巨噬细胞移动抑制因子介导MPP+/MPTP诱导的小胶质细胞NLRP3炎症小体的激活

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）/κb（NF-κB）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）/1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）激活小胶质细胞NLRP3炎症小体的影响和机制,进而对神经元的影响。方法 慢病毒MIF-shRNA感染Bv-2细 胞,敲低MIF表达。Western blot检测MPP+干预的Bv-2 NLRP3和MIF表达水平、转染病毒后细胞NLRP3、p65、caspase-1表达水平及细胞核、浆蛋白p65表达水平。ELISA检测细胞培养上清液IL-1β、IL-18表达水平。将细胞培养上清液作为条件培养基培养MN9D细胞,Western blot检测TH蛋白表达水平。C57BL/6小鼠腹腔注射MPTP构建PD小鼠模型,向中脑黑质致密部立体定位注射腺相关病毒MIF-shRNA（AAV-MIF-shRNA）敲低MIF表达。对小鼠进行旷场实验、爬杆实验、悬挂实验行为学评估,组织免疫组化检测小鼠多巴胺能神经元细胞数目和小胶质细胞活化情况,Western blot 检测小鼠黑质 MIF、NLRP3及TH表达情况。结果 感染病毒的细胞MIF mRNA（P<0.001）和MIF蛋白（P=0.014）明显降低。Western blot显示,0.2 mmol MPP+使Bv-2细胞NLRP3（P=0.012）和MIF（P=0.019）表达增高。与MPP组比较,MIF-shRNA组NLRP3（P=0.042） 和caspase-1（P=0.003）表达减少,细胞总蛋白中p65表达没有差异（P=0.978）。ELISA检测细胞上清液发现MIF-shRNA组较MPP组IL-1β（P<0.001）、IL-18（P=0.002）水平降低。与MPP组比较,MIF-shRNA组核蛋白p65表达降低（P=0.016）,浆蛋白p65表达升高（P<0.001）。相较于MPP+的条件培养基,MN9D细胞在MIF-shRNA条件培养基中TH（P=0.01）表达增加。与MPTP 组比较,注射 MIF-shRNA 的小鼠爬杆实验（P=0.024）和旷场实验（P=0.026）评分显著降低,悬挂实验评分显著升高（P=0.001）。组织免疫组化结果显示,相较于MPTP组,AAV-MIF-shRNA组小鼠TH阳性神经元细胞数量增多（P=0.004）,小胶质细胞数量减少（P=0.049）。MIF（P=0.033）、NLRP3表达减少（P=0.045）,TH蛋白明显增多（P=0.043）。结论 抑制MIF表达可以减少MPP+/MPTP干预所引起的小胶质细胞NLRP3炎症小体表达和炎症因子释放,减轻小胶质细胞激活,减轻炎症反应,改善MPTP引起的黑质多巴胺能神经元损伤,在帕金森病神经炎症方面具有保护作用。     

NLRP3炎症小体激活机制及其在脓毒症中的作用

脓毒症是宿主对感染产生的失控性反应,并出现危及生命的器官功能障碍的临床综合征,是临床常见的危重症之一.核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体是一种多蛋白复合物,可控制巨噬细胞胱天蛋白酶1活化以及促炎细胞因子白细胞介素(IL)-1β和IL-18的释放,从而促进炎症反应.NLRP3炎症小体在许多疾病发生、...     

NLRP3炎症小体对口腔鳞状细胞癌作用的研究进展

慢性炎症在肿瘤的进展过程中发挥着重要作用,NLRP3炎症小体作为NLRs家族的核心蛋白,其激活后可以招募ASC,裂解Caspase-1并使其活化,促进IL-1β和IL-18分泌成熟,进而介导炎症反应.目前,关于NLRP3炎症小体的研究较为深入,其与体内炎症、肿瘤等多种疾病的发生、发展密切相关.该文针对NLRP3炎症小体...     

