90 ± 7）%、（63 ± 5）%、（80 ± 5）%、（81 ± 6）%,P均< 0.05]。各组细胞LDH、丙二醛、肌酸激酶水平,细胞凋亡率,Beclin-1 mRNA、Atg5 mRNA以及LC3Ⅱ / LC3Ⅰ、HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、Atg5蛋白表达水平的比较,差异均有统计学意义（F = 78.381、23.519、48.376、22.726、6.315、5.294、75.219、116.546、21.125、39.724、65.247,P均< 0.05）。进一步两两比较发现,在STDP组细胞中,LDH[（92 ± 6）、（194 ± 13）、（195 ± 11）、（192 ± 10）μmol / L,P均< 0.05]、丙二醛[（12.5 ± 0.7）、（17.2 ± 1.2）、（18.5 ± 1.6）、（17.9 ± 1.0）μmol / L,P均< 0.05]、肌酸激酶[（19.9 ± 1.0）、（34.3 ± 2.2）、（35.3 ± 2.2）、（34.8 ± 2.5）μmol / L,P均< 0.05]水平,细胞凋亡率[（5.8 ± 0.8）%、（8.8 ± 0.9）%、（7.6 ± 0.7）%、（7.3 ± 0.5）%,P均< 0.05]较模型组、3-MA组及STDP + 3-MA组均明显降低;Beclin-1 mRNA、Atg5 mRNA、LC3Ⅱ / LC3Ⅰ、BNIP3、Beclin-1、Atg5蛋白表达水平较模型组均明显降低,而较3-MA组及STDP + 3-MA组均显著升高（P均< 0.05）;HIF-1α蛋白表达水平较模型组、3-MA组及STDP + 3-MA组均明显升高（P均< 0.05）。 结论STDP可通过调控HIF-1α / BNIP3信号通路发挥对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。     

低氧对小鼠缺氧诱导因子-1α、P53和血管内皮生长因子表达的影响

目的：研究低氧时小鼠肺组织中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、P53及血管内皮生长因子（VEGF）表达的变化,探讨三者之间的关系,以及低氧与血管新生的关系.方法：实验用雄性昆明小鼠,分为低氧组与对照组,低氧仓浓度分别为10%、7%、5%.低氧时间分别为3天、6天、9天.用免疫组织化学技术检测小鼠在低氧条件下肺组织中的HIF-1α、P53和VEGF蛋白表达的变化及微血管密度（MVD）.结果：低氧组HIF-1α、P53和VEGF蛋白表达均增加,并且随低氧时间的延长及低氧浓度的降低而增强,而对照组HIF-1α无表达,P53和VEGF有少量表达（P＜0.05）;低氧组的MVD也高于对照组;P53,VEGF表达与MVD均与HIF-1α表达呈正相关（r分别为0.609、0.730与0.691）.结论：HIF-1α/VEGF通路在低氧致小鼠肺组织血管新生过程中起重要作用,P53基因的失活可能经HIF-1α/VEGF通路促进血管新生.     

miRNA-224-5p通过TGF-β/Smad4信号通路调控甲状腺乳头状癌细胞凋亡

目的探讨miRNA-224-5p通过TGF-β/Smad4信号通路对甲状腺乳头状癌细胞凋亡的调控作用。 方法选取2015年7月至2017年11月新疆维吾尔自治区人民医院手术切除所得甲状腺乳头状癌组织及相应的癌旁组织冻存标本各60份。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测60例甲状腺乳头状癌组织及60例癌旁组织中miRNA-224-5p的相对表达量,二者比较采用配对资料t检验。将miRNA-224-5p（miRNA-224-5p组）与miRNA-224-5p抑制剂（miRNA-224-5p抑制剂组）分别转染到甲状腺乳头状癌细胞株GLAG-66中,通过RT-PCR检测两组中GLAG-66细胞内miRNA-224-5p的相对表达量,应用流式细胞仪检测两组GLAG-66细胞转染48 h后凋亡率,应用Western blot实验检测两组GLAG-66细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3、TGF-β1、Smad4蛋白的相对表达量,并采用两个独立样本t检验进行比较。 结果miRNA-224-5p在甲状腺乳头状癌组织中的相对表达量与癌旁组织比较明显升高,差异具有统计学意义［（4.175±0.523）vs（1.236±0.236）,t=9.675,P=0.001）］。miRNA-224-5p抑制剂组GLAG-66细胞中miRNA-224-5p的相对表达量与miRNA-224-5p组比较明显下降,差异具有统计学意义［（0.381±0.078）vs（1.000±0.023）,t=19.785,P<0.001）］。miRNA-224-5p抑制剂组GLAG-66细胞转染48 h后的凋亡率与miRNA-224-5p组比较明显增高,差异具有统计学意义［（18.66%±0.98%）vs（3.78%±0.36%）,t=17.561,P<0.001］。miRNA-224-5p抑制剂组和miRNA-224-5p组比较,GLAG-66细胞中Bcl-2、TGF-β1和Smad4蛋白的相对表达量明显降低,差异具有统计学意义［（0.197±0.008）vs（0.278±0.013）,t=8.259,P=0.001;（0.117±0.013）vs（0.227±0.012）,t=13.269,P<0.001;（0.268±0.012）vs（0.439±0.016）,t=9.897,P=0.001］;Bax、Cleaved-Caspase3蛋白的相对表达量明显升高,差异具有统计学意义［（0.286±0.011）vs（0.159±0.009）,t=12.569,P<0.001;（0.128±0.009）vs（0.083±0.010）,t=7.693,P=0.002］。 结论miRNA-224-5p在甲状腺乳头状癌组织中表达增高,下调miRNA-224-5p可以促进甲状腺乳头状癌细胞的凋亡,其作用机制可能与TGF-β/Smad4信号通路有关。     

