IL-1对多发性骨髓瘤细胞粘附分子表达的影响

为探讨人骨髓瘤细胞株ＫＭ３表面粘附分子的表达及ＩＬ－１对粘附分子表达的影响，应用直接免疫荧光标记流式细胞术分析人骨髓瘤细胞株ＫＭ３细胞表面粘附分子表达，以荧光阳性率和平均荧光强度两个指标反映粘附分子的表达量，研究ＩＬ－１对ＫＭ３细胞粘附分子表达调控。发现正常情况下，ＫＭ３细胞表面表达粘附分子ＣＤ４４、ＣＤ５４、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ，不表达ＣＤ５６和ＣＤ４９ｄ；ＩＬ－１以剂量非依赖方式促进ＫＭ３细胞表面ＣＤ４４、ＣＤ５４、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ表达。为进一步应用ＫＭ３细胞探讨粘附分子在ＭＭ发病机制中的作用提供实验依据     

肥大细胞与胶原粘附能力及粘附机制

为了解肥大细胞的粘附特性、与细胞外基质（ＥＣＭ）成分胶原（ＣＡ）的相互作用和粘附实现的分子机制，作者用形态学观察、免疫荧光标记，流式细胞仪分析和ＮＡＧ法检测了未成熟人肥大细胞系ＨＭＣ－１细胞粘附分子或其受体表达和ＨＭＣ－１粘附至ＣＡ的能力以及粘附分子抗体封闭后，对ＨＭＣ－１粘附的抑制效应。结果发现：①ＨＭＣ－１细胞表达十余种粘附分子，高表达ＣＤ２９、ＣＤ４４和ＣＤ４９ｅ；②ＨＭＣ－１与各型ＣＡ有广     

不同HCV优势抗原嵌合基因在大肠杆菌中的表达及其？…

目的：为满足丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＥＩＡ检测的需要，构建含优势抗原表位的ＨＣＶ嵌合重组抗原。方法：利用基因工程重组技术，获得了不同的ＨＣＶ嵌合抗原ＮＣ１和ＮＣ２。含嵌合基因的表达质粒在大肠杆菌中表达了目的抗原，其中包括结构区核壳蛋白Ｃ２２和不同长度的非结构区蛋白ＮＳ３；表达产物经离子交换和盐析纯化。结果：用针对Ｃ２２或ＮＳ３抗原表位特异 血清及系列血清进行了检测，表明ＮＣ１和ＮＣ２均同时具有Ｃ２２     

与ColE1相容的高效表达载体的构建及用于HIV—1蛋白酶在大…

描述了俩套与ＣｏｌＥ１相容的Ｅ．ｃｏｌｉ表达载体的构建过程，表达载体的复制起点来源于ＰＡＣＹＣ１７７，用此表达的蛋白可以方便地与通常使用的ＣｏｌＥ１来源的表达载体表达的蛋白共表达，这些载体带有Ｋｍ筛选标记，利用Ｔ７噬菌体的ｇ１０的先导序列增强翻译起始，已用于有活性的重组ＨＩＶ－１蛋白酶在Ｅ．胞质中的高效表达。重组蛋白酸疼与天然蛋白酸序列一致，且具有离体琚体的切割活性。从中可以纯化大量的ＨＩＶ－１蛋     

电离辐射对T淋巴细胞IL-2分泌和细胞毒活性的影响

正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）体外经１～６Ｇｙγ射线照射后，间接免疫荧光法分析受照Ｔ细胞Ｔ细胞抗原受体（ＴＣＲ）、ＣＤ＿３及ＣＤ＿（２３）阳性细胞百分率，Ｈ￣３－ＴｄＲ掺入及释放法测定白细胞介素－２（ＩＬ－２）分泌及Ｔ细胞细胞毒活性，免疫细胞化学法分析Ｔ细胞内ＴＣＲ及ＣＤ＿３表达．结果表明，Ｔ细胞ＴＣＲ、ＣＤ．及ＣＤ＿（２５）表达及ＩＬ－２分泌和细胞毒活性皆呈照射剂量依赖性降低．受照Ｔ细胞ＩＬ－２分泌及细胞毒活性抑制在一定程度上与细胞表面ＴＣＲ、ＣＤ＿３及ＣＤ＿（２５）表达减少、活性损伤有关，而细胞表面ＴＣＲ和ＣＤ＿３表达降低可能与大量ＴＣＲ及ＣＤ＿３在受照细胞胞浆内堆积有关．     

