郑州市新型冠状病毒核酸检测室间质量评价分析

目的 利用室间质量评价（EQA）评估2020年郑州市实验室新型冠状病毒核酸检测项目的检测能力。方法 对EQA样本采用实时荧光RT-PCR法进行验证,要求参评实验室领取样本2天内完成核酸检测及结果回报,对回报结果按说明书判读条件进行EQA分析。结果 EQA样本可进行实验室间的检测能力评价。31家参评实验室有效回报率为100.00%,29家实验室回报结果完全正确,合格率为93.54%;2家第三方医学检验所成绩为不合格。疾控机构合格率100.00%高于第三方医学检验所89.47%。1个样本检测合格率为93.54%,其他4个样本检测合格率为100.00%。2家不合格检验所整改后成绩合格。结论 郑州市参评实验室新型冠状病毒核酸检测质量整体较好,但个别实验室检测能力尚需提高。     

结直肠癌RAS、BRAF基因状态与临床病理特征的关系

目的分析中国人群结直肠癌患者中KRAS、NRAS及BRAF基因突变状态与临床病理特征之间的关系。方法回顾性分析2018年1月—2020年11月于福建省肿瘤医院接受治疗的370例结直肠癌患者的肿瘤组织标本,检测KRAS、NRAS、BRAF基因突变状态及MMR蛋白表达状态,分析基因突变状态与结直肠癌临床病理特征的关系。结果370例患者中存在KRAS基因突变155例(41.9%),NRAS基因突变19例(5.1%),BRAF基因突变40例(10.8%),其中1例患者突变类型为G469V,其他均为V600E突变。KRAS基因在女性、高中分化患者中突变率高(P<0.05)。NRAS基因突变多见于低分化、浸润型患者(P<0.05)。BRAF V600E突变在右半结肠癌、年龄小于50岁、低分化、浸润型、淋巴结及远处转移患者中的突变率高(P<0.05)。结论KRAS基因突变与性别、分化程度有关,NRAS基因突变与分化程度、肿瘤大体分类有关,BRAF基因V600E突变与肿瘤原发部位、年龄、分化程度、肿瘤大体分类、区域淋巴结及远处转移有关。对结直肠癌患者进行KRAS、NRAS及BRAF基因的检测,为了解中国患者热点基因突变分布情况和临床精准诊疗提供理论依据。     

甲状腺结节TSH受体基因突变和BRAF V600E突变检测的临床意义

目的 探讨甲状腺结节TSH受体基因突变和BRAF V600E突变检测的临床意义.方法 收集120例甲状腺结节患者外周血样本,采用PCR扩增TSH受体基因第8号外显子和BRAF V600E基因,并进行测序,统计不同性质甲状腺结节TSH受体基因和BRAF V600E突变率;比较不同临床特征(性别、年龄、肿瘤大小、被膜外侵犯、淋巴结转移、多发病灶、AJCC分期)患者之间突变率的差异,多因素logistic回归模型分析两种突变分别与甲状腺乳头状癌患者临床特征的相关性.结果 120例甲状腺结节组织病理学诊断为恶性的80例,其中53例(66.25％)患者发生TSH受体基因突变,59例(73.75％)患者发生BRAF V600E突变.单因素分析结果显示,甲状腺结节TSH受体基因突变与甲状腺乳头状癌肿瘤大小、淋巴转移、甲状腺被膜外侵犯、多发病灶、AJCC分期等临床病理特征有关(P＜0.05);多因素分析显示淋巴转移、甲状腺被膜外侵犯、多发病灶、AJCC分期均与甲状腺结节TSH受体基因突变有关(P＜0.05).结论 TSH受体基因突变检测和BRAF V600E突变检测有助于判断甲状腺结节良恶性诊断;伴随甲状腺被膜外侵犯,TSH受体基因和BRAF V600E的突变均明显增加.     

