染色体原位杂交

基本原理 核酸原位杂交技术(in situ hybridization of nucleic acids or in situ nu-cleic acids hybridization)是利用硷基序列已知的带放射性或非放射性标记的核酸探针,依硷基互补配对原理,通过放射自显影或非放射检测体系(免疫酶促显色反应和荧光系统等),在组织切片、细胞、间期核及染色体等标本上对待测核酸进行定性、定位及相对定量分析的一种方法,一般称之为原位杂交。Pardue及Gall首先在细胞学标本上建立了此种方     

FISH与传统细胞遗传学方法在产前诊断中应用的比较

1．FISH的原理 荧光原位杂交技术（FISH：fluorescence in situ hybridization）是原位杂交技术的一个分支，是一种高度灵敏、高特异性以及分辨率强的基因和染色体分析技术，它通过标记核酸探针（已知碱基顺序）与细胞内的末知待测的核酸按碱基互补配对原则进行特异性原位结合（即杂交），然后通过荧光显色，直接观察和确定细胞核中或染色体上的核酸序列的有无、相互位置和相对量关系。     

组织细胞的原位杂交技术

组织细胞的原位杂交技术是指利用碱基序列已经明了的、带有标记的核酸探针与组织切片或细胞中的待测核酸进行杂交,从而对组织细胞中的待测核酸进行定性、定位和相对性定量分析的一种研究方法。其基本原理是:两个核酸分子的碱基序列如果互补,就可形成稳定的杂交分子。这一方法目前已广泛应用于组织细胞中mRNA以及病毒DNA和RNA的检测,它在病毒学、神经生物学、组织胚胎学、内分泌学以及病理学中均有着良好的应用前景。     

一种非同位素通用探针系统

本文报道了一种应用非同位素方法检测核酸的通用探针系统。这一探针系统运用了两种单链的 DNA探针。第一探针为载有特异核酸片段的单链质粒载体,特异核酸片段的序列与待测核酸的序列互补,这一探针不经过标记;第二探针的核酸序列与第一探针质粒部分的核酸序列互补,它采用化学方法(转氨反应)标记了生物素。     

染色体原位杂交技术发展现状

染色体原位杂交技术是建立在DNA变性、复性动力学基础上,利用核酸分子的碱基序列配对的互补性,将已知的带有标记的DNA探针与细胞标本的染色体上经变性解链后的单链DNA,通过二者特定碱基序列互补,结合成长性核酸杂交分子,经放射性、非放射性方法在染色体上显示出其位置。1970年Pardue等在细胞学标本上建立了DNA-DNA杂交方法标记着染色体原位杂交方法的产生。1974     

荧光原位杂交的原理及在产前诊断中的应用

荧光原位杂交（fhorescenceinsituhybridization．FISH）是近几年来由细胞遗传学、分子生物学及免疫学技术相结合而产生的一种新技术。由于其兼备了细胞遗传学与分子生物学技术，克服了使用单一细胞遗传学技术的局限性，故在产前诊断、基因定位、肿瘤细胞遗传学、临床遗传病检测等研究领域显示出重要应用价值。下面就有关荧光原位杂交的原理及在产前诊断中的应用作一简单介绍。所谓FISH即利用生物素（biotin）等标记的已知外源核酸作为探针，通过特定的碱基互补序列与玻片（包括组织切片、细胞滴片、染色体制片）上待测核酸进行原位杂交…     

荧光原位杂交新技术在恶性血液病听研究进展

荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）是以非放射性物质标记核酸探针，根据核酸杂交原理，在间期核和分裂中期染色体上检测特异性ＤＮＡ序列的一种新技术，由于它克服了放射性原位杂交（ＲＩＳＨ）的一些弊端，具有快速，准确，灵敏，经济等优点，现已应用于肿瘤生物学，产前诊断和基因突变等诸多领域，因恶性血液病常规制备染色较大难度，成功率不高，检出较低等问题，而ＦＩＳＨ技术既可以分析中期核染色体，又能用于间期染色质，故该技术对恶     

FISH检测乳腺癌石蜡组织切片酶消化时间的优化

荧光原位杂交(fluorescence in situ-hybridization,FISH)作为20世纪80年代末在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的非放射性原位杂交技术,通过直接或间接将荧光标记DNA特异性探针与靶细胞中同源序列的核酸杂交,实现对目的 DNA片段或基因的定量和定位分析,目前被人们普遍认为是检测Her-2基因是否活化的"金标准"。但     

原位杂交组织化学的进展

原位杂交组织化学(in situ hybridization histoche-mistry ISHH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合,形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学或免疫组织化学方法在核酸原有的位置上把它显示出来,这一技术即原位杂交组织化学.其目的是研究单     

HPV6B/11原位杂交和免疫组化双重染色

ＨＰＶ6Ｂ/ 1 1原位杂交和免疫组化双重染色指同一组织切片上用原位杂交和免疫组化同时进行实验及显色〔1～ 3〕。利用不同底物 ,显示不同颜色 ,原位杂交用ＮＢＴ/ＢＣＩＰ为底物呈紫蓝色 ,免疫组化用ＤＡＢ为底物呈棕色 ,使待测核酸靶序列和待测蛋白质均能理想显色 ,克服了实验标本空间和样本的误差。1　材料与方法1 1　材料　地高辛标记检测ＨＰＶ6Ｂ/ 1 1型双链ＤＮＡ(ｄｓＤ ＮＡ)探针及碱性磷酸酶标记抗地高辛抗体Ｆａｂ片断 (Ａｎｔｉ ＤＩＣ ＡｇＦａｂ)检测系统 ,ＮＢＴ/ＢＣＩＰ显色系统 (Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ…     

