多孔钛的骨传导性及其孔隙结构对MC3T3-E1细胞早期分化的影响

目的 探讨多孔钛的骨传导性及其孔隙结构对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1早期分化的影响.方法 碳酸氢铵造孔剂结合粉末冶金法制备6组由不同平均孔隙率及不同平均孔径组合的多孔钛试样,即AⅠ（43.1±0.7）％和（154.8±11.9） μm AⅡ：（40.9±1.5）％和（295.6±8.5） μm AⅡ （44.3±1.1）％和（560.4±25.6） μm;BⅠ：（53.3±1.2）％和（191.6±3.7） μm; BⅡ.（51.7±2.7）％和（303.8±8.2） μm; BⅢ：（49.9±3.9）％和（583.1±21.7） μm,Ta2级商业致密纯钛作为对照组;每组3个试样.MC3T3-E1细胞接种于24孔板3h贴壁后置入多孔钛试样,培养3d和5d后激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察经FITC微丝蛋白荧光探针标记的细胞.MC3T3-E1细胞接种于已置入试样的24孔板,培养7d和14d后测定碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性,评价细胞的早期分化能力;培养21d后茜素红染色观察细胞晚期矿化结节.结果 MC3T3-E1细胞贴壁后,5d可长人多孔钛孔内及表面.7d和14d多孔钛组ALP活性显著高于对照组（P＜0.05）;其中BⅠ组在14d的ALP活性显著高于其它各组（P＜0.05）.21d多孔钛试样表面及孔隙内均可见钙结节形成.结论 在本实验条件下,多孔钛具有一定的骨传导性;平均孔隙率为53.3％且平均孔径为191.6 μm的多孔钛利于MC3T3-E1细胞的早期分化.     

浓缩生长因子提取液对钛片表面MC3T3-E1细胞增殖分化的影响

目的 探讨浓缩生长因子提取液（CGFe）对钛片表面MC3T3-E1细胞增殖分化的影响。方法 实验组使用含CGFe的α-MEM培养液（含10%胎牛血清）培养MC3T3-E1细胞,对照组则使用不含CGFe的α-MEM培养液（含10%胎牛血清）培养细胞。采用MTT法测定培养1、3、5 d时的细胞增殖情况,碱性磷酸酶（ALP）活性测定法检测培养3、5 d时的细胞分化情况;通过扫描电子显微镜（SEM）观察培养12 h时细胞在钛片表面的形态;通过荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）测定细胞培养3、7 d时核心结合蛋白因子2（Runx2）和成骨细胞特异性转录因子Osterix（Osx）基因的相对表达量。结果 MTT结果显示：随培养时间延长,细胞数量逐渐增加;各时间点实验组细胞的吸光度值均明显高于对照组（P<0.05）。ALP活性随着培养时间延长而增加,两个时间点实验组的吸光度值均明显高于对照组（P<0.05）。SEM观察：培养12 h时,实验组细胞在钛片表面的形态较对照组更加伸展。PCR结果显示：随着培养时间延长,两组细胞Runx2和Osx基因的表达量逐渐增加,两个时间点实验组的表达量均明显高于对照组（P<0.05）。结论 CGFe能有效地促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化及在钛片表面的伸展。     