22家医院凝血试验现场测试EQA结果分析

目的 了解湖南省二级以上医院凝血试验的检测质量及不同室间是质量评价(EQA)方式问结果的差异,为进一步规范临床实验室管理和提高凝血试验检验质量提供依据.方法 采用与常规EQA相同批号的质控品用现场测试EQA的方式,收集22家实验室的凝血试验检测结果,并对结果进行分析和评价.结果 22家实验室四项合格率依次为PT-s(79.1%)、APTT(75.5%)、FIB(71.6%)、PT-INR(69.1%),对异常水平质控物的检测PT-s、P,r-INR两项合格率明显偏低(27.3%、36.4%).经X2检验参加常规EQA活动的实验室现场测试EQA与常规EQA间各项目合格率差异无统计学意义(P>0.05),未参加常规EQA活动的实验室与参加常规EQA活动的实验室间现场测试各项目合格率PT-INR、FIB差异有统计学意义(P<0.01),其他差异无统计学意义. 结论 应加强临床对凝血试验在保证医疗质量和医疗安全中的认识,促进实验室操作的标准化,加大对未参加常规EQA活动的实验室的质量监控,以提高检验质量.     

2011年湖南省肿瘤标志物项目检测室间质量评价

目的讨论影响肿瘤标志物(tumor markers,TM)项目检测室间质量评价(EQA)结果准确性的影响因素。方法对2011年TM项目检测的EQA回报数据进行统计分析。结果 2011年TM项目EQA参评实验室合格率为74.3%;各项目检测试剂分组数据和方法学分组数据平均CV值均值大部分高于NACB的最新指南建议值(批间CV<10%)。经无重复双因素方差分析,不同方法分组各项目统计结果合格率及CV值的组间差异有统计学意义(P<0.05),不同试剂分组的CV值差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论本省TM EQA参评实验室过少,EQA样本的靶值代表性待提高;实验室选择的检测系统不一致是TM项目EQA的检测结果的及格率和PT得分不理想的原因;分组测定EQA结果以电化学发光组准确度最好,试剂分组以进口试剂EQA结果精密度较好。     

豫西南地区结直肠癌患者EGFR、KRAS、BRAF基因突变与临床病理特征的关系

目的探讨豫西南地区结直肠癌患者表皮生长因子受体(EGFR)、Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因(KRAS)、B-Raf原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(BRAF)基因突变与临床病理特征的关系,为结直肠癌的精准医学及靶向治疗提供依据。方法选取2014年6月—2016年12月收治的结直肠癌手术切除患者268例,采用荧光定量PCR法检测EGFR基因18、19、20、21号外显子及KRAS基因12、13位密码子和BRAF基因15号外显子突变情况,比较不同临床病理特征的EGFR、KRAS、BRAF基因突变情况。结果豫西南地区结直肠癌患者EGFR、KRAS、BRAF基因突变频率分别为30%、30%、18.6%,EGFR基因突变类型为4种,以19-Del和L858R最常见,KRAS基因突变类型主要为Gly12Asp,BRAF基因突变类型主要为V600E。EGFR、KRAS基因在男性、年龄≥60岁患者中突变率均高于女性、年龄60岁患者(均P0.05),不同肿瘤部位、浸润深度及淋巴结转移的EGFR、KRAS、BRAF基因突变率比较,差异均无统计学意义(均P0.05)。结论豫西南地区结直肠癌患者中,EGFR、KRAS基因突变与性别、年龄有关,BRAF基因突变与患者性别、年龄无关,EGFR、KRAS、BRAF基因突变与肿瘤部位、浸润深度及淋巴结转移均无关。     

