ELISA检测乙型肝炎表面抗原的范围和确认试验探讨

目的探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）测定乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阴性样本临界结果的复检范围和确认试验的弱阳性样本检测范围。方法血清样本用国产ELISA试剂测定HBsAg,阴性样本进行复检,复检结果阳性进行确认试验。确认试验应用雅培公司的AxSYM全自动酶免疫荧光分析系统和配套试剂。结果HBsAg阴性样本547例,其中510例吸光度（A）值i〉0．0735,复检结果阳性5例,确认试验结果亦为阳性;37例A值〈0．0735,复检结果均为阴性。HBsAg阳性样本332例,其中160例A值≥1．0,确认试验均为阳性;172例A值〈1．0的样本中有7例确认试验结果为阴性。结论应用国产ELISA试剂进行HBsAg的确认试验,应先确定阴性样本的复检范围和需做确认试验的弱阳性样本范围。     

对乙型肝炎表面抗原弱阳性结果进行确认试验的应用研究

目的评估抗体中和确认试验在乙型肝炎表面抗原（HBsAg）低值弱阳性标本中的应用。方法将由微粒子酶免疫发光法（MEIA）检测的HBsAg结果（S/CO）在1.0-10.0之间的111份弱阳性血清标本进行抗体中和确认试验,并进行乙型肝炎病毒（HBV）酶联免疫吸附试验（ELISA）,对比各试验结果间的差异。结果抗体中和确认试验阳性92例（82.9%）,ELISA检测阳性47例（42.3%）,2项试验检测结果间差异有统计学意义（P=0.033）。结论对HBsAg低值弱阳性标本,ELISA检测漏检率很高,敏感性和特异性均不佳;抗体中和确认试验可做为HBsAg弱阳性标本进一步确认的手段。     

对乙型肝炎表面抗原弱阳性结果进行确认试验的应用研究

目的评估抗体中和确认试验在乙型肝炎表面抗原(HBsAg)低值弱阳性标本中的应用。方法将由微粒子酶免疫发光法(MEIA)检测的HBsAg结果(S/CO)在1.0~10.0之间的111份弱阳性血清标本进行抗体中和确认试验,并进行乙型肝炎病毒(HBV)酶联免疫吸附试验(ELISA),对比各试验结果间的差异。结果抗体中和确认试验阳性92例(82.9%),ELISA检测阳性47例(42.3%),2项试验检测结果间差异有统计学意义(P=0.033)。结论对HBsAg低值弱阳性标本,ELISA检测漏检率很高,敏感性和特异性均不佳;抗体中和确认试验可做为HBsAg弱阳性标本进一步确认的手段。     

类风湿因子对ELISA检测乙型肝炎表面抗原的影响

目的探讨高浓度类风湿因子（RF）对酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的影响。方法取RF〉200 IU/mL的血清用ELISA和微粒子酶免疫法（MEIA）分别检测HBsAg,并比较吸附RF前后ELISA检测HBsAg的吸光度（A）值的差异。结果 50例高浓度RF血清中,ELISA检出HBsAg阳性11例（其中2例为确诊乙型肝炎患者）,阳性率18.75%（9/48）;MEIA检出HBsAg阳性1例,阳性率2.08%（1/48）,显著低于ELISA（P〈0.05）。用吸附有纯化的人IgG的胶乳颗粒试剂吸附RF后重新用ELISA检测除2例确诊乙型肝炎外的48例血清HBsAg,仅1例阳性,吸附后的A值较吸附前明显降低（P〈0.05）。结论血清中高浓度RF会引起ELISA检测HBsAg的假阳性,而对MEIA检测的干扰较小。     

弱阳性HBsAg的ELISA假阴性原因分析

ＥＬＩＳＡ检测肝炎病毒是目前最常见方法之一。但影响因素也较多 ,特别是低浓度样本易导致假阴性。本文通过加样时间、试剂平衡时间和溶血程度方面进行实验 ,以进一步探讨低浓度ＨＢｓＡｇ的干扰因素。1　试剂上海科华生产的ＨＢｓＡｇ试剂盒 ,卫生部临检中心提供的低值ＨＢｓＡｇ质控品。2　方法和结果方法 1是用 1ｎｇ/ｍｌＨＢｓＡｇ作样本 ,分别在 2 5℃加入反应板后放置 0ｍｉｎ、15ｍｉｎ、30ｍｉｎ、45ｍｉｎ和 6 0ｍｉｎ ,后按说明书操作。结果Ａ值分别为 0 .132、0 .148、0 .16 2、0 .188、0 .191,立即加样与 30ｍｉｎ以上比较差…     

