骨软骨瘤和骨恶性肿瘤cyclinD1和CDK4的表达及意义

目的研究骨软骨瘤和骨恶性肿瘤组织中cyclinD1和CDK4表达及其临床病理意义.方法骨肿瘤组织脱钙后常规石蜡包埋切片ABC免疫组化法.结果15例骨软骨瘤cyclinD1和CDK4表达均阴性,45例骨恶性肿瘤cyclinD1和CK4表达阳性率分别为44%(20/45)和60%(27/45).组织学分级1级和无原发灶外转移骨恶性肿瘤cyclinD1和CDK4阳性率明显低于组织学分级Ⅲ级和原发灶外转移病例,其中分级之间均存在显著差异(P＜0.05);骨恶性肿瘤中cyclinD1和CDK4表达存在密切正相关(P＜0.05).结论cyclinD1和CDK4表达与骨恶性肿瘤生物学行为和预后存在较密切关系,骨恶性肿瘤的分子发病机制可能涉及到CDK4/.cyclinD1调节通路异常,检测骨良性病变cyclinD1和CDK4的表达可能对预防和早期发现骨恶性肿瘤有一定临床意义.     

软骨形态发生蛋白1诱导真皮成纤维细胞表达软骨细胞表型的实验研究

目的应用软骨形态发生蛋白(CDMP)生长因子,体外诱导真皮成纤维细胞向成软骨细胞表型分化,探讨其作为组织工程化软骨种子细胞的可行性.方法取包皮环切术后丢弃真皮组织共3例,成纤维细胞体外培养扩增至第二代,以1×104/cm2密度接种,12 h后加入细胞诱导液(10%胎牛血清F-12培养液,CDMP1终浓度为100 ng/ml)单层培养,未加的成纤维细胞培养用CDMP1为对照.诱导7 d后观察细胞形态变化,Image Plus图像分析软件计算细胞长宽比例.激光共聚焦显微镜分别观察诱导前后细胞内Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原表达及分布,Western印迹检测诱导前后细胞Ⅱ型胶原蛋白表达.反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测诱导后成软骨相关的Sox9、聚集蛋白聚糖与Ⅱ、Ⅸ型胶原mRNA表达;同时检测与成骨相关的X型胶原、碱性磷酸酶(AKP)mRNA表达.培养第二代细胞以2×107个细胞/ml细胞密度进行离心管法培养,诱导14 d后行阿辛蓝与Ⅱ型胶原免疫组化染色.结果诱导后可见单层培养的成纤维细胞形态由长梭形向软骨细胞样多角形转变,Image Plus图像分析软件计算细胞诱导后的长宽比例为(1.40±0.15),较诱导前(7.40±1.30)差异有显著意义(P＜0.05);与正常软骨细胞(1.29±0.24)差异无显著意义.免疫荧光激光共聚焦观察发现诱导后细胞内出现Ⅱ型胶原表达,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达呈阳性.RT-PCR检测成软骨相关的Sox9,聚集蛋白聚糖,Ⅱ、Ⅸ型胶原mRNA表达阳性;X型胶原、AKP未检测到mRNA阳性表达.Western印迹检测细胞诱导后Ⅱ型胶原蛋白表达阳性.离心管培养诱导7 d后阿辛蓝染色示糖胺聚糖(GAG)均匀分布于基质中,免疫组化染色示基质中Ⅱ型胶原表达阳性.结论第二代成人真皮成纤维细胞在CDMP1生长因子诱导下可向成软骨细胞表型分化,并能分泌软骨细胞特异性基质,有望成为软骨组织工程新的种子细胞来源.     

EGF对大鼠深Ⅱ度烫伤创面成纤维细胞的影响

目的：探讨鼠表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF)对大鼠深Ⅱ度汤伤创面成纤维细胞的影响。方法：采用流式细胞仪测定成纤维细胞的细胞周期，透射电镜观察成纤维细胞的形态，HE染色观察肉芽组织范围以了解成纤维细胞的功能变化。结果：应用EGF组和对照组大鼠分别于用药后第3，6d有成纤维细胞增殖活性的增加，后又迅速恢复近正常水平，电镜下可见用药组大成纤维细胞明显增生迹象，两组大鼠在肉芽组织范围及肉眼观察创面愈合天数上无明显不同。结论：按临床常规用药方法，EGF可在一定时相内增加成纤维细胞增殖活性，但对创面愈合并未产生明显影响。     