下一代测序法检测乙型肝炎病毒YMDD突变的方法学建立及性能评价

目的建立乙型肝炎病毒YMDD突变的下一代测序法,并对此方法进行性能评价。方法采用离心柱法提取血清标本中的DNA,设计引物对乙型肝炎病毒P基因区扩增并靶向捕获,通过下一代测序技术对捕获的DNA进行检测,利用生物信息学分析软件系统对检测结果进行分析,得到基因突变结果,建立下一代测序用于乙型肝炎病毒YMDD突变的检测方法。收集慢性乙型肝炎患者血清样本共229例,采用下一代测序法和Sanger测序法同时检测YMDD基因突变,评价下一代测序法的检测性能。选取5例基因突变阳性的样本(包含不同基因突变型别)、2例基因突变阴性样本,采用下一代测序法对所选样本进行重复检测,评价该方法的重复性。结果建立了乙型肝炎病毒YMDD突变的下一代测序检测方法。对229份临床样本的检测中,2种测序方法均检测到74例(74/229,32.31%)YMDD突变,其中下一代测序法检测到44例(44/229,19.21%)rtM204V突变,25例(25/229,10.92%)rtM204I突变,5例(5/229,2.18%)rtM204V/I混合突变。Sanger测序法检测到47例(47/229,20.52%)rtM204V突变、25例(25/229,10.92%)rtM204I突变和2例(2/229,0.87%)rtM204V/I混合突变。下一代测序法检测到3例Sanger测序法漏检的rtM204V/I混合突变。与Sanger测序法相比,下一代测序法的灵敏度、特异度和准确度均为100%,突变类别完全符合率为95.95%(71/74),部分符合率为4.05%(3/74)。2种方法的一致性(κ)为0.97(P<0.01)。经重复性试验检测,下一代测序法的检测结果均一致,重复性符合率为100%。结论本研究建立的乙型肝炎病毒YMDD突变的下一代测序法灵敏度高,特异性好,重复性好,准确性高,比Sanger测序法更灵敏,能检测到更多的混合突变,为乙型肝炎病毒耐药基因检测提供了新的手段。     

新生儿遗传代谢病筛查室间质量评价结果分析

目的对本实验室连续6年参加卫生部临检中心新生儿遗传代谢病筛查实验室室间质量评价的结果进行回顾分析,总结实验过程中的问题,提高质控水平。方法分别采用荧光法和时间分辨荧光分析法(DELFIA)对卫生部临检中心分发的各批次质评样本进行检测,项目包括苯丙氨酸(Phe)和促甲状腺激素(TSH),对反馈结果进行总结分析。结果 6年来共接受卫生部临检中心18批次共计90份的质评样本,测定Phe和TSH结果偏倚范围分布较广(分别为-62.50%~66.67%和-66.67%~54.31%),相对偏倚平均值分别为8.62%和10.18%;90份质评样本中,85份Phe测定值和84份TSH测定值偏倚在允许范围内,定量判断符合率分别为94.44%和93.33%;90份Phe与TSH定性判断结果均与反馈的质评结果一致,定性判断符合率均为100%;所有项目评分结果均大于80%。结论实验室的室间质评结果于控制限内;接受卫生部临验中心实验室质量监控,有助于评估实验室检验能力,即时发现并改正检验过程中存在的问题,从而使检测质量得到提高,实验结果的准确性和可靠性得到有效保证。     

山西省医疗机构临床实验室基本情况调查分析

目的分析了解山西省各级各类医疗机构临床实验室基本情况,为进一步改进实验室管理策略提供参考依据。 方法2015年,山西省临床检验中心对已纳入本省室间质量评价(external quality assessment, EQA)系统的所有医疗机构临床实验室发放调查表598份,通过网络回收医院(医疗机构等级类型、床位数、信息系统建设)和实验室开展检测项目总数及自动化比例;各专业(临床血液、体液,常规化学,免疫,微生物)开展检测项目数及占总业务额百分比;实验室人员组成等基本信息。然后,用Microsoft Excel 2003软件进行结果汇总分析。 结果回报医疗机构临床实验室调查表258份,回报率43.1%。91.8%(45/49)的三级医疗机构临床实验室配备实验室信息系统(laboratory information system,LIS),62.9%(105/167)的二级医疗机构临床实验室配备了LIS。158家综合医院开展检测项目数在121(6~880)项之间;自动化比例约80.8%。常规化学项目占总业务额的百分比最高(约48%);其次为临床血液、体液项目(约25.4%)。258家医疗机构检验科负责人高、中、初级职称比例为1:2:0.3;检验技术人员高、中、初级职称比例为1:4:7:8;检验医师占10.3%。 结论对山西省临床实验室的基本情况有了较细致的了解,今后医疗机构实验室仍需加强信息系统建设,合理设置检验项目,优化人员结构,适当提高检验医师比例。     

