肝纤维化逆转的机制研究

目的：在CCl4诱导的自愈性肝纤维化模型上探讨肝纤维化逆转的生物学机制。方法：50％CCl4（1mL／kg，每周2次）皮下注射8w，12w和16w并自然恢复2w，4w和8w建立大鼠肝纤维化和自然恢复模型。分别于各时点处死动物检测血清中ALT、AST、HA、LN、IV-C和PCⅢ含量及肝组织Hyp水平；原位细胞凋亡（TUNEL）和SMA（免疫组化）双标染色检测肝星状细胞（HSC）的凋亡并行肝脏病理学检查；RT-PCR检测肝组织中Collagen-1，TIMP-l，TIMP-2，MMP-13和α-SMA mRNA的表达。结果：8w和12w和16w的肝纤维化大鼠随着恢复期的延长，ALT、AST、HA、LN、Ⅳ-C和PCⅢ含量及肝组织Hyp水平逐渐下降；8w和12w和16w的肝纤维化大鼠恢复8w后α-SMA免疫组织化学染色显示活化的HSC的数量显著减少，其中与12w肝纤维化动物相比，12w恢复8w的动物α-SMA阳性细胞减少了12倍。TUNEL和α-SMA双重染色结果显示活化的HSC凋亡逐渐增多，且随着凋亡的HSC数目的增多，大鼠肝纤维化病理程度明显减轻，其中8w和12w的肝纤维化动物恢复8w后，肝组织结构与正常大鼠相似；RT-PCR结果显示各恢复时点基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-1和TIMP-2的mRNA表达明显减少，而胶原酶MMP-13的mRNA表达没有明显改变，但各恢复期肝匀浆中胶原酶MMP-13的活性均显著增加。结论：活化的HSC凋亡，减少了细胞外基质成分的产生，是肝纤维化发生逆转的主要机制之一。     

槲皮黄酮对脂多糖诱导BV-2小胶质细胞损伤的保护机制研究

目的：探讨槲皮黄酮对脂多糖（LPS）诱导的BV-2小神经胶质细胞炎症反应的抑制作用及可能作用的机制。方法：体外培养BV-2细胞,采用LPS刺激细胞诱导炎症模型,将细胞分为正常对照组、炎症模型组和槲皮黄酮低（10 μg/ml）、中（20 μg/ml）、高（40 μg/ml）剂量药物组,CCK8实验检测槲皮黄酮对BV-2细胞增殖情况的影响,ELISA实验检测细胞上清中TNF-α和IL-6的表达量,免疫印迹实验检测iNOS、COX-2、Traf6、p65及p-p65蛋白的表达水平。结果：槲皮黄酮可显著促进BV-2细胞的增殖,并明显降低细胞的炎症反应。主要表现在槲皮黄酮可明显抑制TNF-α和IL-6的释放,还可显著抑制炎症相关蛋白iNOS及COX-2的表达,并且还可以抑制Traf6/p65信号通路的活化。结论：槲皮黄酮可明显抑制LPS诱导的BV-2细胞炎症反应,抑制炎症相关蛋白的表达,其可能作用机制是通过抑制Traf6/p65信号通路的活化实现的。     

槲皮黄酮对Aβ诱导小神经胶质细胞损伤的保护机制研究

目的探讨槲皮黄酮对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导小神经胶质细胞(BV-2)损伤的保护作用及其作用机制。方法体外培养BV-2细胞,利用Aβ诱导BV-2细胞发生损伤;将低(10μg/m L)、中(20μg/m L)、高(40μg/m L)3种浓度槲皮黄酮对细胞进行处理,共24 h,采用CCK8实验对BV-2细胞的增殖情况进行评价,应用ELISA试剂盒对细胞培养基上清中炎症因子IL-6、TNF-α的表达水平进行分析,采用免疫印迹技术分析β-分泌酶(BACE)、早老素(PS1)、呆蛋白(NCT)蛋白表达水平,并对脑啡肽酶(NEP)、胰岛素降解酶(IDE)表达水平进行检测。结果采用Aβ诱导可较好地构建BV-2细胞损伤模型,经过低、中、高3种剂量的槲皮黄酮处理后,BV-2细胞的相对存活率较模型组显著增加(P<0.05);药物处理组细胞培养基上清中IL-6、TNF-α表达水平低于模型组(P<0.05);Western blot结果显示,槲皮黄酮组BACE、PS1、NCT蛋白表达水平较模型组降低(P<0.05);槲皮黄酮可以促进Aβ消化酶NEP、IDE的表达。结论槲皮黄酮对Aβ诱导的BV-2细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制Aβ分泌酶表达和激活Aβ消化酶表达有关。     