软骨形态发生蛋白1诱导真皮成纤维细胞向软骨细胞表型分化的影响因素

目的探讨软骨形态发生蛋白1（CDMP1）生长因子体外诱导真皮成纤维细胞向成软骨细胞表型分化的影响因素。方法取包皮环切术后丢弃的真皮组织共3例,分离成纤维细胞体外培养扩增,以含10％胎牛血清的F—12培养液加入CDMP1（终浓度为100ng／m1）进行诱导,未加CDMP1的作为对照。观察细胞多次传代后（P2、P5、P10）细胞表型分化情况;调整CDMP1浓度分别为10、30、100、300ng／ml,观察诱导后软骨细胞表型的变化;单层培养与微团块培养成纤维细胞分别体外诱导7、14d,逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测细胞诱导前后骨形态发生蛋白受体（BMPR）、Ⅱ、Ⅳ、Ⅹ型胶原表达;Western印迹检测细胞诱导前后Ⅱ型胶原、SOX9、蛋白聚糖的表达;流式细胞术检测表面标志CD29、CDl05、CDl06、CDl66及细胞诱导后Ⅰ、Ⅱ型胶原表达。结果细胞多次传代后（P5、P10）仍可表达特异软骨基质Ⅱ型胶原与蛋白聚糖,Ⅱ型胶原阳性细胞率与P2诱导后差异无统计学意义（P〉0．05）。CDMP1浓度为10、30ng／ml诱导7、14d,均未见Ⅱ型胶原与蛋白聚糖表达;CDMP1浓度为100、300ng／ml时,Ⅱ型胶原与蛋白聚糖表达强度差异无统计学意义。单层培养成纤维细胞诱导14d后,软骨基质表达消失;微团块三维培养诱导14d,软骨基质仍保持表达。RT—PCR检测诱导后ActR—Ⅰ／ALK-2,BMPR—IA／ALK-3,BMPR—IB／ALK-6基因表达明显增强。结论在CDMP1生长因子诱导下,人真皮成纤维细胞体外扩增后可保持向成软骨细胞表型分化能力,细胞分化与CDMP1浓度、细胞三维培养条件及BMPR介导有关。     

表皮生长因子对角膜成纤维细胞生长的影响

目的　研究表皮生长因子 (EpidermalGrowthFactor,EGF)对角膜成纤维细胞生长的影响。方法　通过含不同浓度EGF的培养基培养角膜成纤维细胞 ,分别于 2 4、48和 72h用 0 .5 %台盼蓝法对每组进行细胞活力的测定。结果　 0 .1、1.0mg/L的EGF在细胞培养 48、72h后对细胞生长有一定的促进作用 (P <0 .0 5 ) ,但在 2 4h时对细胞生长无明显影响 (P >0 .0 5 )。浓度为 0 .0 1mg/L的EGF对角膜成纤维细胞生长无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论　一定浓度的EGF对角膜成纤维细胞的生长具有促进作用     

牛磺酸对心肌纤维化的抑制作用及机理

目的：研究牛磺酸（Tau）对心肌纤维化的抑制作用及机制。方法：体内实验以丙肾上腺素（Iso）皮下注射建立心肌纤维化模型，分为正常对照组、模型组及Tau治疗组（80、160和320 mg•kg ^-1•d ^-1),取心肌组织测定羟脯氨酸含量并进行HE 染色。体外实验用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(CFb)增殖,分为正常对照组、模型组及Tau治疗组（40、80和160 mmol•L^-1）。 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖程度；ELISA法测定转化生长因子β₁（TGF-β₁）蛋白的含量；流式细胞仪检测细胞周期素依赖性激酶抑制〖JP3〗因子P27的变化。结果：体内实验显示Tau〖JP3〗(160和320 mg•kg^-1•d ^-1)组羟脯氨酸含量低于Iso组(P<0.01或P<0.001)；HE染色可见Iso组心肌纤维增生、排列紊乱、肌浆肿胀；Tau组明显减轻Iso引起的心肌损伤。体外实验表明，各剂量Tau组CFb增殖程度及TGF-β₁蛋白含量均低于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01)，且呈现剂量依赖性；流式细胞仪检测证实Tau（80和160 mmol•L^-1）组P27蛋白表达量高于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01)。结论：Tau通过抑制TGF-β₁蛋白含量的增多、促进P27的表达，抑制CFb增殖和胶原合成，最终抑制心肌纤维化。     

