人肺癌组织单羧酸转运蛋白—1基因的表达及其意义

目的：研究人肺癌组织中单羧酸转运蛋白－1（MCT1）基因的表达水平，探索肿瘤治疗新策略。方法：以寡聚脱氧核苷酸为探针，用原位分子杂交法探测人肺癌组织和人正常肺组织MCT1mRNA的表达水平。结果：人 肺癌组织的MCT1mRNA的表达显强于正常肺组织，呈过表达。结论：MCT1基因的过表达可能是肺癌组织细胞的分子生物学特征之一。     

猫眼草提取物对人胃癌细胞BCG-823增殖影响的实验观察

目的 观察猫眼草提取物对人胃癌细胞株BCG-823增殖的影响并探讨其可能的机制.方法 人胃癌细胞株BCG-823分别给予猫眼草提取物10.0,1.0,0.1mg/L培养48h,采用MTT法和台盼蓝染色法检测猫眼草提取物对胃癌细胞株增殖的影响.结果 MTT法测定结果显示,猫眼草提取物各浓度组对BCG-823细胞增殖均有明显抑制作用且具有良好的量效关系(P<0.05);台盼蓝法计数结果显示,给予猫眼草提取物后,活细胞数随培养时间的延长而减少,对胃癌细胞株C-823增殖的抑制具有良好的时效关系(P<0.05).结论 猫眼草提取物对人胃癌细胞株BCG-823增殖具有明显的抑制作用,其抑制作用强度随给药浓度的增加和作用时间的延长而递增.     

紫杉醇联合替尼泊苷对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨紫杉醇(Taxol)和替尼泊苷(VM-26)联合应用对胃癌BGC-823细胞的体外抑制和诱导细胞凋亡的作用.方法:采用MTT法测定Taxol单药(0.75、1.50、3.00、6.00、12.00 mg/L),VM-26单药(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00mg/L)及联合用药(0.75/1.25,1.5/2.50,3.00/5.00,6.00/10.00,12.00/20.00 mg/L)对BGC-823细胞的生长抑制率,应用流式细胞仪测定0.75 mg/L Taxol、1.25 mg/L VM-26单药及其联合用药作用0,12,24,48 h各时间点的细胞周期和凋亡率.结果:Taxol和VM-26单药及联合用药对BGC-823细胞的生长抑制率随药物的质量浓度的增加而增加.联合用药指数(CI)为1.43.经1.25 mg/L的VM-26和0.75 mg/L Taxol单药及联合用药均可诱导胃癌BGC-823细胞的凋亡,Taxol单药处理后24 h,使G2/M细胞显著增多,S期细胞显著减少;VM-26单药处理后48 h,G1/G0、S期细胞减少,G2/M期细胞显著增加.结论:Taxol与VM-26单药均可抑制胃癌BGC-823细胞的生长,诱导细胞凋亡,联合用药对胃癌BGC-823细胞的生长抑制有拮抗作用.     

抑制单羧酸转运蛋白1可增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性

目的 探讨siRNA沉默单羧酸转运蛋白1(MCT1)增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性及其可能机制.方法 Western blot检测HNE1和HNE1/DDP细胞中MCT1的表达及siRNA转染沉默MCT1在HNE1/DDP细胞中MCT1的表达;MTT法检测不同浓度顺铂和MCT1 siRNA联合顺铂对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用;PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位;Western blot检测Mcl-1、Bak、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 MCT1在HNE1/DDP细胞中高表达,抑制MCT1的表达可增加HNE1/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.05),部分逆转鼻咽癌细胞对顺铂的耐药.此外,抑制MCT1的表达可增强HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的作用,MCT1 siRNA与8μmol/L顺铂联合作用于HNE1/DDP细胞24 h的凋亡率为(51.23±2.86)%,较单用MCT1 siRNA、顺铂的凋亡率明显升高(P<0.05).同时使细胞线粒体膜电位降低,下调Mcl-1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达.结论 抑制MCT1的表达可增强鼻咽癌HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,其机制可能与下调Mcl-1、Bcl-2和上调Bax有关.     