丹参酮ⅡA对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响。 方法培养Wistar大鼠原代心肌成纤维细胞,分为对照组、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组、丹参酮A组（0.01 mmol/L丹参酮ⅡA）、丹参酮B组（0.1 mmol/L丹参酮ⅡA）、丹参酮C组（1 mmol/L丹参酮ⅡA）。采用四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖率;采用酶联免疫吸附试验检测羟脯氨酸含量;采用实时定量聚合酶链式反应（PCR）法检测大鼠心肌成纤维细胞胶原蛋白Ⅰ型、Ⅲ型、基质金属蛋白酶2（MMP-2）及金属蛋白酶特异性组织抑制2（TIMP-2）mRNA的表达水平;采用Western-blotting测定半乳糖凝集素3蛋白表达水平。 结果5组心肌成纤维细胞间细胞增殖率、羟脯氨酸表达水平、胶原蛋白Ⅰ型、Ⅲ型、MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平、半乳糖凝集素3蛋白表达水平的比较,差异均有统计学意义（F = 14.440、13.510、15.860、42.950、3.727、7.357、127.600,P均< 0.001）。且与对照组相比,AngⅡ组及丹参酮ⅡA各浓度组细胞增殖率[（100.0 ± 2.8）%、（171.2 ± 11.4）%、（162.3 ± 15.9）%、（154.6 ± 17.5）%、（128.7 ± 13.2）%]、羟脯氨酸表达水平[（1.13 ± 0.14）、（2.07 ± 0.23）、（1.89 ± 0.17）、（1.74 ± 0.20）、（1.35 ± 0.16）μg/mg]、胶原蛋白Ⅰ型、Ⅲ型、MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平、半乳糖凝集素3蛋白表达水平均明显上升（P均< 0.05）。与AngⅡ组比较,丹参酮ⅡA各浓度组细胞增殖率、羟脯氨酸表达水平、胶原蛋白Ⅰ型、Ⅲ型、TIMP-2 mRNA表达水平、半乳糖凝集素3蛋白表达水平均显著下降,且丹参酮C组最低（P均< 0.05）。而MMP-2 mRNA表达水平在AngⅡ组与丹参酮ⅡA各浓度组间比较,差异均无统计学意义（P均> 0.05）,且丹参酮ⅡA各浓度组间MMP-2 mRNA表达水平比较,差异亦均无统计学意义（P均> 0.05）。 结论丹参酮ⅡA可有效抑制心肌成纤维细胞的增殖,其机制可能与抑制半乳糖凝集素3蛋白表达,降低TIMP-2表达相关。     

