硼替佐米对人卵巢癌耐顺铂细胞株的生长抑制作用

目的探讨硼替佐米对人卵巢癌耐顺铂细胞株（SKOV3／DDP）的逆转作用及其可能机制。方法体外培养人卵巢癌细胞株（SKOV3）和SKOV3／DDP,空白对照组加RPMI-1640完全培养基;硼替佐米组浓度分别为0．0625、0．1250、0．2500、0．5000、1．0000、2．0000μmol／L,检测不同作用时间对SKOV3／DDP的生长抑制情况;采用流式细胞术检测0．5000μmol／L硼替佐米作用后细胞周期及凋亡率的变化。结果①硼替佐米对SKOV3／DDP细胞生长抑制情况：0．0625、0．1250、0．2500、0．5000、1．0000、2．0000μmol／L的硼替佐米作用SKOV3／DDP细胞24h的生长抑制率依次为（1．19±0．07）％、（2．24±0．08）％、（3．47±0．20）％、（4．61±0．07）％、（5．80±0．17）％、（6．43±0．10）％;作用48h的生长抑制率依次为（9．39±0．08）％、（12．17±0．23）％、（18．08±0．25）％、（41．11±0．10）％、（55．45±0．41）％、（64．91±0．18）％;作用72h的生长抑制率依次为（13．21±0．32）％、（20．18±0．23）％、（22．91±0．35）％、（52．08±0．10）％、（76．59±0．39）％、（83．23±0．38）％。空白对照组抑制率为0,各实验组与空白对照组之间两两比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。②细胞周期及凋亡率的变化情况：0．5000μmol／L硼替佐米作用SKOV3／DDP细胞48h,细胞周期G2／M期的比例为22．8％,空白对照组为10．1％,差异有统计学意义（P〈0．05）;凋亡率分别为11．7％和2．2％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论硼替佐米能够逆转SKOV3／DDP细胞的耐药作用;并将SKOV3／DDP的细胞周期阻滞于Gz／M期。     

柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞环氧化酶2mRNA及蛋白表达水平的影响

目的：研究中药柚皮苷对人卵巢癌SK—OV3细胞环氧化酶2（CoX-2）tuRNA及蛋白表达水平的影响。方法：常规培养人卵巢癌sK—OV3细胞,分为空白对照组、柚皮苷10umol／L组、柚皮苷20tzmol／L组、柚皮苷40umol／L组、阳性对照组（塞来昔布80tLmol／L）。MTT法测定柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响,运用Real—timePCR和WesternBlot法测定培养48h后各组细胞中COX_2mRNA和蛋白表达水平的变化。结果：MTT检测法显示,柚皮苷各浓度处理组,时间依赖性和剂量依赖性地抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长。经药物处理48h后,Real-timePCR结果显示,与空白对照组（1．094±0．053）比较,10、20umol／L柚皮苷即对SK—OV3细胞COX_2mRNA表达抑制作用（O．828±0．006,0．753±0．011,P〈0．05）,而40gmol／L柚皮苷则明显下调COX-2mRNA的表达（0．412±0．216,P〈0．01）,与塞来昔布组（0．321±0．017）的抑制程度相近。WesternBlot法检测结果显示,与空白对照组（1．7325±0．0826）相比,10umol／L柚皮苷组相对表达量（1．7925±0．0880）虽略有上调,但无统计学差异,20、40／umol／L柚皮苷组均可明显下调SKOV3细胞COX-2蛋白的表达（1．2225±0．0822,1．2725±0．0763,P〈0．05）,塞来昔布组也明显抑制CoX-2蛋白的表达。结论：柚皮苷可抑制人卵巢癌SKOV3细胞体外增殖并抑制COX-2mRNA和蛋白的表达。     

