超高效液相色谱-串联质谱法快速测定人血浆中氯吡格雷及其代谢物浓度

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中的氯吡格雷(Clo)及其非活性代谢物(CCAM)和活性代谢物(CATM)的浓度。方法 5名健康受试者单剂量口服Clo片300 mg,分别经时采集肘静脉血样进行药动学分析。血浆样品沉淀蛋白后经WATERS ACQUITY UPLC HSS T3柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm)分离,流动相为水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱。采用电喷雾电离源(ESI)正离子模式、多反应监测(MRM),用于定量分析的离子通道分别为m/z 322.1→211.8(Clo),m/z 356.0→154.9(CATM),m/z 308.3→198.0(CCAM),m/z 253.1→180.0(内标卡马西平)。结果血浆中Clo、CATM和CCAM线性关系良好(r>0.99),日内、日间精密度(RSD)小于12.6%,准确度(RE)在-3.6%~7.6%之间。药动学结果显示,健康受试者单剂量口服Clo片300 mg后,Clo、CATM和CCAM的ρmax分别为(26.57±24.06)、(38.12±22.80)和(8 128.00±1 624.58)ng·m L-1,tmax分别为(1.8±0.8)、(2.0±1.0)和(2.0±1.0)h,AUC0-∞分别为(67.74±48.44)、(212.16±122.58)和(46 982.31±14 496.05)ng·m L-1·h。结论本方法操作简便、灵敏度高、分析时间短,适用于Clo药动学研究和常规血药浓度监测。     

UPLC-MS/MS法同时测定人血浆中氯吡格雷及其代谢物的浓度

目的:建立同时测定人血浆中氯吡格雷(CLO)及其活性代谢产物(CATM)、非活性代谢产物(CCAM)浓度的方法,并用于药动学研究。方法:取烷化剂2-溴-3′-甲氧基苯乙酮(MPB)保护的血浆样品,经乙腈沉淀蛋白后,以卡马西平为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3,流动相为水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱,流速为0.50 ml/min。采用电喷雾电离源(ESI),多反应监测(MRM)方式进行正离子监测,用于定量分析的离子对分别为m/z 322.1→211.8(CLO)、m/z 504.1→155.0(CATM烷化衍生物,CATMD)、m/z 308.3→198.0(CCAM)、m/z 273.2→194.3(内标)。结果:CLO、CATMD、CCAM血药浓度分别在0.03~20.00、0.30~200.00、10.00~10 000.00 ng/ml范围内线性关系良好;日内、日间RSD<15%,相对误差(RE)为-3.5%~5.7。5名健康受试者单剂量口服CLO 300 mg后,CLO、CATM、CCAM的cmax分别为(7.89±5.46)、(15.58±8.08)、(8 023.33±1 047.39)ng/ml,tmax分别为(1.25±0.43)、(1.25±0.43)、(1.67±0.29)h,t1/2分别为(2.31±0.61)、(0.64±0.08)、(6.53±2.55)h,AUC0-t分别为(17.19±14.59)、(21.39±9.58)、(30 648.85±8 026.63)ng·h/ml。结论:该方法操作简便、灵敏度高、分析时间短,适用于CLO及其代谢物血药浓度测定及药动学研究。     

液-质联用测定大鼠血浆中氯吡格雷羧酸代谢物SR26334浓度及其药动学研究

目的建立大鼠血浆氯吡格雷羧酸代谢物SR26334的液-质联用检测方法,研究氯吡格雷代谢物SR26334的药代动力学。方法血浆经乙酸乙酯和正己烷提取,以ZORBAX SB-C18为色谱柱;流动相为乙腈-0.1%甲酸,流速为0.3mL·min-1;通过电喷雾离子源,以多反应监测方式(MRM)进行离子检测,通道为(m/z)为m/z 308.1→m/z 198.1(SR26334)和m/z 383.2→337.0(氯雷他定)。6只雄性大鼠单剂量灌胃给予7.5mg·kg-1氯吡格雷,分别在给药后多点尾静脉采血;用该方法检测血浆中SR26334的浓度。用DAS(数据采集系统)计算药代动力学参数。结果 SR26334浓度在1～5000ng·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9991);最低检测限为1ng·mL-1;方法回收率大于97%,提取回收率大于85%,日内和日间RSD小于8%。结论本方法准确可靠、简便快速,适用于大鼠血浆SR26334浓度的测定及其药代动力学研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中氯吡格雷的浓度及其药动学研究