单羧酸转运蛋白反义基因转染人肺腺癌细胞对其生物学特性的影响

目的　研究单羧酸转运蛋白基因第一亚型 (MCT1)反义表达载体转染肿瘤细胞对其细胞内pH(pHi)调节、乳酸转运及生长性质的影响。方法　通过电穿孔法将单羧酸转运蛋白MCT1基因反义表达重组子pLXSN MCT1转染于肺腺癌细胞系A5 49中 ,经G418筛选转染细胞阳性克隆。用PCR方法鉴定MCT1反义表达重组载体在基因组的转染整合 ;以分光光度法测定pHi及乳酸含量变化 ,并以细胞生长曲线研究细胞的生长情况。结果　与未转染的A5 49细胞比较 ,转染MCT1反义表达重组载体的细胞pHi降低、乳酸显著升高 (P <0 .0 0 1) ;且细胞的生长受到明显抑制。结论　单羧酸转运蛋白MCT1基因在肿瘤细胞pHi调节、乳酸转运及细胞的生长中起着重要的调节作用。     

5-氟尿嘧啶联合替尼泊苷对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)和替尼泊苷(VM-26)联合应用对胃癌BGC-823细胞的体外抑制和诱导细胞凋亡的作用.方法:采用MTT法测定5-FU单药(15.63、31.25、62.50、125.00、250.00 mg/L),VM-26单药(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 mg/L)及联合用药(15.63/1.25、31.25/2.50、62.50/5.00、125.00/10.00、250.00/20.00mg/L)对BGC-823细胞的体外生长抑制率,应用流式细胞仪测定15.63 mg/L 5-FU、1.25 mg/L VM-26单药及其联合用药0、12、24、48 h各时间点的细胞周期和凋亡率.结果:VM-26和5-FU单药及联合用药对胃癌BGC-823细胞的生长抑制率随药物质量浓度的增加而增加.15.63 mg/L 5-FU单药处理后12、24 h时S期细胞增多,G2/M期细胞减少;1.25 mg/L VM-26单药处理细胞后G2/M期细胞随时间的延长逐渐增多;联合用药24 h后S期细胞显著减少,G2/M期细胞显著增多;联合用药处理后12、24 h细胞凋亡率比单药5-FU和VM-26处理相同时间点显著增加.结论:5-FU和VM-26单药均可抑制胃癌BGC-823细胞的生长,低剂量联合用药抑制作用较单药应用增加.单药和联合用药均可诱导细胞凋亡,且细胞周期的分布不同.     

单羧酸转运泵基因反义真核表达载体的构建

目的 构建单羧酸转运泵基因反义逆转录病毒真核表达载体。方法 应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增带有双酶切位点的单羧酸转运泵目的基因片段,与带有相同酶切位点的ｐＬＸＳＮ逆转录病毒真核表达载体粘末端进行反向基因插入连接,构建具有反义表达的逆转录病毒载体。结果 构建载体进行双酶切电泳分析及插入片段基因序列分析。证明反义载体构建成功。结论 应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增插入ＤＮＡ片段,简单、灵活、快捷。双酶切定向连接构建     

环孢素A对人胃癌BGC823细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究环孢素A(CsA)对人胃癌BGC823细胞的生长增殖以及凋亡的影响.方法 MTT法检测不同浓度CsA处理24、48、72 h后对BGC823细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期、活性氧(ROS)含量及细胞线粒体膜电位(△Ψm)改变;Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率.结果 CsA在5～20 μmol/L浓度范围内和24 ～ 72 h时间范围对BGC823细胞增殖有显著抑制作用,与药物剂量、作用时间呈现量效和时效的依赖性;FCM结果显示CsA浓度依耐性使细胞周期阻滞于G0/G1期,与对照组相比差异有统计学意义(F=33.45,P＜0.05,P＜0.01);细胞凋亡率随CsA作用浓度增加而增加;5～ 20μmol/L CsA浓度范围细胞内ROS含量显著增加(F =46.17,P＜0.01),细胞线粒体膜电位明显降低.结论 CsA对BGC823细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与阻滞细胞生长周期、细胞内ROS含量增加以及线粒体膜电位下降相关.     

