莱菔硫烷诱导人肝癌 HepG-2 细胞凋亡的 p38MAPK 途径研究

目的：探讨莱菔硫烷（sulforaphane, SFN）诱导人肝癌 HepG-2 细胞凋亡过程中,p38MAPK 途径的作用。方法：流式细胞仪检测 SFN 对 HepG-2 细胞凋亡率的影响,Western Blotting 方法检测细胞内 p38 及 p-p38 蛋白表达。结果：SFN可明显诱导 HepG-2 细胞凋亡,10、20、40 μmol/L SFN 作用 48 h 后,对 HepG-2 细胞的抑制率分别达到 27.42 %、46.53 %、58.92 %;10、20、40 μmol/L 的 SFN 可上调 HepG-2 细胞内 p-p38 蛋白的表达,而对 p38 的表达无明显影响。结论：SFN 可诱导 HepG-2细胞的凋亡,而且这一过程与阻断 p38MAPK 途径有关。     

莱菔硫烷诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的p38MAPK途径研究

目的:探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡过程中,p38MAPK途径的作用。方法:流式细胞仪检测SFN对HepG-2细胞凋亡率的影响,Western Blotting方法检测细胞内p38及p-p38蛋白表达。结果:SFN可明显诱导HepG-2细胞凋亡,10、20、40μmol/LSFN作用48h后,对HepG-2细胞的抑制率分别达到27.42%、46.53%、58.92%;10、20、40μmol/L的SFN可上调HepG-2细胞内p-p38蛋白的表达,而对p38的表达无明显影响。结论:SFN可诱导HepG-2细胞的凋亡,而且这一过程与阻断p38MAPK途径有关。     

莱菔硫烷调控RhoA/ROCK信号通路诱导宫颈鳞癌细胞凋亡

目的研究莱菔硫烷对人子宫颈鳞癌细胞系SiHa细胞的作用及相关机制。方法 MTT法检测2.5、 5、 10、 20、 40μmol·L-1莱菔硫烷作用24 h对SiHa细胞增殖的作用,流式细胞术检测细胞凋亡情况。采用RhoA/Rho相关激酶(ROCK)通路抑制剂C3转移酶作为阳性对照,实时定量PCR法检测莱菔硫烷对ROCK mRNA表达的影响,蛋白免疫印迹法检测SiHa细胞中ROCK、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、细胞周期蛋白(cyclin) B1蛋白表达水平。结果 2.5、 5、 10、 20、 40μmol·L-1莱菔硫烷对Si Ha细胞增殖的抑制率分别为(3.87±1.22)%、(16.64±2.47)%、(49.04±2.09)%、(70.00±2.14)%和(86.16±1.97)%,诱导SiHa细胞凋亡率分别为(10.60±1.21)%、(30.67±2.09)%、(55.51±2.54)%、(62.67±3.09)%和(75.31±2.63)%,均呈浓度依赖性(F=12.097、 13.208, P <0.01)。与对照组相比,莱菔硫烷组与C3转移酶组ROCK蛋白和mRNA表达均显著减少, CDK1及cyclin B1蛋白表达显著增加(P <0.05或P <0.01)。结论莱菔硫烷可抑制SiHa细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与抑制RhoA/ROCK通路有关。     

线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分诱导KG1a细胞凋亡中的作用

目的研究线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分(naja naja actra venom component,NNAVC)诱导KG1a细胞凋亡过程中的作用。方法以人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞为研究对象,采用Annexin V-FITC/PI荧光染色法进行凋亡细胞的形态学观察,流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3的活性,ELISA法检测胞质内细胞色素C的表达水平,流式细胞仪分析TRAIL死亡受体(DR4、DR5)和诱骗受体(DcR1、DcR2)的改变。结果 NNAVC作用后,荧光显微镜下可见明显的凋亡细胞,细胞凋亡率随药物作用浓度的增加而升高;Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3蛋白被激活,胞质内细胞色素C的表达明显增加;流式细胞仪检测结果显示,NNAVC具有降低死亡受体DR4和诱骗受体DcR1的表达率,而提高DR5和DcR2的表达水平的作用。结论线粒体凋亡通路和死亡受体通路均参与NNAVC诱导KG1a细胞凋亡的过程,这可能是NNAVC发挥抗白血病作用的机制之一。     

