MicroRNA-195 在长期脑低灌注诱发认知功能障碍中的作用及分子机制

由各种原因引起的长期脑低灌注（chronic brain hypoperfusion,CBH）被认为是轻度认知障碍（mild cognitive impairment,MCI）的临床前病理表现,MCI 会引起患者的认知功能障碍,进一步发展为阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）或血管性痴呆（vascular dementia,VaD）。目前尚无有效的治疗药物,早期干预被认为治疗AD 或VaD 的有效措施。VaD 和AD具有相似的病理学特征：在细胞外表现为β- 淀粉样蛋白（β-amyloid protein,Aβ）沉积所引起的老年斑、在细胞内表现为tau 蛋白过度磷酸化所引起的神经纤维缠结,此外还包括神经元轴突和树突的退化。我们的研究发现采用双侧颈总动脉结扎（2VO）8 周构建大鼠CBH 动物模型表现为学习和记忆能力的下降。随后研究表明：CBH 可引起海马和皮层miR-195 的表达下调,下调的miR-195 会上调淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein,APP）及APP β裂解酶1（Beta-secretase 1,BACE1）的表达,引起Aβ的聚集;下调的miR-195 在通过促进Aβ的生成促进LCMT-1 表达的同时转录后调节PME-1 表达,从而参与CBH 大鼠海马区蛋白磷酸酯酶2A（protein phosphatase 2A,PP2A）活性的调节过程,并通过诱导Aβ的生成激活CDK5/P35 向CDK5/P25 的转化协同靶向调节cdk5r1 的转录后翻译促进了tau 蛋白过度磷酸化过程。进一步研究发现CBH 通过下调miR-195 激活N-APP/DR6/caspase6/ caspase3 信号通路,诱导神经元树突退化和神经元的死亡。结论：miR-195 以多靶点调控方式调节Aβ级联反应过程,在CBH诱发认知功能障碍的过程中发挥重要作用。     

以tau 为靶点的拟AD 模型及其在药理学研究中的应用

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是老年人中发病率最高的神经退行性疾病。目前临床缺乏治疗AD 的有效药物。以往以Aβ为靶点的药物研究均告失败,AD 患者另一典型病理变化- 微管相关蛋白tau 异常过度磷酸化,越来越引起研究者的关注。tau 蛋白磷酸化受蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A,PP2A）和蛋白磷酸激酶糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthasekinase-3β,GSK-3β）等的共同调节。开发PP2A 激活剂和GSK-3β抑制剂成为目前AD 药物研究的新策略。
目前国际较为认可的以tau 为靶点的拟AD 动物模型为P301L 突变转基因动物模型、P301S突变转基因动物模型和APP-PS1-P301L 三转基因动物模型。细胞模型包括：过表达tau40 的基因转染细胞、过表达P301L/P301S 的基因转染细胞、PP2A 抑制剂冈田酸或GSK-3β激活剂WT/GFX处理的细胞模型等。
山茱萸环烯醚萜苷（Cornel iridoid glycoside,CIG）是我室从山茱萸中提取的主要有效部位。我室前期研究发现,CIG 在冈田酸拟AD 细胞模型上能够抑制tau 蛋白过度磷酸化,但其作用机制尚不清楚。我课题组从GSK-3β通路和PP2A 通路两方面,研究CIG 抑制tau 蛋白过度磷酸化的作用机制,为研发治疗AD 的创新药物提供实验依据。
我们的研究发现：在tau 蛋白过度磷酸化的4 个细胞模型和3 个动物模型上,CIG 能够降低tau 蛋白在多个位点的过度磷酸化,其作用机制包括：CIG 可直接降低PP2A 催化亚基C 的去甲基化及磷酸化以提高PP2A 活性,从而促进tau 蛋白的去磷酸化;也可通过减少GSK-3β抑制GSK-3β活性,从而减低tau 蛋白的磷酸化。CIG 能够抑制神经细胞和动物脑内tau 蛋白过度磷酸化,具有治疗AD 的应用前景。     