MicroRNA-103-3p对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化早期的影响

目的:探讨miR-103-3p对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化早期的影响。方法:以小鼠前成骨细胞MC3T3-E1为实验对象,对MC3T3-E1细胞进行成骨诱导,分别在0、3、5、7 d应用实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测细胞中Runx2、Osx、ALP、miR-103-3p表达水平,Western免疫印迹（Western blotting）检测Runx2、Osx蛋白表达并进行碱性磷酸酶（ALP）染色。通过脂质体lipofectamine2000瞬时转染miR-103-3p模拟物 （miR-103-3p mimics）及模拟物阴性对照进入MC3T3-E1细胞内,Real-time PCR检测2组细胞miR-103-3p的表达水平,CCK-8试剂盒检测细胞增殖。分别对2组细胞进行成骨诱导,在成骨诱导后0、3、7 d,分别使用Real-time PCR和Western免疫印迹检测2组细胞Runx2、Osx等成骨相关基因mRNA和蛋白的表达变化,并对2组细胞进行ALP染色。实验数据采用SPSS19.0软件包进行统计学分析。结果:MC3T3-E1经成骨诱导0、3、5、7 d后,细胞内Runx2、Osx、ALP转录水平持续显著升高;Runx2、Osx蛋白表达升高。ALP染色逐渐加深。在成骨诱导3、5、7 d的MC3T3-E1细胞中,miR-103-3p水平较诱导前受到持续显著抑制(P<0.05)。瞬时转染miR-103-3p mimics后,MC3T3-E1细胞中的miR-103-3p表达水平较对照组显著上调(P<0.05),细胞增殖受到抑制,Runx2、ALP转录水平显著抑制（P<0.05）,Runx2蛋白表达显著抑制。对转染后的细胞进行成骨诱导3、7 d后,miR-103-3p转染组细胞Runx2、Osx、ALP在转录水平的表达较对照组显著降低,Runx2、Osx在蛋白水平的表达较对照组显著降低,且miR-103-3p转染组细胞ALP活性较对照组显著降低。结论:miR-103-3p可能对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的成骨分化早期起抑制作用。     

釉基质蛋白诱导MC3T3-E1细胞成骨分化过程中微小核糖核酸的表达

目的 探讨微小核糖核酸(micro ribonucleicacid,miRNA)是否参与到釉基质蛋白(EnamelMatrix Derivative,EMD)诱导的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞成骨分化的过程,并对发生显著变化的miRNA进行分析.方法 将MC3T3-E1用含EMD(刺激组)/不含EMD(对照组)的培养液培养0天、7天和14天,检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,实时聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分析成骨分化标记物ALP、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨钙素(osteocalcin,OC)的信使RNA(mRNA)水平的表达变化.利用基因芯片技术分析miRNA的相对表达.结果 0天、7天、14天的ALP染色结果显示随着培养时间的增加,两组ALP活性均逐渐增强,EMD刺激组ALP活性增强较对照组更为明显.RT-PCR结果表明,与对照组相比,ALP、BSP、OC的mRNA表达量均显著增加,ALP与OC均于14天时表达量达到峰值,BSP则于7天时处于峰值表达,EMD刺激组MC3T3-E1成骨活性更强;各期11个miRNA表达上调,28个miRNA表达下调,其中miR-335-5p,miR-503已被证实可参与促进骨形成,而miR-30家族(miR-30a,-30b,-30c和-30d)则被证实参与抑制成骨.结论 miRNA参与EMD诱导的MC3T3-E1细胞的成骨分化过程,这一发现可以为了解EMD促进成骨分化的机理及临床应用提供指导.     

不同浓度无机磷对MC3 T3-E1细胞系成骨及破骨相关基因表达的影响

目的：探讨不同浓度的无机磷液对体外培养MC3T3-E1细胞的成骨和破骨相关基因mRNA表达的影响。方法：体外常规培养MC3T3-E1细胞。根据所用培养液外加无机磷浓度的不同,将实验细胞分为4组：0 mM组（对照组）、1 mM组、3 mM组和5 mM组。每组设3个复孔,培养48 h后收取细胞标本,通过Real-time PCR检测MC3T3-E1细胞成骨和破骨相关基因mRNA的表达。结果：与对照组相比,成骨相关基因ALP、BSP、OC及OSXmR-NA的表达在1 mM组和3 mM组增加,而在5 mM组则减少,差异具有统计学意义（ P＜0.05）;成骨抑制基因SOST及破骨相关基因CTSK、TRAPmRNA的表达,在1 mM 组、3 mM 组和5 mM 组都增加,差异具有统计学意义（ P ＜0.05）。结论：高浓度（5 mM）的无机磷环境对MC3T3-E1细胞的成骨相关基因表达起显著抑制作用,对破骨相关基因表达起显著增强作用,提示高浓度无机磷抑制MC3T3-E1细胞的成骨活性。     