莱菔硫烷对代谢性疾病的调控作用研究进展

近年来,肥胖和糖尿病等代谢性疾病成为威胁我国居民健康的主要公共卫生问题。代谢性疾病的发展过程中,高血脂、胰岛素抵抗和高血糖等代谢紊乱相互交织,导致代谢性疾病的病因及发病机制极为复杂。莱菔硫烷是一种主要存在于绿花椰菜中的植物化学物,具有抗氧化、抗肿瘤和抑菌等多种生物学功能。近期研究显示,莱菔硫烷对代谢性疾病如肥胖症、糖尿病及其多种并发症具有重要的调控作用,未来可能为代谢性疾病的防控提供新靶点。本文从调节脂肪细胞分化、脂质代谢、胰岛素分泌、葡萄糖代谢和抗氧化损伤等方面对莱菔硫烷改善肥胖、糖尿病及其并发症的作用机制进行综述。     

莱菔硫烷对糖尿病及脂肪肝病的调控作用研究进展

莱菔硫烷干预能够降低糖尿病患病风险,主要是通过调控核因子E2相关因子2抑制内皮细胞活化,改善高密度脂蛋白水平来实现。此外,莱菔硫烷通过调控脂质代谢,对脂肪肝病也具有明显的改善作用,其重要途径包括调节氧化物酶体增殖剂激活受体γ、激素敏感性脂肪酶和腺嘌呤核糖核苷酸依赖的蛋白激酶,促进脂肪分解。综上,深入挖掘植物性食源功能成分莱菔硫烷的作用机制,可能是防治糖尿病及脂肪肝病的关键。     

莱菔硫烷调节脂肪肝的药理作用研究进展

莱菔硫烷是一种富含于十字花科植物的天然活性成分,对于脂肪肝具有良好的防治作用。药理研究发现莱菔硫烷通过减少脂肪积累、缓解线粒体功能障碍以及恢复氧化平衡缓解饮食因素引起的代谢相关脂肪性肝病;通过加速体内乙醛的代谢、减轻细胞内的氧化应激、修复肠道屏障功能缓解酒精性脂肪肝。莱菔硫烷缓解代谢相关脂肪性肝病的作用机制研究较多,并体现出明显的优势,综述其调节脂肪肝的药理作用研究进展,以期为新药研发提供理论依据。     

莱菔硫烷对槟榔碱所致人牙周膜干细胞损伤的保护作用

目的:探讨莱菔硫烷(SFN)对槟榔碱所致人牙周膜干细胞(hPDLSCs)损伤的保护作用,并初步分析其发挥作用的分子机制.方法:体外培养hPDLSCs后,用流式细胞仪鉴定其免疫表型,多能分化实验检测分化能力;分别用不同浓度的槟榔碱溶液(0,1,5,10,25μg·ml-1)和莱菔硫烷溶液(0,5,20,40,80μmol...     

莱菔硫烷对帕金森病大鼠脑内多巴胺能神经元的保护作用及机制

目的 观察莱菔硫烷(sulforaphane,SF)对帕金森(PD)病大鼠模型脑内黑质多巴胺能神经元的保护作用.方法 健康成年雄性Wistar大鼠背部皮下注射鱼藤酮制备PD大鼠模型,药物治疗组同时给予大鼠腹腔注射EGCG.采用分光光度法检测大鼠脑内丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH),免疫细胞化学和免疫印记检测大鼠中脑黑质及纹状体中络氨酸羟化酶(TH)的表达变化.结果 Western blot结果显示试验组大鼠脑内中脑和纹状体中TH蛋白表达都比对照组有明显降低(P<0.05);莱菔硫烷药物干预后TH蛋白在中脑和纹状体比试验组明显增高(P<0.05),但是较对照组仍有明显减少(P<0.05).实验组大鼠在给予鱼藤酮背部皮下注射后导致大鼠脑内纹状体中脂质代谢产物MDA含量比对照组明显增加(P<0.01).莱菔硫烷药物干预组大鼠脑内纹状体中MDA明显减少(P<0.05),但较对照组仍明显增加(P<0.05).同时我们发现鱼藤酮背部皮下注射可以导致实验组大鼠脑内纹状体中GSH的含量比对照组明显减少(P<0.01);莱菔硫烷药物干预后大鼠脑内纹状体中GSH含量较实验组明显增加(P<0.05),但较对照组仍明显减少(P<0.05).结论 氧化应激在PD发病中起着非常重要的作用,抗氧化治疗能有效减轻大鼠脑内多巴胺能神经元损伤情况,同时改善PD样症状,为PD的治疗提供了新的靶点.     