艾滋病筛检人群HIV-1抗体确证阳性率分析

【目的】对人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体筛查有反应样本与HIV-1抗体确证阳性结果进行对比分析,探讨筛查检测与确证检测结果的符合性。【方法】根据中国疾病预防控制中心《全国艾滋病检测技术规范》(2015版),对2017年12月—2018年12月上海市宝山区289份酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫渗透/层析试验HIV筛查有反应标本(其中ELISA试验286份,免疫渗透/层析试验276份)和70份化学发光法筛查有反应,但ELISA、免疫渗透/层析试验均为阴性标本,采用免疫蛋白印迹试验(WB)进行确证,并对筛查和确证结果进行对比分析。【结果】经WB确证试验显示,289份ELISA、免疫渗透/层析试验初筛有反应样品中,HIV-1抗体阳性245份(84.78%),不确定34份(11.76%),阴性10份(3.46%)。ELISA、免疫渗透/层析试验与WB确证试验结果的符合率分别为85.66%(245/286)和88.77%(245/276),二者差异无统计学意义(χ~2=1.211,P=0.271)。WB确证试验HIV-1抗体阳性、不确定及阴性的平均S/c.o值分别为(24.66±1.37)、(20.15±8.06)和(7.96±8.40),三组间差异有统计学意义(F=137.96,P=0.000)。289份筛查有反应样本中,9份样本的S/c.o值在1～6之间,确证阳性1份,阳性符合率为11.11%;3份样本的S/c.o值7～10之间,确证阳性2份,阳性符合率为66.67%;277份样本的S/c.o值均大于10,确证阳性242份,阳性符合率为87.36%。HIV-1抗体确证阳性的样本中,gp160、gp120、gp41、p66、p24条带同时出现的概率为95%。70份化学发光法HIV筛查有反应,ELISA、免疫渗透/层析试验阴性标本中,WB确证结果阴性无条带36份,占51.43%(36/70),出现1条带27份,占38.57%(27/70),出现2条带7份,占10%(7/70)。【结论】HIV筛查采用敏感性、特异性高的试剂,即抗原抗体同时检测,即可减少感染早期漏检,也可提高与确证结果的符合性。筛查试验因样本或某些疾病的影响,存在假阳性可能,必须以抗体确证或核酸补充试验结果为准。HIV抗体确证试验,因其检测的抗体出现较晚,对早期感染者存在漏检风险,建议对初筛有反应S/c.o值较低(1～6之间),抗体确证试验阴性或不确定者,以及化学发光法HIV筛查有反应,ELISA、免疫渗透/层析试验阴性者,采用核酸补充试验检测或结合流行病学资料进行进一步随访。     

山西省细菌鉴定室间质量评价结果回顾分析

目的了解山西省医疗机构近9年来临床微生物学室间质量评价(external quality assessment,EQA)细菌鉴定项目的检测能力。 方法收集2009年至2017年山西省细菌鉴定EQA反馈结果,对所涉及菌株鉴定正确率进行统计学分析。 结果参加山西省临床微生物室间质量评价的实验室以二级公立医疗机构为主,占74.5%。9年来共发放质评样本90份,共涉及33个菌属,54个菌种。累积通过网络上报结果1530份。质评合格率以2012年最低为83.8%,2015年最高为95.7%,9年累积合格率为91.0%。质评样本鉴定正确率从33.1%~100.0%不等。 结论通过参加室间质量评价,可以加强临床微生物实验室质量管理,找出存在的问题和不足,促进检测能力的提高。     