MC3T3-E1 Subclone 14体外诱导成骨模型的建立及Ano5基因表达的研究

目的 建立MC3T3-E1 Subclone 14体外诱导成骨模型,探讨Ano5基因表达与成骨细胞形成的关系,了解其对成骨分化的影响.方法 MC3T3-E1 Subclone 14细胞贴壁培养,加入条件培养基,分别培养至0d、3d、7d、14d、21d.倒置显微镜下观察细胞形态,通过碱性磷酸酶活力测定和茜素红染色,鉴定成骨细胞.利用REALTIME-PCR检测Ocn、Colα1、Opg/Rankl、Osterix和Runx2等成骨相关因子的基因表达水平,同时检测Ano5基因在成骨细胞形成过程中的表达趋势.结果 体外诱导MC3T3-E1 Subclone 14倒置光学显微镜下观察细胞形态呈梭形.成骨细胞碱性磷酸酶活力逐渐增高.成骨诱导培养至14d和21d,茜素红染色可见细胞表面出现矿化结节.成骨相关因子基因表达均逐渐增高,至21d达到高峰.Ano5基因从诱导分化的第3d开始表达,随后表达量逐渐增高,至14d达到高峰,21d表达量下降.结论 在MC3T3-E1 Subclone 14体外诱导分化为成骨细胞过程中,Ano5基因表达量逐渐升高,至14d达到高峰,21d开始表达量具有下降趋势.     

Dlx2在MC3T3-E1细胞成骨分化过程中的作用

目的:探讨Dlx2(distal-less homeobox 2)基因过表达对体外培养的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1 向成骨方向分化的影响.方法:构建Dlx2过表达的反转录病毒载体,测序验证.体外病毒转染MC3T3-E1后,以嘌呤霉素行抗性筛选稳定细胞株,以RT-PCR和Western印迹检测转染后细胞中Dlx2的表达.应用实时定量PCR(RT-PCR)检测Dlx2过表达对部分成骨相关基因(ALP、OCN、Runx2、Msx2)表达的影响.以碱性磷酸酶(ALP)活性测定和茜素红染色法检测Dlx2过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.采用SAS 6.04软件包对数据进行随机设计的方差分析.结果:本实验成功构建Dlx2过表达的反转录病毒载体,测序正确.体外转染后筛选出Dlx2稳定高表达细胞株MC3T3-E1-Dlx2,其mRNA和蛋白表达量显著高于对照组.在成骨诱导过程中,MC3T3-E1-Dlx2细胞ALP值在第4、7、14d均高于对照组细胞,茜素红染色显示实验组较对照组和空白组染色深.Dlx2过表达在成骨诱导早期能显著促进ALP和Msx2的表达(P<0.05),晚期则上调OCN表达(P<0.05),而Runx2表达无明显变化(P>0.05).结论:Dlx2过表达上调AIP、OCN等成骨相关基因的表达.促进MC3T3-E1细胞的成骨分化.     

钛表面RGD/仿生磷酸钙复合涂层对MC3T3-E1细胞黏附、增殖、分化的影响

目的:研究钛表面RGD/仿生磷酸钙复合涂层对MC3T3-E1细胞黏附、增殖和分化的影响。方法:1)两步法在钛表面制备仿生磷酸钙涂层,扫描电子显微镜(SEM)观察形态,X射线衍射(XRD)、傅立叶转换红外光谱(FTIR)检测表征;2)RGD固定至仿生磷酸钙涂层;3)实验分3组:纯钛组,钛/仿生磷酸钙涂层组,钛/RGD/仿生磷酸钙复合涂层组,细胞分别接种至3组材料表面。4)SEM观察细胞接种4 h和24 h的形态;5)结晶紫染色检测细胞接种4 h和8 h的黏附情况。6)MTT法检测细胞1、3、7 d的增殖活性;7)检测细胞3、7、14 d的ALP活性。结果:SEM细胞形态观察及结晶紫染色结果显示,RGD/仿生磷酸钙复合涂层组的细胞黏附效果优于对照组。MTT结果显示RGD/仿生磷酸钙复合涂层组的细胞增殖活性强于对照组。ALP检测结果显示RGD/仿生磷酸钙复合涂层组的成骨分化活性高于对照组。结论:钛表面RGD/仿生磷酸钙复合涂层对MC3T3-E1细胞的黏附、增殖、分化均有促进作用。     