莱菔硫烷：一种潜力巨大的天然药物

天然药物疗效显著、不良反应较小,已被证明对包括癌症在内的多种人类疾病有效,在临床应用中越来越广泛。莱菔硫烷[1-异硫氰酸基-4-(甲基亚磺酰基)丁烷]是一种广泛存在于十字花科植物中的天然药物,在西兰花、芥蓝、花椰菜等蔬菜中含量丰富。目前,越来越多的证据表明莱菔硫烷不仅能有效预防和治疗各种癌症,如前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、皮肤癌、膀胱癌和口腔癌等,而且在对抗阿尔茨海默病、帕金森病和多发性硬化症等神经退行性疾病方面有很好的疗效。此外,莱菔硫烷在预防氧化应激、抗炎、抗疲劳等方面也具有很大的潜力。本文就莱菔硫烷的生物活性和作用机制进行综述,并对莱菔硫烷的成药特性和毒性进行探讨。     

拓扑替康对肺癌细胞生长周期的影响及诱导凋亡的作用机制

目的　研究拓扑替康 (topotecan ,TPT)对人肺癌SPC A 1细胞生长周期的影响及诱导凋亡的作用 ,并探讨Caspase 3及Bcl 2在此过程中的作用。 方法　体外培养肺癌细胞 ,分为对照组 (未处理组 )、TPT(5、10、15和 2 0mg·L-1)组、半胱天冬酶 3 (Caspase 3 )特异性拮抗剂Ac DEVD CHO +TPT组 ,加药后培养 2 4h ,TUNEL法观察肺癌细胞凋亡形态学特征 ;流式细胞仪观察细胞生长周期变化并检测凋亡率和肺癌细胞Bcl 2蛋白的表达。结果　TPT (5mg·L-1)处理细胞 2 4h ,流式细胞仪未检测到凋亡峰 ,随着TPT浓度增大 ,凋亡率显著增高 ,各浓度组间差异具有显著性 (P<0 0 1) ;TUNEL及透射电镜检测到典型的凋亡细胞形态学特征 ,凋亡细胞DNA呈梯状电泳 ;流式细胞仪检测到细胞周期发生改变 ,G1期细胞较对照组增多 (P <0 0 1) ,S期细胞减少 (P <0 0 1) ;TPT(2 0mg·L-1)处理细胞后肺癌细胞凋亡率为 11 9%± 2 6% ,高于对照组细胞 (P <0 0 1) ;Bcl 2蛋白阳性表达细胞率为 7 9%± 1 2 % ,较对照组 (44 7%±7 1% )降低 (P <0 0 1) ;Ac EDVD CHO (5 0 μmol·L-1)和TPT(2 0mg·L-1)共同处理细胞 2 4h其凋亡率为 6 1%±1 8% ,较单纯TPT作用组降低 (P <0 0 1) ;Bcl 2蛋白阳性表达率为 3 3 4%± 5 2 % ,较单纯TPT作用组增高     

川芎嗪衍生物影响肝星状细胞凋亡作用及其机制研究

目的研究川芎嗪衍生物H168对大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cells,HSC)凋亡的影响及其作用机制。方法采用细胞乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒观察药物对LDH活性的影响;MTT实验检测药物对细胞增殖的影响;流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染方法检测药物对细胞凋亡率影响;应用Western blot方法观察药物对凋亡相关细胞因子Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的影响。结果细胞毒性实验发现当H168作用终浓度低于150μmol.L-1时,不具有明显细胞毒作用;MTT实验研究发现药物浓度为10μmol.L-1和25μmol.L-1具有抑制细胞增殖的作用;流式细胞仪检测药物对细胞凋亡率的影响,发现H168具有促进HSC凋亡的作用,且呈量效关系;Western blot结果显示H168通过提高Bax/Bcl-2蛋白的比值和Caspase-3蛋白表达促进细胞凋亡。结论 H168具有促进HSC-T6凋亡的作用,这种作用的发挥主要是通过提高Bax/Bcl-2蛋白的比值和Caspase-3蛋白的表达实现的。     