TGF-β1对口腔鳞癌相关成纤维细胞FAP表达的影响

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对癌相关成纤维细胞(CAFs)中成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达的影响.方法 应用10 ng/ml的TGF-β1作用于CAFs细胞,设置正常成纤维细胞(NFs)和未经处理的CAFs细胞作为对照组,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中FAP的蛋白和mRNA表达情况.结果 FAP在NFs中几乎不表达,而在CAFs中FAP的mRNA和蛋白表达均增加.与NFs组和CAFs组相比,10 ng/ml的TGF-β1能够明显促进CAFs细胞分泌FAP,作用12、24 h后FAP mRNA和蛋白的相对表达量差异有统计学意义(P＜0.05).且随着作用时间的延长,FAP的表达持续升高,24 h较12 h表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TGF-β1能够促进CAFs中FAP的表达,在肿瘤上皮-间质交互作用中扮演着重要角色.     

EGF与bFGF对体外大鼠巩膜成纤维细胞增殖的影响

目的研究表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）在体外对大鼠巩膜成纤维细胞生长的影响。为进一步了解近视发生的分子机制提供依据。方法采用植块法培养大鼠巩膜成纤维细胞。细胞经传代纯化鉴定后,取第3～4代细胞加入不同浓度的EGF（0．1～200ng／mL）、bFGF（0．1～50ng／mL）。分别培养24、48、72h用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞的增殖密度。观察不同浓度、时间下细胞增殖情况。结果发现0．1～100ng／mL的EGF和0．1～50ng／mL的bFGF对大鼠巩膜成纤维细胞均有明显的促增殖作用,且呈剂量相关性。结论一定浓度的EGF、bFGF对体外培养的大鼠巩膜成纤维细胞的生长具有促进作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期及凋亡的影响

目的:研究不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对瘢痕成纤维细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法:取术中切除的增生性瘢痕组织3例,以植块培养法进行成纤维细胞原代培养,取第2代用于实验.选用含1、5、10、50、100、500 ng/mL不同浓度bFGF的培养液作用于细胞72 h,以未加bFGF的培养液作为对照,并进行如下检测:①MTT法检测细胞增殖情况;②流式细胞仪检测细胞周期及凋亡.结果:①MTT显示,随bFGF浓度增高,OA值由0.1833±0.019递增至0.3432±0.041(P＜0.05),且具有剂量依赖性.②流式细胞仪检测结果示:bFGF主要影响G1期,G1期细胞百分数随bFGF浓度增加由81.3%±3.24%递减至75.9%±1.21%.凋亡细胞百分比由7.2%±O.56%递减为2.3%±0.49%(P＜0.05).结论:bFGF可通过增加有丝分裂促进瘢痕成纤维细胞增殖,并有保护细胞免于凋亡的作用.     

碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对成年牛晶状体上皮细胞增殖的影响

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)和表皮生长因子 (EGF)对成年牛晶状体上皮细胞增殖的影响。　方法　按正交表 L16 (4 5)进行正交设计 ,将不同浓度 b FGF和 EGF共同作用于体外培养的成年牛晶状体上皮细胞 ,采用 MTT法测定细胞的增殖能力。　结果　单用 b FGF、EGF均可促进成年牛晶状体上皮细胞增殖。0 .75 ng/ m L 的 b FGF开始对晶状体上皮细胞有促增殖作用 ,1～ 10 0 ng/ m L 的 EGF对成年牛晶状体上皮细胞均有明显的促增殖作用 (P<0 .0 1) ,但 b FGF和 EGF无交互作用。　结论　 b FGF和 EGF是诱导成年牛晶状体上皮细胞增殖的重要因素 ,但两者无交互作用     

表皮生长因子及胶原网架对培养成纤维细胞的影响

目的：观察表皮生长因子（EGF）及胶原网架对体外培养的皮肤成纤维细胞（FB）增殖的影响。方法：酶消化法分离大鼠皮肤FB,以含有10%新生牛血清的DMEM培养液进行培养,采用细胞计数、MTT法、组织学方法测定细胞增殖能力和形态变化。结果：培养液中EGF浓度大于5 μg•L^-1时,FB的增殖活性随EGF浓度的增加而增加,在 20 μg•L^-1浓度时达到最大。植入胶原网架中的FB,随着培养时间的延长,细胞数量增加缓慢。结论：EGF对FB的增殖具有促进作用,而胶原网架对FB的增殖速率具有一定的调节作用。     

