Nrf2基因敲除加剧单侧输尿管梗阻肾纤维化模型中巨噬细胞介导的炎症损伤作用

目的：研究Nrf2基因敲除对小鼠单侧输尿管梗阻（UUO）肾纤维化模型中炎症损伤的作用及其机制。方法：将实验小鼠分为4组：Nrf2野生型UUO组（Nrf2Wild-type UUO）、Nrf2野生型假手术组（Nrf2Wild-type Sham）、Nrf2敲除型UUO组（Nrf2KO UUO）和Nrf2敲除型假手术组（Nrf2KO Sham）,每组6只。PAS与Masson染色分别用于检测肾组织损伤和总胶原累积程度;免疫组织化学染色检测巨噬细胞标志物CD68、IRF5表达;ELISA检测iNOS水平;qRT-PCR检测促炎症基因IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达;Western blot检测IRF5蛋白的表达。结果：PAS染色显示,Nrf2基因敲除没有明显引起肾组织损伤,但构建UUO模型后,其肾组织损伤明显加剧。Masson和免疫组织化学染色结果显示,Nrf2基因敲除可加重UUO模型中肾间质纤维化程度,并促进CD68阳性的巨噬细胞大量浸润,且ELISA结果显示iNOS表达水平也明显升高（P＜0.05）。深入研究发现,Nrf2KO UUO组与Nrf2Wild-type UUO组相比,肾组织中促炎基因IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达水平明显升高（P＜0.05）。同时,Western blot和免疫组织化学染色结果显示,Nrf2基因敲除可增加IRF5蛋白的表达（P＜0.05）。结论：Nrf2基因敲除加剧了UUO肾纤维化模型中的炎症损伤作用,其机制可能是通过促进IRF5介导的炎症型巨噬细胞浸润,进而增加炎症因子的合成与释放。     

脂氧素A4通过ERK1/2通路调控气道上皮细胞上皮间质转化

目的：研究脂氧素A4（LXA4）对气道上皮细胞上皮间质转化（EMT）和卵清蛋白（OVA）诱导的哮喘小鼠模型气道重塑的影响及其可能机制。方法：将BALB/c小鼠分为4组：对照组、OVA组、LXA4组和OVA+LXA4 组,HE和PAS染色观察肺组织病理改变。将BEAS-2B细胞分为6 组：对照组、白介素（IL）-4 组、IL-13组、转化生长因子β1（TGF-β1）组、IL-4/IL-13/TGF-β1联合刺激组和LXA4 预处理组。实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏附蛋白（E-cadherin）mRNA水平;Western blot检测α-SMA、E-cadherin及ERK1/2、pERK1/2蛋白表达水平。结果：小鼠体内实验中,与对照组相比,OVA诱导哮喘小鼠模型出现肺泡壁增厚、间质水肿、炎性细胞浸润和肺组织破坏,肺组织PAS染色强阳性,提示杯状细胞化生和气道黏液分泌增加,而LXA4预处理可以明显改善述OVA诱导的小鼠气道病变。BEAS-2B细胞实验中,TGF-β1组与对照组相比,细胞连接变得松散,细胞间隙增加,形态呈长梭形;IL-4/IL-13/TGF-β1联合刺激组较TGF-β1组细胞形态改变更为明显;与对照组相比,TGF-β1组细胞E-cadherin mRNA和蛋白表达显著降低,α-SMA mRNA和蛋白表达明显升高,pERK蛋白表达增加;与TGF-β1 组比,IL-4/IL-13/TGF-β1联合刺激组α-SMA mRNA和蛋白表达明显升高,E-cadherin mRNA和蛋白表达明显降低,pERK蛋白表达增加更为明显;而LXA4能抑制TGF-β1和IL-4、IL-13共刺激诱导的Beas 2B细胞α-SMA mRNA和蛋白表达升高,E-cadherin mRNA和蛋白表达降低以及pERK表达增加。结论：LXA4可以抑制OVA诱导哮喘小鼠的气道重塑。Th2源性细胞因子IL-4和IL-13提供的慢性炎症环境有利于TGF-β1诱导气道上皮细胞发生EMT。LXA4能抑制气道上皮细胞EMT,这一过程可能依赖于阻断ERK1/2磷酸化。     