目的:建立以高效液相色谱串联质谱电喷雾检测(LC-MS/MS)法测定人血浆中氯吡格雷浓度的方法,并研究其在健康人体内的药动学。方法:以噻氯匹定为内标,血浆样品经液-液萃取后,采用汉邦-C18柱进行分离,通过三重四极杆串联质谱仪,以多反应监测(MRM)方式进行测定。结果:氯吡格雷血药浓度在10～10000pg.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9992);平均相对回收率在98.7%～100.8%之间,日内、日间RSD均≤13.01%。结论:本方法快速、简便、准确、灵敏,适用于氯吡格雷的人体药动学研究。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆氯吡格雷浓度及其生物等效性评价

目的:建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血浆中氯吡格雷的浓度,研究2种硫酸氢氯吡格雷片的人体药动学及相对生物利用度。方法:血浆样品中加入内标美利曲辛,经乙腈沉淀蛋白提取,采用液相色谱-串联质谱法。用建立的方法测定20例健康男性受试者单剂量口服硫酸氢氯吡格雷受试制剂或参比制剂后的血药浓度,求得药动学参数,并对2种制剂的生物等效性进行评价。结果:在0.02～20 ng·mL-1内呈良好的线性关系,方法回收率98.4%～103.2%,日内、日间RSD均小于15%。单次口服75 mg硫酸氢氯吡格雷受试制剂或参比制剂后的Cmax分别为(1.9±1.5)ng·mL-1和(1.8±1.1)ng·mL-1;tmax分别为(0.8±0.5)h和(1.0±0.8)h;t1/2分别为(3.4±1.6)h和(3.5±1.5)h;AUC(0-48)分别为(4.4±4.3)h·ng·mL-1和(4.4±4.6)h·ng·mL-1;AUC(0-∞)分别为(4.7±4.4)h·ng·mL-1和(4.7±4.7)h·ng·mL-1。受试制剂对参比制剂的相对生物利用度为(98.2±32.8)%。结论:该方法灵敏,无杂质干扰。测得的受试制剂与参比制剂的主要药动学参数之间无明显差异,表明2种制剂在人体内生物等效。     

LC-MS/MS法测定人血浆中氯吡格雷活性代谢物衍生物浓度的不确定度评定

目的:评定液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法测定人血浆中氯吡格雷活性代谢物衍生物(CAMD)浓度的不确定度。方法:对LC-MS/MS法测定人血浆中CAMD浓度的整个过程进行分析,对测定过程中的测量重复性、称量、工作液配制、生物样品制备、回收率、仪器允差和标准曲线拟合等因素引起的不确定度分别进行了评定,最后计算合成不确定度并进行扩展。结果:血浆CAMD低(0.107ng/ml)、中(4.467ng/ml)、高(155.667ng/ml)质量浓度质控的扩展不确定度分别为0.010 2、0.188、6.413ng/ml(k=2,P=95%)。结论:LC-MS/MS法测定人血浆中CAMD的不确定度在低浓度时主要由曲线拟合引入,在中浓度和高浓度时主要由生物样品配制、萃取过程、对照品配制和仪器允差引入。     