奥氮平通过抑制NLRP3炎症小体激活对抑郁症模型大鼠海马神经元的保护作用

  目的  探究奥氮平(OLA)对抑郁症模型大鼠海马神经元的影响及作用机制。  方法  将大鼠分为对照组、慢性不可预见性应激(CUS)组、OAL (0.5、1、2 mg/kg)组、si-Atg5及OAL (2 mg/kg)+si-Atg5组,旷场实验及糖水偏好实验评估大鼠行为学表现,Tunnel检测细胞凋亡,ELISA检测白介素(IL)-1β、IL-18质量浓度,Western blot检测cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9,自噬相关蛋白LC3、Beclin1、P62,炎症小体NLRP3及cleaved Caspase-1表达水平。  结果  0.5、1、2 mg/kg OAL均可增加CUS大鼠自发活动总路程、糖水消耗量及偏好率,降低大鼠IL-18血清质量浓度,海马CA3区凋亡细胞百分比,cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-1、NLRP3表达;0.5 mg/kg OAL对cleaved Caspase-3表达及IL-1β血清质量浓度无影响,1、2 mg/kg OAL可降低cleaved Caspase-3表达及IL-1β血清质量浓度。si-Atg5可减小CUS大鼠自发活动总路程、糖水消耗量及偏好率,提高cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-1、NLRP3表达,并减弱2 mg/kg OAL产生的影响。同时,0.5、1、2 mg/kg OAL均可提高大鼠海马CA3区LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及Beclin1表达;0.5 mg/kg OAL对P62表达无影响,1、2 mg/kg OAL可降低P62表达。si-Atg5可降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及Beclin1的表达, 并减弱2 mg/kg OAL产生的作用。  结论  OAL可通过抑制NLRP3炎症小体激活对CUS大鼠海马神经元产生保护作用。     

白藜芦醇对脂多糖引起小胶质细胞激活的影响

目的:探讨白藜芦醇(Resv)抑制脂多糖(LPS)引起的小胶质细胞激活的作用及机制。方法:将小胶质细胞分为对照组、100ng/ml的LPS刺激组、25μM的Resv+LPS组、沉默信息调节因子1(SIRT1)-siRNA+Resv+LPS组和SC-siRNA+Resv+LPS组,24h后,采用酶联免疫法(ELISA)检测细胞培养上清液中促炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,Western blot检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达,相差显微镜观测细胞形态。结果:LPS暴露可显著激活小胶质细胞,增加促炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌和iNOS表达,细胞形态从静息状态的多角形变为激活状态的圆形,白藜芦醇可显著抑制LPS对小胶质细胞产生的上述激活作用,而SIRT1-siRNA显著逆转了白藜芦醇产生的抑制小胶质细胞激活的作用。结论:白藜芦醇可通过SIRT1减轻LPS引起小胶质细胞激活。     

表面活性蛋白A在星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达及炎症调节作用

目的探讨表面活性蛋白A (SPA)在星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达及其炎症调节作用。方法分别采用免疫荧光双染和免疫组织化学染色法检测SPA在健康大鼠脑组织的星形胶质细胞、体外培养的星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达情况。采用不同浓度(1、5、10μg/mL)脂多糖(LPS)培养液培养人星形胶质细胞及小胶质细胞24 h,10μg/mL LPS培养液培养人星形胶质细胞及小胶质细胞2、4、8、16、24 h,采用Western blotting检测细胞中SPA的表达情况。将人星形胶质细胞及小胶质细胞随机各分为LPS组(含有5μg/mL LPS的培养液)、LPS+SPA组(含有5μg/mL LPS和0.5μg/mL SPA的培养液)、SPA组(含有0.5μg/mL SPA的培养液)和对照组(未加入任何处理因素的培养基)。各组细胞培养8 h,采用Western blotting检测各组细胞中TLR4和NF-κB p65蛋白表达;ELISA法检测各组培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平。结果 SPA在大鼠脑组织的星形胶质细胞中表达,在体外培养的人星形胶质细胞和...     