LXA4通过p38MAPK/Nrf2信号通路诱导H9c2心肌细胞HO-1高表达

目的:探讨脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)诱导心肌细胞H9c2中血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)-1表达可能涉及的信号转导通路?方法:分别用核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2 related factor 2,Nrf2)的抑制剂ATRA?p38MAPK的抑制剂SB203580?LXA4联合ATRA?LXA4联合SB03580预处理H9c2细胞后进行缺氧/复氧处理,RT-PCR?Western blot?免疫荧光等检测HO-1?Nrf2以及p38MAPK mRNA和蛋白表达的变化?结果:与只行缺氧/复氧处理的细胞相比,LXA4预处理的H9c2细胞HO-1 mRNA和蛋白的表达明显升高(P < 0.05),而ATRA?SB203580分别抑制了Nrf2的聚集和p38MAPK的磷酸化(P < 0.05),从而抑制了LXA4对HO-1的诱导(P < 0.05)?结论:LXA4预处理诱导心肌细胞H9c2的HO-1高表达,具有抗缺氧/复氧损伤的作用,其机制与p38MAPK/Nrf2信号通路有关?     

miR-28-5p靶向Nrf2调控LPS诱导的急性肺损伤机制研究

目的 探究miR-28-5p在LPS诱导的急性肺损伤（acute lung injury,ALI）进程中的功能和分子机制。方法 利用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠急性肺损伤3h,6h,12h,取肺组织进行荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,RT-PCR）检测miR-28-5p表达;同时体外利用LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7发生炎症反应,RT-PCR检测细胞中miR-28-5p表达;巨噬细胞中过表达miR-28-5p mimic后利用LPS刺激,RT-PCR检测巨噬细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）表达情况;RT-PCR和蛋白免疫印迹（western blotting,WB）检测抗氧化关键分子核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶（HO-1）、醌氧化还原酶（NQO1）表达水平;Targetscan 7.0预测miR-28-5p靶向基因,突变结合位点后,并通过荧光素酶报告基因系统检测miR-28-5p对靶基因的转录调控作用。结果 LPS诱导小鼠ALI 3h,6h,12h,肺组织中miR-28-5p的表达水平明显升高（***P＜0.001）;LPS刺激巨噬细胞炎症反应时,细胞内miR-28-5p的表达水平也明显升高（***P＜0.001）;巨噬细胞中过表达miR-28-5p mimic后,炎症因子TNF-α（###P＜ 0.001）和IL-1β（&&&P＜0.001）表达水平明显升高;同时抗氧化关键分子Nrf2（###P＜ 0.001）及其下游HO-1（&&&P＜0.001）、NQO1（$$P＜0.01）表达的明显降低;Targetscan 7.0预测发现miR-28-5p靶向Nrf2基因3'' UTR序列,荧光素酶报告基因实验进一步明确miR-28-5p通过靶向 基因3'' UTR序列调控其转录。结论 miR-28-5p在LPS诱导的ALI中表达上调,并进一步加剧ALI病理进程,其作用机制可能是通过靶向巨噬细胞Nrf2,从而减弱胞内抗氧化能力,促进炎症因子分泌和巨噬细胞的活化。     

查耳酮衍生物L2H24对H2O2诱导损伤的心肌细胞的保护作用

目的：探讨查耳酮衍生物L2H24 对H2O2 诱导氧化损伤的心肌细胞的抗氧化保护作用及其相关分子机制。方法：MTT法检测大鼠心肌细胞H9c2 活性;集落克隆实验检测细胞增殖能力;倒置显微镜下观察细胞焦亡形态学变化;硫代巴比妥酸显色反应检测细胞中脂质过氧化MDA水平;Western blot法检测HO-1、核/浆Nrf2、Caspase-1 p48、Caspase-1 p20、IL-1β的表达水平。结果：L2H24能上调H2O2氧化损伤的H9c2细胞的存活率（P ＜0.05）,促进其细胞集落形成,降低其MDA水平（P ＜0.05）,减少细胞中Caspase-1 p48、Caspase-1 p20、IL-1β的表达水平（P ＜0.05）,改善细胞焦亡现象;能促进细胞中Nrf2易位入核,并上调其下游抗氧化蛋白HO-1的表达水平（P ＜0.05）,对H2O2诱导氧化损伤的心肌细胞起到保护作用。结论：查耳酮衍生物L2H24具有抗氧化损伤作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