重度急性高原病的临床诊断及预测指标研究

目的观察健康平原地区人群急进高原后多项生理指标的变化，研究其对重度急性高原病（AMS）的诊断及预测价值。 方法选取2017年6月至2019年6月解放军联勤保障部队第九七〇医院赴青海玉树的30例健康医务人员，根据Lake Louise评分（LLS）将30例医务人员分为重度AMS组（5例）和非重度AMS组（25例）。比较两组人员的一般资料及其进入高原后的缺氧诱导因子1α（HIF-1α）蛋白、血氧饱和度、血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数、血小板计数、白细胞介素6（IL-6）及超敏C反应蛋白（hs-CRP）表达水平；采用Pearson相关分析各指标与LLS评分的相关性。 结果急进高原后30例医务人员中重度AMS的发病率为16.7%（5/30）。重度AMS组体质量[（53 ± 6）kg vs.（68 ± 8）kg]、体质量指数（BMI）[（19.8 ± 0.8）kg/m² vs.（23.9 ± 1.9）kg/m²]、血氧饱和度[（84.0 ± 1.0）% vs.（87.7 ± 2.7）%]、血红蛋白[（135.0 ± 2.0）g/L vs.（161.1 ± 22.7）g/L]及红细胞计数[（4.5 ± 0.4）× 10¹²/L vs.（5.3 ± 0.5）× 10¹²/L]表达水平均较非重度AMS组显著降低（t = 1.093、2.789、3.386、7.872、0.028，P = 0.020、0.008、0.031、0.021、0.028）；而HIF-1α蛋白[（3.4 ± 0.3）vs.（0.9 ± 0.7）]表达水平较非重度AMS组显著升高（t = 2.870，P = 0.009）。Pearson相关分析结果显示，HIF-1α与LLS评分呈正相关（r = 0.883，P = 0.004），而血氧饱和度、红细胞计数、血红蛋白及BMI与LLS评分均呈负相关（r = -0.648、-0.750、-0.967、-0.549，P = 0.031、0.008、< 0.001、0.002）。 结论HIF-1α、血氧饱和度、血红蛋白、红细胞计数及BMI可作为预测和评价重度AMS的良好指标。     

低氧诱导因子1α在G-CSF诱导小鼠造血干细胞动员中的表达变化

目的:探究小鼠骨髓微环境低氧诱导因子1α(HIF-1α)在G-CSF动员造血干细胞(HSC)过程中的表达变化及相关机制。方法:采用流式细胞术检测注射G-CSF前后小鼠外周血Lin^-Sca-1⁺c-kit⁺(LSK)细胞比例，并采用RQ-PCR、免疫组化等方法检测G-CSF动员不同时间点小鼠骨髓及骨内膜HIF-1α、骨钙素(OCN)mRNA和蛋白的表达水平，光学显微镜下观察小鼠股骨标本成骨细胞数。结果:G-CSF动员4 d小鼠外周血LSK细胞比例开始升高，动员5 d达到高峰，均较对照组显著升高(P<0.05);稳态小鼠HIF-1α mRNA在骨髓有核细胞和骨内膜成骨细胞中表达差异无显著统计学意义(P=0.073),OCN mRNA主要表达于骨内膜细胞，显著高于骨髓有核细胞(P=0.034);动员过程中HIF-1α基因、蛋白表达水平升高，OCN基因、蛋白表达水平下降，骨内膜成骨细胞数量减少(P<0.05);HIF-1α的表达变化晚于OCN(P=0.004),且与小鼠外周血LSK细胞比例变化趋势一致(P=0.000...     

低氧对胚胎肝间质细胞低氧诱导因子1α基因表达的影响

目的:观察低氧培养条件下小鼠胎肝间质细胞中低氧诱导因子1α(hypoxiainduciblefactor1,HIF-1α)的表达情况,了解造血间质细胞在低氧环境中的生物学特性。方法:取孕14.5d小鼠胚胎肝细胞进行贴壁培养及传代。生长至次融合状态的第5代细胞在950mL/LN2和50mL/LCO2混合气条件下培养,持续通以缺氧混合气0(对照组),2,4,8,16,32h,在37℃培养。在合适时间下应用半定量RT-PCR和Westernblot技术检测其HIF-1α基因表达。结果:在常氧压下培养的胎肝间质细胞中,HIF-1αmRNA及其蛋白水平均较低;而低氧培养则可显著提高胎肝间质细胞HIF-1α基因的mRNA及其蛋白水平。HIF-1αmRNA在低氧培养2h时即显著增高,8h时达到高峰水平,PCR产物HIF-1与β-actin信号比从对照组(3.85±1.98)%增加到(60.28±13.48)%,差异有显著性意义(P<0.01);HIF-1α蛋白在低氧培养4h时显著增高,16h时达到高峰水平,Western检测HIF-1与β-actin信号从对照组(3.86±1.98)%增加到(29.46±8.72)%,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:低氧可诱导HIF-1α在小鼠胎肝间质细胞中的表达。     