CIG 以PTPA 为靶点降低rTg4510 转基因小鼠的tau 蛋白磷酸化及病理表现的研究

前言：微管相关蛋白tau 在阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）的发病机制中发挥重要的作用,并且得到了越来越多的关注。过表达P301L 突变tau 蛋白的rTg4510 转基因小鼠具有明显的tau 病理表现,广泛应用于AD 的基础研究及药理研究中。山茱萸环烯醚萜苷（cornel iridoid glycoside,CIG）为中药山茱萸的有效成分,在我室之前的研究中显示CIG 在体外模型中可以降低tau 蛋白的磷酸化。方法：本研究应用rTg4510 小鼠为AD 病理模型,给予CIG 药物处理3 个月后进行行为学检测,之后分别灌注固定取材及新鲜取材。应用Western Blot 等方法检测磷酸化tau 蛋白、磷酸化调节酶、微管及突触相关蛋白的表达水平;应用免疫荧光等方法观察病理性tau 蛋白、微管的形态、突触相关蛋白表达等;应用Serine/Threonine Phosphatase Assay 检测磷酸酯酶PP2A 的活性。结果：实验结果显示CIG 可以增加rTg4510 小鼠在Morris 水迷宫中的空间和工作记忆,改善在物体识别实验中的物体识别记忆,降低小鼠的过度活跃状态。同时CIG 可以改善rTg4510 小鼠的脑萎缩,降低海马区域的神经元的丢失;同时CIG 可以增加rTg4510 小鼠骨架相关蛋白的表达,改善细胞骨架形态;增加小鼠突触NMDA 受体及突触相关蛋白的表达,增加突触的数量。其主要的机制为CIG 降低了rTg4510 小鼠脑内多个位点的磷酸化,降低了病理性tau蛋白的沉积;同时降低了磷酸化的可溶性和不可溶性tau 蛋白。进一步探讨CIG 降低磷酸化的机制,发现CIG 对于主要的磷酸激酶GSK-3β的作用不明显;而CIG 可以增加主要的磷酸酯酶PP2A 的甲基化修饰,并且可以调节PP2A 甲基化调节酶LCMT-1/PME-1 的比例。同时,CIG 可以增加内源PP2A 酶的激活因子PPP2R4 的表达,并增加PP2A 酶的活性。结论：CIG 可以改善rTg4510 转基因小鼠的认知能力,改善脑萎缩和神经元的丢失,保护细胞骨架形态和突触。其主要机制为CIG 降低了tau 蛋白的过度磷酸化及病理性tau 蛋白的沉积。进一步研究发现CIG 可能通过增加内源性PP2A 激活剂PPP2R4 的表达,进而直接或通过调节PP2A 的修饰间接地增加PP2A 活性。因此本研究提示CIG 可能作为一个潜在的以PP2A 激活为靶点的抗AD 药物。     

脂肪因子参与阿尔茨海默病的研究进展

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）又称老年痴呆,是一种最常见的老年中枢神经退行性疾病。其主要病理改变有：神经元外β- 淀粉样蛋白（β-amyloid protein,Aβ）沉积形成的老年斑、神经元内tau 蛋白异常磷酸化形成的神经原纤维缠结以及神经元大量丢失或损伤。近年研究发现,脂肪因子与Aβ沉积、tau 蛋白过度磷酸化以及神经元凋亡之间具有紧密的联系。该文主要针对脂联素（adiponectin,APN）、瘦素（leptin,LP）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）等脂肪因子对AD 的作用机制做一综述,为AD 的临床治疗提供新的思路。     

脑益康对阿尔茨海默病大鼠tau蛋白过度磷酸化及其相关酶类表达的影响

目的探讨脑益康对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化及其相关酶类表达的影响。方法采用β-淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）右侧海马注射制备AD大鼠模型,免疫组化法和Western blot法检测大鼠海马神经元tau蛋白在Ser404位点的磷酸化水平、蛋白磷酸酯酶2A（PP-2A）的表达情况,ELISA法检测糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）蛋白的水平。结果AD模型组大鼠海马组织p-tau（Ser404）、GSK-3β表达增加,PP-2A表达减少,与假手术组的差异有高度统计学意义（P〈0.01）;脑益康治疗组大鼠的p-tau（Ser404）、GSK-3β表达显著减少,PP-2A表达显著增加,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。结论脑益康可通过增加PP-2A的表达和抑制GSK-3β的表达减轻AD模型大鼠tau蛋白的过度磷酸化。     

蛋白磷酸酶2A活性调节机制及其在阿尔茨海默病中的作用

蛋白磷酸酶2A（PP2A）是脑内主要的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酯酶,参与细胞内多种生理和病理过程,尤其在阿尔茨海默病（AD）中,PP2A与AD的主要病理特征密切相关。PP2A活性的下调会增加tau蛋白的过度磷酸化、促进淀粉样前体蛋白的形成、增加神经元的缺失。以PP2A为靶点的药物研发,可能为AD治疗带来新的希望。本文对PP2A结构、活性调节及其在AD发病中作用的研究进展进行了综述。     