IL-27通过STAT3信号通路改善脂多糖诱导的小鼠急性肺炎

目的：探讨IL-27通过调控STAT3信号通路在脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺炎中的作用。方法：32只雄性小鼠随机分为正常对照组、LPS组、LPS+IL-27组、LPS+IL-27抗体组,每组8只。麻醉处死后取小鼠肺脏,HE染色观察各组小鼠肺组织损伤情况;qRT-PCR检测各组小鼠肺组织及血清中STAT3、SOCS3的mRNA表达水平;Western blot检测各组小鼠肺组织中STAT3、p-STAT3、SOCS3的蛋白表达水平;采用ELISA法分别检测肺组织匀浆及血清中TNF-α、IL-1β、IL-10、TGF-β1的表达水平。免疫组织化学及Western blot检测TNF-α、IL-1β在肺组织中的蛋白表达。结果：HE染色结果发现,正常对照组,LPS组和LPS+IL-27抗体组肺泡结构被破坏,肺泡壁弥漫性增厚,有明显的炎性细胞浸润;LPS+IL-27组病理改变较LPS组明显减轻,炎性细胞浸润减少。与正常对照组比,LPS组和LPS+IL-27抗体组小鼠肺组织STAT3、p-STAT3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;LPS+IL-27组较LPS组和LPS+IL-27抗体组显著降低（P＜0.05）,LPS+IL-27组SOCS3表达水平显著高于LPS+IL-27抗体组（P＜0.05）。各组小鼠肺组织及血清TNF-α、IL-1β表达水平较正常对照组均显著升高（P＜0.05）;LPS+IL-27组TNF-α、IL-1β表达水平较LPS组和LPS+IL-27抗体组显著降低（P＜0.05）;LPS组和LPS+IL-27抗体组IL-10表达水平均显著高于正常对照组（P＜0.05）;LPS+IL-27组IL-10、TGF-β1的表达水平均显著高于LPS+IL-27抗体组（P＜0.05）。免疫组织化学结果显示,与正常对照组比,LPS组和LPS+IL-27抗体组TNF-α阳性表达主要表达在细胞浆中,IL-1β阳性表达主要表达与细胞膜与细胞浆中,Western blot结果发现TNF-α、IL-1β在肺组织中均呈高表达（P＜0.05）;LPS+IL-27组TNF-α、IL-1β的表达水平较LPS组和LPS+IL-27抗体组显著降低（P＜0.05）。结论：外源性IL-27可能通过抑制STAT3信号通路相关蛋白磷酸化水平改善LPS诱导的小鼠急性肺炎。     

伊马替尼抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症表型

【目的】探讨伊马替尼（Ima）在体外对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症表型的影响。【方法】RAW264.7细胞在LPS（0.1μg/mL）或/和Ima（1μmol/L,5μmol/L）处理后,通过Q-PCR方法检测细胞因子IL-1β、IL-10、CCL2、iNOS、TNF-α和Arg1的mRNA表达变化;采用Western Blot检测iNOS蛋白表达变化以及NF-κB和MAPK信号通路活化情况;利用ELISA法检测细胞上清IL-1β、CCL2、IL-10和TNFα的蛋白表达情况。【结果】与对照组相比较,LPS刺激8h后,RAW264.7细胞内的炎症指标IL-1β、CCL2、iNOS和TNF-α的mRNA水平显著升高（P<0.001）以及抗炎指标IL-10的mRNA水平也明显升高（P<0.001）;LPS刺激24h后,细胞上清中IL-1β、IL-10、CCL2和TNF-α的蛋白水平显著上升（P<0.001）,细胞内iNOS蛋白表达以及p65,p38,ERK和AKT的磷酸化水平显著增加。和LPS组相比,Ima提前处理后,IL-1β、CCL2、iNOS和TNF-α的mRNA及蛋白水平显著下降（P<0.01,P<0.001）而IL-10的mRNA及蛋白水平显著升高（P<0.001）,这种抑制作用具有剂量依赖性。Ima的预处理抑制了LPS诱导的p65,p38,ERK和AKT磷酸化。单独用Ima处理RAW264.7细胞后,细胞的功能状态未见明显的改变。【结论】伊马替尼可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症表型,这种作用与抑制NF-κB和MAPK信号通路的过度激活有关。     