Function of HeLa cell cytoplasm in apoptosis induced by cisplatin in a cell-free system

在构建Ｂｃｌ－２高表达及其对照细胞株基础上，用非细胞体系研究了顺铂诱导的ＨｅＬａ细胞凋亡中细胞质的作用．实验结果显示凋亡细胞胞质提取物可引起正常细胞核的固缩及染色质边缘化，类似完整细胞凋亡的改变，而Ｂｃｌ－２高表达株的胞质提取物具有抗凋亡能力．说明引起凋亡的物质及对抗凋亡的物质在细胞质中都存在，细胞质在顺铂诱导的ＨｅＬａ细胞凋亡中起着较重要的作用．     

PD-L1过表达在DENV-2诱导血管内皮细胞自噬和凋亡中的作用机制

目的　探讨PD-L1过表达在Ⅱ型登革病毒（DENV-2）影响血管内皮细胞自噬和凋亡中的作用及机制。方法　以血管内皮细胞EAhy926为研究对象,以含梯度DENV-2（1×108~2×109 pfu/L）的无血清培养基处理细胞24 h和48 h,同时以无血清培养基处理细胞作为对照组,无血清培养基加入空白孔作为调零孔,MTT法检测细胞增殖活力。以PD-L1过表达慢病毒液和空载慢病毒液处理细胞,分别设空载对照组和转染组。DENV-2（1.2×109 pfu/L）处理细胞12、24、48 h作为DENV-2 12 h组、DENV-2 24 h组及DENV-2 48 h组,同时设置对照组（无血清培养基处理）;另以DENV-2处理空载对照组和转染组48 h,以蛋白印迹法检测LC3B、Beclin-1及Bcl-2蛋白表达变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果　1×108~2×109 pfu/L DENV-2可剂量依赖性抑制EAhy926细胞增殖,DENV-2 24 h和48 h的半数抑制浓度（IC50）分别是1.8×109 pfu/L和1.2×109 pfu/L。与对照组比较,DENV-2 12 h组、DENV-2 24 h组及DENV-2 48 h组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,细胞总凋亡率增加（均P＜0.05）。与空载对照组比较,转染组PD-L1蛋白表达上调（P＜0.01）。DENV-2处理48 h,与空载对照组相比,转染组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,细胞总凋亡率降低（均P＜0.01）。结论　DENV-2通过上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白表达及下调Bcl-2蛋白表达,从而诱导EAhy926细胞自噬和凋亡,而过表达PD-L1可抵抗DENV-2的诱导效应。     

小檗碱改善高糖高脂诱导的胰岛NIT-1细胞凋亡的分子机制

目的观察小檗碱对高脂高糖诱导后NIT-1胰岛β细胞凋亡的改善情况,探讨小檗碱抗凋亡的分子机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,在培养基中加入高糖高脂及小檗碱共同培养24h后,比较不同浓度的小檗碱对体外培养及高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞活力的影响;AnnexinV/PI双标记法流式细胞术检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3mRNA表达水平;免疫荧光法检测caspase-3表达。结果与正常对照组相比,模型组NIT-1细胞凋亡率明显升高(P<0.01),bcl-2mRNA表达明显降低(P<0.01),而bax和caspase-3mRNA表达明显增高(P<0.01),且胞质caspase-3表达增加;与模型组相比,小檗碱组NIT-1细胞凋亡率明显降低(P<0.01),bcl-2mRNA表达增高(P<0.01),而bax和caspase-3mRNA表达降低(P<0.01),小檗碱组胞质caspase-3表达亦降低。结论小檗碱抑制高糖高脂诱导NIT-1细胞的凋亡可能与其激活bcl-2和抑制bax和caspase-3的表达有关。     