透钙磷石涂层浸提液掺锶对 MC3T3-E1细胞成骨相关因子表达的影响

目的：探讨透钙磷石与锶对成骨细胞的协同作用。方法：电化学沉积制备含透钙磷石涂层钛片,浸提法制备其浸提液,向配制好的浸提液中分别加入0．1％、0．5％和1％的锶。将 MC3T3-E1细胞置于掺锶的浸提液中进行培养,检测不同含锶量的透钙磷石涂层浸提液中 MC3T3-E1细胞活性、ALP 活性,RT-PCR 检测 bFGF 和 VEGF mRNA 表达。结果：含透钙磷石涂层钛片浸提中锶的浓度为0．1％、0．5％和1％时,培养的 MC3T3-E1细胞增殖率、ALP 活性、bFGF 和 VEGF mRNA 表达均高于无锶对照组（P ＜0．05）。结论：掺锶透钙磷石对 MC3T3-E1细胞成骨功能有促进作用。     

巨噬细胞来源的凋亡外囊泡对成骨细胞增殖的影响

目的：探索巨噬细胞来源的凋亡外囊泡（apoEVs）对成骨细胞增殖活性的影响。方法：使用星孢菌素诱导RAW264.7细胞凋亡，差速离心法提取上清液内的细胞外囊泡，BCA蛋白定量对细胞外囊泡进行定量后，使用不同浓度（0.05～10mg/L）的apoEVs与MC3T3-E1细胞进行共培养，通过激光共聚焦观察apoEVs是否被MC3T3-E1细胞吞噬。随后分别在24、48、72h使用MTT法测定MC3T3-E1的增殖活性。使用RNA酶对apoEVs进行处理，与MC3T3-E1细胞进行共培养一段时间后，再次使用MTT法测定MC3T3-E1细胞活性。结果：成功提取出apoEVs,5mg/L以下浓度的apoEVs使得MC3T3-E1细胞增殖活性增强，而浓度10mg/L的apoEVs使得MC3T3-E1细胞增殖活性降低；各浓度的无RNA的apoEVs均使得细胞增殖活性降低。结论：巨噬细胞来源的apoEVs在低浓度时对MC3T3-E1有促增殖能力，而高浓度时有抑制增殖能力。其中apoEVs内的RNA可能在促进增殖中发挥主要作用。     

同源盒蛋白(Msx1)过度表达抑制成骨细胞碱性磷酸酶表达的实验研究

目的:观察同源盒蛋白(Msx1)过度表达在成骨细胞MC3T3-E1分化培养过程中对碱性磷酸酶的调节作用,以探讨Msx1蛋白对细胞成骨分化过程的调控机制。方法:将成骨细胞MC3T3-E1分为5组:未转染病毒组作为对照组1(A组);空白腺病毒载体组作为对照组2(B组);未分化组作为空白对照组(C组);分化前1 d转染携带同源盒基因Msx1的腺病毒载体组(D组);分化后1 d转染Msx1腺病毒载体组(E组)。在成骨分化培养基中培养4 d后,检测成骨细胞MC3T3-E1在成骨分化培养过程中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性。结果:A、B两组成骨细胞MC3T3-E1在成骨分化培养基培养4 d后,ALP活性呈强阳性;C组中未分化成骨细胞MC3T3-E1无ALP活性,D、E两组的成骨细胞MC3T3-E1在成骨分化培养4 d后的ALP活性明显较A、B组减低,而且D、E两组间ALP活性无区别。结论:过度表达同源盒蛋白(Msx1)能抑制成骨细胞MC3T3-E1的ALP表达,在其成骨分化的过程中起一定的抑制作用。     