槲皮黄酮对酒精性肝损伤大鼠高同型半胱氨酸血症及氧化应激的作用

目的探讨槲皮黄酮对酒精性肝损伤大鼠高同型半胱氨酸血症(HHcy)及氧化应激的作用。方法将30只大鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量槲皮黄酮治疗组、中剂量槲皮黄酮治疗组、高剂量槲皮黄酮治疗组,每组6只。用酒精+0.5 mL鱼油灌胃诱导酒精性肝损伤模型,造模3周后,治疗组大鼠分别给予4、2、1 g/kg槲皮黄酮灌胃,7周后麻醉处死大鼠,测定血浆总同型半胱氨酸(tHcy)浓度及血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(Alb)、白/球蛋白比值(A/G)、肝匀浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)表达水平,并对肝脏病理组织进行检测。结果模型组大鼠tHcy、ALT、AST、MDA的表达水平高于正常对照组,而SOD、GSH含量低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,槲皮黄酮治疗组大鼠tHcy、ALT、AST、MDA均低于模型组(P<0.05),而SOD、GSH含量高于模型组(P<0.05),并呈浓度依赖性。组织病理学检测显示,模型大鼠出现肝细胞脂肪变性、点状坏死,伴随炎性细胞浸润,槲皮黄酮治疗后,点状坏死和炎性细胞浸润消失。结论槲皮黄酮可改善酒精性肝损伤,其作用机制可能与降低高同型半胱氨酸水平及氧化应激有关。     

MicroRNA-154对大鼠肝星状细胞HSC-T6中β-catenin蛋白表达的影响

目的:探讨microRNA-154(miR-154)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cellc,HSC)中β-catenin蛋白表达的影响。方法:合成miR-154模拟物(miR-154 mimics)和miR-154抑制物(miR-154 inhibitor)转染HSC-T6,以其阴性对照物(mimics NC、inhibitor NC)转染细胞作为阴性对照组,不作处理的正常细胞为空白对照组(Blank);通过实时定量RT-PCR检测转染后各组细胞内的miR-154和β-catenin mRNA的相对表达,免疫印迹法(Western blotting)检测转染后各组细胞内β-catenin蛋白的表达。结果:β-catenin蛋白表达量和β-catenin mRNA表达量在转染miR-154 mimics组显著上调,与空白对照组和阴性对照组相比差异具有统计学意义,P<0.05;β-catenin蛋白表达量和β-catenin mRNA表达量在转染miR-154 inhibitor组显著下降,与空白对照组和阴性对照组相比差异具有统计学意义,P<0.05。结论:细胞内过表达miR-154能够诱导细胞中β-catenin mRNA及蛋白的过表达;抑制细胞内miR-154的表达则能够抑制细胞中β-catenin mRNA及蛋白的表达。     

槲皮黄酮对原代皮层神经元细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的探讨槲皮黄酮对原代皮层神经元细胞氧糖剥夺损伤的保护作用及其作用机制。方法体外原代培养小鼠皮层神经元细胞,氧糖剥夺方法构建原代皮层神经元细胞的局部缺血/再灌注损伤,低(10μg/mL)、中(20μg/mL)、高(40μg/mL)剂量槲皮黄酮治疗24 h后,采用CCK-8试剂盒检测神经元细胞的相对存活率;免疫印迹技术检测凋亡相关蛋白及Traf6/TAK1信号通路蛋白表达水平;Traf6质粒及空白质粒瞬时转染神经元细胞,使Traf6蛋白在细胞中发生过表达,然后利用槲皮黄酮处理细胞,观察凋亡蛋白及Traf6/TAK1信号通路相关蛋白的表达情况。结果低、中、高剂量槲皮黄酮处理后细胞相对存活率显著增加(P<0.05),表现出浓度依赖性;促凋亡蛋白Bax、Traf6及p-TAK1表达显著降低,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05);瞬时转染了Traf6重组质粒的细胞中,Traf6蛋白发生过表达,经槲皮黄酮处理后,Bax、Traf6、p-TAK1蛋白水平显著降低,而Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05)。结论槲皮黄酮对原代皮层神经元细胞氧糖剥夺损伤具有较好的保护作用,其作用机制可能与抑制Traf6/TAK1信号通路活化有关。     