线粒体活性氧在心肌成纤维细胞NLRP3炎症小体激活中的作用

目的: 探讨线粒体活性氧在心肌成纤维细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法: 培养原代小鼠心肌成纤维细胞，细胞分为对照组（正常培养组），使用脂多糖刺激的引发组，使用脂多糖加三磷酸腺苷的激活组，以及再加用mito-TEMPO的干预组。通过MitoSOX染色检测各组细胞线粒体活性氧水平;通过蛋白质印迹法检测细胞内NLRP3、凋亡相关微粒样蛋白（ASC）、Pro-caspase-1、Pro-IL-1β及上清液中caspase-1 p20、IL-1β蛋白水平; 用酶联免疫吸附法检测上清液中IL-1β蛋白的含量; 使用免疫共沉淀法观察ASC与NLRP3蛋白的结合情况。结果： 激活组细胞胞内线粒体活性氧水平较对照组明显增加（P＜0.05），而干预组线粒体活性氧水平较激活组明显下降（P＜0.05）；心肌成纤维细胞经脂多糖刺激后，细胞内NLRP3和Pro IL 1β蛋白较对照组明显升高（P＜0.05），干预组中Pro-IL-1β较激活组明显升高（P＜0.05）。激活组上清液中caspase-1 p20和IL-1β较对照组明显升高（P＜0.05），干预组caspase-1 p20和IL-1β较激活组明显减少（P＜0.05）。激活组NLRP3-ASC连接形成复合体，干预组NLRP3和ASC的结合减少。结论： 心肌成纤维细胞中线粒体活性氧通过促进NLRP3蛋白和ASC蛋白的结合，使NLRP3炎症小体激活。     

NLRP3炎症小体调节创伤后炎症反应的作用

创伤在造成机体原发损伤的同时,诱发炎症反应,对机体产生继发性损伤.炎症小体通过影响促炎细胞因子的裂解及其成熟、释放来调节炎症反应.NLRP3炎症小体能活化半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1),并引起白细胞介素(IL-1β、IL-18)等促炎细胞因子的分泌,参与机体抵抗病原体的免疫应答.本文就NLRP3炎症小体在创伤诱发的炎症反应中的作用的研究进展做一综述.     

白藜芦醇对脂多糖诱导的星型胶质细胞炎症损伤的保护作用

目的研究白藜芦醇(RES)对脂多糖诱导的星型胶质细胞炎症因子释放的抑制作用,探索其对中枢神经系统保护作用的可能机制。方法 GFAP免疫组化法鉴定星型胶质细胞的纯度。采用不同浓度的RES与星型胶质细胞共同培养12 h,然后进行LPS损伤24 h,检测不同实验组乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,cck-8法检测细胞存活率,Griess法检测NO释放量,Elisa法检测α-肿瘤坏死因子(TNF-α)表达量及Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达水平。结果离体培养的星形胶质细胞的阳性率为(95.49±1.86)%。LPS处理组细胞LDH漏出量升高,存活率降低,同时NO、TNF-α的释放量明显增加及iNOS蛋白的表达水平上调。测试浓度范围(5～50μmol/L)的RES能有效提高细胞存活率及降低LDH漏出量并呈现一定程度的剂量-反应关系。而在抑制NO、TNF-α释放及iNOS表达方面,只有25、50μmol/L的RES处理组有明显抑制作用,5μmol/L RES处理组与LPS处理组相比并无明显变化。结论较高浓度RES能明显抑制LPS诱导的星型胶质细胞炎症介质的释放,改善星型胶质细胞的炎症损伤,这种作用可能与抑制iNOS/NO的表达通路有关。     