微弧氧化处理Ti2448的生物相容性研究

目的　评价微弧氧化处理低弹性模量钛铌锆锡合金（Ti-24 Nb-4 Zr-7.9 Sn,Ti2448）的生物相容性。方法  通过微弧氧化处理Ti2448试件（MAO-Ti2448）。采用MTT法比较MAO-Ti2448组和Ti2448组浸提液培养小鼠成纤维细胞（L929）的增殖和毒性情况;应用致敏实验观察各组浸提液引起的豚鼠皮肤反应;各组与小鼠胚胎成骨细胞前体细胞（MC3T3-E1）共培养,测定MC3T3-E1的碱性磷酸酶（ALP）活性。结果　MAO-Ti2448组与Ti2448组的细胞毒性分级为0级,均无细胞毒性。随着细胞培养时间延长,MAO-Ti2448组和Ti2448组的吸光度（OD）值均增加,且MAO-Ti2448组的OD值明显高于Ti2448组,差异有统计学意义（P < 0.05）。MAO-Ti2448组与Ti2448组的皮肤反应均为0级,无皮肤致敏性。随着细胞培养时间延长,MAO-Ti2448组和Ti2448组MC3T3-E1的ALP活性均增高,与Ti2448组对比,MAO-Ti2448组MC3T3-E1的ALP活性较高,差异有统计学意义（P < 0.05）。结论　微弧氧化处理Ti2448无细胞毒性,可促进细胞增殖及早期成骨分化,具有良好的生物相容性。     

“壳-芯”结构电纺纤维膜对MC3T3-E1细胞体外早期成骨分化的影响

［摘要］　目的　研究载有骨形态发生蛋白(BMP-2)的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚己内酯(PCL)“壳芯结构”静电纺丝纤维膜(PP-B)对MC3T3-E1细胞体外早期成骨分化的影响。方法　通过同轴静电纺丝的方法制备PLGA/PCL-BMP-2纤维膜(PP-B),以不含BMP-2的PLGA/PCL电纺纤维膜(PP)为对照组。通过透射电子显微镜观察PP-B膜的“壳-芯”结构;用ELISA法检测BMP-2的体外释放行为;收集PP-B膜的浸出液培养细胞,用碱性磷酸酶(ALP)活性检测法检测其释放的BMP-2对MC3T3-E1细胞的影响;将MC3T3-E1细胞接种到纤维膜上,通过CCK-8法检测1d、3d、5d、7d的增殖情况;以碱性磷酸酶(ALP)活性为早期骨向分化指标,检测其7d的活性;用实时荧光定量逆转录PCR检测细胞接种7d时成骨指标Bmp2、Alp、Col1、Msx2、Runx2的表达。结果　透射电镜结果表明,同轴静电纺丝法制备的PP-B静电纺丝可形成连续均一的“壳-芯”结构;ELISA结果显示,PP-B膜可以实现BMP-2的持续释放;ALP活性检测结果证实本实验条件下制备的负载BMP-2的同轴静电纺丝支架能保持生长因子的部分活性。CCK-8结果显示PP-B膜和PP膜上的MC3T3-E1细胞在1、3、5、7d都持续增殖;ALP活性检测及染色结果显示PP-B膜上的MC3T3-E1细胞的ALP活性高于PP膜(P<0.05);实时荧光定量逆转录PCR结果显示接种在PP-B膜上的MC3T3-E1细胞的相关成骨基因Bmp2、Alp、Col1、Msx2、Runx2的表达高于PP膜(P<0.05)。结论　本实验制备的PP-B膜能促进MC3T3-E1细胞在体外的早期成骨分化。     