基于自动化系统的曲霉半乳甘露聚糖检测及评价

目的将自动化检测系统应用于曲霉半乳甘露聚糖（GM）检测，探讨其在规模化中心临床实验室中的应用价值。 方法选取临床血清样本66例，肺泡灌洗液（BALF）样本54例以及15例美国病理学家协会（CAP）室间质评样本，通过DNK-A600全自动微生物联合检测仪进行GM检测，并与美国Bio-Rad GM检测（Platelia? Aspergillus Ag）手工操作试剂盒的检测结果进行一致性比较。 结果120例样本中DNK-A600系统和Bio-Rad GM检测试剂总符合率95.00%，Kappa值0.90。DNK-A600系统GM检测批内和批间精密度均符合标准，CV值低于15%，正确度符合率100%，检出限符合临床使用要求。 结论基于DNK-A600全自动微生物联合检测系统的GM检测试剂盒结果准确、可靠、可实现与传统手工检测GM结果的互认。     

循环肿瘤DNA与转移性结直肠癌靶向治疗及耐药机制的相关研究

目的 探讨转移性结直肠癌(metastatic colorectal cancer,mCRC)耐药相关的点突变,明确循环肿瘤DNA(circulating tumour DNA,ctDNA)能否作为mCRC检测和耐药相关的突变分子标志物以及mCRC可能的耐药机制。 方法 通过对连续抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)单抗药物治疗的mCRC患者多阶段ctDNA进行KRAS、BRAF和PIK3CA基因点突变动态监测,构建药物作用下的肿瘤基因突变谱变化,筛选耐药相关点突变;培养相应点突变细胞系后,通过体外细胞增殖试验(MTS法)分析细胞系的耐药程度,实时荧光定量PCR( real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测药物作用对突变丰度的影响。 结果 通过临床数据分析,筛选出可能与mCRC耐药相关的点突变KRAS(G12D)、PIK3CA(H1047R)和BRAF(V600E),并纳入后续研究。选择NCI-H747、SW948和SW1417细胞系分别作为KRAS(G12D)、PIK3CA(H1047R)和BRAF(V600E)点突变的细胞系,并选用C2BBe1野生型细胞系作为本底细胞。MTS半数抑制浓度即IC₅₀测定发现,野生型细胞系对西妥昔单抗和帕尼单抗敏感性均较突变细胞高;经与本底细胞稀释后,西妥昔单抗组和帕尼单抗组在培养3 d后突变基因相对水平均比不加药组高,不加药组均比基线组高。 结论 ctDNA检测能够发现与耐药相关的点突变;KRAS(G12D)、PIK3CA(H1047R)和BRAF(V600E)点突变可提高转移性结直肠癌细胞生长速度,并与西妥昔单抗和帕尼单抗耐药相关。     

The diagnosis of typhoid fever in the Democratic Republic of the Congo

The diagnosis of typhoid fever (TF) in Kinshasa (DR Congo) was assessed by on-site surveys, external quality assessment (EQA) of the Widal test and a microbiological blood culture surveillance study. In 331/536 (61.8%) health facilities, clinicians diagnosed TF by clinical picture and the Widal test. An EQA on the Widal test consisting of three samples revealed correct scores by respectively 27.1%, 65.6% and 3.1% of 125 participating laboratories. Most (80.9% of 152 laboratories) performed <100 Widal tests per month, with a median sample positivity rate of 32.6% (range 0-90.7%). The Widal test was mostly performed on a single sample and by slide agglutination (89.5% and 97.0% respectively); errors in cold chain and procedures were recorded (not making serial dilutions, estimating titres by the intensity of agglutination). Among 293 prescribers, 52.2% and 40.8% requested the Widal test for treatment follow-up and detection of chronic carriers respectively. Salmonella Typhi was recovered from the blood in 2.4% of 3820 patients suspected as having TF, with non-typhoid Salmonellae and other Enterobacteriaceae accounting for the majority of organisms. In conclusion, clinicians rely highly on the Widal test for the diagnosis of TF and the Widal test is poorly performed and interpreted.     