人参皂苷Rg1对冈田酸所致大鼠脑片tau蛋白磷酸化的影响

目的：观察人参皂苷Rg1对阿尔茨海默病（Alzhei mer＇s disease,AD）样tau蛋白磷酸化大鼠脑片模型中磷酸化tau蛋白（phosphorylatedtau protein,P-tau）、蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A,PP2A）及tau蛋白表达的影响,以研究其对tau蛋白磷酸化的抑制作用机制。方法：将5周龄雄性Wistar大鼠脑片（含皮层和海马）随机分为空白对照组、模型组和低、中、高浓度人参皂苷Rg1组,每组10张脑片。脑片置于人工脑脊液中培养。人参皂苷Rg1组培养液中首先加入人参皂苷Rg1使其浓度分别为60、120和240μmol/L,作用2h。模型组和3个浓度人参皂苷Rg1组培养液中分别加入冈田酸（okadaic acid,OA）,使其浓度分别为1μmol/L,作用3h,空白对照组不加任何处理。采用免疫组织化学染色、图像分析技术等方法,检测皮层和海马P-tau、PP2A和tau蛋白的表达水平。结果：与空白对照组比较,模型组P-tau蛋白的表达增加（P〈0.01）,PP2A和tau蛋白的表达水平降低（P〈0.01,P〈0.05）;3个浓度人参皂苷Rg1组与模型组比较,P-tau蛋白的表达减少（P〈0.01）,PP2A和tau蛋白的表达增加（P〈0.01,P〈0.05）,其中以高浓度人参皂苷Rg1效果最佳。结论：人参皂苷Rg1可以上调AD样tau蛋白磷酸化大鼠脑片模型中PP2A的表达从而促进P-tau的去磷酸化,以此途径抑制tau蛋白磷酸化。     

白细胞介素-10对冈田酸诱导的阿尔茨海默病模型大鼠的保护作用

目的:观察细胞因子白细胞介素-10(IL-10)预处理对阿尔茨海默病(Alzheimer’disease,AD)模型鼠行为学和分子生化改变的保护作用,并探讨其机制?方法:SD大鼠海马微量注射冈田酸(okadaic acid,OA)及 IL-10建立AD 模型?用水迷宫检测大鼠逃避潜伏期;用Western blot方法检测海马匀浆中蛋白磷酸酯酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)和淀粉样蛋白前体(amyloid precursor protein,APP )的表达量;用流式细胞术检测肠系膜淋巴细胞中的CD4+细胞数与CD8+细胞数的比值?结果:大鼠海马注射OA后,动物的水迷宫逃避潜伏期时间增加,且高浓度OA组水迷宫逃避潜伏期时间均长于低浓度OA组;海马内PP2A蛋白的表达下调,且随着OA浓度的加大,对PP2A蛋白表达的抑制作用加强,APP蛋白的表达增强,且随着OA浓度的加大,对APP蛋白表达的增强作用更明显?IL-10与OA注射入大鼠海马后,动物的水迷宫逃避潜伏期时间明显少于仅注射OA的AD模型动物;IL-10能够逆转OA引起的PP2A蛋白表达减少,对抗OA引起的APP蛋白表达增加;IL-10可使OA诱导的CD4+/CD8+增加翻转到对照水平?结论:大鼠海马多次微量注射OA可诱导大鼠产生AD样病变,即可诱导AD模型,IL-10可以抑制OA诱导的大鼠产生AD样病变,IL-10的这种作用与它抑制炎症反应有关?     