表皮生长因子对TPN大鼠小肠隐窝表皮生长因子受体表达的影响

目的：研究给予外源性表皮生长因子（ＥＧＦ）对完全胃肠外营养（ＴＰＮ）大鼠小肠隐窝ＥＧＦ受体表达的影响以及与小肠粘膜细胞增殖的关系．方法：采用大鼠ＴＰＮ模型，小肠组织切片ＨＥ染色，测定隐窝细胞数及有丝分裂指数；采用免疫组织化学结合计算机图像分析的方法，测定隐窝细胞ＥＧＦ含量及ＥＧＦ受体的表达．实验共使用２００～２５０ｇ体重ＳＤ大鼠２４只，随机分组：对照组（ｎ＝８），仅行虚拟手术，即行右颈静脉结扎，每日饲以普通饲料及水；ＴＰＮ组（ｎ＝８），禁食水，输注常规ＴＰＮ；ＴＰＮ－ＥＧＦ组（ｎ＝８），输注常规ＴＰＮ溶液，并每日按０．１μｇ／（次·ｇ）皮下注射ＥＧＦ２次．各组均观察１４ｄ．结果：ＴＰＮ大鼠小肠隐窝ＥＧＦ含量及ＥＧＦ受体表达显著减少（Ｐ＜０．０１），隐窝细胞数和有丝分裂指数也明显降低（Ｐ＜０．０５）；当给予外源性ＥＧＦ后，隐窝ＥＧＦ含量、ＥＧＦ受体表达以及隐窝细胞数、有丝分裂指数均未降低．结论：ＥＧＦ能预防ＴＰＮ大鼠小肠隐窝ＥＧＦ受体表达及ＥＧＦ含量下降，维持细胞生成率．     

cyclin D1和CDK4在口腔正常上皮、炎症及鳞癌中表达的定量分析

目的 通过检测口腔粘膜的正常上皮、非特异性炎症上皮及鳞癌中cyclin D1与CDK4的表达,探讨其在上皮组织不同状态中的变化及意义。方法 用临床病理标本,设立对照,选择cyclin D1和CDK4抗体免疫组化染色。结果 cyclin D1和CDK4在正常口腔上皮与口腔鳞癌上皮、非特异性炎症与口腔鳞癌上皮中的表达间有统计学差别（P＜0．05）,正常组与炎症组间无差别,cyclin D1及CDK4在口腔鳞癌上皮中过表达（P＜0．05）。结论 cyclin D1与CDK4过表达的机制可能由于基因扩增或其他因素使其蓄积,口腔鳞癌组分级间的差异性提示其可作为肿瘤分级的评价指标之一。     

鼠萎缩性胃炎表皮生长因子及其受体表达

目的 :探讨表皮生长因子 (EGF)与萎缩性胃炎的关系。方法 :应用放射免疫法和免疫组化 En vinsion技术检测 2 0例萎缩性胃炎和 2 0例正常 SD大鼠血清 EGF及胃粘膜组织 EGFR水平。结果 :萎缩性胃炎大鼠血清EGF水平为 (0 .14 9± 0 .0 2 )μg/ L ,EGFR表达的阳性率为 80 % ,较正常大鼠组 [(0 .0 4 3± 0 .0 0 3)μg/ L和 0 % ]明显增高 (P<0 .0 1)。结论 :实验性萎缩性胃炎大鼠体内有高水平 EGF/ EGFR表达。EGF/ EGFR可能参与了萎缩性胃炎的发生、转化过程。     

胃肠乐对幽门结扎胃溃疡胃黏膜EGF和EGFR的影响

[目的]探讨胃肠乐抗溃疡的机制及对胃黏膜细胞的保护作用。[方法]将48只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、胃肠乐高剂量组、胃肠乐中剂量组、胃肠乐低剂量组、洛赛克组;用游标尺计算各组溃疡指数,采用免疫组织化学分析方法检测胃黏膜表皮生长因子(EGF)、表皮生长因子受体(EGFR)的表达及图像分析。[结果]胃肠乐高、中剂量组胃黏膜全层EGF、EGFR表达明显(其积分光密度值、平均灰度及阳性细胞占总面积的百分比与模型对照组相比有显著差异)(P<0.05)。[结论]胃肠乐抗溃疡,促进溃疡愈合的作用机制可能与其通过增加EGF、EGFR表达而起到胃黏膜细胞保护作用有关。     