脂氧素A4调控mRNA-29b保护脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的机制研究

目的探讨脂氧素A4（LXA4）调控miRNA-29家族分子保护脂多糖（LPS）诱导大鼠急性肺损伤（特征性表现为急性呼吸窘迫综合征）的机制。方法将30只SD大鼠按随机数字表法分为LPS组（按20mg/kg尾静脉注射LPS）、LPS+LXA4组（按20mg/kg尾静脉注射LPS6h后,再按2滋g/kg尾静脉注射LXA4作用2h）和对照组（予等量0.9%氯化钠注射液）,每组10只。麻醉处死大鼠取肺,左肺用于HE染色和ELISA法检测促炎因子（TNF-α、IL-6）水平,右肺用于RT-PCR法检测miRNA-29家族表达水平。结果LPS组大鼠肺组织切片可见明显的炎症改变,肺损伤评分及肺组织内TNF-α、IL-6水平较对照组均明显升高（均P＜0.05）。LPS+LXA4组大鼠肺组织切片可见炎症反应减轻,肺损伤评分及肺组织内TNF-α、IL-6水平较LPS组均明显下降（均P＜0.05）。RT-PCR结果显示,LPS组大鼠肺组织内miRNA-29a、miRNA-29b表达水平均明显升高（均P＜0.05）,LPS+LXA4组miRNA-29b表达水平明显下降（P＜0.05）。结论miRNA-29a、miRNA-29b可能在LPS诱导的大鼠急性肺损伤炎症发生过程中起着调节作用,LPS可能通过下调miRNA-29b表达来发挥促炎症消退的作用。     

大鼠液压冲击脑损伤Nrf2、HO-1和NQO-1动态表达变化及意义

目的 探讨大鼠液压冲击伤后水肿脑组织核因子2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1(NADPH quinineoxidoreductase-1,NQO-1)的表达变化及其意义.方法 成年雄性SD大鼠56只制作液压冲击颅脑损伤模型,术后1h、6h、12 h、24 h、3d、7d用干湿质量法测定脑组织含水量,Westernblot测定Nrf2胞浆、胞核蛋白以及HO-1、NQO-1蛋白;用实时荧光定量PCR测定Nrf2 mRNA表达.结果 自冲击伤后6h,脑组织含水量开始增加,24h达高峰,持续至3d,然后开始下降(P＜0.05).组织学观察印证了脑水肿趋势.Western blot检测结果显示胞浆Nrf2蛋白于伤后12 h开始持续降低,而胞核Nrf2蛋白则于1h开始升高,24 h达到高峰,3d时降低,7d后明显降低,但仍高于NC组(P＜0.05).HO-1和NQO-1蛋白表达与胞核Nrf2蛋白趋势一致.实时荧光定量PCR显示TBI组术后各时间点Nrf2 mRNA表达水平无明显变化(P＞0.05).结论 液压冲击伤后出现核因子Nrf2转位激活,可能通过上调HO-1、NQO-1蛋白表达发挥神经保护作用.     