恩度联合紫杉醇热化疗对人胃癌SGC7901细胞株增殖抑制及凋亡影响

目的观察恩度联合紫杉醇热化疗对人胃癌SGC7901细胞株增殖抑制及凋亡的影响。方法取对数生长人胃癌SGC7901细胞株,分为对照组、41℃、42℃、43℃、44℃组,5组分别加入终浓度30nmol／L、60nmol／L、120nmol／L、240nmol／L、480nmol／L紫杉醇,于水浴箱中分别水浴0．5h、1h、1．5h,72h后MTr法测定紫杉醇热化疗对SGC7901胃癌细胞株细胞抑制作用并确定最佳紫杉醇浓度及热疗温度、热作用时间。流式细胞术分别检测对照组、恩度组（15mg／L）,紫杉醇热化疗组,恩度联合组（恩度＋紫杉醇热化疗）的细胞凋亡率并进行细胞周期分析。结果随着紫杉醇浓度以及温度的提高,SGC7901细胞株的抑制率逐步升高。在紫杉醇浓度480nmol／L、43℃作用1h条件下,SGC7901细胞株的抑制率达到70．99％,在各组最高。细胞凋亡率在对照组、恩度组、紫杉醇热化疗组以及联合治疗组分别为O．70％、1．48％、8．56％、12．97％。细胞周期分析可见与对照组相比恩度组的增殖期（S＋G2／M）细胞比例由（52．5±2．1）％下降到（42．3±2．0）％（P〈0．05）,紫杉醇热化疗组G2／M期细胞比例由（15．2±1．4）％上升至（32．1±2．2）％（P〈0．05）。与紫杉醇热化疗组相比,恩度联合治疗组的G2／M期细胞比例由（32．1±2．2）％下降到（19．9±1．3）％,而G1期比例由（30．5±1．7）％上升到（48．1±2．4）％（P〈0．05）。结论43℃热作用lh联合480nmol／L紫杉醇对人胃癌SGC7901细胞株增殖抑制作用在5组中最强,紫杉醇热化疗联合恩度后能够进一步增卉口时SCr7Q01冒癌细日白楼拍枷制他阐算诱导丘涸十     

二烯丙基二硫对Raji细胞化疗增敏的研究

目的研究二烯丙基二硫（dimlyldisulfide,DADS）对长春新碱（VCR）作用于人淋巴瘤Raji细胞化疗增敏的作用及机制。方法DADS（0．625μg／ml、1．25μg／ml）及VCR（6．25,12．5,25．0μg／ml）单用及联合应用作用于Raji细胞,采用CCK-8（cellcountingkit）法检测各自的抑制率,应用金氏公式求q值。评价联合用药效果;DADS（0．625μg／ml）、VCR（6．25,12．5,25．0μg／ml）及联合应用作用于Raii细胞,采用流失细胞术检测细胞凋亡率,采用细胞免疫化学法检测细胞Bax及Bcl-2的表达情况。结果无毒剂量的DADSfo．6251Ag／ml、1．25μg／ml）分别与VCR联合应用,可提高VCR对Raji细胞增殖抑制率。DADS（0．625μg／m1）提高VCR（6．25,12．5,25．0μg/ml）诱导Raji细胞凋亡率（P〈0．05）。联合组Raji细胞Bcl-2蛋白表达水平比VCR单药组低（P〈0．05）;Bax蛋白表达水平在联合组Raji细胞VCR单药组高（P〈0．05）。结论DADS能增强VCR对Raji细胞增殖抑制和诱导凋亡作用．起化疗增敏作用：可能机制与其下调Bcl-2蛋白表达水平,上调Bax蛋白表达水平有关。     

华蟾素与紫杉醇合用对S180小鼠移植瘤作用的实验研究

目的观察华塘素与紫杉醇配伍对小鼠S180腹水瘤和肉癌移植瘤的作用。方法ICR小鼠分别于腹腔和腋下接种1×10^6个S180肿瘤细胞．腹腔注射华蟾素注射液（80-20,5mg·kg^-1）或（80,20,5mg·kg^-1）同时腹腔注射紫杉醇注射液5mg·kg^-1连用9天。腹水瘤模型连续给药9d后停药。观察小鼠的生存时间,计算荷瘤小鼠生命延长率。肉癌模型连续给药9d后,次日取瘤块称重。计算肿瘤抑制百分率。结果在腹水瘤模型中,与生理盐水对照组的（17．3±1．3）d比较。华塘素高,中,低剂量单用组小鼠存活时间分别为（21．5±2．4）d（P〈0．05）。（18．6±1：4）d,（18．3±2．4）d;合用组：与生理盐水组比较均有显著性差异,平均小鼠存活时间分别为（26．6±1．6）d（P〈0．001）,（24．3±2．1）d（P〈0．001）,（21．8±1．1）d（P〈0．01）;对腹水瘤小鼠的生命延长率分别是56．4％,40．4％和26．0％。肉癌模型中．与生理盐水对照组的（1．55±0．52）g比较,单用组：S180癌平均瘤重分别为（1．05±0．48）g（P〈0．01）,（1．44±0．41）g,（1．39±0．60）g;合用组：与生理盐水组比较均有显著性差异,平均瘤重分别为（0．61±0．40）（P〈0．001）,（0．88±0．38）（P〈0．001）,（1．09±0．55）（P〈0．01）g;抑瘤率分别为60．7％．43．3％和30．0％。目结。呛华蟾素与紫杉醇合用有明显的协同治疗作用。     