金钗石斛生物碱抗老年痴呆基础研究

研究目的：探究金钗石斛生物碱（Dendrobium nobil Lindl Alkaloids,DNLA）抗老年痴呆作用及作用机制。方法：采用右侧脑室注射脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）或Aβ25-35 制备大鼠学习记忆功能减退模型、APP/PS1 转基因阿尔茨海默病模式小鼠动物模型,以及Aβ25-35 或氧糖剥夺诱导的大鼠原代神经元损伤细胞模型,通过行为学、组织形态学、免疫荧光、PCR、Western blot等技术手段,围绕学习记忆改变、炎症、tau 蛋白磷酸化、Aβ清除、自噬等评价DNLA 的抗老年痴呆作用及作用机制。结果：在LPS 诱导的大鼠学习记忆减退模型,预防性给予DNLA（20,40,80 mg·kg-1）,大鼠逃避潜伏期和搜索距离缩短,神经元坏死凋亡显著改善,其机制可能与降低海马caspase3/8 mRNA 表达、减少Aβ1 -42 产生、减轻海马Tau 蛋白磷酸化有关,值得注意的是DNLA
（80 mg·kg-1）的作用与甾体类抗炎药布洛芬相似,提示DNLA 的改善记忆作用与抗炎作用有关,后续研究发现DNLA 可抑制p-p38 MAPK 和NF-κB 通路降低炎症因子TNF-α及其受体TNFR1 的表达。在Aβ25-35 诱导的大鼠痴呆模型,给予DNLA 后可改善大鼠空间学习成绩,明显减少海马组织Aβ1-42 的含量,降低β- 淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein, APP）和BACE1 蛋白在海马组织的表达,另外,DNLA 可预防Aβ25-35 诱导的小鼠海马神经元及其突触缺失,该效应至少与增加其海马与皮质脑源性神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子及睫状神经营养因子等有关。在APP/PS1 转基因阿尔茨海默病模式小鼠,DNLA 可通过诱导神经元自噬改善模式小鼠空间学习记忆能力。离体细胞实验发现DNLA 抑制氧糖剥夺诱导的大鼠神经元细胞活力降低,减轻细胞凋亡,降低细胞膜通透性,改Aβ25-35 诱导的神经元轴突变性,作用机制与降低［Ca2+］i、增高MMP水平、下调caspase-3/12 基因表达、诱导自噬有关。结论：DNLA 可改善LPS 或Aβ25-35 诱导的大鼠学习记忆功能减退模型、APP/PS1 转基因阿尔茨海默病模式小鼠的学习记忆功能,作用机制与抗炎、抗凋亡、诱导自噬,减少Aβ沉积和tau 蛋白磷酸化等有关。     

阿尔茨海默病脑糖代谢障碍和胆碱能神经元退变机制

目的：针对脑β- 淀粉样蛋白沉积（β-amyloid,Aβ）和Tau 异常聚集的阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）治疗的临床试验先后失败,我们有必要重新审视和理清AD 主要病理生理特征（Aβ沉积、Tau 异常磷酸化、脑糖代谢下降和神经元/ 突触丢失）之间的关系,寻找新的干预靶标。方法：利用二脱氧葡萄糖和匹茨堡化合物B 正电子断层扫描（FDG-PET 和PiB-PET）检测AD 患者和认知功能正常对照者脑葡萄糖代谢和Aβ沉积,利用高效液相色谱荧光检测方法检测人血、体外培养细胞和模型动物血与脑组织硫胺素代谢物水平,利用饮食剥夺硫胺素、基因敲减方法等制备硫胺素代谢障碍动物和细胞模型,高尔基染色、免疫组化、免疫印迹、电生理、水迷宫等方法研究模型动物和神经元等细胞形态学、生化指标和功能状态。结果：AD 患者全血硫胺素活性形式——二磷酸硫胺素（Thiamine diphosphate,TDP）水平显著降低且与脑葡萄糖代谢显著相关,而AD患者脑Aβ沉积与血TDP水平无统计学关系。硫胺素缺乏小鼠脑糖代谢显著低于对照小鼠,并与脑、血TDP 水平显著相关。6 个月、10~12 个月APP/PS1 转基因小鼠脑内Aβ斑块和可溶性Aβ水平显著高于野生型小鼠,而脑糖代谢、基底前脑胆碱能神经元数目却与野生型小鼠并无统计学区别,也与血和脑TDP 水平无显著相关。硫胺素缺乏显著增加模型小鼠脑胰岛素抵抗、磷酸化Tau 水平,导致内侧隔核胆碱能神经元及其突起显著减少、骨成形蛋白-9 减少,过表达骨成形蛋白-9 可显著减少硫胺素代谢异常导致的胆碱能神经元及其突起的减少。硫胺素焦磷酸激酶拮抗剂和RNA 干扰显著降低细胞内TDP 水平并减少树突棘密度。初步的临床病例研究结果显示,硫胺素衍生物苯磷硫胺能长期改善AD 患者的认知功能、其作用独立于脑内Aβ沉积。结论：AD 脑糖代谢、胆碱能神经变性和功能损害独立于脑内Aβ沉积,与硫胺素代谢障碍导致的脑胰岛素抵抗、Tau 异常磷酸化和骨成形蛋白-9 下降密切相关。我们的研究为AD 的疾病修饰治疗和临床诊断标志物研究提供了新的视角。     