荧光原位杂交在儿科遗传性疾病检测中的应用

荧光原位杂交(FISH)是近十几年来迅速发展形成的一项分子细胞遗传学新技术,是近代医学研究的又一重要进展.七十年代末,FISH用荧光素取代放射性同位素标记,克服了放射性杂交的一些弊端,使原位杂交技术大大地前进了一步.八十年代中,用生物素标记的核苷酸制备探针,成功地在组织切片上检测病毒DNA,为非放射性物质标记探针应用于临床奠定了基础.以后FISH又融合了多种分子生物学方法,目前已衍生为一技术系列,具有重要的理论意义和实用价值.该项技术准确、特异、敏感、安全、稳定、快     

荧光原位杂交新技术在恶性血液病中的研究进展

荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）是以非放射性物质标记核酸探针，根据核酸杂交原理，在间期核和分裂中期染色体上检测特异性ＤＮＡ序列的一种新技术。由于它克服了放射性原位杂交（ＲＩＳＨ）的一些弊端，具有快速、准用、灵敏、经济等优点，现已应用于肿瘤生物学、产前诊断和基因突变等诸多领域。因恶性血液病常规制备染色体有较大难度，成功率不高，检出率较低等问题。而ＦＩＳＨ技术既可以分析中期核染色体，又能用于间期染色质，故该技术对恶性血液病研究有着特殊的应用价值，可发现一些新的染色体畸变包括染色数目、结构变化以及用以往一些常规细胞遗传学技术不能确认的微小染色体异常。现就ＦＩＳＨ在恶性血液病中的研究进展作一简要综述。     

组织芯片技术及其应用

生物芯片 (ｂｉｏｃｈｉｐ)是指采用微量点样等方式 ,将核酸片段、多肽分子、组织切片和细胞等生物样品有序地固定于支持物 (如玻片、硅片、尼龙膜等载体 )的表面 ,组成密集二维阵列 ,然后与已标记的待测生物样品中的靶分子进行杂交、或用免疫组织化学、原位杂交等技术使待检分     

荧光原位杂交技术的研究进展

DNA荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization简称FISH)技术是一种应用非放射性荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色体上显示DNA序列位置的方法.该项技术自20世纪70年代后期问世以来已经在很多领域有广泛的应用.在近几年里,FISH有了日新月异的发展.本文就FISH技术的发展史、方法作一简要综述.     

采用原位杂交进行单拷贝DNA序列的染色体定位

用标记核酸探针与染色体上的DNA序别进行原位杂交,是用于真核细胞基因定位工作的一项强有力技术。但直到最近,采用~3H或~(125)I标记核酸探针进行原位杂交的“标准”方法,敏感性差,仅适用于对染色体上     

应用化学发光法进行基因的筛选与鉴定

基本原理 进入九十代,德国Boehringer Mannheim公司推出了一种新型非放射性化学发光分子杂交技术。它采用随机引物标记法将半抗原Digoxigenin-11-dUTP掺入到标记核酸链中。Digoxigenin(Dig,毛地黄毒苷),是一种仅存在于毛地黄属植物中的类固醇化合物。标记好的探针与固定在尼龙膜上的模板进行常规预杂交和杂交后,通过洗膜,封闭,冉与偶联有碱性磷酸酶(AP)的抗Dig     

核酸探针标记和杂交技术

核酸探针检测技术日益成为诊断疾病的一种重要手段。核酸探针标记有同位素标记和非同位素标记(直接标记和间接标记)等方法,同位素标记检测敏感性高,但同位素半衰期短,不能长期保存。非同位素标记探针比较稳定,可保存较长时间,但检测敏感性稍低。在核酸探针检测中,可用固相杂交、液相杂交测定。本文综述了上述各种核酸探针标记方法和杂交技术的研究进展。     

生物素标记核酸探针研究进展

随着重组DNA技术的发展,核酸杂交技术也有很大的进展。但已往的核酸杂交,多半使用高比活性放射性同位素标记的多核苷酸探针以及放射自显影的检测方法。这是一种极其有效的分析手段,但另一方面也有它的局限性和缺点。使用放射性同位素标记的核酸杂交探针,特别是常规用于临床或用于诊断药物时,许多放射性同位素半衰期较短,易扩散,又存在操作者个人安全及     

聚合酶链反应制备生物素标记原位杂交用探针

聚合酶链反应制备生物素标记原位杂交用探针张雷刘鸿瑞王志永原位杂交能良好地定位检测内、外源性核酸物质，并在研究疾病的发生、发展机制中具有重要的作用。但核酸探针的来源困难防碍了这一技术在病理学中的广泛应用。我们用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法制备ＥＢ病毒原位...     

染色体上引物原位DNA合成技术及其应用

染色体上引物原位ＤＮＡ合成技术因具有简便、快速、不需克隆基因作探针等优点而被认为是现行原位杂交技术的潜在替代者。本文介绍了该技术的操作程序，其中包括非放射性的引物原位ＤＮＡ标记合成技术和本实验室刚刚建立的引物原位ＤＮＡ氚标记合成技术，并讨论了该技术的特点和不足之处。