法舒地尔对软骨细胞基质降解的影响及其机制

目的：研究法舒地尔对大鼠软骨细胞的基质降解的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：用CCK-8检测法舒地尔是否具有毒性并确定合适的药物浓度。分别按空白组、法舒地尔组（10 μmol/L）、IL-1β组（10 ng/mL）和IL-1β（10 ng/mL）+法舒地尔组（10 μmol/L）对细胞进行分组处理。使用硝酸还原酶法测定NO水平;Western blot检测COX-2、iNOS、MMP-13、p-MYPT、ROCK1、ROCK2、p-Erk/Erk、p-JNK/JNK与p-p38/p38水平;qRT-PCR测定MMP-13和二型胶原（Collagen-II）mRNA表达;细胞免疫荧光检测MMP-13的表达水平。结果：与IL-1β组比,IL-1β+法舒地尔组ROCK1、ROCK2和p-MYPT受到抑制（P＜0.05）;与IL-1β组比,IL-1β+法舒地尔组的COX-2、NO、iNOS和MMP-13的表达受到显著抑制（P＜0.05）;IL-1β组比,IL-1β+法舒地尔组的p-Erk、p-JNK、p-p38表达降低,并且Erk、JNK与p38磷酸化水平降低（P＜0.05）;与IL-1β组比,IL-1β+法舒地尔组二型胶原（Collagen-II）表达得到上调（P＜0.05）。结论：法舒地尔可抑制IL-1β诱导的软骨细胞基质降解,该作用可能通过抑制MAPK信号通路来实现。     

Shp-2/NF-κB途径介导脂氧素A4对IL-1β促肾小球系膜细胞IL-6合成作用的抑制

目的 :研究脂氧素A4 (LXA4 )是否拮抗IL 1β促进肾小球系膜细胞IL 6合成的作用 ,并探讨LXA4 作用的信号转导机制。方法 :用不同浓度的LXA4 预处理培养的大鼠肾小球系膜细胞 ,再加入IL 1β共同孵育一定时间 ;或单用IL 1β刺激肾小球系膜细胞。用ELISA法检测培养上清中的IL 6蛋白表达量 ;用RT PCR法检测IL 6的mRNA表达量 ;用免疫沉淀与印迹法检测含Src同源区 2 (SH2 )蛋白酪氨酸磷酸酶 - 2 (Shp 2 )的表达 ;用凝胶电泳迁移率试验 (EMSA)检测NF κB的DNA结合活性。结果 :LXA4 呈剂量依赖性地抑制IL 1β诱导的系膜细胞分泌的IL 6蛋白及mRNA表达 ,拮抗IL 1β诱导的Shp 2磷酸化与NF κB的活化。 结论 :LXA4 能够拮抗IL 1β对肾小球系膜细胞IL 6合成的促进作用 ,其机制依赖于Shp 2 NF κB信号转导途径     

柴胡皂苷B通过Nrf2/ARE信号缓解Caco-2细胞氧化损伤

目的 探讨柴胡皂苷B(saikosaponin B,SSB)对棕榈酸(palmitic acid,PA)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS联合诱导的人结直肠腺癌细胞(Caco-2)屏障损伤的保护作用及潜在机制。方法 利用Caco-2细胞构建肠道屏障模型,采用随机数字表法将细胞分为对照组(CON组,n=6),模型组(PA+LPS组,n=6)和柴胡皂苷B干预组(PA+LPS+SSB组,n=6),通过测量跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)值和紧密连接蛋白的表达水平,评价SSB对Caco-2细胞屏障损伤的保护作用。通过检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)和脂质过氧化物含量评估细胞氧化压力。通过定量聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法检测SSB对Nrf2/ARE信号通路相关基因及蛋白的表达水平的影响。通过敲降Nrf2验证SSB改善细胞屏障功能是否通过Nrf2/ARE途径。结果 PA+LPS+SSB组Caco-2细胞的TEER值、ZO-1和Occludin-1的蛋白水平显著高于PA+LPS组...     

N-乙酰半胱氨酸对哮喘小鼠模型气道炎症和氧化应激的影响

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对哮喘模型小鼠气道炎症和氧化应激反应的影响及可能的机制.方法:选择18只SPF级BALB/c雌性小鼠,随机均分为对照组、哮喘组、N-乙酰半胱氨酸组,每组6只.哮喘组、N-乙酰半胱氨酸组雾化激发构建小鼠哮喘模型,N-乙酰半胱氨酸组每次雾化开始前30 m...     