胃肠乐对幽门结扎胃溃疡胃黏膜EGF和EGFR的影响

[目的]探讨胃肠乐抗溃疡的机制及对胃黏膜细胞的保护作用.[方法]将48只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、胃肠乐高剂量组、胃肠乐中剂量组、胃肠乐低剂量组、洛赛克组;用游标尺计算各组溃疡指数,采用免疫组织化学分析方法检测胃黏膜表皮生长因子(EGF)、表皮生长因子受体(EGFR)的表达及图像分析.[结果1胃肠乐高、中剂量组胃黏膜全层EGF、EGFR表达明显(其积分光密度值、平均灰度及阳性细胞占总面积的百分比与模型对照组相比有显著差异)(P＜0.05).[结论]胃肠乐抗溃疡,促进溃疡愈合的作用机制可能与其通过增加EGF、EGFR表达而起到胃黏膜细胞保护作用有关.     

表皮生长因子受体反义基因转染对人恶性胶质瘤细胞体外生长的影响

目的探讨表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）反义基因转染对人恶性胶质瘤细胞Ｕ８７ＭＧ体外生长的影响。方法构建ＥＧＦＲ反义基因表达载体，应用脂质体转染法将其导入Ｕ８７ＭＧ细胞；ＰＣＲ方法鉴定转染克隆；Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交检测ＥＧＦＲ蛋白表达水平；通过绘制生长曲线和软琼脂集落形成实验测定反义ＥＧＦＲ基因对恶性胶质瘤细胞体外生长的抑制作用。结果转染反义ＥＧＦＲ基因的细胞克隆株ＡＳ１ＡＳ６的ＥＧＦＲ蛋白表达水平均有不同程度的降低；ＡＳ１ＡＳ６细胞体外生长明显减慢，ＡＳ１ＡＳ６细胞克隆形成率明显降低。表明Ｕ８７ＭＧ细胞体外生长速度和恶性转化能力均与ＥＧＦＲ表达呈正相关。结论反义ＥＧＦＲ基因转染可以明显抑制Ｕ８７ＭＧ细胞生长，ＥＧＦＲ对Ｕ８７ＭＧ细胞生长具有重要的调控作用     

子宫肿瘤表皮生长因子及其受体与C-erbB-2的表达

①目的 观察子宫肿瘤组织表皮生长因子（ＥＧＦ）及其受体（ＥＧＦＲ）和Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白的表达及其意义。②方法 采用免疫组化方法检测了７３例子宫颈组织（１０例正常宫颈、１８例ＣＩＮ组织、４５例子宫颈癌组织）及７２例子宫内膜组织（增殖期内膜７例、分泌期内膜１０例、子宫肌腺病１０例、子宫内膜癌４５例）ＥＧＦ,ＥＧＦＲ及Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达。③结果 子宫颈组织和子宫内膜组织中ＥＧＦ表达均为阴性。子     

P物质对体外培养大鼠成纤维细胞表皮生长因子及其受体基因表达的影响

目的　探讨P物质 (SubstanceP ,SP)作用于离体培养的大鼠肉芽组织成纤维细胞后 ,对其表皮生长因子(EGF)及受体 (EGFR)基因表达的影响。方法　采用大鼠肉芽组织成纤维细胞培养和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,观察SP在不同浓度 ( 1× 10 -9～ 1× 10 -5mol/L)及不同孵育时间 ( 0、3、6、12、2 4h)情况下刺激大鼠成纤维细胞后 ,成纤维细胞EGF、EGFRmRNA表达的改变情况。结果　SP可上调大鼠肉芽组织成纤维细胞EGF、EGFRmRNA表达。其中 ,SP对EGF的量 效曲线呈双相分布 ,最大效应浓度为 1× 10 -7mol/L。但SP仅在高浓度时 ( 1× 10 -6～ 1× 10 -5mol/L)促进EGFR表达。在最大效应浓度 ( 1× 10 -7mol/L ,1× 10 -5mol/L)时 ,SP对大鼠成纤维细胞EGF、EGFRmRNA表达的上调作用分别于孵育细胞后 6、12h达高峰。结论　SP对大鼠肉芽组织成纤维细胞EGF、EGFR基因表达存在直接影响 ,其表现形式与SP的刺激浓度及孵育时间有关。这种影响可能是SP在创伤愈合过程中发挥调控作用的生物学机制之一。