顺铂与DMPIBPA合用体外抗肿瘤作用研究

目的：合成 Z －2－（3，5－二甲氧苯基）－3－（4－异丁氧苯基）丙烯腈（DMPIBPA）并初步研究与顺铂（DDP）联合应用时的抗癌活性。方法以3，5二甲氧基苯甲酸为原料合成 DMPIBPA，后用 DDP、DMPIBPA 及 DDP＋DMPIBPA 分别处理人结肠癌细胞（HCT116）及人正常肝细胞（L －02）细胞，其细胞增殖的抑制程度用四唑盐（MTT）比色法测定。结果在 HCT116细胞中，100μmol·L －1 DMPIBPA （抑制率为35．3％±5．0％）与250μmol·L －1 DDP（抑制率为28．9％±1．3％）联合应用时其抑制率为65．4％±2．0％，明显强于单用，而在 L －02细胞中仅为36．2％±0.5％。结论联合应用 DDP 及 DMPIBPA 时对 HCT116细胞有选择性协同增殖抑制活性，而对L －02无作用。     

重组人血管内皮抑素心脏毒性作用的靶标及作用机制研究

目的探讨重组人血管内皮抑素（恩度）心脏毒性作用的靶标及作用机制。方法以H9c2心肌细胞为观察对象,进行以下实验：（1）将H9c2细胞分为对照组（不给予药物干预）和恩度100、200、400μ/ml组（加入相应浓度药物培养24、48h）,用流式细胞术检测各组各时点细胞凋亡率;（2）将H9c2细胞分为对照组和恩度400μg/ml干预24h实验组,用透射电镜观察细胞超微结构改变;（3）将H9c2细胞分为对照组和恩度100、200、400μ/ml组（加入相应浓度药物培养18h）,应用JC-1荧光探针检测细胞线粒体膜电位;（4）将H9c2细胞分为对照组和恩度400μg／ml干预24h实验组,用细胞免疫化学方法观察细胞色素C（Cyt-C）释放情况;（5）将H9c2细胞分为对照组和恩度100、200、400μml组（加入相应浓度药物培养24h）,用化学发光法检测各组细胞的ADP／ATP比值。结果（1）恩度200μg／ml组在药物干预24h、恩度400斗g／ml组在药物干预24、48h后,细胞凋亡率均明显高于对照组[24h：（16．34±3．72）％、（27．03±3．91）％比（6．99±1．72）％;48h：（24．89-4-4．77）％比（6．44±1．81）％,均P〈0．01];恩度200μg／ml组药物干预24h后的细胞凋亡率高于药物干预48h[（16．34＋3．72％）比（11．34±3．09）％,P〈0．01]。（2）对照组细胞超微结构正常;恩度400μg/ml干预24h实验组细胞核固缩碎裂、染色质块聚,细胞内空泡增多,内质网扩张,线粒体肿胀,出现凋亡小体。（3）与对照组相比,不同剂量恩度干预组细胞线粒体跨膜电位去极化程度随恩度浓度增加而下降。（4）对照组细胞Cyt-C主要分布于线粒体,恩度400μg/ml干预24h实验组细胞Cyt-C从线粒体释放至胞质。（5）恩度200、400μg/ml组细胞的ADP／ATP比值明显高于对照组（1．14±0．11、1．31±0．18比0．98±0．09,均P〈0．01）。结论心肌细胞线粒体可能是恩度心脏毒性作用的靶标,经线粒体依赖性途径诱导的心肌细胞凋亡是恩度致心肌损伤的机制之一。     