胶体金免疫层析试验检测乙肝两对半时HBsAg假阴性结果的处置

目的胶体金免疫层析试验(GICA)检测乙肝两对半时,对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)结果疑似假阴性的标本分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)和时间分辨荧光分析法(TRFIA)定量试验进行HBsAg检测,并用抗体中和确认试验进行确认,以获得一个处理GICA检测HBsAg产生假阴性结果的可靠方法。方法 2014年1月至2015年2月用GICA检测乙肝两对半的标本3 078例,选取其中结果为单乙型肝炎核心抗体(抗-HBc),或单乙型肝炎e抗体(抗-HBe)为阳性,或抗-HBc和抗-HBe同为阳性,而HBsAg、乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)均为阴性的标本86例,分别用ELISA和TRFIA检测其HBsAg,对检测为阳性的标本进行抗体中和确认试验确认。结果 86例标本经抗体中和确认试验确认阳性的为35例;ELISA检出阳性标本28例,其中2例为假阳性;TRFIA检出阳性标本35例与抗体中和确认试验符合率100%。结论 GICA检测乙肝两对半时,对HBsAg结果疑似假阴性的标本可选用TRFIA进行复查确认。     

酶免疫一步法检测乙型肝炎表面抗原影响因素探讨

乙型肝炎（下称乙肝）是一种严重危害人类健康的世界性传染病。我国是乙肝高发区，乙肝表面抗原（HBsAg）携带者高达10％～15％。HBsAg在乙肝病毒（HBV）感染的检测中一直是最为重要的标志物，是乙肝的早期诊断指标之一。因此，准确地检测HBsAg对于HBV感染的临床诊断、治疗以及避免医患纠纷的发生有着重要意义。目前国内最常用的HB—sAg测定方法为酶联免疫吸附试验（ELISA）中的双抗体夹心双位点一步法，该法简单、方便、快速，灵敏度较高，特异性较好。     

乙型肝炎表面抗原金标法阳性而酶联免疫吸附试验阴性的原因分析

我国是乙型肝炎（下称乙肝）病毒感染的中度流行区，乙肝病毒携带者数量已由9．75％降至7．18％。输血是乙肝病毒经血传播的重要途径之一，为了防止乙肝病毒经血传播，提高血液质量，血站现在一般都用胶体金法和酶联免疫吸附试验（ELISA）对献血者的血液样本进行筛查检测。但在日常工作中会碰到两种方法检测结果不一致的现象，现对胶体金法阳性而ELISA结果阴性的现象分析如下。     

检测乙型肝炎表面抗原的一步法试剂的钩状效应分析

目前,我国检测HBsAg绝大多数采用ELISA中的双抗体夹心双位点一步法。用该方法检测HBsAg,当标本中的HBsAg浓度过高时,会因钩状效应(HOOK)现象出现假阴性而造成漏检,严重威胁着人民的健康。HBeAg和HB-cAb两项阳性时,大多数HBsAg都为阳性,HBsAg阴性者也可能存在漏检问题。所以笔者将HBeAg和HBcAb两项阳性的血清标本进行不同比例稀释后,再用一步法和二步法分别进行检测和比较,以探讨一步法试剂的HOOK在HBsAg检测的漏检情况和二步法的临床实用价值。     

ELISA法检测乙型肝炎表面抗原假阳性的影响因素

<正>目前,大多数实验室采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行定性检测,当检测标本的吸光度值大于试剂盒设定的临界值时为阳性,反之为阴性。对于强阳性和明显阴性的标本几乎不会错检,但是在检测临界值附近的弱显色反应(S/CO:1～2)标本时可能出现假阳性结果,ELISA法操作过程中也存在一部分     