高原红细胞增多症患者外周血低氧诱导因子-1α水平的检测

目的探讨高原红细胞增多症(HAPC)患者血清低氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平及外周血单个核细胞(PBMC)HIF-1αmRNA表达的变化。方法采集53例HAPC患者及90例健康个体的静脉血,ELISA定量检测血清HIF-1α水平,TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测PBMC的HIF-1αmRNA表达。结果 HAPC患者血清HIF-1α为(148.11±42.06)pg/mL,较健康人对照组(53.95±21.89)pg/mL高(t=17.60,P<0.01);HIF-1αmRNA在HAPC患者PBMC中的相对表达量(2-△△Ct)为3.96;HAPC患者血清HIF-1α水平与PBMC的HIF-1αmRNA(2-△△Ct)水平呈正相关(r=0.73,P<0.01)。结论HAPC的发生可能与HIF-1α表达升高有关。     

HIF-2α基因与人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的关系

目的：探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）沉默缺氧诱导因子2α（hypoxia inducible factor-2 alpha,HIF2α）基因表达后,人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的变化.方法：构建靶向HIF-2α基因的siRNA真核表达载体并转染A549细胞,采用Reαl-time PCR检测HIF-2α mRNA的表达,采用Western blotting检测HIF-2α及多药耐药基因1（multidrug resistance-1,Mdr-1）蛋白的表达,采用MTT法检测顺铂处理后细胞的存活率.结果：在HIF-2α siRNA转染A549细胞后24、48 h后,HIF-2α在mRNA和蛋白水平的表达与空白对照组相比均显著下调（均P＜0.01）,Mdr 1蛋白的表达水平也明显降低（均P＜0.05）.与空白对照组相比,HIF-2α siRNA组细胞对顺铂的敏感性明显增加,各时间点的IC50值均显著降低,差异有统计学意义（均P＜0.01）.结论：靶向HIF-2α的siRNA表达载体能够有效抑制HIF-2α基因的表达,从而逆转A549细胞对顺铂的化疗耐药性.     

缺氧诱导因子HIF-1α与自噬相关因子Beclin-1和P62在结直肠腺瘤与腺癌癌变中的表达

目的探索缺氧诱导因子（HIF-1α）与自噬相关因子（Beclin-1）和（P62）在结直肠息肉、结直肠癌（CRC）中表达及与临床病理特征之间的关系。 方法收集2018年1月至2021年1月合肥市第三人民医院结直肠息肉（包括非腺瘤性和腺瘤性息肉）、结直肠癌患者资料和肠镜标本组织，另取正常患者结直肠粘膜作为对照组。苏木精-伊红（HE）染色并根据肠组织进行病理分型，免疫组织化学方法检测HIF-1α和Beclin-1、P62在息肉、癌组织以及正常肠黏膜表达情况并结合其临床病理资料进行统计分析。共51例患者，男性25例，女性26例，中位年龄58.7±13.9（28~95）岁。其中，腺瘤性息肉14例、非腺瘤性息肉16例、CRC11例及正常结直肠黏膜10例。 结果HIF-1α在正常结直肠黏膜、非腺瘤性息肉、腺瘤性息肉以及CRC中阳性表达率分别为20.0%、31.2%、64.3%和81.8%；Beclin-1在对应各组阳性率为40.0%、62.5%、85.7%和90.9%；P62在对应各组阳性率为30.0%、56.3%、78.6%和90.9%。与正常组比较，非腺瘤性息肉中HIF-1α、Beclin-1和P62表达差异无统计学意义（P＞0.05），但腺瘤性息肉以及CRC中表达差异具有统计意义，呈递增趋势，CRC中表达显著高于腺瘤性息肉和非腺瘤性息肉（P＜0.05）。 结论HIF‐1α以及自噬相关因子Beclin-1和P62在CRC以及腺瘤性息肉表达显著高于非腺瘤性息肉以及正常结直肠黏膜，呈递增趋势，提示缺氧和自噬功能异常可能参与结直肠腺瘤癌变过程。     