复方奥美沙坦酯片的人体药动学研究

目的研究健康受试者口服复方奥美沙坦酯片的药物动力学特征。方法30名健康受试者随机分成3组,分别空腹服用复方奥美沙坦酯片1片、2片与3片,定时取血,采用高效液相色谱法测定人血浆中氢氯噻嗪与奥美沙坦浓度并利用DAS药动学软件计算药动学参数。结果氢氯噻嗪低中高剂量给药后的主要药动学参数分别是：t1/2为（9．68±3．37）h、（10．11±4．96）h、（11．02±4．77）h,Cmax为（69．7±19．8）μg·L^-1、（158．5±62-4）μg·L^-1、（209．4±85．7）μg·L^-1,AUC0→ι为（737．8±110．6）μg·L^-1．h、（1397．2±252．0）μg·L^-1．h、（2200．3±517．6）μg·L^-1．h;奥美沙坦低中高剂量给药后的主要药动学参数分别是：t1/2为（6．25±1．98）h、（7．99±2．43）h、（7．03±2．86）h,Cmax为（635．1±237．7）μg·L^-1、（1336．8±452．0）μg·L^-1、（1774．7±792．2）μg·L^-1,AUC0→ι为（4438．4±1058．1）μg·L^-1．h、（8239．6±1909．7）μg·L^-1．h、（13150．3±3627．5）μg·L^-1．h。结论复方奥美沙坦酯片2组分在健康受试者体内为线性动力学过程。     

锡兰绿茶中黄酮类成分对缺氧人脑上皮细胞的治疗作用

为研究从锡兰绿茶（Dilmah）提取纯化的黄酮类有效成分对缺氧人脑上皮细胞的治疗作用，体外培养人脑上皮细胞（HBEC），给与锡兰绿茶黄酮提取物治疗后造缺氧模型，检测锡兰绿茶中的黄酮类化合物的抗氧化活性及脑细胞的生存情况，探究其对缺氧脑细胞氧化应激的影响。生化检测显示锡兰绿茶提取物的自由基的清除抑制率（ABTS）为68％±2．8％，次氯酸漂白邻苯三酚红抑制率为79％±4．5％。缺氧后，空白对照组细胞生存率为29％±2．3％，而锡兰绿茶黄酮提取物治疗组为41％±4．7％，氯沙坦治疗组为39％±3．1％。同时，黄铜提取物与氯沙坦治疗组LDH释放分别减少75％±3．7％和79％±3．5％。锡兰绿茶的黄酮提取物治疗使细胞抗氧化酶活力显著增强，SOD：（1．5±0．6）μmol／min／mg蛋白，CAT：（0．61±0．06）μmol／min／mg蛋白，GPx：（2．6±0．41）μmol／min／mg蛋白，GST：（6．0±2．4）μmol／min／mg蛋白，显著高于缺氧对照组，其酶活力分别为：（0．5±0．52，51±0．04，1．2±0．35，3．1±1．6）μmol／min／mg蛋白。研究结果表明，锡兰绿茶有很大的临床应用价值。饮用锡兰绿茶可能成为预防中风的有效新方法，并能减少现代疾病对生命的威胁，提高人类生活质量。     

HPLC-MS-MS法测定人血浆中石杉碱甲的浓度及人体相对生物利用度研究

目的建立人血浆中石杉碱甲浓度的HPLGM9MS测定法,研究2种石杉碱甲片在正常人体的相对生物利用度。方法以盐酸伪麻黄碱为内标,血浆样品经乙酸乙酯萃取,汉邦C18柱（4．6mm×150mm,5μm）分离后,采用HPLC-MS-MS联用法检测,18名健康男性志愿者采用双周期随机交叉试验设计,分别单剂量口服石杉碱甲片（T或R）0．2mg后测定两者的相对生物利用度。结果石杉碱甲与内标分离度好,内源性杂质不干扰测定,在0．0508～5．080μg·L^-1（r=0．9998）石杉碱甲浓度与峰面积比的线性关系良好,定量限为0．0508μg·L^-1,回收率为101．8％～109．8％（n=5）,日内RSD为1．8％～3．9％（n=5）;日间RSD为2．3％～8．7％（n=15）。单次服用0．2mg石杉碱甲片后T与R的AUC0～24分别为（16．35±3．42）μg·h·L^-1和（16．38±3．61）μg·h·L^-1;AUC0-∞分别为（17．53±3．80）μg·h·L^-1和（17．70±3．97）μg·h·L^-1;Gmax分别为（2．47±0．49）μg·L^-1和（2．514-_0．51）μg·L^-1;tmax分别为（1．3±0．4）h和（1．2±0．3）h;t1／2分别为（5．9±0．8）h和（6．2±0．7）h。与R相比,T的相对生物利用度为100．5％±10．1％。结论该方法准确度高,灵敏度好,可用于石杉碱甲人体内过程研究。方差分析结果表明2种制剂的主要药动学参数之间无明显差异,双单侧t检验结果表明2种制剂为生物等效制剂。     