转录因子GATA结合蛋白3对哮喘易感基因ADAM33表达的影响

目的:探讨转录因子GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)对解整合素-金属蛋白酶33(a disintegrin and metalloproteinase 33,ADAM33)基因启动子活性及mRNA表达的影响。方法:以人正常肺上皮BEAS-2B细胞DNA为模板经PCR扩增得到ADAM33基因启动子区1 953 bp片段。通过双酶切、连接、转化等步骤将该片段克隆至pGL3-Basic载体构建ADAM33启动子重组质粒,并将其转染至人HEK293T、BEAS-2B细胞中;利用双荧光素酶报告基因技术检测HEK293T、BEAS-2B细胞中所构建的质粒启动子活性。将HEK293T、BEAS-2B细胞分为pcDNA-GATA3组和pcDNA3.1对照组,分别转染GATA3过表达质粒和空白对照质粒,用双荧光素酶报告基因技术检测荧光素酶活性;用实时荧光定量PCR检测BEAS-2B细胞中ADAM33 mRNA相对表达水平。结果:通过PCR、双酶切和测序鉴定,成功构建含ADAM33启动子片段的重组质粒;重组质粒的ADAM33启动子活性较pGL3-Basic对照组...     

Role of liver X receptors alpha agonist on expressions of LPS-induced inflammatory response associated factor IRAK-4 and NF-kappaB in Kupffer cells

Objective： To explore the role of activated liver X receptor α （LXRα） on the expressions of interleukin-1 receptor associated kinase-4 （IRAK-4） and NF-kappaB （NF-κB） in the inflammatory response which induced by LPS in the Kupffer cells and to investigate the possible mechanisms of LXRα negative regulation of inflammatory response. Methods： The Kupffer cells were isolated from male Kunming mice by collagen perfusion in situ. And these cells were divided into 4 groups： normal control group, LPS treatment group, LXRct agonist T0901317 treatment group, LPS and T0901317 combined treatment group. The LPS treatment group were treated with a final concentration of 1 μg/ml LPS in RPMI 1640 and cultured for 6 h, the T0901317 treatment group were treated with a final concentration of 5 μg/ml in RPMI 1640 and cultured for 24 h, and the combined treatment group received pre-culture for 24 h with a final concentration of 1μg/ml T0901317 in RPMI 1640 and then cultured for 6 h with a final concentration of 5 μg/ml LPS in RPMI 1640. All groups were cultured for 30 h. The expression of LXRα, IRAK-4 and NF-κB at mRNA and protein levels were detected by real-time PCR and Western blotting, and the TNF-α and IL-1β levels were detected by ELISA. Results： The levels of LXRα mRNA and protein were highest in T0901317 group, and lowest in LPS group （P〈0.05）. The level of IRAK4 and NF-κB mRNAs and proteins were evidently lower in the Combined-treated group than in LPS group （P〈0.05）. And the level of TNF-α and IL-1 were observed highest in LPS group （P〈0.05）, but no difference among the Control group, T0901317 group and Combined-treated group （P〉0.05）. Conclusion： These date suggest that the LXR agonists can effectively up-regulate the expressions of LXRα mRNA and protein and inhibit the inflammatory response. This may be via down-regulating the expressions of IRAK4 and NF-κB at mRNA and protein levels.     