肠道菌群对硫酸氢氯吡格雷及其活性代谢产物在大鼠体内药动学的影响

目的：探究肠道菌群变化对硫酸氢氯吡格雷及其活性代谢产物在大鼠体内药动学的影响。方法：24只健康大鼠随机分为益生菌组、抗生素组和对照组,每组8只,分别灌胃双歧杆菌乳杆菌三联活菌（0.8 g·kg^-1）、阿莫西林克拉维酸钾片（125 mg·kg^-1）和等体积的纯化水,连续7 d。第8天给予硫酸氢氯吡格雷片,并于给药前和给药后不同时间点取血于含有衍生试剂的抗凝管中,LC-MS/MS法测定血药浓度,绘制药时曲线,使用DAS 2.1.1拟合药动学参数,SPSS 21.0进行统计学比较。结果：益生菌组、抗生素组和对照组硫酸氢氯吡格雷和活性代谢产物衍生物（CAMD）的主要药动学参数AUC_0-t、AUC_0-∞、t_1/2、t_max、CL、V、C_max均没有统计学差异（P>0.05）。结论：肠道菌群变化对硫酸氢氯吡格雷及其活性代谢产物的药动学参数没有影响。     

硫酸氢氯吡格雷片在PCI术后患者体内的药动学研究

目的建立HPLC法测定人血清中氯吡格雷及其羧酸代谢物SR26334,研究硫酸氢氯吡格雷片在PCI术后患者体内的药动学情况。方法采用CLC-ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–0.1%甲酸溶液(60∶40);检测波长:235 nm;体积流量:1.0 m L/min;柱温:40℃;进样体积10μL。收集到7例PCI术后口服硫酸氢氯吡格雷片75 mg/d超过7 d的患者,在当天早上服药后0、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12、16、24 h从静脉采血,检测氯吡格雷和SR26334的血药浓度,制备平均药时曲线,使用DSA 2.0计算氯吡格雷和SR26334的药动学参数。结果氯吡格雷、SR26334在0.2~8μg/m L线性关系良好,定量限均为0.2μg/m L。绝对、相对回收率均大于80%,日内、日间精密度RSD值均小于5%。氯吡格雷、SR26334的C_(max)、t_(max)、t_(1/2)分别为(65±0.57)、(0.77±0.22)μg/m L,(3.02±0.69)、(2.88±0.48)h,(7.66±3.65)、(8.52±3.37)h。结论本方法简便、快速,适用于硫酸氢氯吡格雷片血药浓度的临床监测。     

HPLC-MS-MS法检测人血浆中氯吡格雷的浓度

目的:建立HPLC-MS-MS法测定人血浆中氯吡格雷浓度。方法:待测血浆样品经甲基叔丁基醚萃取,以地西泮为内标,采用Agilent ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,10 mmo·lL-1醋酸铵(含0.1%甲酸)-甲醇(23∶77)流动相梯度洗脱,以多反应离子监测模式(MRM)进行正离子检测。结果:氯吡格雷与内标地西泮及血浆杂质分离良好;线性范围为10.02~10 020 n·gL-1,定量下限为10.02 n·gL-1,提取回收率为61.5%~68.4%;批内和批间精密度与准确度、基质效应及稳定性均符合相关要求。结论:该方法简便、准确、灵敏度高、专属性强,适用于人血浆中氯吡格雷的测定。     

LC-MS/MS法同时测定人血浆中氯吡格雷及其羧酸代谢物的浓度

目的建立快速测定人血浆中氯吡格雷及其羧酸代谢物SR26334含量的LC-MS/MS法。方法乙醚-正己烷(4:1,V:V)2次液-液提取法(中性和酸化条件下),采用Teknokroma C_(18)色谱柱,以那格列奈和吡格列酮为内标,同时测定血浆中氯吡格雷和SR26334的浓度。流动相:甲醇-0.1%甲酸(80:20,V:V);流速:0.2mL·min~(-1);以多反应离子监测方式检测:氯吡格雷[M+H]~+,m/z 322.1→212.1;那格列奈[M+H]~+,m/z 318.3→166.2;氯吡格雷羧酸代谢物SR26334[M+H]~+,m/z 308.1→q98.1;吡格列酮[M+H]~+,m/z 357.2→134.2。结果氯吡格雷和内标那格列奈的保留时间分别在4.4和3.7min,SR26334和内标吡格列酮的保留时间分别在1.3和1.7min,氯吡格雷的线性范围为5～5000ng·L~(-1);SR26334的线性范围为20～2500μg·L~(-1)。提取回收率大于75%,方法回收率大于90%,日内、日间RSD小于10%(n=5)。结论本方法简便快速,适用于氧吡格雷制剂的新药临床研究和临床长期治疗病人血药浓度的常规监测。     