肝纤维化分子机制及治疗研究进展

肝纤维化由慢性肝炎造成,若治疗不及时将发展成为肝硬化、肝癌。目前,临床上尚无理想的治疗药物。随着肝纤维化分子机制逐渐得以阐明、基因技术不断发展,使肝纤维化的治疗成为可能。目前,肝纤维化治疗主要是通过抑制肝星状细胞（HSC）活化、增殖,抑制细胞外基质（ECM）的合成,促进ECM的降解,诱导活化HSC凋亡。本文就肝纤维化的分子机制和治疗进行综述,为以后的研究提供参考。     

青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞Wnt/β-catenin信号通路相关因子表达的影响

目的:探讨青蒿琥酯抑制大鼠肝星状细胞增殖并可促进细胞凋亡的作用机制。方法:大鼠肝星状细胞体外培养,分别用含梯度质量浓度(0,1,5,12.5,25,37.5μg·ml-1)青蒿琥酯的培养基培养24 h。采用Western blot方法检测青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞HSC-T6内Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响;采用实时荧光定量PCR方法检测随着药物浓度的变化在RNA水平上的变化。结果:0~37.5μg·ml-1的青蒿琥酯作用大鼠肝星状细胞24 h后蛋白β-catenin和GSK-3β(ser9)逐渐降低(P<0.05)并且有一定的剂量相关性,而GSK-3β逐渐升高(P<0.05)。实时定量PCR结果提示,1~37.5μg·ml-1的青蒿琥酯能抑制β-catenin的表达,且呈剂量相关性。但是GSK-3β在低剂量青蒿琥酯(1~12.5μg·ml-1)的时候并无明显变化(P>0.05),在高剂量青蒿琥酯(12.5~37.5μg·ml-1)抑制GSK-3β的表达(P<0.05)。结论:青蒿琥酯抑制大鼠肝星状细胞与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

肝纤维化研究进展

肝纤维化已有较多进展 ,其发病机理主要有纤维化形成候选基因的研究、肝细胞凋亡与并发症、肝星状细胞 (HSC)的关系研究。在诊断与治疗方面也有值得重视的进展 ,现概述如下。1参与肝纤维化形成候选基因的研究1.1肝纤维化动物模型研究中确定的候选基因 :鉴定与肝纤维化有关的候选基因的实验模型 :(1)体外培养HSC是一种公认的研究与HSC活化有关基因的模型 ;(2)利用啮类动物制备肝纤维化模型研究基因表达 ;(3)转基因 (TG)或基因敲除 (KO)技术 ;(4)基因芯片技术 ,基因芯片的发展为鉴定活化的HSC和肝纤维化时上调的候选基因提供了条件。Ba…     

酒精性肝纤维化中肝星状细胞活化的机制研究进展

肝星状细胞(HSC)活化是各种病因所致肝纤维化过程中的关键环节。在酒精性肝病的发展过程中,乙醇和代谢产物乙醛可改变机体氧化还原状态,活化枯否细胞,释放大量细胞因子,诱导HSC活化、增殖和胶原合成,形成肝纤维化。本文将对酒精性肝纤维化中HSC活化的机制和相关靶点加以综述,为开发抗肝纤维化药物和临床治疗提供新的思路。     

槲皮素防治急性肝损伤作用机制的研究进展

急性肝损伤是一种严重的疾病，其发病机制和影响因素多种多样，其中药物治疗是目前急性肝损伤的主要治疗方法。槲皮素为黄酮醇类化合物，可通过抗炎、抗氧化应激反应、抗肝纤维化、抗细胞凋亡、增强细胞自噬、抑制转运体NTCP的表达降低胆汁酸重吸收、调节肝脏脂质代谢，多途径减轻肝损伤，发挥肝保护作用。总结了槲皮素防治急性肝损伤的作用机制，为急性肝损伤治疗提供参考。     

FAK抑制剂对人肝星状细胞Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响

目的：探讨FAK抑制剂（PF562，271）对人肝星状细胞（LX-2）Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响，为抗肝纤维化寻找新的作用靶点。方法：CCK-8法检测不同浓度范围（0~7 μmol·L^-1）FAK抑制剂（PF562，271）在12、24、48 h和72 h时对LX-2细胞增殖的影响，Real-time PCR分析PF562，271对LX-2细胞中α-SMA、Collagen Ⅰ mRNA表达水平的影响，Western-blot检测不同浓度PF562，271对LX-2细胞中Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin蛋白表达的影响，评价PF562，271对LX-2细胞中Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响。结果：PF562，271能够抑制LX-2细胞增殖，且该作用呈剂量和时间相关性；qRT-PCR检测到PF562，271能够抑制LX-2细胞中α-SMA、collagen ⅠmRNA表达，与对照组相比，表达量显著降低（P<0.05）；Western-blot结果显示PF562，271对Akt/GSK-3β的磷酸化表达水平显著降低（P<0.05）。结论：FAK抑制剂能够抑制LX-2细胞增殖，促进其凋亡，其作用机制可能是通过抑制Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路从而缓解肝纤维化进程。     