知母皂苷B对大鼠海马注射β-AP(25～35)致tau蛋白磷酸化的影响

目的 观察大鼠双侧海马注射β淀粉样肽[β-AP（25～35）]后,海马内p53、Wnt途径抑制剂DKK和磷酸化tau蛋白表达变化,并用此动物模型观察知母皂苷B的作用。方法 用RT-PCR法检测p53和DKK mRNA表达的变化,用免疫组化法检测磷酸化的tau蛋白。结果 AD模型组海马内神经元的tau蛋白过度磷酸化,而p53和DKK mRNA的表达与假手术对照组相比也显著增多：而知母皂苷B给药治疗组均可使这种现象得到明显改善。结论 知母皂苷B可通过抑制β—AP引起的p53及其后续的DKK的表达增加而有效改善AD大鼠脑内神经元的tau蛋白过度磷酸化。     

钙调神经磷酸酶在阿尔茨海默病中作用机制的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's diease,AD)是以进行性认知功能下降和记忆力减退为主要特征的神经系统退行性疾病.AD的主要病理特征是神经原纤维缠结(neuro-fibrillary tangles,NFTs)和细胞外淀粉样老年斑(senile plaques,SP)的形成.NFTs是由于过度磷酸化的微管相关蛋白Tau于神经元内高度螺旋化而成.SP是由淀粉样前蛋白(amyloid precursor protein,APP)在β-分泌酶(β-secretase)和γ-分泌酶(γ-secretase)水解作用下形成β-淀粉样肽(β-amyloid peptid,Aβ)在细胞外沉积而成.除少数家族性AD外,大部分散发性AD的发病机制尚未明确.近年来关于AD发病机制研究很多,有β-淀粉样蛋白瀑布假说、tau蛋白假说、钙离子失衡假说等.已经有研究证实钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)与Tau蛋白的磷酸化[1]、突触的可塑性[2]及神经元细胞的凋亡[3]等有关,但CaN在AD中的具体机制还不甚明了.本文就CaN在AD中的作用机制进行综述.     

阿尔茨海默病的外周机制和防治途径

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）以进行性认知功能减退为主要表现,是最为常见的神经系统退行性疾病。AD 患者脑内的主要病理变化包括β淀粉样蛋白（β-amyloid protein,Aβ）在细胞外沉积形成的老年斑、异常磷酸化Tau 蛋白在细胞内聚集形成的神经原纤维缠结、淀粉样血管病和神经元丢失。传统观点认为,AD 是一个大脑自身异常的疾病,因此过去AD 防治策略的重点在于使药物进入脑内而发挥干预作用。近年来的研究表明,AD 患者中Aβ沉积也存在与外周脏器组织如心脏和肠道,我们的工作也发现外周脏器的功能状态与Aβ代谢相关,外周脏器组织在脑内Aβ清除上发挥重要作用。我们新近证实,来源于外周血液的Aβ也能进入正常小鼠脑内,诱发AD 特征性病理变化、损害神经功能。腹腔透析可以降低AD 小鼠血液Aβ水平,改善脑内微环境,促进脑内Aβ清除。这些发现提示,AD 可能是一个系统疾病,需要从系统这一新的角度来理解AD 发生机制、寻找AD 防治措施。     