缺氧诱导因子1α在人胰腺导管腺癌中的表达及其与微血管形成的关系

目的：探讨胰腺导管腺癌组织中缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α）表达与血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达、微血管密度之间的关系及其临床意义。方法：运用免疫组织化学方法对2009年10月-2010年10月手术切除的43例胰腺导管腺癌标本和20例正常胰腺组织对照标本分别进行HIF-1α、VEGF和CD34检测,再结合肿瘤的临床和病理学特征进行相关分析。结果：HIF-1α、VEGF在胰腺癌组织中表达均显著高于正常胰腺组织（67．4％比10．0％和76．7％比35．0％,P〈0．01）,胰腺癌组织中的微血管密度（micro vessel density,MVD）计数也显著高于正常胰腺组织（21．95±7．83比11．95±3．90,P〈0．01）。HIF-1α表达与VEGF、MVD等呈正相关,且HIF-1α表达与肿瘤的直径、临床分期以及有无淋巴结或远处转移相关,而与肿瘤的部位和病理学分级之间无关。结论：HIF-1α在人胰腺导管腺癌中高表达,并与胰腺癌微血管形成以及胰腺癌的生物学行为关系密切,有望为胰腺癌的治疗和预后判断提供参考。     

硫化氢对心肺复苏后大鼠心肌缺氧诱导因子-1α的影响

目的 研究心肺复苏后大鼠心肌细胞缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的变化及外源性硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)的干预作用.方法 实验在华中科技大学同济医学院附属同济医院动物实验室进行,雄性SD大鼠45只,采用窒息法建立大鼠心搏骤停模型,随机(随机数字法)分为3组,每组15只:(1)对照组,仅行麻醉、气管插管及动静脉插管操作;(2)CPR组,进行模型制备及复苏;(3)CPR+硫氢化钠(NaHS)组,以NaHS作为H2S供体,在CPR开始前1 min经股静脉给予50μg /kg NaHS,其余操作同CPR组.观察各组血流动力学参数,留取6 h心肌组织,采用RT-PCR法检测HIF-1α mRNA表达,采用MPO测定试剂盒测定各组心肌组织MPO含量,三组动物于24 h处死取心肌组织行病理学检查.采用单因素方差分析,组阳比较采用t检验.结果 CPR组和CPR+NaHS组的血流动力学指标差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组相比,CPR组和CPR+NaHS组HIF-1α基因表达均上升,CPR+NaHS组上升更为显著(P＜0.05),与CPR组比较,CPR+NaHS组HIF-1α基因表达升高(P＜0.06);与对照组相比,CPR组和CPR+NaHS组心肌MPO活性出现不同程度升高(P＜0.05),与CPR组比较,CPR+NaHS组心肌MPO活性下降(P＜0.05);通过对心肌苏木精-伊红(HE)染色切片观察显示,CPR组和CPR+NaHS组出现不同程度的病理损伤,GPR+NaHS组的病理损伤轻于CPR组.结论 HIF-1α mRNA在心肺复苏后大鼠心肌细胞的表达增强,硫化氢可能通过上调HIF-1α的表达,对心肺复苏后心肌起保护作用.     

缺氧诱导因子-1α对A549细胞株中生存素表达及其生物学特性的影响

目的观察非小细胞肺癌细胞株A549中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对生存素转录的调控作用及对A549细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)检测生存素启动子序列与核蛋白结合的情况。EMSA实验分为阴性对照反应组、结合反应组、探针冷竞争反应组、突变探针的冷竞争反应组和特异性抗体反应组。应用脂质体将载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP miRNA HIF-1α质粒和阴性(错义链)、内参(β-肌动蛋白)微小RNA(miRNA)质粒转染A549细胞。转染分为未处理组(正常A549细胞)、HIF-1α沉默组(转染HIF-1αmiRNA质粒)、阴性对照组和内参组。杀稻瘟菌素筛选阳性克隆扩大培养;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法筛选出对A549细胞干扰效果最佳的miRNA HIF-1α干扰载体;常氧、缺氧条件下检测各组中HIF-1α、生存素在mRNA和蛋白水平的变化;用细胞计数法、流式细胞术和转移小室迁移试验检测各组细胞增殖、凋亡及迁移细胞数。结果 (1)γ-32P标记的生存素启动子序列-26^-9 bp与A549细胞核蛋白作用,该条带可与HIF-1α抗体结合产生特异性抗体结合条带;(2)常氧下HIF-1α沉默组的HIF-1α和生存素mRNA分别为0.313±0.051和0.060±0.008,明显低于未处理组的1.042±0.036和1.071±0.016(F=436.433,0.002,均P<0.05);HIF-1α和生存素的蛋白含量分别为0.559±0.051和0.051±0.003,未处理组分别是1.452±0.146和0.194±0.007,两组比较差异有统计学意义(F值为53.525和331.646,均P<0.05)。缺氧条件下HIF-1α沉默组中HIF-1α、生存素的mRNA和蛋白分别为0.604±0.040、0.394±0.018、0.997±0.026、0.172±0.006,明显受到抑制(mRNA的t值分别为7.809和-28.936,均P<0.01;蛋白的t值分别为13.523和-14.202,均P<0.01);常氧条件下,转染miRNA后A549细胞增殖(24 h为0.273±0.008)无明显变化,但迁移细胞数(30±6)比未处理组(121±17)减少;缺氧条件下,转染miRNA后,A549细胞生长速度(24 h为0.273±0.008)减慢,细胞体外的迁移细胞数(75±4)减少(均P<0.05)。结论 A549细胞中生存素核心启动子上存在HIF-1α结合位点;miRNA沉默A549细胞HIF-1α表达后,可有效下调生存素基因表达,常氧条件下仅抑制细胞迁移,缺氧条件下不仅促进细胞凋亡,还可抑制细胞增殖和迁移。     