鞘内注射单羧酸转运蛋白抑制剂α-氰基-4-羟基肉桂酸缓解大鼠神经病理性疼痛

目的 观察鞘内注射4-CIN对坐骨神经慢性缩窄性损伤（CCI）大鼠神经病理性疼痛的影响.方法 18只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组（n=6）：假手术组（S组）、CCI组（C0组）及4-CIN组（C1组）.C0组与C1组建立CCI动物模型,S组仅分离而不结扎坐骨神经.术后第2天,C1组鞘内注射溶解于10％二甲基亚砜（DMSO） 10μl中的4-CIN（α-cyano-4-hydroxy-cinnamate）100 μmol,C0组仅鞘内注射DMSO10μl.各组在术前1d、术后第1,3,7,10,14天（T0-5）测定大鼠机械缩足反应阈值（PWMT）和热缩足反应潜伏期（PWTL）.结果 各组术前PWMT和PWTL差异无统计学意义（P＞0.05）.与S组相比,C0组在T1-5时PWMT[（11.71±2.81）g,（9.76±1.00）g,（8.22±1.33）g,（6.50± 1.48）g,（4.67± 1.03）g]、PWTL[（11.36±2.18）s,（11.60±2.54）s,（8.54±1.42）s,（7.59±1.00）s,（6.88±0.42）s]均出现明显降低（P＜0.05）,而C1组在给药后T2-5时与S组无明显差异（P＞0.05）.结论 鞘内注射4-CIN可缓解CCI所致的慢性神经病理性疼痛.     

选择性COX-2抑制剂对胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响

目的：观察塞来昔布对胃癌细胞株BGC-823细胞增殖和凋亡的影响，寻找安全有效的治疗胃癌的化疗药物。方法：常规培养胃癌细胞株BGC-823至80％融合，加入不同浓度塞来昔布继续培养，采用噻唑蓝（MTT）比色法观察其对胃癌BGC-823细胞生长的影响。流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况。RT-PCR技术检测p21和Fas的表达。结果：MTT比色法显示体外不同浓度塞来昔布均能抑制胃癌BGC-823细胞生长，呈浓度和时间依赖性，各浓度组间比较有显著差异（P＜0．05）。流式细胞仪检测发现在0～100tzmol／L内，随浓度增加G，期细胞数增加，S期细胞数减少；RT—PCR显示塞来昔布干预后胃癌BGC-823细胞p21和Fas的表达增强且呈浓度依赖性，各浓度组间比较，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：体外塞来昔布抑制胃癌BGC-823细胞增殖和促进其凋亡，可能与p21上调阻止细胞周期进展和促进Fas表达诱导细胞凋亡有关。     

大蒜素对胃癌细胞BGC-823增殖影响的研究

目的研究大蒜素对胃癌BGC-823细胞增殖的影响.方法通过细胞培养技术、瑞氏染色、MTT实验方法,观察大蒜素对胃癌细胞生长的影响.结果 BGC-823细胞在大蒜素的作用48 h后,出现体积变小、核固缩等形态学改变.大蒜素对胃癌细胞的生长曲线有明显的抑制作用,其抑制作用与大蒜素的浓度和时间呈正相关.结论 大蒜素对体外培养的BGC-823细胞具有明显的增殖抑制作用.     

双氢青蒿素对人胃癌细胞BGC-823细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

研究双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）对人胃癌细胞BGC-823细胞增殖、凋亡的影响及机制。 方法采用噻唑蓝（methylthiazoletetrazolium,MTT）法检测DHA对人胃癌细胞BGC-823增殖的抑制作用;用流式细胞技术、荧光显微镜、透射电子显微镜检测经DHA处理后BGC-823细胞的凋亡率及形态特征的变化;Western印迹方法检测凋亡相关基因Bax、Caspase-3、Caspase-8表达的变化。 结果MTT分析表明,DHA作用可明显抑制BGC-823细胞的增殖,抑制率随药物浓度的增加而增大,且随着时间的延长而增大,具有显著的剂量和时间依赖性（P＜0.01）,半数抑制浓度(IC50值)为3.4 μmol/L。流式细胞术检测结果显示,随着DHA药物浓度的增加,凋亡峰愈加明显,并呈现出剂量依赖性（P＜0.01）。形态学的观察结果：BGC-823细胞在DHA作用下出现典型的凋亡形态。Western印迹显示：Bax、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达随着DHA给药浓度的增加而增高。 结论DHA对BGC-823细胞增殖有抑制作用;DHA通过上调Bax、Caspase-3、Caspase-8表达促进BGC-823细胞凋亡。     