川楝素对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响

目的研究川楝素对体外卵巢癌细胞恶性生物学行为的作用及其可能的作用机制。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,分为低、中、高剂量实验组和对照组,分别以50,60,70μmol·L^-1川楝素与等量生理盐水干预,分别干预24,48和72 h。用活细胞计数(CCK-8)法检测人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制情况;用细胞划痕实验检测人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力;用Transwell小室实验检测人卵巢癌SKOV3细胞的侵袭能力;用蛋白质印迹(Wb)法检测人卵巢癌SKOV3细胞LIM激酶1(LIMK-1)、丝切蛋白(cofilin)和磷酸化cofilin(p-cofilin)蛋白的表达水平。结果干预72 h时,低、中、高剂量实验组人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制率分别为(56.41±2.69)%,(68.37±3.56)%和(79.51±4.64)%;干预72 h时,对照组和低、中、高剂量实验组人卵巢癌SKOV3细胞的迁移率分别为(92.43±3.51)%,(47.32±4.11)%,(36.25±3.42)%和(18.62±2.69)%;侵袭率分别为(91.48±3.73)%,(76.56±4.12)%和(34.51±3.22)%,(10.36±2.91)%;LIMK-1蛋白相对表达量分别为0.86±0.11,0.59±0.14,0.53±0.12和0.28±0.09;cofilin蛋白相对表达量分别为0.79±0.08,0.82±0.12,0.80±0.10和0.81±0.11;p-cofilin蛋白相对表达量分别为0.90±0.10,0.82±0.12,0.55±0.08和0.24±0.07。随川楝素作用浓度增大,低、中、高剂量实验组人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制率逐渐升高;与对照组比较,低、中、高剂量实验组人卵巢癌SKOV3细胞迁移率、侵袭率及LIMK-1和p-cofilin蛋白相对表达量均显著降低,且呈剂量依赖性(均P<0.05)。结论川楝素具有体外抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭的作用,其作用机制可能与抑制人卵巢癌SKOV3细胞LIMK-1/cofilin信号通路有关。     

lncRNA HOST2通过PI3K/Akt途径调控卵巢癌SKOV3 细胞对顺铂的敏感性

摘要：目的 探讨下调长链非编码RNA（lncRNA）上皮性卵巢癌转录因子2（HOST2）表达对人卵巢癌SKOV3细 胞顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,取对数生长期细胞分为空白对照组、阴 性对照组和siRNA干扰组,其中阴性对照组和siRNA干扰组SKOV3细胞应用Lipofectamine 2000分别转染阴性对照 siRNA 和 lncRNA HOST2-siRNA,空白对照组未进行转染。采用 qPCR 法检测各组细胞 lncRNA HOST2 的表达; Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶（Akt）信号通路相关蛋白Akt、p-Akt （S473）、pAkt（S380）及Bcl-2的表达;CCK-8法检测经不同浓度（0、20、40、60、80、100 μmol/L）顺铂作用后细胞的存活情况,并计算半抑制浓度（IC50）;流式细胞术检测经20 μmol/L顺铂作用后的细胞凋亡率。结果 与空白对照组和阴性对照组 比较,siRNA 干扰组细胞 lncRNA HOST2 表达及 p-Akt（S473）、p-Akt（S380）和 Bcl-2 蛋白表达水平均降低（均 P＜ 0.05）;3组Akt蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。空白对照组、阴性对照组和siRNA干扰组细胞存活率均 随顺铂药物浓度的增加而降低,IC50分别为（59.58±5.97）、（51.42±5.22）和（39.75±5.31）μmol/L。siRNA干扰组细胞凋 亡率（12.42%±1.46%）明显高于空白对照组（7.53%±1.25%）和阴性对照组（8.16%±1.31%）。结论 下调 lncRNA HOST2表达可增强人卵巢癌SKOV3细胞对顺铂的敏感性,其机制与抑制PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达有关     