ELISA一步夹心法检测HBsAg假阴性原因分析

目的:探讨ELISA一步夹心法检测HBsAg假阴性的原因.方法:对ELISA一步夹心法检测HBeAg阳性、HBcAb阳性和HBsAg阴性的血清样品,用ELISA两步夹心法和将样品倍比系列稀释用ELISA一步夹心法检测HBsAg,并用化学发光免疫分析定量检测HBsAg.结果:在112 166份血样中,ELISA一步夹心法检测HBeAg阳性、HBcAb阳性、HBsAg阴性的标本9份,占0.008%;9份HBsAg阴性样品中,ELISA两步夹心法检测有1份阳性;同时经倍比系列稀释后用ELISA一步夹心法检测,在1∶327 68稀释后检出阳性1份,与ELISA两步夹心法检测HBsAg阳性为同一份血样,该标本经定量检测为HBsAg＞250 IU/mL,属钩状效应;其余8份样品经ELISA两步夹心法和一步夹心法检测均为阴性,而定量检测HBsAg其中1份样品为144.41 IU/mL,其余7份均在0.05～5 IU/mL之间.结论:ELISA一步夹心法检测高浓度HBsAg确有漏检现象,而低浓度HBsAg的漏检情况更为严重,建议使用灵敏度更高的试剂和方法来检测;中等浓度的HBsAg漏检应引起检测者及试剂厂家的关注.     

乙肝病毒抗原在离体全血中衰减引起假阴性

目的 探讨离体全血中的细胞成分对乙肝抗原HBsAg和HBeAg的免疫学检测影响.方法 收集80人份HBV携带者血样.每人血样分为3份,一份在离体后迅速离心祛除细胞成分,另一份在离体后3 h离心祛除细胞成分,还有一份在离体后12 h离心祛除细胞成分.分别以夹心ELISA试验及RIA试验定性、定量检测3份血样中的HBsAg和HBeAg水平,井进行成对资料的t检验分析.结果 HBsAg和HBeAg在较高浓度时,同一来源的36份血样中抗原含量无明显差异;而HBsAg和HBeAg处于较低浓度时,3份血样中抗原含量差异明显,细胞成分祛除较晚的血样中抗原水平明显较低.结论 作为外源性病原体抗原,HBsAg和HBeAg因抗原代谢作用而在离体全血中持续衰减,这种衰减可能导致一些乙肝携带者的假阴性检测.     

HBsAg阴性的乙型肝炎的临床特点

对 2 8例HBsAg阴性乙肝患者和同期住院的HBsAg、HBeAg、抗HBc均阳性患者 30例进行肝功能、HBV bDNA的观察 ,部分作了肝活检。结果HBsAg阴性肝炎患者临床上反复出现胆红素 (SB)峰值、转氨酶 (ALT )峰值显著差异升高(P <0 .0 5 ) ,而HBV bDNA定量水平显著降低 (P <0 .0 5 )。     

血袋内抗凝血液标本对ELISA法检测HBsAg结果的影响

目的 探讨血袋内抗凝血液标本对ELISA法检测HBsAg结果的影响。方法 对3468人次街头无偿献血者留取2份血液标本：一份不抗凝,另一份同血袋里血液一样抗凝,所用试剂、仪器相同,并在同等条件下检测HBsAg;用HBsAg弱阳性参考品按比例加入抗凝剂进行检测;模拟同血袋内一样抗凝稀释血液检测HBsAg的漏检情况。结果 不抗凝血液标本中HBsAg阳性48份,同血袋一样抗凝血液标本中HBsAg阳性30份,两者差异有显著性。结论 血袋内抗凝血液标本被稀释可造成低浓度HBsAg漏检,应留取不抗凝血液标本或固体抗凝剂的抗凝血液标本。     

HBsAb阳性对酶标法HBsAg检测的影响

目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)假阴性的产生及预防方法。方法应用全自动加样仪(ML-AT plus-Sampler),使加样针在不同的清洗次数下,同时加样12份含不同浓度HBsAb标本和12份含不同浓度HBsAg不同OD值标本,分别应用ELISA二步法检测HBsAg,观察其吸光度的变化。结果 12份含HBsAg标本在清洗次数逐渐减少的情况下,OD值都有不同程度的下降。HBsAb强阳性标本对OD值影响很大,在只清洗3次的情况下,HBsAg弱阳性标本开始出现假阴性;在不洗涤也不擦拭的情况下,4份HBsAg弱阳性出现假阴性。结论高浓度的乙型肝炎表面抗体会引起HBsAg检测结果假阴性;使用一次性加样枪头,可避免假阴性。     