游离脂肪酸激活肾系膜细胞NLRP3炎症小体信号及氧化应激机制的探讨

目的:探讨NLRP3炎症小体在游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)诱导下的肾小球系膜细胞(HBZY-1)中的表达及氧化应激在其中的影响。方法:将HBZY-1细胞分为正常对照组、不同浓度棕榈酸组、高棕榈酸+N-乙酰半胱氨酸(N-acetylL-cysteine,NAC)组。各组细胞培养6、9、12 h后采用Western blotting和RT-PCR检测各组NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及m RNA表达,并同时观察NAC对各组蛋白及m RNA表达的影响。结果:棕榈酸刺激肾系膜细胞NLRP3炎症小体信号分子的表达变化:与对照组相比,不同作用浓度和时间的棕榈酸均可上调NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及m RNA表达(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性。与单纯棕榈酸组相比,NAC预处理可阻止棕榈酸诱导的NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及m RNA表达上调(P<0.05)。结论:棕榈酸可通过氧化应激机制诱导系膜细胞NLRP3炎症小体信号的活化,参与糖尿病肾病炎症的发生。     

星形胶质细胞与NLRP3炎症小体在围术期认知障碍中作用靶点的研究进展

七氟烷是目前应用较广泛的全麻吸入药物,大量临床数据显示其会增加围术期认知功能障碍(perioperative neurocognitive disorders, PND)的发生概率,造成患者认知功能下降,阻碍患者康复和预后。PND是典型的神经退行性疾病,其特征是以认知减退、记忆力和注意力障碍为主要临床表现。其病因病机复杂多样,目前还没有一种被广泛认可的有效预防和临床治愈PND的药物。以往研究可知海马神经炎症是其主要发病机制。因此,评估和探索神经炎症的药物靶点是一个重要课题。星形胶质细胞和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体与神经炎症、认知功能障碍密切相关,本综述总结了目前关于星形胶质细胞和NLRP3炎症小体在神经炎症中的发病机制以及通过调控星形胶质细胞和NLRP3炎症小体来缓解神经炎症的药理学相关靶点和方法,为PND的预防与治疗提供一定的参考依据。     

LPS激活巨噬细胞NLRP3炎性小体的作用研究

目的 探讨脂多糖(LPS)激活巨噬细胞NLRP3炎性小体的作用.方法 用佛波酯诱导人单核细胞(THP-1)分化为巨噬细胞.实验分为对照组、LPS组、LPS+NLRP3 siRNA组、LPS+Scrambled siRNA组.采用免疫荧光染色检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin结构域蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白ASC的共定位、Western blotting检测NLRP3蛋白的表达、ELISA检测细胞培养上清白介素1β(IL-1β)的浓度.结果 与对照组相比,NLRP3和ASC蛋白的共定位明显增多,LPS组NLRP3蛋白的表达增强.LPS还能使细胞培养上清IL-1β的浓度显著升高,NLRP3 siRNA干扰后细胞培养上清IL-1β的浓度显著降低.结论 LPS可以促进炎性小体成分NLRP3、ASC的表达,激活NLRP3炎性小体,刺激巨噬细胞分泌炎症因子IL-1β.     

NLRP3炎症小体对种植体植入的影响

核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域相关蛋白（NLRP）3炎症小体在种植体周围骨稳定的保持中发挥重要作用。NLRP3通过其下游的促炎性细胞因子白介素-1β和白介素-18,以及胱天蛋白酶-1介导的细胞焦亡,促进种植体周围骨吸收。通过抑制NLRP3炎症小体的产生可能有利于种植过程中提高患者的舒适度和种植后的骨稳定。种植体周围环境中存在的金属颗粒和菌斑可以激活NLRP3炎症小体进而促进骨吸收。已有研究多聚焦于骨科植入物周围骨组织和牙周炎,针对种植体周围炎的研究较少。本文就NLRP3炎症小体对种植体周围骨形成、骨吸收及种植体植入所致疼痛产生的影响展开综述,并对NLRP3炎症小体作为预防种植体周围炎的可能进行阐述。     