硝酸镓对胃癌细胞增殖与凋亡的作用

目的通过硝酸镓、顺铂单药及二者联合用药对胃癌BGC823细胞作用,观察其对胃癌BGC823细胞诱导凋亡、抑制增殖的影响。方法通过对胃腺癌BGC823细胞培养及干预,采用流式细胞仪技术对凋亡细胞进行测定;MTT技术对肿瘤细胞增殖进行测定。结果MTT及流式细胞仪检测结果显示：硝酸镓对BGC823细胞作用呈剂量一时间依赖效应;小剂量硝酸镓与顺铂配伍应用能大大提高顺铂作用效应,配伍高浓度组在24h、48h、72h的抑制率为70．0％、71．4％、72．3％。结论硝酸镓对胃癌细胞的作用与顺铂无明显差异,为肿瘤治疗及制备抗肿瘤药物提供新的途径。     

星形胶质细胞上调基因-1对胃癌干细胞增殖、凋亡及干性的影响

目的探讨星形胶质细胞上调基因-1（AEG-1）在胃癌干细胞中的表达及其作用。方法采用实时荧光定量技术（qRT-PCR）及Western blotting检测胃癌干细胞（HGC-27、MKN-45）及相应非干细胞mRNA及蛋白表达水平,采用瞬时转染法对AEG-1进行处理,使用MTS、细胞周期检测细胞增殖情况及作用机制,Annexin Ⅴ及Caspase-3/7活性检测细胞凋亡情况,干细胞成球实验评估AEG-1沉默对胃干细胞干性的影响,裸鼠体内成瘤实验评估AEG-1对裸鼠体内胃干细胞肿瘤发生的影响。Ⅴ结果胃癌干细胞MKN-45中AEG-1表达水平高于非干细胞组（P < 0.01）;AEG-1-siRNA转染的癌干细胞导致癌干细胞周期停滞在G₁期,明显抑制了细胞增殖（P < 0.01）;Annexin Ⅴ及Caspase 3/7活性检测AEG-1敲低可诱导胃干细胞凋亡;AEG-1表达被敲低时显著抑制了胃癌干细胞的成球能力;AEG-1缺失抑制了肿瘤干细胞的体内成瘤能力。结论AEG-1沉默抑制细胞增殖,诱导胃癌干细胞G₁期细胞周期停滞和细胞凋亡,抑制肿瘤发生,在胃癌干细胞的肿瘤发生中起着积极作用。     

不同pH值条件下多柔比星对胃癌BGC823细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的 探讨在不同pH值培养条件下多柔比星(doxorubicin,ADM)对胃癌BGC823细胞增殖、凋亡能力的影响及初步机制研究。 方法 采用细胞活性测定试剂盒(CCK-8)法检测不同pH值培养条件下多柔比星对胃癌细胞BGC823增殖活性的影响;应用Annexin V/PI双染法,在荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态,用流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡率;采用qRT-PCR法检测p-AKT、BCL-2和NF-κB基因在胃癌细胞中的表达。 结果 ①ADM对胃癌BGC823细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)值为5.277 μg/mL,考虑化疗药物毒性及后续实验,ADM剂量选择该细胞株IC₅₀值1/4的浓度(即1.319 μg/mL)用于进行后续实验;②随着pH值升高,ADM对BGC823细胞增殖活性的抑制作用增强,当pH达到7.4时,抑制增殖作用最明显;③随着pH值升高,ADM对BGC823细胞凋亡水平明显增加,当pH达到7.4时,促凋亡作用最明显,再提高pH浓度,促凋亡作用能力不明显;④不同pH(pH 6.8～7.6)环境下,ADM处理后,随着pH升高,BCL-2、NF-κB和p-AKT基因表达水平明显降低。 结论 升高细胞外pH值能明显提高ADM对BGC823细胞抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的能力,这种与pH值相关的ADM抗肿瘤效果可能是通过抑制AKT的磷酸化,阻止NF-κB、Bcl-2等抗凋亡基因表达来实现的。      