Body size and risk for colorectal cancers showing BRAF mutations or microsatellite instability: a pooled analysis

BACKGROUND: How body size influences risk of molecular subtypes of colorectal cancer (CRC) is unclear. We investigated whether measures of anthropometry differentially influence risk of tumours according to BRAF c.1799T>A p.V600E mutation (BRAF) and microsatellite instability (MSI) status. METHODS: Data from The Netherlands Cohort Study (n?=?120?852) and Melbourne Collaborative Cohort Study (n?=?40?514) were pooled and included 734 and 717 colorectal cancer cases from each study, respectively. Hazard ratios (HRs) and 95% confidence intervals (CIs) for body mass index (BMI), waist measurement and height were calculated and compared for subtypes defined by BRAF mutation and MSI status, measured from archival tissue. RESULTS: Results were consistent between studies. When pooled, BMI modelled in 5?kg/m(2) increments was positively associated with BRAF wild-type (HR: 1.16, 95% CI: 1.08-1.26) and MS-stable tumours (HR: 1.15, 95% CI: 1.06-1.24). Waist measurement was also associated with BRAF wild-type (highest vs lowest quartile, HR: 1.59, 95% CI: 1.33-1.90) and MS-stable tumours (highest vs lowest quartile HR: 1.68, 95% CI: 1.31-2.15). The HRs for BRAF mutation tumours and MSI tumours were smaller and non-significant, but differences between the HRs by tumour subtypes were not significant. Height, modelled per 5-cm increase, was positively associated with BRAF wild-type and BRAF mutation tumours, but the HR was greater for tumours with a BRAF mutation than BRAF wild-type (HR: 1.23, 95% CI: 1.11-1.37, P(heterogeneity)?=?0.03). Similar associations were observed with respect to height and MSI tumours (HR: 1.26, 95% CI: 1.13-1.40, P(heterogeneity)?=?0.02). CONCLUSIONS: Generally, overweight increases the risk of CRC. Taller individuals have an increased risk of developing a tumour with a BRAF mutation or MSI.     

2007年青岛市HIV筛查实验室血清学考核结果分析

[目的]提高HIV抗体筛查实验室的检测工作质量。[方法]2007年对43家HIV抗体筛查实验室发放一套考评血清（5份）,结合各实验室检测月报情况综合评分。[结果]43家实验室5份质评血清检测结果全部符合。其中优秀41家;良好2家。[结论]青岛市艾滋病筛查实验室HIV抗体检测技术总体水平较好,能够满足本市艾滋病筛查工作的需要。部分实验室质控体系有待进一步完善。     

External quality assessment of enterovirus detection and typing. European Union Concerted Action on Virus Meningitis and Encephalitis

Reported are the results of a study of an enterovirus proficiency panel for use in isolation and serotyping and/or the polymerase chain reaction (PCR) carried out by 12 laboratories in nine European countries. Eleven laboratories reported results of virus isolation and serotyping. In addition, four laboratories reported results of a PCR for enterovirus detection. Correct virus isolation results were obtained for 105 of 110 samples (95.5%, four false-negatives, one false-positive), and correct PCR results for 39 of 40 (97.5%, one false-negative). The highest isolation rate (87.5%) was observed in primary and tertiary monkey kidney cells; on monkey kidney cell lines, human diploid fibroblasts or human heteroploid cells the isolation rate varied between 64% and 71.4%. Serotyping results were less satisfactory. Only 63 of 106 (59.4%) isolated viruses were typed correctly. Major problems were seen with samples containing mixtures of enteroviruses and with enterovirus 71 or echovirus 4, with 9%, 50%, and 55% correct results, respectively. These results underline the need for improvement of enterovirus typing, especially in view of the poliomyelitis eradication initiative.     

甘肃省耐甲氧西林金黄色葡萄球菌室间质评调查分析

目的 了解某省参加微生物室间质评的各医院微生物室对MRSA，MSSA的鉴定、判断及药敏检测水平，督促各实验室重视MRSA检测并能为I临床提供正确的药敏报告。方法 共进行了4次调查，统一发放菌种，要求鉴定菌种并采用NCCLS方法对6种抗生素做药敏试验，检验中心对结果进行统计分析，评定成绩。结果 菌种鉴定符合率由75．00％上升N84．38％，MRSA判断正确率由17．65％上升至76．56％，药敏平均符合率由86．12％上升至94．94％。结论 大部分实验室对MRSA的严重性还认识不足，检测方法欠缺。通过室间质评活动的开展，各参评实验室MRSA检测水平明显提高。