NLRP3炎症小体在心肌梗死中作用的研究进展

NLRP3炎症小体是固有免疫系统中模式识别受体家族的重要组成部分。NLRP3炎症小体一旦被激活,将募集适配器凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC),并与之相互作用,从而招募并结合半胱天冬氨酸蛋白酶-1前体(procaspase-1),使其自身裂解活化为半胱天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1),最终使IL-1β前体(pro-IL-1β)和IL-18前体(pro-IL-18)成熟活化为有活性的促炎性细胞因子(IL-1β和IL-18),并启动焦亡性细胞死亡(pyroptosis)。NLRP3炎症小体与多种疾病的发病机理有着密切的关系。近年来研究报道,NLRP3炎症小体识别非微生物危险信号引起的无菌性炎性反应在心肌梗死的发展过程中发挥着重要作用。本文就NLRP3在心肌梗死中的相关研究作一综述。     

NLRP3炎症小体在抑郁症中作用的研究进展

抑郁症是一种常见且严重的精神障碍类疾病,给家庭和社会带来了沉重的负担。核苷酸寡聚结合域样受体蛋白3(Oligonucleotide binding domain-like receptor pyrin containing 3, NLRP3)炎症小体使活化的半胱天冬酶-1将前白介素-1β和前白介素-18剪切为成熟的白介素-1β和白介素-18,进而产生大量的炎症因子,参与了抑郁症的发生发展进程。本文主要探讨NLRP3炎症小体激活在抑郁症中作用的最新研究进展。     

NLRP3炎症小体在心血管疾病中作用的研究进展

心血管疾病具有较高的发病率和致死、致残率。各种内源性和外源性损伤因子均可激起心血管系统的固有免疫应答,引起大量免疫炎症反应,造成心血管系统的组织损伤,加速心血管疾病的病情进展。而核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体作为广泛存在于机体细胞内的一种多蛋白复合体,可以识别细胞内外的多种病原和危险损伤信号并激活胱天蛋白酶1。作为目前结构和功能最为明确的炎症小体,NLRP3炎症小体在心血管疾病中的作用受到学者们的广泛关注。     

NLRP3炎症小体的活化及调控机制

炎症小体是机体固有免疫的重要组成部分,目前对NLRP3炎症小体的研究最为热门和透彻.NLRP3炎症小体的活化因素包括病原体及其分泌的毒素、晶体和内源性危险信号等.NLRP3炎症小体的活化需要启动和激活两个步骤,其中启动机制主要针对NLRP3的转录和翻译后修饰水平,激活机制与线粒体、离子流动和溶酶体等相关.本文还综述了NLRP3炎症小体在表达、组装、活化等方面存在的负调控机制.     

丹参酮ⅡA通过NLRP3炎症体信号通路对小胶质细胞糖氧剥夺/再灌注损伤的保护作用

目的 探讨丹参酮ⅡA对小胶质细胞BV-2糖氧剥夺/再灌注（oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R）损伤的保护作用及其机制。方法 取对数生长期的BV-2细胞OGD 3 h后再灌注4~24 h,采用Western blot筛选细胞内Nod受体蛋白3（NLPR3）表达水平最高的再灌注时间。 将实验组细胞OGD处理3 h后分别加入终质量浓度为0~2.5 μg/mL的丹参酮ⅡA,CCK8法检测细胞存活率,筛选丹参酮ⅡA的最大有效质量浓度。对BV-2细胞OGD 3 h后分别加入0、0.5 、1.0、2.0 μg/mL丹参酮ⅡA,再灌注12 h,Western blot检测BV-2细胞内NLRP3和凋亡蛋白caspase-1的表达水平,ELISA检测BV2细胞白介素（IL）-1β和IL-18的质量浓度。结果 OGD 3 h后,再灌注12 h时NLPR3蛋白表达水平最高。CCK8法显示丹参酮ⅡA最大有效质量浓度为2.0 μg/mL。NLRP3、caspase-1、 IL-1β和IL-18表达均随着丹参酮ⅡA质量浓度的升高而降低。结论 丹参酮ⅡA能抑制OGD/R处理后BV-2细胞内NLRP3炎症体信号通路分子的表达,这可能是其保护OGD/R细胞的分子机制之一。