HPLC-MS/MS测定人体血浆中克拉霉素浓度的方法及方法学确证

目的建立测定人体血浆中克拉霉素浓度的高效液相色谱-串联质谱联法（HPLC-MS/MS）法。方法血浆样本用甲醇沉淀蛋白后,选用色谱柱Agilent-XDB-C8柱（2.1mm×150mm,5μm）,以甲醇（A相）：水（含0.1%甲酸）=85：15（V：V）的比例为流动相,流速为0.2ml/min,选用岛津（SHIMADZU）高效液相色谱系统,串联API3200型三重四极杆质谱仪,采用多重反应监测（MRM）扫描方式进行监测,电喷雾离子化源（ESI源）,正离子方式,用于定量分析的离子反应对分别为质荷比m/z748.4→m/z158.2（克拉霉素）和m/z515.3→m/z276.2（替米沙坦,内标）。结果本方法血浆中克拉霉素的线性范围为10～3000ng/ml（r〉0.99）,定量下限为10ng/ml,批内和批间相对标准偏差均〈15%,准确度（相对回收率）相对标准偏差也均〈15%。稳定性试验中,血浆中克拉霉素在方法学要求的各种贮存条件下均较稳定。结论该方法快速、灵敏、专属性强、重现性好,适用于人体内克拉霉素的药代动力学研究。     

液相色谱-质谱法测定人血浆中的甲哌卡因

目的建立灵敏、快速液相色谱-串联质谱法测定人血浆中甲哌卡因的浓度,并用于人体药动学研究。方法 200μL的血浆样品经甲基叔丁基醚提取处理后,以10 mmol.L-1醋酸铵(含0.5%甲酸)水溶液-乙腈(60∶40,v/v)为流动相,Inertsil CN柱分离,通过电喷雾离子源四极杆串联质谱,以多反应监测(MRM)的方式进行检测,选择离子反应为m/z 247.2→98.0(甲哌卡因)和m/z 235.2→86.0(利多卡因)。结果甲哌卡因在0.500～1 500 ng.mL-1线性关系良好,定量下限为0.500 ng.mL-1,日内、日间精密度(RSD)均≤10.1%,甲哌卡因和内标利多卡因的提取回收率分别为64.6%～67.4%和64.5%。结论该法选择性强、灵敏度高,适用于人血浆中甲哌卡因的浓度测定。     

氯吡格雷在人血浆浓度的液质联用测定法

目的建立测定人血浆中氯吡格雷(抗心肌及抗脑梗死药)血药浓度的HPLC/MS/MS法。方法血浆样品用叔丁基甲醚提取,内标为噻氯匹定;色谱柱用X-Terra MS C_(18)(2.1 mm×50 mm,5μm),柱温30℃,流动相:乙腈-水(含10 mmol·L~(-1)醋酸铵,调pH为4.0)为70:30,流量为0.3 mL·min~(-1);质谱用ESI离子源,定量分析的离子反应分别为m/z 322→z 212 (氯吡格雷),m/z 264→m/z 154(内标噻氯匹定)。结果氯吡格雷的线性范围为10×10~4～1.2×10~4pg·mL~(-1)(γ=0.9993),日内、日间RSD均小于10%,提取回收率约为80%。结论该方法快速、准确、灵敏度高,可用于氯吡格雷血药浓度测定。     