皮肤基底细胞癌,鳞状细胞癌表皮生长因子及其受体免疫组化研究

应用免疫组化法观察了４３例基底细胞癌（ＢＣＣ）、２６例鳞状细胞癌（ＳＣＣ）表皮生长因子（ＥＧＦ）及其受体（ＥＧＦＲ）的表达。结果表明：ＥＧＦ及ＥＧＦＲ在所有ＢＣＣ中表达均有增强，且在边缘肿瘤组织表达强于中央肿瘤组织。ＳＣＣ组织中ＥＧＦ及ＥＧＦＲ表达强度与肿瘤分化程度呈负相关。提示ＥＧＦ和ＥＧＦＲ对ＢＣＣ及ＳＣＣ的发展可能起促进作用；ＳＣＣ组织中ＥＧＦ及ＥＧＦＲ表达有助于识别其生物学行为及估计预后。     

创伤对小鼠腹腔巨噬细胞CD16/32、CD80表达的影响

ＣＤ１６／３２（ＦｃγＲⅢ／Ⅱ）、ＣＤ８０（Ｂ７－１）在巨噬细胞的吞噬及抗原提呈过程中有重要作用，通过观察它们在创伤后不同时相巨噬细胞表面表达的变化情况发现，除第４天外，其余时相点ＣＤ１６／３２、ＣＤ８０的表达均明显增强（Ｐ＜０．０１），提示创伤后巨噬细胞的抗原提呈能力发生变化，但增强还是减弱尚须进一步研究；大多数细胞同时表达ＣＤ１６／３２、ＣＤ８０，表明二者在功能上有着密切的联系。     

环孢霉素亲合素在儿童难治性肾病中基因表达的意义

环孢霉素亲合素（ＣｙＰ）是细胞环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）的受体，广泛存在生物体内，在自身免疫性疾病中发挥着重要作用。本文使用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，研究儿童难治性肾病患者用ＣｓＡ治疗前后ＣｙＰｍＲＮＡ表达及ＣｓＡ的浓度与ＣｙＰｍＲＮＡ表达之...     

rhGM-CSF基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞和小鼠体内的表达

将ｈＧＭＣＳＦ基因克隆至真核表达质粒ｐＣＤＳ中，构建成重组质粒ｐＣＧ１。用电穿孔法将质粒ｐＣＧ１导入ＣＯＳ７细胞和直接注射小鼠骨骼肌内，ＥＬＩＳＡ检测显示质粒ｐＣＧ１转染ＣＯＳ７细胞后４８、７２、９６ｈ和肌注质粒ｐＣＧ１后ｄ１０、ｄ１５、ｄ２０、ｄ２５小鼠体内均有ｈＧＭＣＳＦ的表达。生物学活性检测显示含肌注ｐＣＧ１的小鼠血液有维持ＴＦ１细胞生长的作用，表明重组质粒ｐＣＧ１表达分泌的ｈＧＭＣＳＦ具有生物学活性     

与ColE1相容的高效表达载体的构建及用于HIV-1蛋白酶在大肠杆菌的表达

描述了两套与ＣｏｌＥ１相容的Ｅ．ｃｏｌｉ表达载体的构建过程。表达载体的复制起点来源于ｐＡＣＹＣ１７７，用此表达的蛋白可以方便地与通常使用的ＣｏｌＥ１来源的表达载体表达的蛋白共表达。这些载体带有Ｋｍ筛选标记，利用Ｔ７噬菌体的ｇ１０的先导序列增强翻译起始。已用于有活性的重组ＨＩＶ－１蛋白酶在Ｅ．ｃｏｌｉ胞质中的高效表达。重组蛋白酶与天然蛋白酶序列一致，且具有离体与在体的切割活性。从中可以纯化出大量的ＨＩＶ－１蛋白酶，满足生化分析以及抑制剂筛选的需求     