ELISA法检测HBsAg灰区和单试剂反应性样本的确认结果分析

目的 探讨ELISA法检测HBsAg结果判定灰区设置的必要性,以及中和试验对HBsAg灰区和单试剂反应性样本的确认情况.方法 采用两个不同厂家生产的ELISA HBsAg试剂对献血者标本分别进行检测,对检测结果在0.7≤S/CO＜1或单试剂为反应性的标本,再用同种试剂进行双孔复试,双孔中至少有1孔结果仍在灰区内或仍为反应性,留取标本做HBsAg中和试验确证.结果 136例灰区标本中HBsAg中和试验检测出阳性标本10例,阳性率为7.35％,结果异常标本14例;159例单试剂反应性标本中HBsAg中和试验检测出阳性标本19例,阳性率为11.95％,结果异常标本16例.灰区与单试剂反应性样本阳性率的差异没有统计学意义;S/CO值在0.70～0.79区间、0.80～0.89区间、0.90～0.99区间的阳性率有逐渐升高的趋势,但差异无显著性;双试剂灰区的阳性率高于单试剂灰区的阳性率,但差异无统计学意义.结论 对HBsAg灰区和单试剂反应性标本,ELISA检测漏检率较高,应结合自己实验室实际设置合适的灰区,最大限度地检出这些可疑标本,并进行确认实验,进一步减少HBsAg漏检和误检率,以提高输血安全,同时避免血源的浪费.     

乙型肝炎表面抗原酶联免疫法检测试剂的性能评价

目的对我室使用国产乙型肝炎表面抗原酶联免疫法（ELISA）检测试剂进行性能评价。方法用ELISA法使用国产试剂检测国家参考品（n=33）、临床科研血清盘（n=40）及临床标本（n=270）,判断其是否符合国家检定标准,并分析其真实性、可靠性和收益指标。结果检测国家参考品的阴性符合率为100%（20/20）,阳性符合率为100%（3/3）,三种亚型的最低检出量均为0.5ng/mL;其真实性指标：灵敏度、特异性、粗一致性和约登指数（Youden）分别为96.88%、99.45%、98.39%和0.96;可靠性指标：变异系数（CV）和Kappa值分别为5.2%和0.96;收益指标：阳性预测值与阴性预测值分别为99.20%和97.84%。结论国产试剂性能评价结果优质,适用于临床标本检测。     

ECLIA和ELISA检测血清HBsAg的结果比较

目的 比较电化学发光免疫分析(ECLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清HBsAg结果。方法 采用ECLIA一步法和ELISA一步法、二步法测定定值血清中的HBsAg；用ELISA一步法和二步法检测经ECLIA筛选的190例HBsAg模式如下的临床标木：①HBsAg光放射强度(COI)在1～20，20例；②HBsAg COI在21～4000，160例；③HBsAg COI大于4000，6例；④HBsAg阴性(其COI值小于1)，HBeAg和HBcAb阳性4例。结果 ELISA一步法灵敏度为1ng／ml，二步法灵敏度为0．2g／ml，ECLIA灵敏度为0．05ng／ml。存190例临床标本中，ELISA一步法阳性检出率为84．2％，二步法阳性检出率为92．6％，ECLIA阳性检出率为97．4％。结论 ELISA一步法受钩状效应(hook effect)影响明显，敏感度低，HBsAg漏检明显：ELISA二步法能较好地避免钩状效应，敏感度较高，HBsAg漏检率较低，但费时：而ECLIA灵敏度高，受HOOK效应影响较小，HBsAg漏检率低，且自动化程度高，检测时间短。     

酶联免疫试验两步法检测乙型肝炎病毒表面抗原的影响因素分析

目的探讨酶联免疫吸附试验（ELISA ）两步法检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg ）的影响因素。方法分别在稀释液的量、洗板时机、孵育时间、显色时间等不同条件下对阳性混合血清、阴性混合血清和弱阳性对照血清进行检测。结果使用滴瓶滴加1滴稀释液、不加入稀释液、加入血清后温育时间缩短为45 min 、加入酶结合物后孵育时间缩短为15 min 、加入显色剂后显色时间缩短为15 min ,弱阳性结果较标准方法差异有统计学意义;加入样本孵育1 h 后洗板,阳性、弱阳性和阴性结果均较标准方法差异有统计学意义。结论 ELISA 条件的改变,就强阳性标本而言或许影响不大,但弱阳性标本的结果会被显著影响,尤其是处于临界值（灰区）的标本所受影响可能就更为明显。