INI1调节胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭能力的机制研究

目的：探讨INI1在胃癌进展中的作用及其调节胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭能力的相关机制。 方法：以荧光定量RT-PCR和Western-blot技术检测胃癌、癌旁组织的INI1表达情况并进行比较;将INI1-GFP真核表达质粒转染人胃癌SGC7901细胞株,MTT法检测肿瘤细胞增殖活性、流式细胞术检测细胞周期,以TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡情况,细胞划伤试验和侵袭小室试验检测细胞侵袭转移能力。同时,用荧光定量RT-PCR和Western-blot技术检测转染前后细胞株的INI1水平,检测增殖相关基因P16、P21、Cyclin D1、Cyclin A水平,检测凋亡相关基因P53、Bax、Bcl2、Caspase3水平和侵袭相关基因ICAM1、MMP2、MMP9、TIMP1水平。 结果：胃癌组织的INI1表达水平低于癌旁组织。INI1-GFP真核表达质粒转染人胃癌SGC7901细胞株后细胞的增殖和侵袭能力受到抑制、凋亡能力及G0/G1期细胞增高。转染后INI1和P16、P21、P53、Bax、TIMP1表达增高,Cyclin D1、Cyclin A、Bcl2、ICAM1、MMP2、MMP9表达下调,而Caspase3表达无明显变化。 结论：INI1在胃癌癌变、进展中发挥重要作用,这种作用是通过调节胃癌细胞的增殖、凋亡、侵袭能力而实现的。     

环状RNA-VANGL1对胃癌细胞增殖和凋亡的作用及机制研究

目的 探讨环状RNA-VANGL1(circ_VANGL1)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其中的分子机制。方法 采用qRT-PCR检测circ_VANGL1在胃癌组织和细胞中的表达水平,并分析circ_VANGL1与患者临床病理因素如年龄、性别、肿瘤体积、病理分型、分期、淋巴结转移之间的相关性。构建携带circ_VANGL1全长序列的慢病毒（Lenti-circ_VANGL1）和携带circ_VANGL1 shRNA的慢病毒（Lenti-circ_VANGL1-shRNA）分别转染胃癌细胞株（NCI-N87和HGC-27）。CCK-8实验检测circ_VANGL1表达上调或下调后NCI-N87和HGC-27细胞的增殖变化。Annexin Ⅴ/PI实验检测circ_VANGL1表达上调或下调后NCI-N87和HGC-27细胞凋亡的变化。JC-1法检测circ_VANGL1表达上调或下调后NCI-N87和HGC-27细胞线粒体势能变化。Western印迹法检测Fas、FADD、bax、bcl-2、细胞色素C以及Caspase-3活性片段的蛋白表达变化。结果 circ_VANGL1在胃癌组织中表达显著高于癌旁组织,且其表达水平与肿瘤体积、分期和淋巴结转移显著正相关。Lenti-circ_VANGL1可以上调NCI-N87和HGC-27细胞内circ_VANGL1表达并促进细胞增殖;Lenti-circ_VANGL1-shRNA可以下调circ_VANGL1表达并诱导细胞凋亡。Lenti-circ_VANGL1-shRNA可以导致细胞线粒体膜势能降低。Lenti-circ_VANGL1-shRNA可以促进Fas细胞表面死亡受体（Fas cell surface death receptor, Fas）、Fas相关蛋白死亡结构域(Fas associated via death domain, FADD)、bax（BCL2 associated X）、胞质细胞色素C（cytoplasmic cytochrome C）以及Caspase-3活性片段表达增高,降低bcl-2和线粒体细胞色素C蛋白表达。miRDB软件显示circ_VANGL1存在12个潜在的靶miRNAs,其中miR-605-3p、miR-377-5p、miR-4468以及miR-5008-5p等4个miRNAs的表达在circ_VANGL1表达下调后显著增高。结论 circ_VANGL1在胃癌中表达异常增高,参与调控胃癌细胞的增值和凋亡,在胃癌发生发展过程中发挥重要作用。