MCP-1对成骨前体细胞凋亡及凋亡调控蛋白Caspase3表达的影响

目的探讨MCP-1对成骨细胞凋亡和凋亡调控蛋白Caspase3表达的影响。方法体外培养小鼠MC3T3-E1细胞并采用免疫荧光方法检测其趋化因子MCP-1的表达情况,MC3T3-E1细胞加入不同浓度趋化因子MCP-1,流式细胞技术检测细胞凋亡率同时免疫细胞化学染色测定凋亡调控蛋白Caspase3的表达。结果 MC3T3-E1细胞MCP-1阳性表达。流式细胞仪检测结果表明,正常血清对照组存在小鼠MC3T3-E1细胞自发性凋亡,但均不大于5%。与正常血清组相比,无血清对照组细胞凋亡率明显升高。与无血清对照组相比,（1～100）ng/mL MCP-1组的浓度范围内,细胞凋亡率明显下降（P〈0.05）。MCP-1组Caspase3平均灰度值降低（P〈0.05）,且随着MCP-1（1ng/mL～100ng/ml）浓度的增大,Caspase3平均灰度值呈下降趋势。结论 MCP-1可能通过调节Caspase3在成骨细胞中的表达,对抗无血清诱导的细胞凋亡,从而促进成骨的形成。     

高度浓缩生长因子对MC3T3-E1成骨细胞生物学性能的影响

目的：观察高度浓缩生长因子（concentrated growth factor,CGF）对成骨细胞生物学性能的影响。方法：将MC3T3-E1细胞在CGF环境下进行培养,并设立空白对照组。扫描电镜观察成骨细胞在CGF表面的附着;培养1、4、7 d后,检测细胞增殖情况以及碱性磷酸酶（ALP）活性;茜素红染色观察矿化结节和成骨相关基因Runx2的表达。CGF浸出液培养细胞24 h后,以鬼笔环肽染色观察细胞骨架的形态变化。采用 SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果：CCK-8比色显示,培养1、4、7 d,在相同时间点,实验组与对照组相比,CGF细胞增殖活性显著增强（P< 0.05）。ALP活性检测显示,培养1 d后,实验组与对照组无显著差异（P>0.05）;培养4、7 d后,实验组与对照组相比,ALP活性具有显著差异（P<0.05)。茜素红染色显示,CGF组钙化结节数量增多且面积较大。鬼笔环肽染色和DAPI染色可见,CGF组中细胞数量增多,细胞铺展面增大,肌动蛋白形态更为清晰。CGF可促进Runx2 mRNA表达（P<0.05）。结论：CGF可促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化以及Runx2的表达。     

钛表面自组装聚L-赖氨酸和海藻酸钠多层膜对成骨细胞增殖和分化的影响

目的在钛表面沉积聚L-赖氨酸(PLL)和海藻酸钠(ALG)聚电解质多层膜,以评价其对成骨细胞增殖和分化的影响。方法用层层自组装的方法在钛表面沉积PLL和ALG,形成Ti-(PLL-ALG)10-PLL涂层,用傅里叶变换红外光谱(FTIR)和扫描电子显微镜(SEM)对涂层进行表征。以纯钛作为对照组,Ti-(PLL-ALG)10-PLL作为实验组,分别在其表面进行MC3T3细胞培养,1d、3d、5d和7d后用CCK-8检测细胞增殖率,用ALP检测碱性磷酸酶的活性。结果 FTIR和SEM显示PLL和ALG已沉积到钛表面。MC3T3细胞在Ti-(PLL-ALG)10-PLL表面的增殖率在第1天和3天时明显高于对照组,P值分别为0.04和0.028;第5天和7天则无显著性差异(P>0.05)。第7天和14天Ti-(PLL-ALG)10-PLL组碱性磷酸酶值明显高于对照组,P值分别为0.08和0.02。结论通过层层自组装的方法在钛种植体表面沉积Ti-(PLL-ALG)10-PLL聚电解质多层膜能促进MC3T3细胞在其表面的增殖和分化。     