外源性胍丁胺抑制脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤

目的研究胍丁胺对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤的影响,并探究其与NF-κB、MAPK通路及活性氧（ROS） 的产生是否相关。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）。MTT法检测0~4 mmol/L胍丁胺作用24 h对HUVECs细胞 活力的影响。HUVECs细胞机分为：①空白对照组;②脂多糖（10 μg/mL）组;③胍丁胺干预组：脂多糖（10 μg/mL）+胍丁胺 （0.125、0.5、1 mmol/L）。ELISA 法检测24 h 细胞上清中可溶性细胞间粘附分子-1（sICAM-1）、可溶性血管间粘附分子-1 （sVCAM-1）、可溶性E-选择素（sE-selectin）及单核细胞趋化因子-1（MCP-1）水平,确定胍丁胺最适干预浓度（1 mmol/L）。后续 实验中HUVECs细胞随机分为：对照组、脂多糖（10 μg/mL）组、胍丁胺（1 mmol/L）组及脂多糖（10 μg/mL）+胍丁胺（1 mmol/L） 共同组,作用1、6、24 h;抑制剂组即在脂多糖刺激前1 h,用10 μmol/L NF-κB（PDTC）、ERK1/2（PD98059）及p38（SB203580）抑 制剂进行预处理。qRT-PCR法检测ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、MCP-1、血红素氧合酶（HO-1）、醌氧化还原酶（NQO1）mRNA 表达水平;DCFH-DA作为荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平;Western blot 法检测细胞VCAM-1、ICAM-1、p65、磷酸化- p65（p-p65）、IκBα、p-IκBα、ERK、p-ERK、p38、p-p38、JNK、p-JNK蛋白表达水平。结果（1）HUVECs经10 μg/mL脂多糖刺激24 h 后,上清sVCAM-1、sICAM-1、sE-选择素、MCP-1 含量明显升高（P<0.05）,细胞内ROS明显增加（P<0.05）;刺激6 h 后各因子 mRNA水平升高（P<0.05）;（2）胍丁胺（1 mmol/L）干预后上述指标显著下调（P<0.05）,这与p38、ERK及NF-κB信号通路抑制剂 预处理细胞后的抑制效应相似;（3）胍丁胺干预组6 h HO-1 mRNA表达较脂多糖组明显增加（P<0.05）,而NQO-1无明显变化; （4）胍丁胺明显抑制脂多糖刺激引起的细胞内p38、ERK、核内p65（Ser536）与胞浆IκBα磷酸化,并上调胞浆IκBα蛋白水平。结 论胍丁胺可能通过抑制NF-κB、MAPK通路的激活下调粘附分子及趋化因子水平,并增强HO-1表达以减少活性氧产生对抗脂 多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤。     

脂多糖及TOLL样受体4阻断剂对蜕膜细胞中孕激素受体、IL-1β及COX-2的影响

目的:研究脂多糖(LPS)或拮抗剂TOLL样受体4阻断剂(Toll-like receptor 4 antagonist,TLR4 mAb)作用于体外培养的蜕膜细胞后其孕激素受体(progesterone receptor,PR)、IL-1β及COX-2的表达改变,以探讨LPS及其拮抗剂对蜕膜细胞中PR的影响,以及PR与炎症因子之间的关系。方法:分离培养早孕人蜕膜细胞,将细胞培养至第4代时随机分为6组,对照组:仅加培养液。研究1组:加入终质量浓度为100 ng/mL的LPS。研究2组:加入终质量浓度为1 μg/ mL TLR4 mAb。研究3组:加入终质量浓度为3 μg/mL TLR4 mAb。研究4组:终质量浓度为1 μg/mLTLR4 mAb预处理24 h,再加入质量浓度为100 ng/mL的LPS。研究5组:终质量浓度为3 μg/mL TLR4 mAb预处理24 h,再加入质量浓度为100 ng/mL的LPS。均培养24 h 后,采用RT-PCR半定量技术检测蜕膜细胞中PR,IL-1β及COX-2mRNA的表达情况。结果: LPS使蜕膜细胞中PR mRNA的表达下调(P<0.05),使IL-1β和COX-2 mRNA的表达上调(P<0.05);TLR4 mAb则使LPS作用后的蜕膜细胞中PR mRNA的表达上调(P<0.05)、IL-1βmRNA的表达下调(P<0.05);高质量浓度TLR4 mAb使COX-2 mRNA的表达下调(P<0.05)。结论:LPS作用于体外培养的人蜕膜细胞后,PR mRNA表达下调;IL-1β,COX-2的mRNA表达增加;使用TLR4 mAb后能拮抗LPS对蜕膜细胞中PR,IL-1β以及COX-2的作用。