山茱萸环烯醚萜苷对蛋白磷酸酶2A催化亚基C磷酸化的调节机制

目的 探讨山茱萸环烯醚萜苷（Cornel iridoid glycoside,CIG）上调蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A,PP2A）,PP2A活性抑制tau蛋白磷酸化的作用机制。方法 1确定最佳转染条件：将Src质粒DNA（0.2、0.4、0.6、0.8 μg）瞬时转染入小鼠神经瘤母细胞（Neuro-2A cell,N2a细胞）,观察不同量Src对PP2A催化亚基C磷酸化和tau蛋白磷酸化的影响;2将0.6 μg Src质粒DNA转染入N2a细胞,24 h后加入CIG（50、100、200 μg/mL）共同孵育24 h,观察CIG对Src、蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B（protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B）、p-PP2Ac及tau蛋白磷酸化的作用。结果 1转染Src（0.2、0.4、0.6 μg）质粒DNA到N2a细胞,Src蛋白表达明显增加,p-PP2Ac水平上调,PP2Ac蛋白总量表达无变化,tau蛋白在Ser 199/202、Ser 396位点磷酸化显著增加;转染0.8 μg Src质粒DNA到N2a细胞与转染0.6 μg Src相比,p-PP2Ac表达下降,PP2Ac蛋白总量表达无变化,tau蛋白在Ser 199/202、Ser 396位点磷酸化降低。2转染0.6 μg Src质粒DNA到N2a细胞,Src蛋白表达增加,p-PP2Ac表达增加,tau蛋白在Ser 199/202、Thr 205、Thr 217以及Ser 396位点的磷酸化明显增加;CIG对Src蛋白表达无影响,能够抑制p-PP2Ac的表达,抑制tau蛋白在Ser 199/202、Thr 205、Thr 217以及Ser 396位点的磷酸化。此外,CIG能上调PTP1B蛋白表达。结论 CIG对Src蛋白无明显调节作用,但能通过增加PTP1B的表达,降低PP2A催化亚基C磷酸化,从而升高PP2A活性,进一步降低tau的过度磷酸化。CIG对tau蛋白过度磷酸化的抑制作用,将会给阿尔茨海默病的治疗带来广阔的应用前景。     

阿尔茨海默病信号转导机制的研究进展

<正>阿尔茨海默病(AD)是以渐进性遗忘为主要症状的一种神经退行性疾病,其主要病理改变是神经元外β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集形成的老年斑和神经元内过度磷酸化的tau蛋白形成的纤维缠结细丝以及累及小动脉的血管淀粉样变性。磷酸化tau蛋白构成的神经纤维缠结和血管淀粉样变性的核心物质为淀     

Saa3缺失改善阿尔茨海默病模型小鼠认知功能障碍和Tau蛋白病理进展

探究血清淀粉样蛋白A（serum amyloid A, SAA）对阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease,AD）模型小鼠的认知功能及tau蛋白磷酸化水平的影响。构建Saa3缺失的APP/PS1转基因AD小鼠模型和侧脑室内（ICV）注射链脲佐菌素（STZ）AD小鼠模型。采用免疫荧光方法检测两种AD模型小鼠脑内Saa3的表达。记录ICV注射STZ小鼠造模期间的体重变化。采用转棒式疲劳仪、旷场实验和高架十字迷宫分别检测小鼠运动协调和平衡能力、自主运动能力和焦虑程度。Morris水迷宫实验评估小鼠的空间学习和记忆能力。Western blot实验检测小鼠脑组织中tau蛋白的磷酸化水平。结果发现,两种AD模型小鼠脑内Saa3的表达显著增加。Saa3缺失对两种AD模型小鼠的运动协调和平衡能力及自主运动能力无显著影响。Saa3缺失缓解了AD小鼠的焦虑程度。Saa3缺失改善了ICV注射STZ模型小鼠和APP/PS1小鼠的学习和记忆能力损伤。Saa3缺失降低了AD小鼠脑内tau蛋白特定位点的磷酸化水平。组间差异有统计学意义（P < 0.05）。这些结果表明,Saa3参与AD的认知功能和tau蛋白的病理进展,抑制SAA为AD的治疗和预防提供了新策略。     

阻断酪氨酸蛋白激酶Src表达对蛋白磷酸酯酶2A活性和tau蛋白磷酸化的影响

研究细胞内酪氨酸蛋白激酶Src对蛋白磷酸酯酶2A（PP2A）酪氨酸307位点（Y307）磷酸化和活性以及tau蛋白磷酸化的影响，为阿尔茨海默病脑内PP2A活性下调和tau蛋白异常磷酸化机制提供实验依据。体外培养小鼠成神经瘤N2a细胞，转染特异性阻断Src表达的siRNA，检测转染不同时间点PP2A Y307的磷酸化水平、PP2A的活性以及tau蛋白在不同位点的磷酸化水平。     