二硫键稳定的人源化抗肝癌单链抗体与人嗜酸性细胞神经毒素重组免疫毒素融合基因的构建及表达

目的：构建二硫键稳定的人源化抗肝癌单链抗体(hdsFv)与人嗜酸性细胞神经毒素(hEnS)融合基因原核表达载体，并在大肠杆菌中表达。方法：利用RCR的方法扩增hEDN基因，克隆人含抗肝癌hdsFv基因的TIH原核表达载体，转化大肠杆菌BL21(DE3)plyS后，以IPTG诱导融合蛋白表达。表达产物用SDS-PACE及Westen-blot分析及鉴定。结果：成功构建了抗肝癌HdsFv-hEDN融合基因原核表达载体；SDS-PACE和wbsten—blot分析显示，诱导表达产物出现一条Mr约为45．0KD的新生蛋白带，表达量占菌体总蛋白量的x％，主要以包涵体形式存在。结论：抗肝癌hdsFv—hEDN重组免疫毒素融合基因的成功构建及表达，为其进一步进行肝癌的导向治疗研究奠定了基础。     

人CD81胞外大环在大肠杆菌中的克隆表达及活性研究

目的：构建人CD81分子胞外大环（ED2）的原核表达质粒,并研究胞外大环同HCV E2蛋白的结合性能。方法：从人外周血淋巴细胞中经RT－PCR克隆出CD81胸外大环序列,插入原核表达载体pBVILl中,构建表达质粒pBVILl-EC2并在大肠杆菌中表达。表达产物经纯化后用间接ELISA法测定同E2蛋白的结合能力。结果：经序列测定证明,CD81分子胞外大环正确插入载体。融合蛋白得到高效表达,以包涵体形式存在,经Q－Sepharose FF阴离子交换柱得到有效纯化。初步结果表明,重组CD81胞外大环能同原核表达的截短的HCV E2（384－661）蛋白结合。结论：本研究为进一步研究CD81同E2及HCV的相互作用和制备抗EC2单克隆抗体奠定了基础。     

UROC28基因cDNA的克隆及其原核表达

目的：克隆人UROC28基因cDNA并在原核细胞中表达。方法：用RT-PCR从前列腺癌PC-3细胞系中扩增UROC28基因cDNA,并克隆到载体pUC-19中。经测序证实后,用HindⅢ/EcoRI双酶切,亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,并转化E.coliDH5α菌株。取工程菌,用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE鉴定。结果：①经RT-PCR、测序和酶切鉴定,成功地克隆了人UROC28基因cDNA;②经IPTG诱导的重组质粒pGEX-4T-UROC28表达出相对分子质量（Mr）约为42000的融合蛋白,与预期的结果相符。结论：成功克隆到人UROC28基因cDNA,并在E.coliDH5α中表达出GST-UROC28融合蛋白。     

丙型肝炎病毒E1E2蛋白原核表达载体的构建及表达产物的鉴定

目的 :构建丙型肝炎病毒 (HCV)包膜糖蛋白 (E1E2 )基因的原核表达载体 ,为研究HCVE1E2蛋白属性及基因免疫奠定基础。方法 :设计HCVE1E2区基因上、下游引物 ,分别引入BglⅡ及EcoRI酶切位点 ,以含有HCVH株基因序列的质粒pBRTM/HCV1- 30 11为模板 ,通过PCR扩增获得HCVE1E2区基因片段 ,将其克隆入原核表达载体pRSETA ,然后通过酶切和序列测定对其进行鉴定 ;将此表达载体转化入表达菌BL2 1(DE3)pLySs诱导表达 ,并采用SDS -PAGE对表达产物进行鉴定。结果 :经酶切及序列测定分析表明 ,成功地构建了重组原核表达载体pRSETA -HCVE1E2 ;SDS -PAGE显示目的蛋白大量表达 ,且呈非溶状态。结论 :HCVE1E2融合蛋白可以在大肠杆菌中大量表达 ,为HCVE1E2蛋白的制备及基因疫苗的研制奠定了基础。     