5-脱氧杂氮胞苷对上皮性卵巢癌细胞株生长及侵袭力的影响

目的 探讨不同浓度的甲基转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza-CdR)对上皮性卵巢癌细胞系ES2、SKOV3细胞生长和体外侵袭力的影响.方法 应用甲基化特异性PCR检测上皮性卵巢癌细胞系ES2及SKOV3 E-cad基因启动子区5'CpG岛甲基化状况.观察ES2和SKOV3用5-Aza-CdR处理前后细胞的形态变化.用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况并绘制生长曲线.用Transwell 小室法检测药物处理前后细胞侵袭力的变化.结果 经不同浓度5-Aza-CdR处理后SKOV3细胞的穿膜细胞数发生了明显变化,分别为对照组(97.6±2.7)个,5-Aza-CdR 0.1μmol/L组(88.2±2.1)个,5-Aza-CdR 1 μmol/L组(60.5±2.2)个,5-Aza-CdR 10 μmol/L组(36.2±3.0)个,随着药物浓度的增高穿膜细胞数逐渐下降,在10 μmol/L浓度时穿膜细胞数最少.结论 甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR能够使卵巢癌细胞的恶性生物学行为发生部分逆转,其在卵巢癌治疗方面的价值值得进一步探讨.

Abstract：

Objective To observe the effects of different concentrations of 5 - aza cdr ( methyl transferase inhibitor) on epithelial ovarian cancer cell line ES2, SKOV3 growth inhibition and invasive capacity. Methods Methylation-specific polymersse chain reaction was applied to detect epithelial ovarian cancer cell line ES2, 3AO and SKOV3 E-cad gene promoteR5'CpG island methylation status. The morphological change of ES2 and SKOV3 before and after treatment with 5- Aza CdR was observed. Thiazolyl blue (MTT) method was used to detect cell growth and the growth curve. The change of cell invasive capacity was detected by transwell chamber method before and after treatment. Results After being treated by different concentrations of 5-Aza-CdR, invasive cell numbers in SKOV3 changed dramatically. Invasive cell numbers of the control group, 5-Aza 0. 1 μmol/L group, 5-Aza 1 μ mol/L group and 5-Aza 10 μmol/L group were (97.56 ±2.67), (88.23 ±2.12), (60.46 ±2.25) ,(36.21 ±2.98), respectively. With the increase of drug concentration,the number of penetrating cells decreased. Conclusion Methyl transferase inhibitoR5-Aza-CdR can partially reverse the malignant behavior of ovarian cancer cells.     

腺苷酸活化蛋白激酶激活与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的：研究腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）激活与卵巢癌细胞对顺铂耐药的关系。方法：以不同浓度的顺铂（0,3.125,6.25,12.5,25,50 μmol·L^-1）分别作用人卵巢癌细胞SKOV3及其顺铂耐药株SKOV3/DDP 24 h,MTT法检测顺铂的抑制率;透射电镜检测SKOV3和SKOV3/DDP中的自噬体;流式细胞术检测顺铂作用SKOV3和SKOV3/DDP的凋亡率;Western blot法测定基础状态下及顺铂单独或联合AMPK抑制剂compound C作用时,SKOV3和SKOV3/DDP中p-AMPK、自噬微管相关蛋白轻链3（LC3-Ⅱ）和凋亡蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP）的表达差异;并测定compound C联合顺铂作用SKOV3和SKOV3/DDP时的细胞活性。结果：与SKOV3比较,SKOV3/DDP对顺铂耐药（RI=6.8）;SKOV3/DDP中自噬体明显增多（P<0.01）;顺铂对SKOV3/DDP早期凋亡率（7.0±0.55）%远低于SKOV3早期凋亡率（30.5±0.34）%（P<0.01）;SKOV3/DDP中p-AMPK、LC3-Ⅱ表达量均增加,顺铂作用时Cleaved-PARP表达不明显;compound C与顺铂同时作用时,SKOV3/DDP中p-AMPK、LC3-Ⅱ表达减少,Cleaved-PARP表达水平显著升高,且SKOV3/DDP对顺铂敏感性增加。结论：SKOV3/DDP中p-AMPK的激活诱导卵巢癌细胞自噬可能导致其对顺铂耐药,compound C抑制p-AMPK的激活,与顺铂同时作用促进顺铂诱导SKOV3/DDP细胞凋亡,且增加其对顺铂的敏感性。     