槲皮素对博莱霉素致鼠肺纤维化的防治作用

目的　观察SD大白鼠腹腔内注射槲皮素 ( 2 0 0mg·kg-1)对实验性博莱霉素致肺纤维化的防治作用。方法　通过博莱霉素 ( 5mg·kg-1)致鼠肺纤维化的动物模型 ,动态观察各实验组与肺纤维化形成相关的d 3、d 7、d 14、d 2 8肺组织匀浆内羟脯氨酸、脂质过氧化物 (LPO)含量 ,动态观察肺组织病理学变化及形态学定量测量肺组织中炎症组织数 /每高倍视野、肺泡间隔宽度、单位面积肺纤维化灶所占的分面积。结果　与对照组相比 ,槲皮素组能显著地降低博莱霉素致肺纤维化程度。结论　槲皮素对博莱霉素致肺纤维化有一定的防治作用     

蛇毒神经生长因子对大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及肝纤维化相关蛋白质表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒神经生长因子(NGF)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖、凋亡以及蛋白质表达差异的影响,进一步为蛇毒NGF抗肝纤维化提供依据。方法实验分为对照组(单纯HSC-T6培养)和实验组(NGF进行干预)。应用MTT检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞增殖抑制率;流式细胞技术检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞凋亡的影响;双向电泳技术观察HSC-T6细胞蛋白质表达变化;质谱鉴定差异表达的蛋白。结果 MTT结果显示NGF对HSC-T6细胞增殖具有明显抑制作用(5 mg.L-1NGF时抑制率为48.2%±1.9%,P<0.01);流式细胞仪也有同样的发现,NGF(5 mg.L-1)干预组的凋亡率21.15%±3.31%明显高于对照组的2.7%±1.55%(P<0.05);比较分析空白对照组和NGF作用组的2-DE图谱,找到差异蛋白质点47个,其中与对照组相比在NGF作用组表达上调22个,下调25个;质谱鉴定出9个蛋白质,其中4个表达上调,5个表达下调。结论蛇毒NGF能抑制大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖,诱导其凋亡,并且影响HSC-T6细胞蛋白质的表达。     

槲皮素对肝肿瘤细胞生长周期的影响

目的 :研究槲皮素对肝肿瘤细胞细胞周期的影响并探讨其机制。方法 :用联合四唑盐比色法研究槲皮素对肿瘤细胞生长的抑制作用 ,流式细胞仪、电镜及免疫细胞化学等方法观察槲皮素对肝肿瘤细胞株QGY ,HepG2体外生长的影响。结果 :槲皮素对HepG2和QGY均有抑制作用 ,使 G0 /G1期细胞增加 ,G2 /M期和S期细胞减少 ,出现凋亡峰 ,电镜下可凋亡小体。 4 8,72h后对HepG2的作用更明显。免疫细胞化学显示使用槲皮素后 ,2种细胞中增殖细胞核抗原 (PCNA)的阳性表达均减弱 ,而P2 1WAF1的表达均增强 ,Bax仅在HepG2细胞中表达增强。结论 :槲皮素对 2种肝肿瘤细胞株都有一定的抑制作用 ,可能主要通过增强 2种细胞株的P2 1WAF1的表达及减弱PCNA的表达诱导G0 /G1期阻滞及细胞凋亡     

莪术油注射液对宫颈癌细胞株Hela增殖及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的：探讨莪术油注射液对宫颈癌细胞Hela增殖的抑制作用及潜在作用机制。方法：采用CCK-8法筛选莪术油最佳给药剂量,并设立对照组和莪术油处理高、中、低剂量组。CCK-8法检测莪术油对Hela细胞生长曲线的影响;流式细胞术检测莪术油对Hela细胞周期的影响;Western Blot试验检测莪术油对Hela细胞中Wnt3a、β-catenin、C-myc、CyclinD1蛋白表达的调节作用。结果：CCK-8试验表明,莪术油给药剂量越大,其对Hela细胞增殖的抑制作用越明显,以高剂量组为最优。流式细胞术试验表明,莪术油可将Hela细胞阻滞在G1期,使S期和G2期细胞比例明显降低。Western Blot试验结果显示,莪术油处理后Wnt3a、β-catenin、C-myc、CyclinD1蛋白表达相较于对照组其表达明显降低。结论：莪术油注射液通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制宫颈癌细胞增殖。     