丙型肝炎病毒核心蛋白人源抗独特型单链抗体在大肠杆菌中的表达

目的 在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒核心蛋白人源抗独特型单链抗体。方法 采用噬菌体表面展示技术,将丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白单克隆抗体固相包被于Nunc板。从人源噬菌体单链可变区抗体库中经过3轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选,获得结合活性较强的人源HCV核心蛋白抗独特型(抗-Id)scFv阳性克隆。从阳性克隆中提取质粒,经SfiI／Not I酶切鉴定后,亚克隆到pCANTAB5E载体,转化大肠杆菌XL1-Blue,应用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达可溶性的HCV核心蛋白抗独特型单链可变区抗体。酶联免疫吸附法(ELISA)证实表达的HCV核心蛋白抗-Id scFv具有与HCV核心蛋白单克隆抗体反应的特异性。对转化的大肠杆菌XL1-Blue上清中表达的HCV核心蛋白抗-Id scFv进行硫酸铵沉淀,并进行SDS-PAGE电泳。结果 筛选得到的HCV核心蛋白抗-Id scFv片段基因由774bp组成。SDS-PAGE电泳表明,大肠杆菌XL1-Blue中表达的可溶性HCV核心蛋白抗-Id scFv分子量约28kD。结论 HCV核心蛋白抗-Id scFv与HCV核心蛋白抗-Id scFv单克隆抗体具有较强的结合活性和特异性。HCV核心蛋白抗-Id scFv的筛选和表达成功,为今后HCV核心蛋白抗-Id scFv的研究和应用奠定了基础。     

东部马脑炎病毒E2基因的克隆与表达

目的 :克隆表达东部马脑炎病毒 (easternequineencephalomyelitisvirus ,EEEV)E2基因 ,研究重组蛋白的抗原性 ,为研制东部马脑炎病毒基因工程诊断试剂奠定基础。方法 :由病毒感染的鼠脑制备总RNA ,利用RT_PCR技术扩增EEEVE2基因全长序列 ,并将其克隆至pGEM_Teasy载体测序 ,再将E2基因克隆至谷胱甘肽转移酶 (GST)融合表达载体pGEX_5x_2中表达。采用免疫印迹试验 (Westernblotting)和ELISA法分析表达的重组蛋白的抗原性。结果 :经过RT_PCR扩增和测序 ,证明得到的E2基因片段的序列是正确的 ,并且在原核载体中得到表达 ,目的蛋白占总菌体蛋白的 2 4 .5 % ,主要以包涵体形式存在。Western印迹分析表明GST_E2蛋白有良好的抗原性 ;包涵体经Tri tonX_10 0 ,1mol L和 2mol L尿素洗涤 ,初步纯化后 ,用表达的E2融合蛋白作为包被抗原初步建立了间接ELISA法 ,结果表明与兔抗EEEV血清起特异反应 ,但与兔抗WEEV血清无交叉反应。结论 :东方马脑炎病毒的E2基因在大肠杆菌中得到稳定表达 ,表达的GST_E2蛋白具有良好的抗原性和特异性 ,为从分子水平上对EEEVE2蛋白的功能性研究和发展EEEV基因工程诊断试剂奠定了基础     