牛耳枫生物碱F21对HepG-2细胞的抑制作用及机制

目的探讨牛耳枫生物碱F21对HepG-2增殖的影响及抗肿瘤作用机制。方法 F21 6.25～100 mg.L-1作用24,48和72 h,MTT法检测细胞抑制率并计算IC50。F21 10～100 mg.L-1作用48 h,瑞姬氏染色光学显微镜下观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳观察DNA的梯形条带,流式细胞仪检测细胞凋亡。F2110,30 mg.L-1+Z-VAD-FMK(胱天蛋白酶抑制剂)20μmol·L-1作用48 h,MTT法检测抑制率。结果 F21可明显抑制HepG-2细胞增殖,其于24,48和72 h的IC50值分别为5.3±0.1,1.3±0.1和(0.13±0.1)mg.L-1,且具有量效(F=232.39,P<0.05)和时效(F=65.59,P<0.05)关系。F21 10～30 mg.L-1可使HepG-2细胞体积增大、胞质内细胞核周围出现大量空泡、细胞膜完整、细胞核破碎甚至细胞形态消失。琼脂糖凝胶电泳未观察到典型的凋亡细胞DNA梯形条带。流式细胞术分析显示,与正常对照组比较,F21 10,30和100 mg.L-1处理HepG-2细胞48 h后,晚期凋亡率分别(17.34±0.01)%,(25.45±0.01)%和(43.67±0.03)%(P<0.05)。Z-VAD-FMK可明显抑制星形孢菌素诱导的细胞死亡。F21 10和30 mg.L-1组的增殖抑制率分别为(18.42±0.09)%和(42.77±0.01)%,而F21 10,30 mg.L-1+Z-VAD-FMK组的增殖抑制率分别为(16.46±0.01)%和(44.01±0.01)%,与相应的F21组相比无统计学差异。结论 F21在体外对HepG-2细胞具有显著的抑制作用,其作用机制并非通过激活胱天蛋白酶途径而诱导肿瘤细胞的凋亡。     

25种化疗药物对原代培养人乳腺癌细胞的体外药敏研究

目的:研究25种化疗药物对原代培养人乳腺癌细胞的敏感性,探究抗乳腺癌药物敏感性的一般规律。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测25种化疗药物对原代培养人乳腺癌细胞生长的影响,计算各自抑制率(%)。结果:对人乳腺癌细胞抑制率超过30%的药物依次为紫杉醇、多西他赛、表柔比星、环磷酰胺、氟尿嘧啶、替尼泊苷、丝裂霉素、长春新碱、卡铂。S期、M期和周期非特异性药物对乳腺癌平均抑制率分别为(36.2±9.5)%、(29.1±5.6)%和(27.5±8.8)%,差别无显著意义。S期、M期和周期非特异性药物中抑制率最高的药物分别是紫杉醇、氟尿嘧啶和表柔比星。结论:肿瘤药敏的结果佐证了临床联合化疗的合理性。     

土槿乙酸抑制人卵巢癌SKOV_3细胞增殖并诱导G_2/M期阻滞

目的探讨土槿乙酸(pseudolaric acid B,PLAB)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和细胞周期的影响。方法 MTT法检测PLAB对细胞生长抑制作用;Hoechst 33342荧光染色分析细胞死亡特征;流式细胞术检测细胞周期;Real time-PCR和Western blot检测周期相关基因Cyclin B1、CDK1和CyclinD1的表达变化。结果 PLAB明显抑制SKOV3细胞生长,且抑制作用呈浓度-作用时间依赖性(P<0.05),其24、48和72 h的IC50值分别为2.44、1.60、2.94μmol.L-1。5μmol.L-1PLAB处理细胞24 h,细胞出现核染色质凝集、凋亡小体等典型凋亡特征,随着PLAB浓度升高,G2/M期细胞比例明显增大并表现出时间依赖性(P<0.05),同时伴有Cyclin B1和CDK1呈高表达状态(P<0.05),Cyclin D1呈低表达状态(P<0.05)。结论 PLAB可抑制SKOV3细胞生长,引起细胞G2/M期阻滞,伴随Cyclin B1和CDK1呈高表达状态,可能与其调控周期相关蛋白降解有关。