Preventive effects of Ophiocordyceps sinensis mycelium on the liver fibrosis induced by thioacetamide

Thioacetamide (TAA), usually used as a fungicide to control the decay of citrus products, itself is not toxic to the liver, but its intermediates are able to increase oxidative stress in livers and further cause fibrosis. Ophiocordyceps sinensis mycelium (OSM) which contains 10% polysaccharides and 0.25% adenosine decreased (P < 0.05) the lipid accumulation and increased (P < 0.05) antioxidative capacity in livers of thioacetamide (TAA) injected rats. Meanwhile, the increased (P < 0.05) liver sizes, serum alanine transaminase (AST) and aspartate transaminase (ALT) values in thioacetamide (TAA)‐injected rats were ameliorated (P < 0.05) by OSM supplementation. Moreover, the levels of proinflammatory cytokines, such as the tumor necrosis factor‐α (TNF‐α) and interleukin‐1β (IL‐1β), were also reduced (P < 0.05). The fibrosis phenomena in pathological (Masson's trichrome and H&E stainings) and immunohistochemical [α‐smooth actin (αSMA) and CD86/ED1] observations in TAA‐treated rats were reduced (P < 0.05) by OSM cotreatment. The protective effect of OSM against TAA‐induced liver inflammation/fibrosis may be via downregulations (P < 0.05) of TGF‐β pathways and NFκB which further influenced (P < 0.05) the expressions of fibrotic and inflammatory genes (i. e., αSMA, Col1α, COX2). Therefore, OSM shows preventive effects on the development of TAA‐induced hepatic fibrosis.     

槲皮素对四氯化碳致大鼠肝纤维化的缓解作用及其机制研究（英文）

槲皮素是一种广泛存在于蔬菜和水果中的酚类植物化学物质,具有抗氧化、抗炎、抗病毒和免疫调节活性,已成功应用于急慢性疾病的治疗。本研究目的是探讨槲皮素对大鼠肝纤维化的缓解作用并探讨其作用机制。将健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和槲皮素组,每组6只。通过腹腔注射1 m L/kg四氯化碳(50%v/v,溶于橄榄油),每周2次,持续6周诱导肝脏纤维化,并于第7周灌胃给予槲皮素(100mg/kg/d)持续至第12周结束。末次给药1h后,收集血液和肝脏样品。利用全自动生化仪检测血清肝功能参数(AST、ALT、ALP、GGT和TBA);HE、Masson和天狼星红染色观察肝组织病理形态;Westernblotting评价肝纤维化因子(TGF-β1、α-SMA、MMP2和MMP9)和胆汁酸相关调节蛋白(FXR、CYP7A1、CYP8B1和CYP27A1)的表达;采用试剂盒检测肝组织氧化应激标志物(GSH、GSH-Px、GR、SOD和MDA)的含量;运用LC-MS/MS测定肝组织中胆汁酸含量。结果发现与模型组相比,给予槲皮素治疗后可显著降低血清AST、ALT和TBA含量(P <0.05);肝纤...     

质谱技术分析联合用药抗大鼠肝纤维化的作用

目的:应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ionizationtime of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术分析联合用药抗大鼠肝纤维化的肝组织中蛋白质的表达差异。方法:采用CCl4造成大鼠肝纤维化模型,试验分为正常对照组、模型组和联合用药治疗组。在试验的第10周末取大鼠肝组织,提取肝组织总蛋白质,应用SELDI-TOF-MS检测肝组织差异表达的蛋白。结果:SELDI-TOF-MS共检测到176个蛋白峰,其中表达差异2倍以上的蛋白有12个,包括在模型组中表达有降低趋势的10个蛋白质和升高趋势的2个蛋白质;经过联合用药治疗后,这些蛋白表达恢复到正常水平。对这12个差异表达蛋白进行蛋白质组数据库的检索,获得4个蛋白质,涉及负调控细胞生长、抑制细胞增殖和参与细胞信号转导。结论:联合用药能够通过调节大鼠肝脏组织蛋白质的表达,改善和修复肝脏功能。