淫羊藿苷对MC3T3-E1增殖及成骨分化的影响研究

目的：研究传统中药淫羊藿的主要活性成分淫羊藿苷(icariin,ICA)对小鼠颅顶前成骨细胞(preosteoblasts in mice calvarium,MC3T3-E1)的细胞活性及成骨分化的影响。方法：筛选出ICA的最佳干预浓度，将MC3T3-E1细胞分为空白对照组及不同浓度的实验组，实验组以含10^-9、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5 mol/L的ICA完全培养液分别处理MC3T3-E1细胞。分别于培养2、4、6 d后用CCK8试剂盒检测MC3T3-E1细胞增殖能力；于培养3、6、9 d后用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测其ALP活性；根据检测结果，分别用完全培养液、成骨诱导液、含10^-7 mol/L的ICA完全培养液处理MC3T3-E1细胞21 d后，再分别作茜素红染色。结果：与空白对照组相比，药物处理组明显抑制了MC3T3-E1细胞的增殖，但促进了MC3T3-E1细胞的ALP活性；而不同浓度的I...     

Bioaggregate对成骨细胞矿化相关基因表达的影响

目的：通过与三氧化矿化聚合物（MTA）比较,评价Bioaggregate（BA）对成骨细胞MC3T3-E1的细胞毒性及其对成骨细胞矿化相关基因表达的影响。方法：将MC3T3-E1细胞与BA或MTA共培养分别至1、2、3d后,它们对成骨细胞的毒性通过MTT技术来检测。同时,其对成骨细胞矿化相关基因Ⅰ型胶原（COLⅠ）,骨钙素（OCN）,骨桥蛋白（OPN）表达的影响运用定量PCR检测。结果：BA和MTA均对MC3T3-E1细胞无毒性作用。与MTA比较,BA能够诱导成骨细胞矿化相关基因COLⅠ,OCN,OPN的表达。结论：BA是一种新型的根管充填材料并且能够诱导成骨细胞矿化相关基因的表达。     

浓缩生长因子提取液对 MC3T3-E1细胞影响的实验研究

目的:探讨浓缩生长因子提取液(CGFe)对MC3T3-E1细胞增殖、分化的影响。方法:实验组和对照组分别使用含有及不含有CGFe的α-MEM培养液培养MC3T3-E1细胞。培养1、3、5 d后MTT法测定细胞增殖,ALP试剂盒检测碱性磷酸酶活性;培养7、14 d后茜素红染色观察钙结节形成;荧光实时定量PCR测定RUNX2和OSX mRNA的表达。结果:随着培养时间延长,实验组的细胞增殖、碱性磷酸酶活性、钙结节数目及基因表达量均高于对照组(P<0.05)。结论:浓缩生长因子提取液能有效地促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化。     

低温氩氧等离子体处理的无机牛骨对MC3T3-E1细胞黏附、增殖及分化的影响

目的研究小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1在低温氩氧等离子体处理的无机牛骨上的黏附、增殖及分化特征。方法使用低温氩氧等离子体对无机牛骨进行表面活化(实验组)后,使用扫描电子显微镜(SEM)观察无机牛骨表面形貌的变化,X射线光电子能谱分析(XPS)检测表面元素的组成。将MC3T3-E1细胞接种于低温氩氧等离子体处理的无机牛骨表面,使用SEM观察细胞的黏附形态,CCK-8法检测细胞1、3、5 d的增殖变化,碱性磷酸酶(ALP)法检测细胞7、14 d的分化状态。以不作处理的无机牛骨作为对照。结果对照组与实验组的表面形貌无明显改变;在表面材料的元素组成上,实验组表面碳元素减少,氧、钙、磷元素均增高。实验组MC3T3-E1细胞的黏附更充分,细胞伸出伪足;培养1、3、5 d时,实验组细胞增殖数量明显高于对照组;培养14 d时,实验组ALP活性明显高于对照组(P<0.05)。结论低温氩氧等离子体处理对无机牛骨表面小鼠胚胎成骨细胞的黏附、增殖及分化具有一定的促进作用。