食管鳞状细胞癌患者细胞分化抑制因子-1和低氧诱导因子-1α的表达及意义

目的 研究细胞分化抑制因子-1（Id-1）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在食管鳞状细胞癌中的表达及其相关性,探讨其在食管鳞状细胞癌发生发展中的意义.方法 选取食管鳞状细胞癌60例,正常食管组织40例,应用免疫组化SP法分别检测Id-1、HIF-1α在两组中的表达,分析其与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系.结果 Id-1和HIF-1 0在食管鳞状细胞癌组织中表达率分别为81.7％和73.3％,与正常组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,且Id-1和HIF-1α的表达与食管鳞状细胞癌的浸润深度、TNM分期及淋巴结转移有关,并随着浸润深度的加深、临床分期的提高及淋巴结的转移阳性率增高,差异有统计学意义（P＜0.05）.在食管鳞状细胞癌组织中,Id-1和HIF-1α的表达呈正相关（r=0.396,P=0.002）.结论 Id-1和HIF-1d与食管鳞状细胞癌的发生发展密切相关,,联合检测可作为判断食管鳞状细胞癌浸润和转移的重要指标.     

低氧诱导因子-1α、Ki67和微血管密度在弥漫浸润性星形细胞瘤中的表达及意义

目的探讨低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、增殖指标（Ki67）及微血管密度（MVD）在人弥漫浸润性星形细胞瘤中的表达与临床病理指标及预后的关系。方法用免疫组织化学法检测10例正常人脑组织和76例弥漫浸润性星形细胞瘤中HIF-1α、Ki67和CD34的表达,并以CD34平均阳性血管数作为微血管密度（MVD）。结果 76例弥漫浸润性星形细胞瘤中HIF-1α阳性表达59例（77.6%）,Ki67平均核阳性率为8.22%,平均MVD为（43.7±11.3）,与正常对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。HIF-1α、Ki67的表达率和MVD计数均随弥漫浸润性星形细胞瘤级别的升高而增加,并与患者的预后负相关,各组间差异显著（P〈0.01）;HIF-1α和K i67的表达与MVD计数呈正相关。结论 HIF-1α、Ki67和MVD计数在弥漫浸润性星形细胞瘤中的表达与级别及预后有关,提示缺氧及微血管的增殖在弥漫浸润性星形细胞瘤的发生和演进中发挥作用。     

低剂量辐射对荷S180肉瘤小鼠肿瘤组织HIF-1α和P53表达的影响

目的探讨低剂量辐射对荷S180肉瘤小鼠肿瘤组织中乏氧诱导因子1α（HIF-1α）、P53表达的影响。方法昆明种小鼠皮下接种S180肉瘤细胞,待肿瘤形成后（第12天）将小鼠随机分成假照（N）组及低剂量辐射（LDR）组。LDR组小鼠给予一次性75mGy ^60Co射线全身照射,N组小鼠予以无射线假照射。进行小鼠一般状态观察,N组于假照射后6h处死,LDR组分别于照射后6h（LDR-6h组）、12h（LDR-12h组）、24h（LDR-24h组）、48h（LDR-48h组）、72h（LDR-72h组）处死。分别取瘤称瘤质量,行免疫组化染色检测肿瘤组织中HIF-1α、P53表达情况。结果LDR各组瘤质量与N组比较无统计学差异（P〉0.05）。LDR-24h组、LDR-48h组、LDR-72h组HIF-1α、P53的表达与N组比较均有统计学差异（T=59.000～139.500,P〈0.05）。结论荷瘤小鼠低剂量全身照射后72h内肿瘤质量无明显变化,HIF-1α及P53的表达均降低。一定程度上表明低剂量全身照射一定时间内可降低HIF-1α及P53的表达,从而改善肿瘤乏氧。