LC-MS／MS法测定人血浆中舒芬太尼的血药浓度

目的建立液质联用（LC—MS／MS）法测定血浆中舒芬太尼血药浓度。方法以芬太尼为内标,血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,以Ultimate XB C18（100mm×2．1mm,3．0μm）柱为色谱柱,流动相为水-甲醇（15：85,V／V）,各含10mmol·L^-1乙酸铵,流速为0．2mL·min^-1,柱温加℃;质谱条件为电喷雾电离源（ESI）,检测方式为正离子电离、多离子反应监测（MIIM）,用于定量分析的离子为舒芬太尼m／z387．2→238．1,芬太尼m／z337．2→188．2。结果舒芬太尼线性范围为0．05～2μg·L^-1（r=0．9964）,线性关系良好。舒芬太尼的提取回收率为83．68％。88．06％。批内和批间精密度RSD均〈10％。结论本研究建立的测定舒芬太尼血药浓度的方法简单、快速、准确、灵敏,可用于临床上血药浓度监测和药动学研究。     

高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中伊托必利的浓度

目的:建立HPLC-MS法测定人血浆中的伊托必利浓度.方法:以舒必利为内标,选用液液萃取法,然后进行LC-MS/MS分析.色谱柱为Phenomenex Luna C18柱(150 mm×2.0 mm,5μm),流动相为乙腈-10 mmol·L-1甲酸胺水溶液(含0.1%甲酸)(60:40),流速为0.2 mL·min-1,柱温40℃,进样量为10μL,质谱采用ESI正离子方式进行扫描,MRM方式检测,用于定量分析的监测离子为m/z 359.9→71.9(伊托必利)和m/z 343.0→112.2(舒必利).结果:本方法线性范围是0.336～688 ng·mL-1,r=0.999 3,最低定量限为0.336 ng·mL-1.绝对回收率均在80%以上,相对回收率在85%～115%之间,日内、日间RSD均<5%.结论:本方法灵敏、快速和稳定,可用于伊托必利血药浓度检测和药动学研究.     

LC-MS/MS法测定人血浆及唾液中伏立康唑浓度

目的:采用LC-MS/MS法测定人血浆及唾液中伏立康唑的浓度。方法:血浆样品及唾液样品经氢氧化钠碱化,萃取剂萃取后进行分析。使用Agilent C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1。结果:线性范围为10～4 000 ng·mL-1,最低定量限为10 ng·mL-1,萃取回收率为81.3%～94.4%,基质效应为-5.35%～1.25%,日内和日间RSD均<7.9%。结论:所用方法快速、简便、灵敏度高,适用于人血浆伏立康唑浓度测定及药代动力学和生物利用度的研究。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中阿普唑仑及其代谢物的浓度

目的 建立同时测定人血浆中阿普唑仑(抗焦虑药)及其代谢物α-羟基阿普唑仑、4-羟基阿普唑仑浓度的液相色谱一串联质谱方法.方法 用Asi-lent Zorbax SB C_(18)(2.1 mm×30 mm,3.5μm)色谱柱,流动相为25 mmol·L~(-1)甲酸-乙腈(58:42),流量为0.2 mL·min~-,柱温40℃,进样量50μL,正离子电离、多离子反应监测进行定量分析.结果 阿普唑仑和2个代谢物线性范围分别为0.5～50.0 ng·mL~-(γ=0.9960),0.05～2.00 ng·mL~(-1)(γ=0.9961,0.9922).3者的提取回收率为75.0%～87.3%(RSD<10%).结论 本方法灵敏、准确、快速,可用于临床上阿普唑仑及其代谢产物血药浓度监测和药代动力学研究.     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中虎杖苷浓度

目的 建立测定大鼠血浆中虎杖苷浓度的LC-MS/MS方法。 方法 采用LC-MS/MS测定大鼠血浆中虎杖苷的浓度,以二苯乙烯苷为内标,血浆样品用乙腈沉淀蛋白,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C₁₈ (100 mm×2.1 mm, 3.5 μm),流动相为甲醇-乙腈-0.1%甲酸水溶液(18∶15∶67),流速0.3 ml/min,柱温30 ℃。 结果 虎杖苷的线性范围为1.0~5 000.0 ng/ml (r=0.998 4),最低定量检测浓度为1.0