丙型肝炎病毒T细胞表位的筛选及其在大肠杆菌中的克隆与表达

目的：在丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)不同变异株中，筛选高保守的能涵盖多种MHC限制类型的T细胞表位，并构建重组表位抗原的原核表达质粒。方法：检索文献并结合MHC限制型，从中遴选出功能明确的T细胞表位；利用Goldkey软件，建立HCV全长蛋白序列数据库；从中分别截取各个表位所在区段，对所选取的表位进行同源性比较；从中选取保守性强的部分表位，用化学法合成表位基因，插入原核表达载体pBVIL1中，构建多个融合表达质粒并在E．coli表达。结果：从文献中获得HCV免疫优势性T细胞表位18个，在由55条全长HCV序列组成的数据库中进行比较，获得了大量有关表位保守性的信息，并进行了统计分析，所构建的5个表达质粒pBVIL1—T1—T5经鉴定后，在大肠杆菌中均获得了高效表达。结论：本研究有助于深入认识HCV T细胞表位的特性，为表位的筛选提供了方法学依据，所选取的表位及原核表达的重组蛋白，为HCV治疗性疫苗的实验研究提供了候选抗原。     

乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节人类新基因HBVDNAPTP1的克隆及原核表达与组织表达分析

目的 克隆应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学技术筛选得到的乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶反式调节新型靶基因HBVDNAPTP1,构建HBVDNAPTP1基因的原核表达载体,诱导其在大肠埃希菌中表达,并进一步分析HBVDNAPTP1在组织中的分布表达水平.方法 应用RT-PCR技术扩增获得HBVDNAPTP1基因片段,测序正确后插入至原核表达载体pET-32a( )中,转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导以获得HBVDNAPTP1融合蛋白的表达,利用Western blot证实表达蛋白的特异性.应用UniGene数据库对HBVDNAPTP1基因的染色体中定位及组织分布表达水平进行分析.结果 RT-PCR扩增获得HBVDNAPTP1基因片段,插入pET-32a( )表达载体,转化BL21(DE3)受体菌,经IPTG诱导获得了HBVDNAPTP1重组蛋白的表达,Western blot证实了表达的重组蛋白的特异性.HBVDNAPTP1在多数组织中低表达,仅在脑垂体腺、扁桃体、舌、胸腺、气管与脐带中无表达.结论 成功构建了HBVDNAPTP1基因的原核表达载体,利用大肠埃希菌原核表达系统获得了重组蛋白的表达,并初步了解了HBVDNAPTP1基因的染色体定位与组织表达水平.     

我国登革2型病毒株NS1基因的克隆与表达

目的：通过对登革病毒ＮＳ１基因的表达,研究表达的ＮＳ１蛋白的抗原性,为研制新型登革疫苗提供依据。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ和分子克隆技术将扩增的ＮＳ１基因插入到ｐＢＶ２２０载体中,通过温控诱导进行外源蛋白的表达,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蛋白质印迹法分别测定表达产物的相对分子质量及特异性。结果：获得正向插入的ＮＳ１－ｐＢＶ２２０重组质普,表达产物的相对分子质量约为５１０００,与预期大小一致,并且可与登革２型     

丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白7的重组表达及生物信息学分析

目的 构建丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白7(NS5ATP7)的原核表达载体,诱导其在大肠埃希菌中的表达,并初步探讨其结构与功能.方法 应用逆转录PCR(RT-PCR)技术,以HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得NS5ATP7基因片段,连接到pGEM-T载体,酶切鉴定及测序正确后插入至原核表达载体pET-32a( )中,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导以获得NS5ATP7融合蛋白的表达,SDS-PAGE、Western blot免疫印迹分析和证实该融合蛋白表达的特异性,并应用生物信息学方法对该融合蛋白的结构和功能进行预测.结果 利用RT-PCR扩增获得大小为891bp的NS5ATP7基因片段,插入pET-32a( )表达载体,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,成功获得了大小为48kD的目的蛋白,Western blot进一步证实了该蛋白具有特异性免疫反应识别.生物信息学预测结果显示此蛋白富含螺旋结构,为非跨膜蛋白,无信号肽.结论 利用大肠埃希菌BL21成功表达了NS5ATP7融合蛋白,结合生物信息学分析结果,为研究NS5ATP7蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了基础.