三氧化二砷诱导人宫颈癌细胞凋亡及bcl-2高表达对其影响

采用脂染素（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）介导的ＤＮＡ 转染,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹, ＭＴＴ和克隆形成实验,流式细胞术和细胞凋亡原位检测法探讨Ａｓ２Ｏ３ 对人宫颈癌ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞的生物学效应和ｂｃｌ－２ 高表达对这一效应的影响． 结果表明,Ａｓ２Ｏ３ 处理的ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞,存活率和克隆形成能力明显降低,细胞周期的Ｇ１ 期前有低于２ 倍体的凋亡峰,细胞被阻滞在Ｇ２／Ｍ 期,有细胞凋亡时出现的ＤＮＡ 断裂． 而Ａｓ２Ｏ３ 处理的ｂｃｌ－２ 高表达的ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞存活率和克隆形成能力增加,凋亡率减少,Ｇ２／Ｍ 期阻滞程度显著降低． 结果表明,Ａｓ２Ｏ３ 可诱导ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞凋亡,Ｇ２／Ｍ 期阻滞可能是其诱导凋亡的原因之一;ｂｃｌ－２ 高表达可能通过减轻Ｇ２／Ｍ 期阻滞的程度而部分阻止Ａｓ２Ｏ３ 诱导的细胞凋亡．     

土贝母苷甲诱导HeLa细胞周期阻滞和凋亡

目的 :研究土贝母苷甲 (下称苷甲 )抗肿瘤作用的机制 ,探索它对细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 :采用MTT法检测苷甲对细胞生长的抑制作用 ;采用流式细胞术 ,光学、荧光和电子显微镜 ,以及DNA琼脂糖凝胶电泳检查和分析苷甲对细胞周期和细胞凋亡的影响 ;采用蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl 2和bax表达的变化。结果 :苷甲对HeLa细胞的生长有强抑制作用 ,其 2 4、4 8和 72h的IC50 值分别为 35 .7,2 3.6 ,17.4 μmol·L-1。在苷甲的作用下 ,细胞周期阻滞在G2 M期 ,细胞在形态学和生物化学上都出现了细胞凋亡的典型证据。蛋白免疫印迹结果揭示bcl 2下调 ,bax过表达。结论 :苷甲诱导的细胞周期阻滞和凋亡在苷甲的抗肿瘤效果中可能起着重要作用 ,而苷甲诱导的细胞凋亡与bcl 2的下调及bax的过表达密切相关。     

莪术油对直肠癌SW1463细胞株增殖、凋亡及Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨莪术油对直肠癌SW1463细胞株增殖、凋亡及相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2表达的影响。方法 水蒸气蒸馏法提取黔产莪术挥发油,配制成40、80、120、160、200、240、280 mg/L浓度梯度,干预SW1463细胞24、48、72 h,MTT法检测莪术油对SW1463细胞的增殖抑制率;Giemsa染色法观察莪术油对SW1463细胞凋亡形态的影响;蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测Capase-3、Bax与Bcl-2蛋白表达。结果 莪术油对SW1463细胞的增殖有明显抑制作用,并呈现时间-剂量相关性,24、48、72 h的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为144.33、134.11、120.04 mg/L;Giemsa染色可见细胞明显的凋亡形态学特征;莪术油干预SW1463细胞24 h后,与对照组比较,Caspase-3、Bax蛋白表达显著上调、Bcl-2蛋白表达显著下调（P<0.05）。结论 莪术油能明显抑制SW1463细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调Caspase-3和Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达相关。     

白藜芦醇抑制HepG2细胞生长及诱导细胞凋亡的初步研究

目的　研究白藜芦醇 (Res)对人肝癌HepG2细胞生长增殖的影响 ,进而探讨Res诱导HepG2细胞凋亡的作用。方法　用不同浓度的Res处理HepG2细胞 ,MTT法检测Res对HepG2细胞生长增殖的抑制作用 ,通过HE染色、透射电子显微镜、原位末端标记法 (TUNEL)和流式细胞术观察凋亡细胞的形态结构变化以及定性、定量检测细胞凋亡。结果　Res能抑制HepG2细胞的生长增殖 ,并呈浓度依赖性 ;Res能诱导HepG2细胞凋亡。 结论　Res能够通过诱导HepG2细胞凋亡抑制HepG2细胞的增殖。