马钱苷通过抑制蛋白磷酸酶2A催化亚基C磷酸化降低tau蛋白过度磷酸化

目的 探讨马钱苷对tau蛋白过度磷酸化的影响及其作用机制。方法 马钱苷（500、1 000 μmol/L）与人神经母细胞瘤细胞株（SK-N-SH细胞）预孵育24 h,之后加入PI3K抑制剂Wortmannin（WT）及PKA抑制剂GF-109203X（GFX）与SK-N-SH细胞孵育3 h,采用Western blotting方法观察马钱苷对tau蛋白在Thr205、Thr217、PHF-1位点的磷酸化,GSK-3β-Ser9、GSK-3β、PP2A催化亚基C（protein phosphatase 2A catalytic subunit C,PP2Ac）磷酸化/甲基化及PP2Ac的表达。结果 WT/GFX明显抑制p-GSK-3β-ser9的表达,引起GSK-3β活性增高,从而导致tau蛋白Thr205、Thr217、PHF-1位点高度磷酸化。马钱苷能够明显抑制模型细胞tau蛋白在Thr205、Thr217、PHF-1位点的过度磷酸化,但是不能增高p-GSK-3β-ser9的表达,提示马钱苷抑制tau蛋白磷酸化的作用不是通过影响GSK-3β通路实现的。但是实验显示马钱苷能够抑制PP2A催化亚基C Tyr307位点的磷酸化,但对Leu309位点甲基化无影响。结论 马钱苷能够抑制tau蛋白过度磷酸化,机制可能与其抑制PP2A催化亚基C Tyr307位点的磷酸化,提高PP2A活性有关,与GSK-3β通路无关。     

阿尔茨海默病中β-淀粉样蛋白损伤血脑屏障的干预新靶点：晚期糖化终产物受体

阿尔茨海默病（Alzheimer＇ s disease, AD）是老年痴呆的最常见类型,脑内β-淀粉样蛋白（β-amyloid protein, Aβ）沉积形成老年斑（senileplaques,SPs）和过度磷酸化tau蛋白形成神经纤维缠结（ neurofibrillary tangles, NFT）是AD的特征性病理变化。     

α7 神经型尼古丁受体对突触功能和钙信号通路的影响及在阿尔茨海默氏病中的神经保护作用机制研究

目的：研究β- 淀粉样蛋白（ β-amyloid protein,Aβ） 的聚集是否会引起突触形态及相关蛋白表达水平的变化以及与Aβ、胆碱能受体及突触功能密切相关的钙离子通路是否发生变化,进一步探讨这些改变之间是否具有一定的相关性;研究特异性激动原代海马神经元中的 α7nAChR 对突触形态及其相关蛋白、钙信号通路相关蛋白、Ca2+ 浓度以及 α7nAChR 对抗 Aβ 毒性作用的神经保护作用机制,为进一步阐明AD 发病机制提供一定的理论依据。方法：原代培养大鼠海马神经元细胞;实验细胞分为A 组：对照组;B 组：α7nAChRs 特异性激动剂 PNU-282987 处理组;C 组：Aβ1-42 寡聚体处理组;D 组：PNU-282987+ Aβ1-42 寡聚体处理组;采用Real-time PCR 法和蛋白免疫印迹（ Western Blot） 法分别测定各组细胞中突触相关蛋白Syn、PSD95、SNAP25、DYN1、AP180,钙信号通路相关蛋白CaM、CaMKⅡ、pCaMKⅡ、CREB、PCREB mRNA 和蛋白表达水平的变化,流式细胞仪检测神经细胞钙离子水平。结果：Aβ1-42 寡聚体可引起神经元细胞内钙超载,Aβ1-42 寡聚体可减少各组细胞中突触相关蛋白Syn、PSD95、SNAP25、DYN1、AP180 和钙信号通路相关蛋白CaMKⅡ、pCaMKⅡ、CREB、pCREB mRNA 及蛋白表达水平,增加CaM mRNA 及蛋白的表达水平;特异性激动海马神经元细胞α7nAChR 后神经细胞内钙离子水平相对减少,神经元细胞中的突触相关蛋白Syn、PSD95、SNAP25、DYN1、AP180 和钙信号通路相关蛋白CaMKⅡ、pCaMKⅡ、CREB、pCREB mRNA 及蛋白表达水平升高,且能对抗Aβ对突触蛋白及钙通路相关蛋白的影响。结论：Aβ1-42 寡聚体对细胞的神经毒性能够损伤突触功能以及钙信号通路;α7nAChR 可增加突触相关蛋白的表达以及可能通过激活钙信号通路来抵抗Aβ的神经毒性发挥神经保护作用。